种植人骨髓间充质干细胞的猪角膜板层移植治疗兔角膜损伤的初步研究

目的研究种植人骨髓间充质干细胞（MSCs）的猪角膜基质治疗兔角膜损伤的可能性。方法用全骨髓贴壁法分离纯化人MSCs并传代,流式细胞仪检测免疫表型及诱导成脂、成骨分化鉴定。12只新西兰白兔随机分为2组,实验组取第3代MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上,培养4 d后移植到广泛损伤的兔角膜上,对照组单纯移植去上皮猪角膜基质。术后2、4、8周,取各实验眼行组织学检查,观察移植的MSCs及猪角膜基质的存活、转归及移植局部的反应。免疫组织化学、免疫荧光染色检测移植后角膜上皮细胞角蛋白12的表达。结果培养获得的MSCs中CD29阳性者占95.97%,CD44阳性者占96.49%,CD90阳性者占92.79%,CD105阳性者占94.66%,CD34阳性者占0.59%,CD45阳性者占0.36%,符合MCSs的免疫表型,并可以诱导成脂及成骨分化。实验组MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附、生长迅速,术后植片在植床上存活良好,无排斥反应,角膜较对照组透明,新生血管少,而对照组在移植后发生排斥反应。实验组角膜免疫组织化学及免疫荧光染色均检测出CK12阳性细胞。结论种植MSCs的猪角膜基质移植到损伤兔角膜后可以存活,MSCs可以分化为角膜上皮样细胞,具有构建组织工程角膜的潜能。     

人工角膜载体的体外构建及生物相容性研究

目的　应用壳聚糖（chitosan，CS）和蚕丝蛋白（silk fibroin，SF）构建组织工程角膜基质，探讨不同比例的CS和 SF共混膜的生物特性，为以后的角膜移植奠定基础。方法　将SF和CS按体积比3∶1和4∶1混合，体外构建具有相应器官特征的角膜基质层；体外培养原代兔角膜基质及上皮细胞，检测细胞分布情况和载体膜片的物理特性；免疫组织化学法测定细胞表型和分布情况,CCK-8试剂盒测定载体膜片毒性，电镜下观察细胞结构形态和附着情况，将构建的膜片植入兔板层角膜中检测组织生物相容性。结果　载体膜片的吸水率均在90%左右，明显强于天然角膜，抗拉力SF/CS 3∶1组为 0.90±0.02，SF/CS 4∶1组为 1.30±0.05，透光率均大于60%，且抗拉力和透光率随着CS含量增加而增强，但与天然角膜组织间仍存在差异。与载体膜片共培养的细胞在培养2周后，电镜下可见膜片上形成致密的细胞层，重构的板层角膜结构与天然角膜相似。CCK-8法检测结果显示，合成膜无明显毒性。免疫组织化学染色结果显示，培养出的基质细胞形态与天然角膜相似。动物板层移植术后，裂隙灯观察载体膜片组术后半个月内充血消失，无明显的前房炎症反应，术后1个月拆线时无明显新生血管。免疫组织化学法检测术后病理组织未发现CD4+、CD8+、CD31+T细胞浸润。结论　CS-SF可以用于组织工程角膜基质的构建，这为重建角膜基质提供了方向。     

大鼠角膜碱烧伤模型制备方法的研究

目的:探索相对稳定性强、一致性好的大鼠角膜碱烧伤动物模型。方法:将87只SD大鼠分为角膜缘碱烧伤20s组(A组,34只),角膜缘碱烧伤40s组(B组,23只),角膜中央碱烧伤40s组(C组,30只),用浸润1mol/L氢氧化钠的滤纸片,分别烧灼大鼠角膜缘和角膜中央,术后7d裂隙灯显微镜观察角膜透明度、角膜溃疡及角膜新生血管情况,并记录上述指标。结果:角膜缘碱烧伤(B组)较角膜中央烧伤(C组)溃疡发生率、角膜穿孔率和角膜上皮荧光素钠染色阳性率高,且有统计学差异(P<0.05);角膜缘烧灼时间长组(B组)溃疡发生率及角膜穿孔率高于角膜缘烧灼时间短组(A组),且有统计学差异(P<0.05);烧灼角膜缘和角膜中央(A,B,C组)均能诱导出角膜新生血管。结论:对于研究角膜新生血管的动物模型,以选择3mm圆形滤纸片角膜中央烧伤为佳;对于研究角膜缘干细胞缺乏所致角膜病变的实验,以选择环形滤纸片放置于角膜缘20s为佳。     

异种角膜脱细胞基质为供体进行角膜前板层移植的初步研究

目的探讨以异种猪角膜脱细胞基质为供体植片,分析兔角膜进行前板层移植后的生物相容性：设计实验研究。研究对象新西兰白兔。方法应用1％TritonX-100及冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,切取1／3厚度前板层作为供体角膜植片,对兔眼角膜前板层切除后进行移植,同时以新鲜猪角膜板层为供体对兔进行前板层移植作对照。通过术后角膜透明度、组织结构观察,评价猪角膜脱细胞基质的生物相容性及植片转归的情况。主要指标角膜透明度和组织学HE染色。结果制备的猪角膜脱细胞基质植片作前板层移植到兔眼后,未见明显的新生血管、炎症反应、角膜坏死等排斥现象,观察期内植片较透明;脱细胞基质表面上皮化良好,植片基质板层与植床逐渐融合,植片内有宿主细胞迁入生长,板层结构与正常角膜相似。结论猪角膜脱细胞基质具有良好的生物相容性、安全性和低抗原性,有望成为角膜板层移植的供体材料。     

人羊膜作为载体体外培养兔角膜上皮细胞移植治疗碱烧伤动物的实验研究

目的观察培养生长于人羊膜的兔角膜上皮细胞使其扩增并移植治疗角膜碱烧伤的效果。为培养角膜上皮细胞移植技术及应用于临床实践提供最佳的理论和实验依据。方法新西兰白兔30只（30眼）,随机分为3组（n=10）,右眼制成碱烧伤模型。A组：角膜上皮细胞羊膜移植组;B组单纯羊膜移植组;C组为对照组（碱烧伤后不作任何移植）。术后观察角膜透明度、角膜新生血管及上皮修复情况,裂隙灯显微镜照相记录。3组均于术后1周、2周、1个月及3个月时各取1眼角膜标本行病理组织检查。结果A组除1眼移植片在第7天脱落外,所有移植片在术后3d水肿消退,角膜逐渐透明。B组移植片持续水肿,眼前段炎性反应稍重,但较碱烧伤对照组轻。C组角结膜高度水肿浑浊,烧伤后观察3个月未发现角膜恢复透明现象。病理组织检查显示：A组角膜及周边上皮细胞为多层结构,角膜新生血管消失,基质的炎性细胞浸润减退;B组覆盖上皮细胞表现为完整上皮细胞型,C组角膜浑浊,新生血管及肉芽组织形成。结论人羊膜作载体体外培养兔角膜上皮细胞移植重建角膜基底膜和角膜上皮结构治疗兔碱烧伤后的角结膜损伤是一种合理有效的方法。     

角膜移植患者外周血中T细胞CD28分子的表达及其意义

目的　探讨角膜移植患者外周血T细胞及亚群CD2 8分子表达的变化及其意义。方法　于术前1d、术后第1、2、3、4周,应用流式细胞仪检测2 5例角膜移植患者外周血中CD2 8分子表达水平的变化。结果　角膜高血管化植床组患者术后外周血T细胞CD2 8分子表达比角膜无血管化植床组患者明显增高,也比术前明显增高(P <0 .0 1) ;6例发生排斥反应的患者均出于高血管化植床组;术后早期外周血T细胞中以CD4 + 细胞为主。结论　外周血T细胞CD2 8分子表达与角膜移植排斥反应关系密切,检测角膜移植患者外周血中的CD2 8分子表达可更早监测免疫排斥反应的发生     

Effect of administration of CTLA4-Ig as protein or cDNA on corneal allograft survival

PURPOSE: To examine the role of the CD28-CD80-CD86 pathway of T-lymphocyte costimulation in corneal allograft rejection and the effect of blockade of that pathway on graft survival. METHODS: Kinetics of CD80 and CD86 expression in the cornea and draining lymph nodes were examined by RT-PCR and immunohistochemistry in untreated allograft recipients in a high-responder rat model. The effect of blockade of CD28-mediated costimulation was first examined by ex vivo incubation of excised Brown Norway rat donor cornea with the inhibitory protein CTLA4-Ig or an adenovirus vector (AdCTLA) expressing CTLA4-Ig, before grafting into Lewis rat recipients. A second group of graft recipients received systemic posttransplantation treatment with either CTLA4-Ig or AdCTLA. RESULTS: Expression of CD80 mRNA was increased in both donor and recipient cornea 16 hours after transplantation, whereas CD86 was detected constitutively, with no significant early increase. Immunohistochemistry on day 5 after transplantation demonstrated major histocompatibility complex (MHC) class II expression, no CD80, and only a trace of CD86 in corneal allografts. In lymph nodes strong MHC class II, weak CD80, and moderate CD86 expression was noted. Both donor cornea and recipient treatment with CTLA4-Ig resulted in prolonged allograft survival. AdCTLA was found to induce sustained secretion of bioactive CTLA4-Ig from corneas infected ex vivo. Survival of corneal allografts incubated with AdCTLA was marginally prolonged, and systemic treatment with AdCTLA significantly prolonged survival. CONCLUSIONS: Protein- or gene-based administration of CTLA4-Ig prolongs allograft survival by treatment of either the recipient or the donor tissue ex vivo before grafting.     

Inhibitory effect of tetrandrine eye drops on corneal allograft rejection in rats

To observe the effect of tetrandrine (Tet) eye drops of different concentrations on corneal graft and on allograft rejection in rats. · METHODS: Models of allograft rejection were set up in 64 SD rats and they were then randomly divided into 3, 5, 10g/L tetrandrine eye drops-treated and control groups. At different times postoperatively, neovascularization and inflammation of corneal graft were observed using slit-lamp microscopy, HE staining, light microscopy and microphoto-analysis. · RESULTS: The graft was infiltrated mainly with lymphocytes and mononuclear-macrophages. Corneal neovascularization and inflammation were significantly inhibited in the 5g/L Tet-treated group (P <0.05), compared with control group on day 7, 14, 21, 28 postoperatively. · CONCLUSION: Corneal edema and corneal epithelial bubble appear when the graft is treated with tetrandrine of higher concentration (10g/L), but 5g/L Tet eye drops significantly inhibit corneal allograft rejection in rats without serious side-effects.     

汉防己甲素滴眼液治疗大鼠角膜移植排斥反应及植片变化

目的:探讨汉防己甲素(Tet)滴眼液治疗实验性角膜移植排斥反应效果及植片变化。方法:建立大鼠角膜移植排斥反应模型,随机分4组:A、B、C、D组为SD-Wistar大鼠行同种异体角膜移植术,SD鼠为受体,Wistar鼠为供体,其中A组为空白对照组,B～D组分别为3,5,10g/L汉防己甲素滴眼液治疗组。术后不同时间裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜植片新生血管情况,并观察植片病理学改变。结果:植片内主要为淋巴细胞及巨噬细胞浸润。B、C、D组术后7,14,21,28d时角膜植片水肿、淋巴细胞及巨噬细胞浸润及新生血管明显少于A组(P<0.05)。不同Tet浓度组间比较C组排斥指数最低(P<0.05)。结论:高浓度(10g/L)Tet治疗角膜移植排斥反应时可出现角膜基质水肿及角膜大泡,但5g/L浓度Tet滴眼液可有效抑制角膜移植排斥反应,且无明显毒副作用。     

Bevacizumab inhibits corneal neovascularization in an alkali burn induced model of corneal angiogenesis

BACKGROUND: New and uncontrolled blood vessel development in the cornea is a pivotal process in the pathogenesis of several corneal diseases. These corneal diseases may finally cause blindness and managing them therapeutically is problematic. The data supporting a causal role for vascular endothelial growth factor in corneal neovascularization are extensive. This study aimed to evaluate the effect of subconjunctival bevacizumab (Avastin) on experimental corneal neovascularization in rabbits. METHODS: Chemical cauterization of the cornea was performed by touching central cornea with a 5-mm-diameter NaOH-soaked cotton applicator for 10 s in 20 eyes of 20 White New Zealand rabbits. The rabbits were then divided randomly into two equal groups. Bevacizumab (2.5 mg) was administered to 10 eyes (group 1) by a subconjunctival injection immediately after chemical cauterization of corneal surface. As a control, 10 eyes (group 2) received an injection of distilled water. Rabbits were examined daily for detection of the first signs of neovascularization. Three weeks later, the extent of corneal neovascularization was evaluated by direct examination and photograph analyses. Total corneal neovascularization area, degree of circumference involved and longest neovascular pedicle length were assessed. RESULTS: Bevacizumab significantly decreased the total neovascularization area (P < 0.009), the circumference involved (P < 0.011) and the longest neovascular pedicle length (P < 0.023). CONCLUSION: Local injection of bevacizumab has a significant effect on inhibition of alkali burn-induced corneal neovascularization. This shows the potential value of bevacizumab in the treatment of corneal neovascularization.     

重组人Ⅲ型胶原基组织工程角膜植入兔眼生物相容性研究

背景组织工程角膜由于更接近活体角膜形态,植入体内易于成活而成为当今眼科学关注的热点。目的探讨组织工程角膜重组人Ⅲ型胶原（RHC-Ⅲ）／聚[3-（甲基丙烯酰胺）丙基-二甲基（3-磺丙）胺]（PMPDSAH）互穿聚合物网络（IPN）（RHC-Ⅲ／PMPDSAHIPN）水凝胶植入兔眼的生物相容性及其作为角膜替代物的可行性。方法中国大耳白兔108只按照随机数字表法分为2个组,实验组90只,正常对照组3只,其他15只兔（30只眼）为同种异体移植组提供供体角膜。实验组根据角膜材料的不同分为RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组、负载神经生长因子（NGF）的NGFRHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组,每组各30只兔,均取右眼为手术眼。将实验组3种材料移植入兔角膜前板层,术后裂隙灯下观察有无排斥反应,对角膜透明度、角膜新生血管（CNV）的变化进行评分,记录各组兔术眼角膜上皮化时间,观察期为6个月。分别于术后3d、1周、2周及术后1、3、6个月每组各取5只兔角膜行苏木精-伊红染色,术后6个月采用免疫组织化学法检测角膜上皮细胞特异性标志蛋白角蛋白K3的表达。对实验组3个亚组各时间点角膜透明度和CNV评分的差异比较进行多组独立样本的Kraskal—WallisH检验,3个亚组角膜上皮化时间比较采用单因素方差分析及LSD—t检验。结果实验的6个月中,RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组、NGF RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组兔术眼的植片均未脱出,未见免疫排斥反应。术后6个月,RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组、NGFRHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组角膜透明度、CNV与正常对照组比较差异均无统计学意义（H=4．34,P=0．23;H=2．60,P=0．46）。NGFR HC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组角膜上皮化时间最短,平均为（4．97±0．63）d,与RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组比较差异均有统计学意义（t=11．97,P=0．00;t=5．80,P=0．00）;RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组比较差异有统计学意义（t=6．32,P=0．00）。RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和NGF RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组移植材料与兔角膜融合较好,术后2周材料部分降解,术后1个月材料均完全降解,术后6个月新生胶原纤维排列整齐,角膜上皮细胞中K3表达阳性。结论RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN与兔眼的生物相容性较好,NGF可以有效地促进角膜创口愈合和上皮再生,提高其力学强度后,有望作为一种安全有效的角膜替代物。     

Clinical application of a shape-preserving rapid corneal donor dehydrater

AIM: To describe the design and clinical application of a corneal donor dehydrator which can quickly dehydrate corneas and keep its original shape. METHODS: The corneal donor material is placed on stainless steel beads with different diameters in the dehydrating box to make the cornea the same shape as the steel ball. Then, the cornea is placed inside the dehydrater for rapid dehydrating using the internal cleaning and ventilation system. Totally 83 eyes underwent deep anterior lamellar keratoplasty (DALK) using corneal donor tissue preserved with corneal dehydrater, and 60 patients (60 eyes) received DALK by the same surgeon using corneal donor tissue preserved with glycerol were included in the control group. The best corrected visual acuity (BCVA), the thickness and transparency of the corneal buttons were recorded. RESULTS: After the completion of dehydrating, all the donor corneas maintained a normal shape without any shrinkage or distortion, and the average intraoperative rehydration time was 43.3±12.1s during operation. The mean BCVA of the dehydrater group was 0.30±0.18 at 1wk and 0.32±0.16 at 1mo, which were statistically better than that of the control group (P<0.001). The score of corneal buttons transparency were lower than that of the control group with statistical difference (P<0.001). The thickness of corneal buttons at 1wk and at 1mo in the dehydrater group was significantly better than that of the control group respectively (P<0.001). One week after operation, no corneal button turbidity or edema was observed in both groups. CONCLUSION: The dehydrater can quickly dehydrate the corneal material in a clean and airtight environment and maintain the original shape of the corneal donor during the dehydrating process. This dehydrater is recommended for long-term high-quality preservation in areas where corneal materials cannot be used within a reasonable time period.     

组织工程上皮移植对碱烧伤角膜新生血管的影响

目的：评价组织工程上皮移植在碱烧伤角膜缘干细胞缺乏症中对角膜新生血管的抑制作用。

方法：回顾性非随机的病例研究。2006/2011年我院收治的19例(23眼)完全性角膜缘干细胞缺乏症的碱烧伤患者, 10例13眼行组织工程上皮移植,9例10眼行羊膜移植。所有患者在手术前后均用裂隙灯观察角膜新生血管情况,在术后第21,60d对角膜新生血管进行评分比较。

结果：术后第21d和术后第60d组织工程上皮移植组和羊膜移植组角膜新生血管均较术前明显减少( P<0.05),在术后两个评价时间点,组织工程上皮移植组平均角膜新生血管分数明显低于羊膜移植组。

结论：对碱烧伤所致角膜缘干细胞缺乏的患者,组织工程上皮移植抑制角膜新生血管的作用明显好于羊膜移植。     

Tectonic deep anterior lamellar keratoplasty in impending corneal perforation using cryopreserved cornea

We report a case of tectonic corneal transplantation for impending corneal perforation to preserve anatomic integrity using cryopreserved donor tissue. An 82-year-old woman exhibiting impending corneal perforation suffered from moderate ocular pain in the left eye for one week. After abnormal tissues around the impending perforation area were carefully peeled away using a Crescent blade and Vannas scissors, the patient received tectonic deep anterior lamellar keratoplasty using a cryopreserved cornea stored in Optisol GS® solution at -70℃ for four weeks. At six months after surgery, the cornea remained transparent and restored the normal corneal thickness. There were no complications such as corneal haze or scars, graft rejection, recurrent corneal ulcer, and postoperative rise of intraocular pressure. Cryopreserved donor lamellar tissue is an effective substitute in emergency tectonic lamellar keratoplasty, such as impending corneal perforation and severe necrotic corneal keratitis.     

构建组织工程人工角膜的天然生物材料的研究进展

当角膜失去透明性或者形状发生改变时,可能会造成视力的丧失。最有效的治疗手段是使用全层或者部分层供体角膜进行角膜移植手术。然而,在全球范围内捐赠角膜的来源严重不足,约有超过98.5%的角膜盲患者在等待捐赠角膜。此外,在角膜移植后,存在感染的可能以及异体移植免疫排斥反应等问题。因此,多年以来组织工程角膜作为供体角膜的可行替代品,不同材料和方法已被广泛研究。并且在近十几年来,有了突破性的进展。研究的最终目的是为了构建具有良好透明性、生物相容性以及合适机械强度的组织工程全层或部分层人工角膜,以修复、再生或替换病变角膜。本综述讨论了近年来最常被研究的天然生物材料包括羊膜、脱细胞角膜、胶原、蚕丝,作为人工角膜支架的研究进展以及目前存在的问题。并进一步说明了该领域中上述讨论的生物材料所面临的其他挑战,以及今后的研究方向。     

诱导人脐带间充质干细胞分化为角膜上皮样细胞的研究

背景眼表疾病导致的角膜盲已成为全球致盲性角膜疾病中的主要原因之一。随着组织工程技术的发展和进步,组织工程角膜为眼表疾病的治疗开辟了新的途径。目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞（UC—MSCs）移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨人UC-MSCs分化为角膜上皮细胞以及治疗兔角膜损伤的可行性。方法获取人脐带组织,采用Ⅳ型胶原酶消化法分离纯化人UC—MSCs并传代,取第3代细胞用于扩增和实验。流式细胞仪检测细胞的免疫表型及诱导成骨分化鉴定。24只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为2个组,将人UC—MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上,培养4d后行实验组兔左眼板层角膜移植;对照组以相同的手术方法单纯移植去上皮猪角膜基质。术后对角膜定期行活体激光共焦显微镜检查,并分别于术后2、4、8周摘除各组实验眼行组织病理学和免疫荧光检查,评价移植到兔角膜基质的人UC-MSCs的存活、分化以及移植局部的反应等;应用免疫荧光技术检测移植后角膜上皮细胞中角蛋白3（CK3）、CKl2以及转运蛋白G超家族成员（ABCG2）的表达。结果消化培养的人UC—MSCs呈圆形,细胞胞体较大,贴壁后细胞呈长梭形。培养获得的人UC—MSCs的细胞表型CD105^＋／CD29^＋／CD44^＋／CD34^-／CD45^-,并可诱导分化为成骨细胞。实验组人ISC—MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附良好、生长迅速,术后植片在植床上存活良好,种植了人UC-MSCs的去上皮猪角膜移植到兔眼,可见实验组受体角膜较对照组透明,未见明显新生血管,在活体共焦显微镜下可见新生的角膜上皮样细胞,未发生免疫排斥反应。免疫荧光检测可见在重建的角膜上皮层检测到CK3及CKl2的阳性表达,而未见ABCG2的表达。结论将种植了人UC—MSCs的猪角膜基质移植到损伤的兔角膜后,人UC—MSCs可以存活、增生并分化为角膜上皮样细胞,可用于修复甚至重建损伤的角膜表层。     

人脐静脉血管内皮细胞在体移植替代猴角膜内皮细胞的形态学分析

目的　使用去除后弹力层的恒河猴自体角膜为细胞载体,将培养的人脐静脉血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎ-ｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＵＶＥＣ）种植到角膜内表面,观察ＨＵＶＥＣ替代恒河猴角膜内皮细胞的功能情况以及ＨＵＶＥＣ在恒河猴眼内生长的情况。方法　取恒河猴６只随机分为３组:实验组（３只）、实验对照组（２只）、空白对照组（１只）。实验组:用离心沉淀法将培养的ＨＵＶＥＣ移植到去除后弹力层的恒河猴自体角膜内表面,之后将自体角膜缝回植床;实验对照组:将撕除部分后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床;空白对照组:取下术眼角膜植片不做任何处理原位缝回植床。术后观察各组角膜植片透明情况;实验组及实验对照组于术后３０ｄ及６０ｄ、空白对照组于术后６０ｄ行术眼摘除,标本做病理切片、ＣＤ３４免疫组化及扫描电镜,观察房角结构及ＨＵＶＥＣ在角膜植片内表面形态分布。结果　实验组角膜植片维持了一定的厚度和透明性,而实验对照组角膜植片发生严重大泡性改变。病理切片示实验组角膜内表面可见一层细胞生长,ＣＤ３４染色阳性,提示为血管内皮细胞;实验对照组角膜内表面未见任何细胞生长;空白对照组角膜植片保留完整后弹力层及内皮细胞层。扫描电镜示实验组有ＨＵＶＥＣ单层在角膜内表面生长但有大量白细胞聚集及少量细胞碎片嵌顿于小梁网;实验对照组角膜内表面残留胶原纤维样物质,无细胞生长;空白对照组见完整六边形角膜内皮细胞层。结论　ＨＵＶＥＣ能够在撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面生长并发挥一定的屏障作用,维持角膜的厚度和透明性,但会产生较重的排斥反应。     

角膜新生血管对角膜损伤神经再生影响的研究

目的 探讨角膜新生血管对大鼠角膜损伤神经再生的影响。设计 实验研究。研究对象 SD大鼠。方法 采用随机数字表法将18只SD大鼠分为3组,每组6只。A组行缝线铲针角膜基质层间切开及缝线诱导新生血管术,术后0、3、7天给予结膜下注射贝伐单抗;B组行缝线铲针角膜基质层间切开及缝线诱导新生血管术;C组0、3、7天行结膜下注射贝伐单抗操作。分别在术后1天、1周、2周、4周,采用裂隙灯照相法观察记录角膜新生血管面积;角膜共聚焦显微镜记录神经长度。采用Cochet-Bonnet知觉仪测量缝线区的角膜知觉,采用Schirmer试验泪液线测量右眼的泪液分泌量。术后4周角膜全层铺片免疫荧光染色,记录上皮下神经密度。主要指标 角膜新生血管面积比、神经长度、上皮下神经密度、角膜知觉、泪液分泌量。结果 A、B组术后1、2周有角膜新生血管生长,术后4周消退闭锁,C组无角膜新生血管生长。A组术后1、2周新生血管面积比为（10.86±1.57）%和（1.87±0.69）%,分别小于B组的（25.42±2.65）%和（6.48±1.10）%（P均=0.000）。术后1天A、B组神经长度分别为（151.02±4.74）μm、（149.69±4.32）μm（P=0.306）;术后1、2、4周,A组神经长度均长于B组,分别为（193.84±2.25）μm与（155.73±2.98）μm、（217.15±2.08）μm与（166.21±2.41）μm、（220.70±1.41）μm与（203.76±1.74）μm（P均=0.000）。术后A、B组神经长度均有减少并有恢复趋势,C组无明显变化。术后4周A组损伤区上皮下神经密度（22.60%±2.02%）明显高于B组（9.41%±2.01%）（P=0.000）。A、B组上皮下神经短小稀疏、密度低,C组形态正常。A、B组术后1、2、4周时角膜知觉及泪液分泌量均无统计学差异（P均＞0.05）。A、B组均有下降并恢复趋势,C组无明显变化。结论 角膜新生血管可能抑制角膜损伤神经再生,抑制角膜新生血管有利于神经再生。（眼科, 2017, 26： 106-111）     

恒河猴骨髓间充质干细胞角膜移植后的超微结构观察

背景寻求理想的种子细胞是解决角膜移植供体匮乏的研究热点。骨髓间充质干细胞（BMSCs）已被成功地在体内或体外诱导为角膜上皮细胞或视网膜神经节样细胞,但尚无诱导为角膜内皮细胞的报道。目的探讨BMSCs移植于角膜内皮表面后的存活和增生情况,进而为BMSCs体内诱导为角膜内皮细胞的研究奠定基础。方法健康成年恒河猴4只,分为实验组（3只）和对照组（1只）,均取右眼为实验眼。采用密度梯度离心联合贴壁法分离培养BMSCs,培养至第3代,通过流式细胞仪检测细胞表面分子、透射电子显微镜观察细胞超微结构以及对细胞进行脂肪细胞诱导等方法鉴定体外培养的BMSCs,同时用含0．01g／L 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）的完全培养基增生培养对细胞进行标记备用。实验组与对照组均用7mm环钻钻取恒河猴右眼角膜植片,撕除角膜内皮细胞层,实验组采用离心沉淀法将BrdU标记的BMSCs移植于角膜植片,而对照组未进行细胞移植,最后将角膜植片原位缝合回植床。分别于术后1、2、3个月摘取术眼角膜植片进行扫描电子显微镜检查,观察移植后细胞分布及连接情况,同时行BrdU免疫组织化学染色。结果密度梯度离心联合贴壁法可以获得较高纯度的BMSCs,体外培养12～16d细胞90％融合,细胞呈梭形,平行或漩涡状排列。培养细胞的CD29表达阳性率为94．26％,CD45表达阳性率为4．02％,CD34表达阳性率为7．51％。透射电子显微镜显示核质比增大,细胞质内可见丰富的线粒体、高尔基体及粗面内质网。培养的细胞通过脂肪细胞诱导液培养3周后,油红O染色细胞质被染为橘红色,细胞核染为蓝色。实验组术后1个月,右眼角膜植片内皮表面细胞呈短梭形,术后2个月呈梭形及多角形,术后3个月多数细胞呈多角形,细胞数量增多,细胞连接较前紧密,均为单细胞层;角膜植片内表面可见BrdU抗体染色阳性的细胞;对照组扫描电子显微镜检测角膜植片内皮表面无细胞生长,弹性纤维裸露,BrdU染色阴性。结论BMSCs通过离心沉淀法移植于角膜内表面可以存活并增生为单细胞层。     

新型免疫抑制剂J2纳米混悬液抑制大鼠角膜移植排斥反应的实验研究

目的　观察计算机辅助药物设计的新型免疫抑制剂Ｊ２纳米混悬液（ｎａｎｏ-ｓｕｓｐｅｎ-ｓｉｏｎ,ＮＳ）结膜下注射对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用。方法　成年雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为供体,Ｓｐｒａｇｕｅ-Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠为受体,建立同种异体穿透性角膜移植模型。手术大鼠随机分成３组,每组各１６只（３２眼）,Ａ组:ＳＤ大鼠自体角膜移植,结膜下注射空白溶剂０．０５ｍＬ;Ｂ、Ｃ组为同种异体角膜移植组,术后分别给予结膜下注射空白溶剂０．０５ｍＬ及１０ｇ?Ｌ－１Ｊ２ＮＳ。术后记录角膜植片排斥指数（ｒｅｊｅｃｔｉｏｎｉｎｄｅｘ,ＲＩ）,当ＲＩ≥６,确定为排斥。各组于角膜移植后７ｄ、１４ｄ随机选取２只行术眼及同侧颌下淋巴结病理学检查。结果　Ａ组:术后２～３ｄ角膜植片由透明逐渐变为混浊、水肿,随后保持透明。Ｂ组:术后３～５ｄ角膜植片开始水肿、混浊,７～１０ｄ时水肿、混浊发展迅速。Ｃ组:术后１周反应与Ａ组相似,之后出现角膜水肿、混浊,术后９～１４ｄ角膜完全混浊。Ａ、Ｂ、Ｃ组的角膜植片生存时间分别为（３０．００±０．００）ｄ、（１０．７５±１．６０）ｄ、（１４．３３±２．９３）ｄ,三组间差异有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。组织学观察发现:Ａ组术后炎症反应轻微,基质厚度基本正常或增厚,内皮层完整。Ｂ组术后１４ｄ时可见典型的免疫排斥反应,植片角膜上皮空泡样改变、部分崩解坏死。Ｃ组较Ｂ组角膜植片中细胞成分和新生血管均少,同侧颌下淋巴结增生明显减弱。结论　Ｊ２ＮＳ结膜下注射有抑制大鼠角膜移植排斥的作用,可减轻角膜移植术后角膜植片和同侧颌下淋巴结的细胞增生,抑制免疫应答。