“生精散”对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制研究

目的:研究"生精散"对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组),对照组(B组),生精散组小(C组)、中(D组)、大剂量组(E组),每组8只。建立左侧睾丸扭转模型,B组自扭转前1 h开始给予每日灌胃生理盐水1 ml/d,C组(0.01 g/kg.d)、D组(0.02 g/kg.d)、E组(0.03 g/kg.d)分别按体重给予灌服生精散,连续35 d后处死大鼠,对大鼠进行精液常规分析,用RT-PCR检测大鼠精子CatSper1的表达。结果:a+b级精子百分率、精子存活率、精子浓度,CatSper1基因表达,与A组[(51.30±6.60)%、(69.01±7.20)%、(40.53±7.01)×106/ml、2.04±0.77]相比,B组[(15.30±6.30)%、(44.42±6.36)%、(21.00±6.14)×106/ml、1.12±0.50),均显著降低(P<0.01);与B组相比,D组[(51.63±3.20)%、(72.09±2.20)%、(55.30±5.90)×106/ml、2.11±0.20]、E组[(55.93±3.17)%、(73.01±2.11)%、(58.33±4.90)×106/ml、2.31±0.17]均显著升高(P<0.01),而C组[(18.02±0.23)%、(48.04±7.01)%、(22.87±2.10)106/ml、1.19±0.51]升高不明显(P>0.05)。结论:生精散可以促进睾丸扭转复位后精子质量的恢复,其机制可能与调节生精功能,提高精子细胞CatSper1基因的表达有关。     

尿激酶对弱精症患者精子活力影响的研究

对２８例弱精症男子精液中加入不同浓度的尿激酶后，分别在３０、６０、９０和１２０分钟观察精子的活率和前向运动能力。并对１４例患者体内给予尿激酶１０天后，比较用药前后精子活率和有前向运动力精子数目的变化。结果：２８例精液标本体外加入尿激酶后，３０、６０、９０和１２０分钟时精子的活率均有提高；前向运动精子的数目亦有增加。体内给药前，１４例精子平均活率为４４．６４±１１．７９，用药１０天后，精子平均活率为６４．７１±１３．０１，二者比较有极显著差异（Ｐ＜０．０１）。尿激酶的这一作用可能与它降低精液的粘稠度有关。     

补肾生精方促进少弱精症大鼠精子发生的作用机制研究

目的：研究补肾生精方对腺嘌呤诱导的少弱精症大鼠精子发生的作用机制。方法：采用腺嘌呤灌胃诱导SD大鼠制备少弱精症大鼠模型,将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、五子衍宗丸组（1 g/kg）和补肾生精方高、中、低剂量组（2.8 g/kg、1.4 g/kg、0.7 g/kg）,给药3周。干预结束后采用放射免疫法测定血清睾酮水平;利用计算机辅助精子分析系统评估精子密度、活动力;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠睾丸组织病理形态学改变;免疫组织化学（IHC）检测大鼠睾丸组织支持细胞中波形蛋白表达水平。结果：与模型组相比,给药组的大鼠睾丸病理损伤有所改善,睾丸组织部分生精小管增厚,细胞排列紧密,部分管腔缩小,生精细胞和精子数量增加。与模型组相比,五子衍宗丸组及补肾生精方各剂量组血清睾酮水平均上调（P<0.05）,其中,五子衍宗丸组、补肾生精方高剂量组上升明显（P<0.05）,差异有统计学意义。与模型组相比,给药后大鼠精子质量有所改善,精子活动力差异有统计学意义（P<0.05）,同时,补肾生精方高剂量组在改善精子密度方面优于模型组（P<0.05）;补肾生精方高剂量组在改善精子...     

“益精方”对小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响

目的:观察"益精方"对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG),按60mg/kg体重给CG小鼠腹腔注射生理盐水(NS),给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5d,第6d开始按体重分别给SG和LG小鼠灌服"益精方",剂量分别为人类常规用量(以60kg为标准)的1倍和5倍,MG小鼠给予等体积的NS灌胃,每天1次,连续34d,CG常规饲养,然后对小鼠进行精液常规分析,并用RT-PCR法检测小鼠精子CatSper1的表达。结果:CG、MG、SG和LG组小鼠附睾精子密度分别为(5.20±1.34)、(1.73±0.03)、(2.08±0.01)、(3.31±0.56)×106/ml,a+b级精子百分率分别为(14.49±0.30)%、(6.64±1.88)%、(11.99±1.01)%、(19.40±3.13)%,a+b+c级精子百分率分别为(68.39±15.13)%、(39.96±4.89)%、(62.28±4.43)%、(73.61±5.05)%,MG组精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率显著低于CG组(P<0.05),经治疗后LG组精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率明显增加,与MG组比较有显著性差异(P<0.05),而与CG组在a+b级精子百分率和a+b+c级精子百分率上没有明显区别。CatSper1的表达量在CG、MG、SG和LG组分别为0.76±0.05、0.73±0.03、0.75±0.12、0.85±0.04,LG组显著高于MG组(P<0.05),而与CG组比较没有明显区别。结论:腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率降低,CatSper1表达量下降,大剂量"益精方"可以通过提高CatSper1的表达量,增加小鼠精子密度、a+b级和a+b+c级精子百分率,从而达到治疗少弱精子症的目的。     

铝对大鼠精子质量及精子线粒体的影响

目的:研究铝暴露对大鼠精子质量及精子线粒体的超微结构、线粒体膜电位(MMP)水平及膜通透性转换孔(MPTP)功能状态的影响,探讨铝降低精子质量的可能作用机制。方法:取体重为180～200 g雄性Wistar大鼠96只,根据饮水中AlCl_3的半数致死量(LD50),采用AlCl_3·6H_2O水溶液饮水暴露法,设置高剂量组[1/5 LD50,256.72 mg/(kg·d)]、中剂量组[1/10 LD50,128.36 mg/(kg·d)]、低剂量组[1/20 LD50,64.18 mg/(kg·d)]及对照组[0 mg/(kg·d)],每组随机分配24只,连续作用16周。实验结束时对各组大鼠附睾精子进行质量检测,透射电镜下观察精子线粒体结构,并采用流式细胞术测定精子线粒体的MMP水平及MPTP的功能状态。结果:与对照组比较,低、中、高剂量铝暴露组前向运动精子百分率均显著低于对照组[(46.49±5.37)%、(33.50±8.75)%、(16.94±5.00)%vs(66.28±5.68)%,P0.01];死精子率显著高于对照组[(19.73±5.57)%、(35.80±5.90)%、(55.19±4.97)%vs(12.71±4.84)%,P0.01];畸形精子百分率显著高于对照组[(19.06±2.44)%、(23.78±3.29)%、(32.06±4.65)%vs(14.56±1.62)%,P0.01]。随着铝暴露剂量的增加,铝暴露组精子线粒体肿胀越明显;铝暴露组大鼠的精子MMP水平显著低于对照组[(60.88±7.37)%、(51.54±6.12)%、(37.70±7.44)%vs(74.35±4.67)%,P0.01],MMP水平与铝暴露剂量呈负相关(r_s=-0.819,P0.01);病理性开放的MPTP水平显著高于对照组[(27.80±5.74)%、(36.58±6.67)%、(64.95±8.07)%vs(15.37±7.13)%,P0.01],病理性开放MPTP与铝暴露剂量呈正相关(r_s=0.867,P0.01)。结论:铝暴露可致大鼠精子线粒体肿胀、精子MMP水平降低及MPTP病理性开放,并因此引起精子质量下降。     

丹参对烧伤大鼠肝细胞线粒体呼吸功能的影响

肝损害是严重烧伤后早期的重要并发症之一。为观察丹参能否改善大鼠烧伤后肝细胞线粒体呼吸功能，笔进行了以下研究。     

清胰汤对呼吸机相关肺炎患者免疫功能的影响

目的:探讨中药清胰汤在改善呼吸机相关肺炎患者免疫功能中的应用。方法:将106例呼吸机相关肺炎患者随机分为常规治疗组(对照组)和清胰汤治疗组(研究组),分别于治疗前,治疗后第7 d、第10 d,采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞比例,运用ELISA和放射免疫法测定细胞因子IL-8、IL-17、髓过氧化物酶(MPO)浓度;并比较两组患者的治愈率、死亡率以及ICU住院时间。结果:研究组于治疗后第7 d、第10 d,CD4+T细胞、CD4+/CD8+、NK细胞百分率明显高于对照组(P<0.05),CD8+T细胞百分率明显低于对照组(P<0.05);IL-8、IL-17、MPO浓度显著低于对照组(P<0.05)。研究组治愈率明显高于对照组(P<0.05),死亡率显著低于对照组(P<0.05)。对照组和研究组ICU住院时间分别为(19.7±3.5)d、(12.2±2.7)d(P<0.05)。结论:清胰汤治疗可以显著改善呼吸机相关肺炎患者的免疫功能,减轻炎症和应激反应,提高临床疗效。     

清胰汤对呼吸机相关肺炎患者免疫功能的影响

目的:探讨中药清胰汤在改善呼吸机相关肺炎患者免疫功能中的应用.方法:将106例呼吸机相关肺炎患者随机分为常规治疗组(对照组)和清胰汤治疗组(研究组),分别于治疗前,治疗后第7 d、第10 d,采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞比例,运用ELISA和放射免疫法测定细胞因子IL-8、IL-17、髓过氧化物酶(MPO)浓度;并比较两组患者的治愈率、死亡率以及ICU住院时间.结果:研究组于治疗后第7 d、第10 d,CD4+T细胞、CD4+/CD8+、NK细胞百分率明显高于对照组(P<0.05),CD8+T细胞百分率明显低于对照组(P<0.05);IL-8、IL-17、MPO浓度显著低于对照组(P<0.05).研究组治愈率明显高于对照组(P<0.05),死亡率显著低于对照组(P<0.05).对照组和研究组ICU住院时间分别为(19.7±3.5)d、(12.2±2.7)d(P<0.05).结论:清胰汤治疗可以显著改善呼吸机相关肺炎患者的免疫功能,减轻炎症和应激反应,提高临床疗效.     

肾气汤对肾硬化大鼠生存影响的研究

目的探讨肾气汤、活血化淤汤及健脾益肾解毒汤对阿霉素肾病、肾小球硬化模型大鼠生存的影响。方法使用肾气汤、活血化淤汤及健脾益肾解毒汤对肾小球硬化模型进行干预,观测各组大鼠在做模型前、药物干预后的尿蛋白、尿糖、血浆白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、血脂（TG、CH0）的变化。并在用药干预2月后处死大鼠,留取左肾标本,常规石蜡包埋,用来做HE、Masson染色,观察肾脏组织中肾小球硬化和其它病理损伤程度。比较各组大鼠的生存情况,寻找能延长阿霉素肾病、肾小球硬化大鼠生存的药物。结果活血化淤汤能提高大鼠的生存率,而金匮肾气汤可能会加速。肾硬化大鼠的死亡,缩短肾硬化大鼠的生存期。结论肾气汤加速肾硬化大鼠的死亡很可能是阿霉素与附子两者合用的结果。     

乌头汤对膝骨关节炎大鼠软骨细胞焦亡相关基因表达的影响

目的：探讨乌头汤通过调控软骨细胞炎性焦亡途径延缓膝骨关节炎软骨退变的作用与机制。方法：将36只SD大鼠(雄性,8周龄)随机分为空白对照组、模型对照组和乌头汤组,每组12只。空白对照组不造模,模型对照组和乌头汤组采用改良Hulth法造模。空白对照组与模型对照组采用生理盐水(3 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,乌头汤组采用乌头汤(生药浓度4.2 g·mL^-1)灌胃。干预8周后,麻醉状态下摘取大鼠膝关节软骨。采用Western blot检测不同组别关节软骨中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的蛋白含量表达;采用Real-time PCR检测不同组别关节软骨中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18的基因相对表达变化。结果：模型对照组和乌头汤组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白含量与基因相对表达量均上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P <0.01);乌头汤组能够下调NLRP3、Caspa...     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

活血化瘀药物在抗Thy-1抗体肾炎中的实验研究

目的为了探讨活血化瘀中药在抗Thy-1抗体肾炎中的作用及其机理。方法利用大鼠抗Thy一1抗体系膜增殖型肾炎模型,以强的松为对照,研究中药补肾活血汤、保肾康对此模型的干扰。并以免疫组化法,观察。肾组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果实验组大鼠24小时尿蛋白定量、血尿程度、肾脏病理改变及系膜区PCNA阳性细胞数的改变均较模型组明显为轻。结论补肾活血汤及保肾康对系膜增殖型肾炎有治疗作用。．     

补肾活血汤联合前列地尔对老年糖尿病肾病患者血液流变学及肾功能的影响

目的 探讨补肾活血汤联合前列地尔对老年糖尿病肾病(DN)患者血液流变学及肾功能的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月本院收治的老年DN患者160例,依据随机数字表将其分为对照组和观察组,每组80例.对照组给予前列地尔治疗,观察组在对照组的基础上给予补肾活血汤联合治疗.比较两组患者的血糖控制效果[空腹血糖(FB...     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的：建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法：用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果：定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log（X）＋25.99和Y=-3.409log（X）＋24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论：用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

健脾补肾活血汤治疗前列腺增生临床疗效及对尿动力学的影响

目的:探讨健脾补肾活血汤治疗前列腺增生临床疗效及对尿动力学的影响。方法:选择 2019年 10月—2020年 12月我院收治的 114例中医辨证为脾肾气虚、痰瘀互阻证的良性前列腺增生患者,分成 2组,每组 57例。对照组予坦索罗辛胶囊 0.2 g/次,每日 2次口服;研究组使用健脾补肾活血汤加减治疗,均治疗 2个月。观察治疗前、完成治疗末尿动力学、性激素水平变化并比较。完成治疗末比较两组疗效。对比两组停药时、停药 2周后症状积分情况。结果:两组完成治疗末前列腺体积、膀胱残余尿量、前列腺质量上较治疗前均显著下降,最大尿流率较治疗前均显著升高( P<0.05),且研究组以上指标改善水平均显著优于对照组( P<0.05)。研究组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义。两组完成治疗末睾酮、催乳素较治疗前均显著上升,雌二醇、黄体生成素较治疗前均显著下降( P<0.05),且研究组均显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组停药时和停药 2周后在尿频、尿中断、尿线细、排尿困难比较差异无统计学意义( P>0.05),对照组停药 2周后尿不尽、夜尿次数较停药时升高,差异有统计学意义( P<0.05),而研究组差异无统计学意义( P>0.05),研究组尿不尽、夜尿次数显著优于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。结论:健脾补肾活血汤加减进行辅助治疗能改善前列腺增生尿动力学,促进性激素水平升高,疗效可靠。     

补肾活血汤联合手法复位小夹板固定治疗老年肱骨近端骨折患者的临床效果

目的:探讨补肾活血汤联合手法复位小夹板固定治疗老年肱骨近端骨折患者的疗效及对肢体功能的影响.方法:选择2018年5月—2020年1月我院收治的老年肱骨近端骨折患者84例,随机分为对照组和观察组,各42例.对照组采用手法复位小夹板固定治疗,观察组在对照组基础上联合补肾活血汤治疗,治疗4周后对患者效果进行评估,比较两组骨折...     

槐杞黄干预小鼠IgA肾病模型的疗效观察以及机制探讨

目的：探讨槐耳菌质、枸杞子和黄精组方（简称槐杞黄）对免疫性肾病的疗效及其机制。方法：雌性BABL/c小鼠随机分为3组,即正常对照组、IgA肾病模型组、槐杞黄治疗组,每组10只。IgA肾病组和槐杞黄治疗组用牛血清白蛋白酸化水灌胃、牛血清白蛋白以及葡萄球菌肠毒素尾静脉注射免疫建立IgA肾病模型,正常对照组以酸化水灌胃,磷酸盐缓冲溶液尾静脉注射作为对照。槐杞黄治疗组于免疫8周后按4g/kg体重给予槐杞黄浸膏干预,正常对照组、IgA肾病模型组以等量的生理盐水作为对照。观察3组小鼠血清白蛋白、尿素、肌酐24h尿蛋白变化以及肾脏病理改变。12周后处死小鼠,无菌分离脾淋巴细胞,并将各组细胞悬液接种于24孔板中置于37℃、50ml/LCO2条件下孵育51h。用ELISA方法检测各组培养细胞上清中细胞因子IL-2、IL-4、INF-γ的水平,比较各组小鼠INF-γ/IL-4的比值。留取血清,用ELISA方法定量检测血清总IgA的浓度,比较各组动物血清IgA水平。结果：1）第八周和第十二周模型组24h尿蛋白均较对照组明显增加（P〈0.05）,治疗前（8周）槐杞黄治疗组和模型组24h尿蛋白差异无统计学意义（P〉0.05）,治疗4周后,槐杞黄治疗组24h尿蛋白较模型组明显降低（P〈0.05）;2）实验结束时模型组血清白蛋白较对照组明显下降（P〈0.05）,槐杞黄治疗组血清白蛋白较模型组明显升高（P〈0.05）;尿素氮、肌酐含量三组之间差异无统计学意义;3）病理检查显示对照组无明显异常,模型组出现较显著的肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多,毛细血管袢受压,开放欠佳,且免疫荧光显示肾小球系膜区和毛细血管壁有较强的颗粒状或者团块状IgA沉积;槐杞黄治疗组肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多情况和IgA沉积程度较模型组明显减轻,毛细血管袢开放良好;4）模型组IL-2、INF-γ的分泌较对照组下降（P〈0.01）、IL-4分泌较对照组升高（P〈0.01）;槐杞黄治疗后的IL-2、INF-γ的分泌较模型组升高（P〈0.01）,IL-4分泌较模型组下降;5）模型组INF-γ/IL-4的比值较对照组下降（P〈0.05）,槐杞黄治疗组INF-γ/IL-4的比值较模型组升高（P〈0.01）,血清总IgA的浓度模型组较对照组升高（P〈0.01）,槐杞黄治疗组较模型组降低（P〈0.05）。结论：槐杞黄治疗可以显著减少小鼠IgA肾病尿蛋白,减轻肾小球系膜增生。其机制可能与其上调IL-2、INF-γ表达以及下调IL-4表达,纠正Thl/Th2失衡的作用密切相关。     

常染色体隐性遗传性远端肾小管酸中毒患儿ATP6V0A4和ATP6V1B1基因突变分析

目的 分析常染色体隐性遗传性远端肾小管酸中毒(rdRTA)患儿ATP6V0A4和ATP6V1B1基因的突变,进行基因型和表型的相关性研究.方法 PCR扩增基因组DNA,直接测序分析来自3个家系3例患儿的ATP6V0A4和ATP6V1B1基因的突变位点,选取不相关的100例健康人作为对照.结果 1例患儿携带ATP6V0A4基因的1个新的纯合无义突变(p.R194X);1例患儿携带ATP6V1B1基因1个新的杂合无义突变(p.R114X)和1个已经报道过的杂合突变p.I386fsX441;第3例患儿未发现以上2个基因的突变.结论 对中国rdRTA患者基因突变分析有利于了解该类疾病的基因型和表型的相关性,增强临床医生对该类疾病的认识和治疗.