补肺益肾方对COPD大鼠气道黏液高分泌及肺组织Notch3，HES1的影响

目的:观察补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌及Notch信号通路相关蛋白Notch3,HES家族发状分裂相关增强子1(HES1)的影响,探讨其作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺益肾方组和氨茶碱组,每组12只。第1~12周,采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型;第13~20周,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组给予相应药物灌胃(补肺益肾方组3.7 g·kg^-1·d-1,氨茶碱组54 mg·kg^-1·d-1)。第20周灌胃结束后取材,观察肺组织病理,检测大鼠肺功能,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),黏蛋白5AC(MUC5AC)和肺组织Notch3,HES1,MUC5AC mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺功能显著降低(P<0.05,P<0.01),平均肺泡数显著降低(P<0.01),肺泡平均截距显著升高(P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著升高(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肺益肾方组和APL组肺功能和肺病理损伤显著改善(P<0.05,P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著降低(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肺益肾方抑制COPD大鼠气道黏液高分泌,其机制与调控Notch3,HES1蛋白有关。     

调补肺肾法对COPD大鼠JAK/STAT信号转导的影响及远后效应

目的:评价调补肺肾3种方法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾法)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠JAK/STAT信号转导的影响及远后效应.方法:大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,采用香烟暴露联合反复细菌感染法制备COPD大鼠模型.于第9周对照组、模型组给予生理盐水,其余组分别给予相应药物灌胃,于第20,32周分批取材,观察肺组织病理,p-JAK2,p-STAT1,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达及JAK2和SOCS3 mRNA表达.结果:第20,32周时,模型组JAK2 mRNA和p-JAK2,p-STAT1,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达较对照组升高(P＜0.01),3个中药(补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方)组及氨茶碱组较模型组显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).模型组SOCS3 mRNA较对照组升高(P＜0.01),3个中药组及氨茶碱组较模型组明显升高(P＜0.01),3个中药组明显高于氨茶碱组(P ＜0.05,P＜0.01).与第20周比较,第32周补肺健脾组JAK2mRNA和p-JAK2,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),补肺益肾组p-STAT3降低(P＜0.01),益气滋肾组p-STAT3,p-STAT5降低(P ＜0.05,P＜0.01),氨茶碱组上述指标均无显著性差异.结论:调补肺肾3法可明显减轻COPD肺组织损伤,且具有良好的远后效应,可能与调控JAK/STAT信号转导有关,其中补肺健脾方在降低p-JAK2,p-STAT3,p-STAT5表达方面,补肺益肾方在降低p-STAT3,益气滋肾方在降低p-STAT3,p-STAT5表达方面具有良好的远后效应.     

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病大鼠右心室重构的影响和远后效应

目的评价调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠右心室重构的影响和远后效应。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,每组20只。除对照组外其余各组采用香烟暴露联合细菌感染法制作COPD模型8周,于第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃至第20周。于第20、32周分批取材,观察大鼠心肌组织超微结构,计算右心肥大指数(RVHI)和心肌组织细胞因子的表达。结果第20、32周时,各给药组及对照组大鼠RVHI均低于模型组(P<0.01);补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组大鼠RVHI较氨茶碱组显著降低(P<0.05或P<0.01)。第20、32周时,模型组大鼠肌节长度较对照组缩短(P<0.05),补肺健脾组较模型组增长(P<0.01)。第20、32周时,模型组大鼠心脏组织细胞因子表达高于其余各组(P<0.01);补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组大鼠内皮素-1(ET-1)表达较氨茶碱组明显降低(P<0.01)。结论调补肺肾三法可改善COPD右心室重构并有明显远后效应,其中以补肺健脾方和补肺益肾方尤为显著,其作用机制可能与调节细胞因子有关。     

补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠肺脏Jagged1/notch1通路的影响

目的:评价补肺益肾方联合舒肺贴对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠肺脏Jagged1/notch1通路的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、舒肺贴组、补肺益肾组、补肺益肾联合舒肺贴组和氨茶碱组。采用熏烟和细菌感染制备COPD模型。分别于第0,8,20周观察肺功能,第20周检测肺jagged1、notch1mRNA和蛋白表达。结果:模型对照组大鼠肺潮气量(tidal volume,VT)、呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF)及肺脏Jagged1、Notch1基因及蛋白表达降低(P0.01)。各治疗组VT、PEF、Jagged1、Notch1基因和蛋白较模型对照组升高,以联合组升高明显(P0.05)。结论:补肺益肾联合舒肺贴可调控肺组织Jagged1、Notch1基因及蛋白表达,参与细胞分化过程,作用优于单独使用补肺益肾方或舒肺贴。     

补肺益肾组分方联合针刺对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺小血管的影响

目的?观察补肺益肾组分方联合针刺不同治疗时期对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺小血管的影响。方法?将240只大鼠随机分为空白对照组（空白组）、模型组、补肺益肾组分方组（组分方组）、针刺组、补肺益肾组分方联合针刺组（联合组）和氨茶碱组，每组40只。1~12周采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型。13~20周组分方组、针刺组、联合组及氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方、针刺、补肺益肾组分方联合针刺和氨茶碱干预，空白组和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）灌胃，停止干预后继续观察至第28周，分别在第14、16、20、24和28周取材。观察不同治疗时期血管壁厚度占血管外径百分比（WT%）、管壁面积占血管总面积百分比（WA%）及管腔面积占血管总面积百分比（LA%）的变化，检测肺组织中血管内皮生长因子（VEGF）和内皮素-1（ET-1）表达，并采用R值综合评价法对各指标进行综合评价。结果?与空白组比较，模型组14~28周WT%、VEGF、ET-1均升高，16~28周WA%升高、LA%降低（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，氨茶碱组14、24、28周WT%降低，16~24周VEGF降低，16、28周ET-1降低，16、24、28周R综合降低；组分方组14~28周WT%降低，16、20周WA%降低、LA%升高，14~24周VEGF降低，16~28周ET-1降低，R综合第16、24、28周降低；针刺组14~28周WT%、R综合降低，20周WA%降低、LA%升高，14、20周VEGF降低，20、24周ET-1降低；联合组14~28周WT%、VEGF降低，16、20、28周WA%和ET-1降低、LA%升高，16~28周R综合降低（P<0.05，P<0.01）。与针刺组比较，组分方组16周VEGF、ET-1降低，28周R综合降低；联合组16周VEGF降低，ET-1、R综合24周升高，28周降低（P<0.05，P<0.01）。与氨茶碱组比较，组分方组14、20周VEGF降低，20、24周ET-1、R综合降低；针刺组16周VEGF、ET-1升高，14、20周VEGF降低，20、24周ET-1降低，20、28周R综合降低；联合组14、20周VEGF降低，20、24周ET-1、R综合降低（P<0.05，P<0.01）。综合所有时间点显示，与模型组比较，各治疗组R综合均降低（P<0.01）；与氨茶碱组比较，组分方、针刺及联合组R综合降低（P<0.05，P<0.01）。结论?补肺益肾组分方、针刺及其联合治疗可明显改善COPD肺组织肺血管重构，针刺起效早，组分方及其联合针刺作用时间长，以联合为优。     

健脾补肺方对幼龄哮喘大鼠cAMP/PKA/CREB信号通路的影响

目的 观察健脾补肺方对卵蛋白（OVA）致敏并攻击复制的幼龄哮喘大鼠模型气道炎症、高反应性及环磷酸腺苷（cAMP）信号通路活性的影响。方法 雄性SD大鼠75只,随机选取15只作为正常组,剩余大鼠随机分为哮喘模型组,健脾补肺方组（8.37 g·kg^-1·d^-1）,氨茶碱组（40 mg·kg^-1·d^-1）和地塞米松组（0.1 mg·kg^-1·d^-1）,每组15只。用0.2% OVA的氢氧化铝凝胶10点致敏,并以1% OVA生理盐水溶液雾化攻击复制幼龄大鼠哮喘模型,并给予相应的药物处理。小动物肺功能仪观察大鼠气道高反应（AHR）变化,支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞计数及分类计数观察炎症细胞数量变化,苏木素-伊红（HE）,马松（Masson）和碘酸雪夫氏（PAS）染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中白细胞介素（IL）-4,IL-5,IL-13,γ干扰素（IFN-γ）,肿瘤坏死因子（TNF）-α和血浆中cAMP水平变化;免疫组化法观察肺组织蛋白激A（PKA）蛋白表达变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）观察肺组织环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB） mRNA和蛋白表达变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠气道阻力（RL）明显增加而Cdyn明显降低（P<0.05）,BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞比例显著升高,外周血IL-4,IL-5,IL-13,TNF-α水平显著升高而IFN-γ水平显著降低（P<0.01）,肺组织病理改变明显;cAMP水平显著下降,肺组织中PKA和CREB的表达显著下调（P<0.01）。与模型组比较,健脾补肺方可以抑制AHR,降低BALF中的白细胞总数和嗜酸性粒细胞比例及RL（P<0.05）,改善大鼠肺组织病理改变,增加Cdyn（Cdyn）,上调大鼠血清中cAMP水平和肺组织中 PKA和CREB表达（P<0.01）。结论 健脾补肺方能够改善幼龄哮喘大鼠的AHR,抑制气道炎症,减轻肺组织损伤,其机制可能与上调cAMP/PKA/CREB通路活性相关。     

基于VEGF/PI3K/Akt通路的补肺益肾组分方干预慢性阻塞性肺疾病改善肺血管重构机制研究北大核心CSCD

目的基于血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探讨补肺益肾组分方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺血管重构的影响。方法选取32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、补肺益肾组分方组(简称组分方组)和氨茶碱组,每组8只。采用香烟烟雾熏吸联合肺炎克雷伯氏菌反复感染法制备COPD大鼠模型。正常组和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃(雄鼠2.0 mL/次,雌鼠1.5 mL/次),补肺益肾组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方[5.5 mg/(kg·d)]和氨茶碱[54.0 mg/(kg·d)]混悬液灌胃,干预8周后取材。观察大鼠肺功能和肺组织病理变化,免疫荧光和免疫组化法检测细胞分化因子34(CD34)、VEGF、内皮素-1(ET-1)蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测VEGF、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、ET-1 mRNA表达,Western Blot法检测VEGF、VEGFR2、PI3K、Akt、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)、50%呼气流速(EF50)、用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气容积(FEV 0.1)、平均肺泡数(MAN)、管腔面积占血管总面积百分比(LA%)降低,功能残气量(FRC)、肺泡平均截距(MLI)、支气管壁厚度(BWT)、管壁厚度占外径百分比(WT%)、管壁面积占血管总面积百分比(WA%)、VEGF、ET-1、VEGFR2、PI3K、Akt、p-Akt、m TOR蛋白表达及VEGF、VEGFR2、ET-1 mRNA表达升高(P<0.01),肺组织CD34蛋白阳性表达增多。与模型组同期比较,氨茶碱组干预后TV、PEF、EF50、MAN、LA%升高(P<0.05,P<0.01),MLI、WT%、WA%、VEGF、ET-1、VEGFR2、PI3K、m TOR蛋白表达及VEGF、VEGFR2、ET-1 mRNA表达降低(P<0.01),肺组织CD34蛋白阳性表达降低;组分方组干预后TV、PEF、EF50、FEV 0.1、MAN、LA%升高,FRC、MLI、W%、WA%、BWT、VEGF、ET-1、VEGFR2、PI3K、m TOR、p-Akt蛋白表达及VEGF、VEGFR2、ET-1 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),肺组织CD34蛋白阳性表达降低。与氨茶碱组同期比较,组分方组干预后PEF、EF50升高,MLI、WT%降低(P<0.05,P<0.01)。结论补肺益肾组分方能够改善COPD模型大鼠肺小血管重构,其作用机制可能与调控VEGF/PI3K/Akt通路有关。     

黄芩清热除痹胶囊含药血清对强直性脊柱炎患者外周血单核细胞氧化应激的影响

目的?探讨黄芩清热除痹胶囊（HQC）含药血清对强直性脊柱炎（AS）患者外周血单核细胞（PBMCs）氧化应激的影响。方法?将40只大鼠按随机数字表法分为HQC低、中、高剂量组，空白组、阴性组（生理盐水），其中HQC低、中、高3组大鼠连续给药7天处死取血清；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测HQC含药血清对PBMCs增殖的影响；将PBMCs分为正常组、模型组、HQC组、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（Compound C）组、HQC含药血清+Compound C组；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醇（MDA）、脂质过氧化产物（LPO）、总抗氧化能力（TAOC）的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹（Western Blot）检测AMPK/叉头转录因子O3a（FOXO3a）/锰超氧化物歧化酶（MnSOD）信号通路相关基因及蛋白的表达。结果?中剂量HQC含药血清具有显著抑制PBMCs增殖的作用，确定其最佳作用时间为24 h。与正常组比较，模型组MDA、LPO明显升高，SOD、TAOC明显降低（P<0.01）；与模型组比较，HQC、HQC+Compound C组MDA、LPO明显降低，SOD、TAOC明显升高（P<0.01），Compound C组MDA、LPO明显升高，SOD、TAOC明显降低（P<0.01）；与Compound C组比较，HQC+Compound C组MDA、LPO明显降低，SOD、TAOC明显升高（P<0.01）；与正常组比较，模型组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；与模型组比较，HQC组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显升高（P<0.01），Compound C组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；与Compound C组比较，HQC+Compound C组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论?HQC含药血清能通过活化AMPK、FOXO3a、MnSOD信号通路，改善AS患者PBMCs氧化应激。     

基于SIRT1/FOXO3A/BNIP3通路探讨益气化瘀清热方对小鼠足细胞损伤的影响

目的：探讨益气化瘀清热方对阿霉素（ADR）诱导损伤小鼠足细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)、FOXO3A、BNIP3相关蛋白表达的影响。方法：取分化成熟足细胞,采用ADR诱导造模,并采用siRNA和过表达质粒构建足细胞SIRT1沉默和SIRT1过表达模型,实验分为空白组、模型组（ADR组）、空白血清组（ADR+K组）、含药血清组（ADR+Z组）、SIRT1沉默组和SIRT1过表达组。采用RT-qPCR和Western Blot检测SIRT1、FOXO3A、BNIP3 mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。结果：与空白组比较,ADR组与SIRT1沉默组SIRT1、FOXO3A、BNIP3 mRNA及蛋白表达均显著降低（P<0.05,P<0.01）,SIRT1过表达组上述指标显著升高（P<0.05,P<0.01）,ADR组、SIRT1沉默组和SIRT1过表达组足细胞凋亡率均显著升高（P<0.01）;与ADR组比较,ADR+Z组SIRT1、FOXO3A、BNIP3 mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05,P<0.01）,ADR+Z组足细胞...     

柴胡皂苷A 调节cAMP/PKA/CREB 信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的 基于cAMP/PKA/CREB 通路探讨柴胡皂苷A 对失眠大鼠的改善作用及机制。方法 将75 只SD 大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A 低剂量组（0.625 mg·kg-1）、柴胡皂苷A 高剂量组（2.500 mg·kg-1）、艾 司唑仑组（0.1 mg·kg-1）,每组15 只。采用腹腔注射苯丙氨酸（PCPA,0.1 mg·kg-1）复制失眠大鼠模型。观察大 鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相, 记录慢波睡眠第1 期（SWS1）、慢波睡眠第2 期（SWS2）、快速眼球运动睡眠期（REMS）时长以及总睡眠时长 （TST）;qRT-PCR 法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA 及钟控基因Rev-erbα、Rorα mRNA 的表达水 平;免疫荧光法测定海马组织NeuN 表达水平;ELISA 法测定脑组织中的cAMP 水平;Western Blot 法测定脑 组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα 及cAMP/PKA/CREB 通路相关蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模 型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长（P＜0.05）,睡眠持续时 间及SWS1、SWS2、REMS、TST 均明显缩短（P＜0.05）;神经元排列紊乱,NeuN 阳性神经元IOD 值明显降低 （P＜0.05）; 脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）; 脑组织 cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性 明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短（P＜0.05）,睡眠持续时间及 SWS1、SWS2、REMS、TST 均明显延长（P＜0.05）;神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN 阳性神经元IOD 值 明显升高（P＜0.05）;脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）;脑 组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 柴胡皂苷A 可能通过激活 cAMP/PKA/CREB 通路改善失眠大鼠的昼夜节律。     

补肺益肾组分方Ⅲ联合针刺对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织胶原和蛋白酶的影响

目的 评价补肺益肾组分方Ⅲ、针刺及其联合在不同时间点对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织胶原和蛋白酶的影响。方法 将240只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氨茶碱组、补肺益肾组分方Ⅲ组(组分方组)、针刺组、补肺益肾组分方Ⅲ联合针刺组(联合组)。1～12周制备COPD大鼠模型，13～20周分别给予相应干预，停止干预后继续观察至28周结束。分别于14、16、20(即治疗2、4、8周)及24、28周(即停止干预4、8周)检测大鼠肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1含量及ColⅠ、ColⅢ蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠肺组织中MMP-2、MMP-9、ColⅠ和ColⅢ均升高，TIMP-1降低(P<0.01),并随疾病进程加重。与模型组比较，组分方组第16～24周ColⅠ和ColⅢ降低，16～28周TIMP-1升高，20～28周MMP-2降低(P<0.05,P<0.01);针刺组第16～24周ColⅠ和ColⅢ降低，16～20周TIMP-1升高，仅第20周MMP-2、MMP-9降低(P<0.05,P<0.01);联合组第16～28周ColⅢ降低、...     

基于“肺主行水”理论探究小青龙汤调节肺水转运蛋白的作用机制

目的 观察小青龙汤及其方元对于肺水转运蛋白的调节作用，初步阐释“肺主行水”的生物学内涵，并从该角度探索其作用机制。方法 根据经方的组方规律，将小青龙汤（11.22 g·kg^-1）拆分为桂枝甘草（2.70 g·kg^-1）、芍药甘草（2.70 g·kg^-1）、姜辛味（3.90 g·kg^-1）、半夏麻黄（3.27 g·kg^-1） 4个方元。通过“形寒+饮冷+冷水浴”法建立寒饮蕴肺证大鼠病理模型，给予小青龙汤及其方元进行干预。肺功能分析系统测定大鼠用力肺活量（FVC）、功能残气量（FRC）、平均呼气中期流量（MMEF）、吸气时间（tI）和呼气时间（tE）等参数；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理形态学改变；免疫组化法（IHC）检测大鼠肺组织中水通道蛋白（AQP）1、AQP5、上皮细胞钠通道α亚单位（α-ENaC）和钠钾泵（Na⁺-K⁺-ATPase）表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）和cAMP反应元件结合蛋白（CREB）mRNA分子表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中cAMP、PKA、CREB和磷酸化（p）-CREB蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠FVC、FRC和MMEF功能显著下降（P<0.01），tI与tE时间明显延长（P<0.05，P<0.01）；肺组织中TNF-α含量显著升高（P<0.01）；肺组织中cAMP、PKA、CREB mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）；肺组织中AQP5及α-ENaC表达明显减少；大鼠肺泡腔内充满水肿液，周围组织充血，炎性细胞浸润，支气管黏膜上皮黏连。与模型组比较，小青龙汤及其方元组可以明显增强模型大鼠FVC、FRC与MMEF功能（P<0.05，P<0.01），部分方元组可缩短tI与tE时间（P<0.05，P<0.01）；小青龙汤组、桂枝甘草组及半夏麻黄组肺组织TNF-α的含量显著下调（P<0.01）；小青龙汤组cAMP、PKA和CREB的mRNA的表达显著上调（P<0.01），桂枝甘草组、姜辛味组及半夏麻黄组显著上调cAMP和PKA的mRNA表达（P<0.01）；小青龙汤组、桂枝甘草组、姜辛味组及半夏麻黄组显著上调cAMP、PKA和CREB的蛋白表达（P<0.01），芍药甘草组明显上调CREB蛋白的表达（P<0.05）；小青龙汤可以上调AQP5和α-ENaC的阳性表达，桂枝甘草组可以上调α-ENaC的阳性表达；小青龙汤及其方元各组可以减少模型大鼠肺组织水肿，炎性细胞浸润明显减少，支气管黏膜黏连程度减轻。结论 小青龙汤及其方元可以通过提高肺水转运相关蛋白AQP1、AQP5和α-ENaC的表达，减轻寒饮蕴肺证大鼠病理模型中肺水肿，抑制肺部炎症状态，改善大鼠肺功能，从而恢复肺脏的生理功能，cAMP/PKA信号通路可能参与了该过程，Na⁺-K⁺-ATPase在肺水转运调节中可能发挥了辅助作用，从肺水转运相关蛋白角度初步阐释“肺主行水”的内涵具有一定的客观依据。     

安寐丹调控OXA/CREB/PER1信号通路改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱＊

目的 观察中医经典名方安寐丹对睡眠剥夺（Sleep disruption，SD）模型大鼠食欲素（Orexin）及其介导的食欲素A（Orexin A，OXA）/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein，CREB）/Period1（period circadian regulator 1， PER1）基因信号通路的作用。方法 40只雄性6月龄SD大鼠随机等分为空白组、模型组、艾司唑仑组、安寐丹组，空白组常规进食进水，其他三组采用对氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射叠加多平台水环境剥夺法构建SD模型，自主活动仪监测昼夜活动节律。空白组、模型组给予等容的0.9%氯化钠灌胃，艾司唑仑组给予艾司唑仑0.09 mg·kg^-1、安寐丹组给予安寐丹水煎剂9.09 mg·kg^-1灌胃治疗，连续4周。4周后运用Morris水迷宫检测其学习记忆，免疫荧光检测下丘脑Orexin神经元表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠下丘脑组织OXA、食欲素B（Orexin B，OXB）含量，蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）和实时荧光定量（Quantitative Real-time PCR，RT-PCR）检测各组大鼠下丘脑组织OXA/CREB/PER1信号通路蛋白和mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠24 h自主活动时间和活动距离均高于空白组；活动时间、活动距离显著增加（P<0.01），上平台潜伏期与游泳总路程显著延长（P<0.01），穿越站台次数和站台活动时间均减少（P<0.01）；下丘脑组织OXA、OXB含量高于空白组（P<0.01）；且OXA、CREB 蛋白和mRNA表达均显著升高（P<0.01），PER1 蛋白和mRNA表达均显著下调（P<0.01）。与模型组比较，安寐丹组大鼠上平台潜伏期缩短（P<0.01）、游泳总路程减少（P<0.05）、穿越平台数量增加（P<0.05）；下丘脑组织OXA、OXB含量降低（P<0.05），OXA蛋白表达下调（P<0.05）、CREB蛋白表达下调（P<0.01）、PER1蛋白表达上调（P<0.01），OXA和CREB mRNA表达降低（P<0.05），PER1 mRNA表达升高（P<0.05）。结论 安寐丹改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱可能与调节Orexin及其介导的OXA/CREB/PER1信号通路相关。     

电针对坐骨神经分支选择性损伤大鼠脊髓CaMK Ⅱ-CREB通路的影响

目的:通过观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠脊髓磷酸化钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)与环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的变化和电针干预对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制。方法:SD大鼠随机分为5组,每组12只。假手术组仅分离坐骨神经,但不进行结扎和剪断;模型组采用SNI法制备神经病理性痛模型;电针组于造模术后第11~17天电针大鼠损伤侧"委中"穴与"环跳"穴,刺激时间30min,1次/d;AP-5(N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂)组和L-NAME(一氧化氮合酶抑制剂)组同样于术后第11~17天实施药物干预。于造模前、造模后10d和16d时测定机械痛阈。造模后17d时,采用Western blot法测定脊髓磷酸化CaMKⅡ(pCaMKⅡ)与磷酸化CREB(pCREB)蛋白的表达,采用荧光定量-聚合酶链反应法测定脊髓CREB mRNA的表达。结果:与基础值比较,除假手术组外的其余4组SNI后机械痛阈均降低(P0.01);与SNI后10d比较,电针组、AP-5组和L-NAME组SNI后16d时机械痛阈均升高(P0.01,P0.05);与假手术组比较,模型组机械痛阈降低(P0.01),其脊髓组织pCaMKⅡ与pCREB的蛋白印迹表达量均升高(P0.05),CREB mRNA的表达亦升高(P0.05);与模型组比较,电针组机械痛阈升高(P0.01),同时脊髓组织pCaMKⅡ与pCREB蛋白印迹及其CREB mRNA表达均被逆转(均P0.05),AP-5组和L-NAME组机械痛阈亦升高(P0.05),但脊髓组织pCaMKⅡ与pCREB蛋白印迹及其CREB mRNA表达均无明显变化(P0.05)。结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制之一,可能与其有效地下调脊髓CaMKⅡ-CREB通路的功能有关。     

参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证大鼠气道平滑肌中乙酰化组蛋白H4、HDAC2和NF-κB p65表达的影响

目的 观察参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺气虚证大鼠支气管平滑肌（ASM）中乙酰化组蛋白H4、组蛋白去乙酰化酶-2（HDAC2）和核因子-κB p65（NF-κB p65）表达的影响。方法 取SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、参芪补肺汤组、氨茶碱组,每组10只。运用气管内注射脂多糖加烟熏28 d的方法建立COPD肺气虚证大鼠模型。光镜下观察肺组织的病理形态学变化,运用图像分析法测量小气道管壁和ASM的厚度,采用免疫组化和Western blot方法检测大鼠ASM中乙酰化组蛋白H4、HDAC2和NF-κB p65的蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测大鼠ASM组织中HDAC2 mRNA和NF-κB p65 mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠气道管壁和ASM厚度明显增高（P＜ 0.05）;与模型组比较,参芪补肺汤组和氨茶碱组气道管壁和ASM厚度明显降低（P＜ 0.05）;参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异无统计学意义（P \> 0.05）。与正常组比较,模型组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达明显增高（P＜ 0.05）;HDAC2 mRNA和蛋白的表达均明显降低（P＜ 0.05）;与模型组比较,参芪补肺汤组和氨茶碱组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达明显增高（P＜ 0.05）;HDAC2 mRNA和蛋白的表达明显降低（P＜ 0.05）。参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义（P \> 0.05）。结论 参芪补肺汤可抑制COPD肺气虚证模型大鼠ASM增殖,其机制与其提高HDAC2的表达,使组蛋白H4去乙酰化,从而抑制NF-κB p65的表达有关。     

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓神经元轴突再生的影响

目的 观察益肾养髓方对脊髓型颈椎病（CSM）大鼠脊髓神经元轴突再生的影响，探讨其潜在机制。方法 54只雌性SD大鼠随机分为空白对照组8只、假手术组8只、造模组38只，采用吸水膨胀材料压迫脊髓法制备CSM大鼠模型，将成模大鼠分为模型组和益肾养髓方低、中、高剂量组，给药组分别予相应剂量药液灌胃，1次/d，连续4周。采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分法评价大鼠运动功能，透射电镜观察脊髓神经元轴突变化，RT-qPCR及Western blot检测脊髓组织生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA及蛋白表达。结果 与空白对照组及假手术组比较，模型组大鼠BBB评分明显降低（P<0.05），脊髓神经元髓鞘可见“洋葱皮”样松解，轴突退化萎缩，脊髓组织GAP-43 mRNA及蛋白表达有升高趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）；与模型组比较，益肾养髓方各剂量组大鼠BBB评分明显增加（P<0.05），髓鞘脱失、轴突退化有不同程度改善，益肾养髓方低、中剂量组大鼠脊髓组织GAP-43 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 益肾养髓方可有效改善...     

防风石油醚提取物对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜细胞增殖、凋亡、cAMP/PKA/CREB通路及AQP1表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨防风石油醚提取物对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖、凋亡、cAMP/PKA/CREB通路及水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法:通过10μg/mL的TNF-α诱导HFLS-RA细胞建立体外细胞模型,用60、120、240μg/mL的防风石油醚提取物处理后,采用CCK8法测定细胞增殖,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA法检测上清液中白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10和环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用RT-PCR法检测磷酸激酶蛋白激酶A(Pka)、cAMP效应元件结合蛋白(Creb)和Aqp1的mRNA表达,Western blot法检测PKA、磷酸化PKA(p-PKA)、CREB和AQP1的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞增殖能力增加,凋亡减少,上清液IL-1β、IL-6和cAMP的含量升高,Creb和Aqp1的mRNA表达上调,p-PKA、CREB和AQP1的蛋白表达上调及p-PKA/PKA比值显著升高(P<0.01);与模型对照组相比,防风石油醚提取物120、240μg/mL组细胞增殖能力降低,凋亡增加,上清液IL-1β、IL-6和cAMP的含量减少,Creb和Aqp1的mRNA表达下调,p-PKA、CREB和AQP1的蛋白表达下调及p-PKA/PKA比值降低(P<0.05或P<0.01)。结论:防风石油醚提取物可抑制HFLS-RA细胞增殖,促进细胞凋亡,并通过cAMP/PKA/CREB信号通路下调AQP1的表达。     

秦苓液对尿酸性肾病大鼠肾组织AMPK/iNOS信号途径的影响

目的观察秦苓液对尿酸性肾病大鼠肾组织AMPK/iNOS信号途径的影响，探讨其对尿酸性肾病肾脏损伤的保护机制。方法采用腺嘌呤灌胃配合酵母饲料喂养的方法制备高尿酸肾病大鼠模型，将成模大鼠随机分为模型组，别嘌呤醇组［23.33 mg/（kg·d）］，秦苓液大、中、小剂量组［剂量分别为：36.4、18.2、9.1 g/（kg·d）］，每组12只，予对应药物干预。6周和8周时处死各组1/2大鼠，取肾脏组织。RT-PCR检测AMPKα1、iNOS mRNA表达水平，Western Blot检测AMPKα1、p-AMPKα1、iNOS蛋白表达水平。结果与正常组比较，6周及8周模型组AMPKα1 mRNA和蛋白表达、p-AMPKα1蛋白表达降低，iNOS mRNA及蛋白表达升高（P<0.01， P<0.05）。与模型组比较，6周时秦苓液各组AMPKα1 mRNA表达升高，p-AMPK蛋白表达升高，iNOS蛋白表达降低，秦苓液大、小剂量组AMPKα1 蛋白表达升高（P<0.01， P<0.05）；8周时秦苓液小剂量组AMPKα1 mRNA表达升高，中、小剂量组AMPKα1、p-AMPKα1蛋白表达升高，iNOS mRNA及蛋白表达降低（P<0.01， P<0.05）。结论秦苓液可能通过调节AMPK/iNOS信号途径改善代谢，抑制炎性损伤，减轻尿酸性肾病大鼠的肾脏损伤。     

补肺益肾组分方对PM2.5诱发慢性阻塞性肺疾病加重模型大鼠上皮-间质转化的影响

目的 观察PM2.5及补肺益肾组分方对慢性阻塞性肺疾（COPD）大鼠上皮-间质转化（EMT）的作用，并探讨其作用机制。方法 将50只健康SD大鼠随机分为：空白组、COPD组、大气颗粒物（PM2.5）组、补肺益肾组分方组（组分方组）和氨茶碱组，每组10只。除空白组外采用香烟熏吸联合反复克雷伯杆菌感染制备COPD大鼠模型，除空白组和COPD组外以大气实时浓缩PM2.5对其进行全身暴露。自暴露第1天起，组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方[6.48 mg/（kg·d）]或氨茶碱[54 mg/（kg·d）]灌胃，其余各组给予生理盐水，1次/天，持续8周。检测大鼠最大呼气中期流速（MMEF）和功能残气量（FRC）；免疫组化法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（COL Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（COL Ⅲ）表达；Western Blot检测肺组织E-钙黏附蛋白（E-cad）、N-钙黏附蛋白（N-cad）、α-SMA、COL Ⅰ、Smad家族成员（Smad）4、p-Smad2/3表达；ELISA法检测血清和肺组织匀浆中TGF-β1水平。结果 与空白组比较，COPD组MMEF及E-c...     

右归丸对骨质疏松症模型大鼠骨组织中PKA和CREB蛋白表达的影响

目的:通过观察摘除卵巢复制骨质疏松症模型大鼠股骨中PKA和CREB的蛋白表达变化,探究骨质疏松症的病理机制和右归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制。方法:实验采用摘除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,并将大鼠分为正常组、假手术组、模型组、右归丸组、阳性药物组福善美组和盖天力组,术后2 d开始给药干预,6次/周,持续12周。用ELISA法检测各组大鼠股骨中PKA和CREB蛋白表达水平。结果:与正常组和假手术组相比,模型组PKA和CREB的蛋白表达水平明显降低;给药干预12周后,与模组相比较,各给药组均可上调大鼠股骨中PKA和CREB蛋白表达水平均,其中右归丸组上调明显。结论:1正常大鼠骨组织中存在PKA和CREB蛋白表达;2骨质疏松症的发病机制可能与骨组织中PKA和CREB的蛋白表达变化有关;3右归丸能够有效治疗骨质疏松,这种作用可能通过激活PKA/CREB信号通路来实现。