一种梅毒螺旋体重组抗原胶体金的制备

目的制备一种可以特异、准确的检测血清中梅毒螺旋体抗体的胶体金免疫层析试纸。方法利用原核表达系统构建一种包含梅毒螺旋体多个免疫表位的重组抗原B1,采用ELISA的方法对重组抗原进行活性检测。胶体金标记重组抗原B1,制备胶体金免疫层析试纸。结果重组抗原B1在BL21表达载体中有较高表达,ELISA结果显示B1与梅毒患者血清能特异、敏感的结合,与乙型肝炎病毒血清及阴性血清无交叉反应。应用B1蛋白制备的胶体金诊断试纸检测100份梅毒标准血清,结果均为阳性,与乙型肝炎患者血清及健康人群血清无交叉反应。结论梅毒螺旋体胶体金快速诊断试纸具有良好特异性和敏感性,可以快速、准确的诊断梅毒螺旋体的感染。     

重组梅毒螺旋体抗原的研究进展

在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下，基因克隆技术的出现为该病原体的研究开辟了一条新的途径。应用基因工程技术目前已制备出多种重组梅毒螺旋体抗原，这些抗原的制备对梅毒发病机理的探讨，疫苗的研制，以及血清学诊断试验的建立与应用具有重要意义，为梅毒的预防和控制提供了更加有效的手段。     

基因工程技术制备梅毒螺旋体重组抗原的研究

目的 用基因工程技术制备梅毒螺旋体特异蛋白抗原,以梅毒螺旋体不能体外培养而难以获得足量的纯梅毒螺旋体特蛋白抗原的难题。方法 以PCR技术克隆出目的基因,重组后通过DNA序列测定验证重组质粒中连结有目的基因片段;以pMAL^TM-e2为质粒载体,TB1大肠杆菌为宿主菌进行目的基因的转化、诱导和表达,并对表达产物进行蛋白印迹试验检测其血清学活性。结果 PCR克隆出梅毒螺旋体15000、17000以及47000蛋白的基因克隆,其中梅毒螺旋体17000以及47000在TB1大肠杆菌中得到稳定的表达,且表达产物显示与梅毒患者血清有非常特异的血清学反应。结论 梅毒螺旋体之目的基因在大肠杆菌中得到了成功表达,并具特异的血清学活性,从而为建立为国产化梅毒血清学诊断的新方法奠定了基础。     

胶体金法检测梅毒螺旋体特异性抗体的初步观察

检测梅毒螺旋体抗体有两种,一种是检测非特异性抗体,另一种是检测其特异性抗体。目前胶体金标记金黄色葡萄球菌Ａ蛋白(ＳＰＡ)法检测梅毒螺旋体非特异性抗体已见报道[1]。我们采用基因重组梅毒螺旋体抗原点样于醋酸纤维薄膜上、胶体金标记ＳＰＡ快速检测血清中梅毒螺旋体特异性抗体,现将结果报道如下。一、材料和方法1.梅毒螺旋体特异性抗原的制备:选用公认的42000膜蛋白(ＴｍｐＡ)作为梅毒螺旋体特异性抗原[2,3],聚合酶链反应(ＰＣＲ)人工合成或者将其基因片段植入大肠埃希菌内大量合成其ＴｍｐＡ蛋白,本抗原及醋酸纤维薄膜由Ｔｒｉｃｏｎ…     

梅毒螺旋体抗体IgG酶联免疫吸附试验的建立

梅毒螺旋体抗原试验,如荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)等的敏感性和特异性高,但试剂昂贵,操作较复杂,所需时间较长,现不用于筛查而用于确证。为探讨既可用于筛查又可用于确证的梅毒螺旋体抗体检测方法,我们用基因重组技术表达的梅毒螺旋体蛋白(Treponema pallidum protein,Tp)17和Tp44.5为抗原,以辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体为酶结合物,建立了梅毒螺旋体抗体IgG的间接ELISA法(ELISA-Tp-IgG),经临床观察和献血员筛查,效果较好,现报道如下。     

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达

随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体(Tp)全基因序列的解析^[1],通过重组技术已制备多种重组Tp抗原,并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发^[2-5],但对于哪一种Tp蛋白抗原在临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析,选取抗原性较强的Tp外膜蛋白GPd进行克隆表达,并以重组蛋白为包被抗原,建立间接ELISA法,评价其在梅毒血清学诊断中的应用价值。     

ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体在诊断梅毒中的应用

目的探讨酶联免疫吸附测定(ELISA)抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体在诊断梅毒中的应用。方法临床诊断或怀疑为梅毒的97例患者和74例非梅毒患者的血清同时接受ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体和TPPA试验两种检测。结果ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体具有较高的敏感性和特异性。结论ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体适合于大样本的筛查和确诊。     

梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达构建双抗原夹心法的研究

目的用基因工程方法表达嵌合的梅毒螺旋体优势表位抗原,建立检测血清梅毒抗体的双抗原夹心酶联免疫方法。方法通过计算机软件分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,用聚合酶链反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了梅毒螺旋体多优势表位嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN47)表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)进行表达,亲和层析柱法纯化获得高纯度融合抗原,并用其建立检测梅毒抗体的DAS-EIA。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性。用其建立的嵌合抗原DAS-EIA检测确诊的50份阳性和30份阴性血清,阳性检出率和阴性检出率都是100%。结论嵌合抗原DAS-EIA法具有比间接EIA和重组单抗原DAS-EIA更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外TPHA的水平,该方法的建立为临床检测梅毒开辟了新的领域。     

FTA-ABS TPHA TPPA三种梅毒螺旋体特异性抗体检测方法的效果评价

目前,国内用于检测梅毒螺旋体特异性抗体的试验主要为梅毒螺旋体抗体吸收试验（ＦＴＡ－ＡＢＳ）、梅毒螺旋体血凝试验（ＴＰＨＡ）［１,２］和梅毒螺旋体被动乳胶凝集试验（ＴＰＰＡ）,这类螺旋体抗原试验敏感性和特异性均较高,通常用作证实试验,验证非螺旋体抗原类...     

梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析

目的 探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值.方法 通过生物信息学分析,获取TP0993基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹检测其免疫抗原性,用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔,评价其免疫原性.用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清,同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行比较,根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况,评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值.结果 成功构建PET-28a(+)-0993原核表达载体,经表达、纯化后获得相对分子质量约为34 000的重组蛋白;Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔,能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答.以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,对TPPA法检测的480份临床血清进行检测,与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88.3％,特异度为85.8％,ELISA法与TPPA法符合率为86.5％.结论 重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性,可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一.     

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达及免疫活性研究

目的 克隆和表达梅毒螺旋体Tp0319基因,并对其表达产物进行免疫活性分析。方法 挑选并克隆出Tp0319免疫优势区基因,构建原核表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定;用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔;间接ELISA法检测梅毒螺旋体参考血清及临床标本。结果 成功构建原核表达载体pQE32/Tp0319;高效表达和纯化出一相对分子质量约30 000的重组蛋白。用重组蛋白免疫新西兰兔,能刺激其产生高水平抗体滴度。Western印迹证明其能与梅毒患者血清发生特异性反应,阴性对照菌未见目的表达条带。间接ELISA法检测80份梅毒螺旋体参考血清（阴性、阳性各40份）,阳性和阴性结果的符合率均为100%。检测200份临床梅毒血清标本及200份正常人血清,结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验相比,灵敏度和特异度分别为92.6%和100%,符合率为96%。结论 制备的Tp0319重组蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础。     

目测梅毒抗体试验:重组抗原酶免疫试验检测螺旋体抗体

本试验的目的在于评价目测梅毒螺旋体抗体试验(VSA)作为检测血库血中的螺旋体抗体的筛查试验,并测定其临床的敏感性。该试验是为一种微量孔免疫试验,用重组的病原体特异的和免疫显著的螺旋体抗原作为试剂(靶)。 共检测了二个血库的3944份标本,其结果与CDC标准的非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体试验进行了比较。另外,2539份代表不同期梅毒和正常人群的血标本,与标准校准的试验进行了比较(外地872份,本地1616份)。两种试验结果如不一致,则改用蛋白印迹试验确诊。 结果:在排除梅毒标本之前,VSA试验的     

用蛋白印迹技术初步评价重组梅毒螺旋体抗原的反应性

目的：初步分析重组梅毒螺旋体抗原对梅毒螺旋体抗体的反应性。方法：用蛋白印迹技术检测与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合的2种重组梅毒螺旋体蛋白（rTP47和rTP17)与二期梅毒患者血清的反应性。结果：30份二期梅毒患者血清均与MBP－rTP47和MBP－rTP17反应,反应强度与RPR试验测定的血清滴度无绝对一致性,但MBP－rTP17与二期梅毒患者血清的反应强于MBP－rTP47,30份正常人血清均不与MBP－rTP47和MBP－rTP17反应。结论：MBP－rTP47和MBP－rTP17对二期梅毒患者血清的反应性较强。     

关于梅毒血清学检查的几个热点问题

梅毒血清试验包括非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验,二种方法需结合使用,前者主要用来判断疗效,后者用作确证诊断。本文讨论了关于梅毒血清学检查的几个热点问题,包括梅毒血清试验假阳性、假阴性、术前梅毒血清检查阳性、血清固定及其处理等。     

牙买加人群梅毒血清学试验的生物学假阳性

VDRL试验是最标准、应用最广泛的梅毒非螺旋体筛查试验.由于VDRL是非特异性抗原,可以产生生物学假阳性(BFP).梅毒的BFP结果是指非螺旋体试验阳性而螺旋体试验阴性.在普通     

ELISA在梅毒血清学诊断中的应用

酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)是一种利用酶标记抗原或抗体检测相应抗体或抗原的免疫学检测方法 ,目前已广泛应用于各种抗原和抗体的测定。在梅毒的免　 [作者单位 ] 1湖北医科大学附属第二医院皮肤科 ,湖北武汉　430 0 71　 2湖北医科大学附属第二医院检验科疫学检测中 ,用非致病性螺旋体作为抗原成分的ＥＬＩＳＡ方法已用于先天梅毒的诊断和梅毒的抗心磷脂抗体与其它疾病的抗磷脂抗体的鉴别 ,而以梅毒螺旋体为抗原成分的ＥＬＩＳＡ试验也已应用于梅毒血清学的诊断[1] 。我们采用ＥＬＩＳＡ方法以梅毒螺旋体为抗原对临床 116份血清作了特…     

梅毒螺旋体Nichols株45KD多肽成分的研究及其在梅毒临床诊…

应用单克隆抗体和免疫印迹技术分析Ｎｉｃｈｏｌｓ株梅毒螺旋体４５ＫＤ多肽成分，证明其具有多个抗原决定簇，与其它７种螺旋体无交叉反应。并应用印迹技术诊断梅毒作对比。符合率为９８．７５％。正常人对照均为阴性。     

梅毒螺旋体Nichols株45KD多肽成分的研究及其在梅毒临床诊断的应用

应用单克隆抗体和免疫印迹技术分析Ｎｉｃｈｏｌｓ株梅毒螺旋体４５ＫＤ多肽成分，证明其具有多个抗原决定簇，与其它７种螺旋体无交叉反应。并应用印迹技术诊断梅毒作对比，符合率为９８．７５％。正常人对照均为阴性。     

性传播疾病

20102062我国梅毒血清诊断试剂临床质量评估/魏万惠(中国医科院北京协和医院皮研所),尹跃平,王红春…∥中国艾滋病性病.-2010,16(3).-307~309以日本Fuji公司梅毒螺旋体明胶凝集试验(TP-PA)及美国BD公司快速血凝反应素试验(RPR)试剂作为参与试剂,广西和福建两家省级性病中心试验室参与,对11种梅毒血清学试剂进行评估。结果显示,非梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂的敏感性为90.90%~100%。说明非梅毒螺旋体抗原及梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂质量参差不齐,部分国产梅毒诊断试剂质量有待提高。表3参9(李百灵)20102063早期潜伏梅毒和晚期梅毒外周血淋巴细胞亚群检     

住院患者梅毒血清学假阳性及梅毒检出情况报告

<正>梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性全身感染性疾病,是仅次于艾滋病的对人体危害最大的性传播疾病之一。目前常用的梅毒血清学试验包括非梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗原血清学试验。我们对2010年1月—2013年9月本院部分住院患者进行了梅毒血清学检查,共63 460例次,结果报告如下。1资料与方法1.1病例资料2010年1月—2013年9月因其他疾