应用PCR—SSCP方法检测肺癌,肠癌中p53基因突变

目的 研究ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测肺癌、肠癌中Ｐ５３基因突变的方法改进及突变率。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,银染技术检测４例肺和７例大肠癌组织标本中Ｐ５３基因外显子５－８。结果 肺癌Ｐ５３基因突变率为７５％,肠癌Ｐ５３基因突变率为４２．９％。结论Ｐ５３基因突变与肺癌、肠的发生密切相关,ＰＣＲ－ＳＳＣ 染技术简便快速、灵敏安全的基因突变检测方法,可应用于肿瘤的临床基本诊断 。     

大肠癌p53基因突变及p16基因缺失检测及临床意义

目的：探讨本地区散发性大肠癌p53、p16蛋白表达、临床病理因素的关系。方法：SSCP－PCR检测p53基因突变、p16基因缺失,免疫组化检测p53,p16蛋白表达,结果p16基因缺失率48％（19／40例）,未见突变,p16蛋白缺失率为55％（22／40）。p53基因突变率30％,p53蛋白阳性表达率为68％（27／40例）。组织学分组Ⅱ,Ⅲ级p16基因缺失率明显高于Ⅰ级（P＜0．01）,临床分期D期p53估变明显高于临床分期B,C期（P＜0．05）,结论p16基因缺失、53基因突变与大肠癌的发生、发展有关。     

应用改进的PCR—SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变？…

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５￣９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带，卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例，突变率在临     

应用PCR-SSCP方法检测肺癌、肠癌中p53基因突变

目的　研究ＰＣＲ－ ＳＳＣＰ 检测肺癌、肠癌中ｐ５３ 基因突变的方法改进及突变率。方法　用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,银染技术检测４ 例肺癌和７ 例大肠癌组织标本中ｐ５３ 基因外显子５ ～８ 。结果　肺癌ｐ５３ 基因突变率为７５％ （３／４ 例）,肠癌ｐ５３ 基因突变率为４２．９％ （３／７ 例） 。结论　ｐ５３ 基因突变与肺癌、肠癌的发生密切相关,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术简便快速、灵敏安全的基因突变检测方法,可应用于肿瘤的临床基因诊断。     

应用非同位素PCR—SSCP方法检测甲状腺癌p53基因的突变

目的 探讨甲状腺癌组织中p53基因点突变。方法 应用非同位素PCR－SSCP技术检测39例不同类型甲状腺癌石蜡包埋组织中p53基因点突变。结果 10例分化甲状腺癌中4例（40％）、9例未分化甲状腺癌中6例（67％）出现异常电泳,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变,而5例乳头状癌和5例滤泡型癌均未见该基因的突变。10例出现异常电泳的甲状腺癌中9例（90％）同时呈现p53蛋白的表达。结论 非同位素PCR－SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法,p53基因点突变率与蛋白表达率基本相一致,p53基因的突变是分化型癌向间变型癌转化的关键性遗传改变。     

联合检测胸水细胞p53、p16和K-ras基因突变对于肺癌的诊断价值

目的:研究胸水细胞p53、p16和K-ras基因突变及三者联合检测对肺癌的诊断价值。方法:研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者,对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他胸膜炎患者。常规抽取胸水,提取胸水细胞DNA,采用PCR-SSCP方法,分别对p16基因和K-ras基因的第1、2外显子以及对p53基因第7、8外显子进行突变分析。结果:研究组p16基因突变率为33.3%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);研究组K-ras基因突变率(31.5%)也明显高于对照组(3.7%),差异有统计学意义(P<0.05);研究组p53基因突变率为40.7%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。联合应用p53、p16和K-ras基因突变检测可将胸水细胞中肺癌阳性检出率提高至70.4%。结论:p53、p16和K-ras基因突变对良恶性胸水鉴别诊断具有重要价值,三者联合应用可提高肺癌的诊断率。     

青石棉诱发的转化细胞p53基因突变分析

为探讨青石棉与Ｐ５３基因突变之间的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法，对８株青石棉衣发的ＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３转化细胞进行Ｐ５３基因的突变检测和分析。结果：从８株转化细胞Ｐ５３基因上的１１个显子中共发现７处突变，其中２个位于外显子４－６，５个位于外显子９－１１；大多数检出的异常表现为比野生型多１条带；突变随机地分布于各个青石棉剂量组。     

甲状腺癌中p53基因的突变与病理学特征及预后的关系研究

为探讨ｐ５３基因突变与甲状腺癌的发生,发展及预后的关系,应用ＰＣＲ－单链构象多成性（ＳＳＣＰ）,分析技术,对ｐ５３基因第７,８外显子突变进行了检测和分析。结果显示,在３１例甲状腺癌中有１０例发生突变,突变率为３２．３％,ｐ５３基因突变在复发的患者中显著高于未复发的患者;ｐ５３基因突变与转移,组织学类型和分化状况无显著差异,表明ｐ５３基因的突变可能是甲状腺癌发生的一个重要因素。     

人脑原发性肿瘤中p53基因的PCR-SSCP分析

为探讨ｐ５３基因突变与人脑原发性肿瘤发生的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法，对３７例人脑原发性肿瘤中ｐ５３基因外显子５到外显子７之间的ＤＮＡ序列进行了突变分析。结果发现有１０例存在突变，其中９例为胶质瘤（３７．５％），１例为脑膜瘤（７．７％），且肿瘤恶性程度越高突变频率越高。以上结果表明，人脑原发性肿瘤的发生与ｐ５３基因的突变密切相关，ｐ５３基因突变有可能是人脑原发性肿瘤尤其是胶质瘤发生的原因之一。     

p53基因PCR-SSCP银染检查痰标本诊断肺癌

目的　了解痰标本检测肺癌患者p53基因突变的可行性及其对临床诊断的意义。方法　采用改良Saccomanno法浓缩及保存痰标本,部分涂片找癌细胞,其余标本进行痰细胞DNA提取及多聚酶链反应(PCR)单链构象多态性分析(SSCP)。共检测22例患者,其中确诊肺癌患者15例(涂片或活检找到癌细胞),临床高度怀疑肺癌患者5例(涂片或活检均阴性),2例非肿瘤患者(1例为结节病,另1为右中叶肺炎),同时采用正常肺组织标本作对照。结果　p53外显子6、7、8的PCRSSCP银染阳性率在肺癌组及癌疑组分别为6/15(40%)和2/5(40%)。非肿瘤患者痰标本及正常肺组织均未发现p53基因异常。结论　改良Saccomanno法不仅能贮存、浓缩痰细胞,而且方便痰标本DNA提取;PCRSSCP银染方法可用来检测肺癌患者痰细胞的p53基因突变。     

p53基因在肺癌患者中的突变

目的　探讨肺癌组织中p5 3基因蛋白表达和肺癌患者血白细胞p5 3基因突变及其相互关系。方法　应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3基因蛋白表达及聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测其中肺癌患者血白细胞p5 3基因突变。结果　p5 3基因蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率为 5 9% ,其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者 ( 77% )显著高于无淋巴结转移者 ( 4 5 % ,P <0 0 5 ) ,p5 3蛋白在肺癌癌旁正常肺组织及白细胞中均为阴性 ;5 1例肺癌患者中 2 8例血白细胞DNA均未见p5 3基因突变。结论　p5 3基因在肺癌患者血白细胞DNA未见突变 ,p5 3基因蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移     

PCR-SSCP检测胃癌中p53基因突变

目的　研究p5 3基因表达及突变在胃癌发生中的地位。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (S -P)法与聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析技术分别检测胃癌p5 3基因表达及突变。结果　p5 3蛋白表达在正常胃粘膜均为阴性 (0 / 2 0 ) ,在不典型增生为 18% (11/ 6 0 ) ,其中轻度全为阴性(0 / 2 0 ) ,中度 2 5 % (5 / 2 0 ) ,重度 30 % (6 / 2 0 ) ,明显低于胃癌的 5 8% (70 / 12 0 ) (P <0 .0 5 ) ,而中度、重度不典型增生高于正常胃粘膜及轻度不典型增生 (P <0 .0 5 )。胃癌中p5 3基因第 5外显子突变率高达 2 5 % (5 / 2 0 ) ,显著高于无突变的正常胃粘膜 0 % (0 / 2 0 ) (P <0 .0 5 )。结论　p5 3基因突变可出现于中度、重度不典型增生 ,是胃癌发生的一个早期事件。在胃癌发生中p5 3基因第 5外显子突变频繁     

肺增生病变p53基因突变的检测

目的：检测p53基因突变率在“肺癌性”增生病变和“肺炎性”增生病变是否存在差异，试图确定“发生真正癌变”的癌前病变，为肺癌前病变的风险性预测提供实验依据。方法：采用PCR—SSCP—DNA测序法，检测了80例“肺癌性”和5l例“肺炎性”增生病变的p53基因突变率。结果：“肺癌性”增生组的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级增生病变的p53突变率分别为7％(1／15)、33％(4／12)、38％(5／13)、30％(3／10)和“肺炎性”增生组相对应的Ⅰ--Ⅳ级增生病变的突变率7％(1／15)、25％(3／12)、36％(5／14)、40％(4／10)比较无显著性差异(P＞0．05)。结论：p53基因的突变率在两组增生病变没有差别，提示p53基因突变不能作为预测肺增生病变预后的检测指标。     

用非同位素PCR－SSCP方法检测p53基因第4外显子多态性

本研究通过对比不同凝胶组成成分及电泳条件，建立了非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法以检测ｐ５３基因第４外显子第７２密码子的多态性。对３５例正常组织ＤＮＡ的研究结果显示，ｐ５３基因这位点的杂合率和纯合率分别为４８．６％（ＣＣＣ／ＣＧＣ），４５．７％（ＣＧＣ／ＣＧＣ）和５．７％（ＣＣＣ／ＣＣＣ）．本法简单、快速，能有效地检测基因多态性，并可进一步应用于对肿瘤细胞ｐ５３基因杂合性缺失的分析。     

Detection of p53 gene mutations in sputum samples and their implications in th e early diagnosis of lung cancer in suspicious patients

目的　评价痰标本检测p5 3基因点突变方法及其作为肺癌早期临床诊断监测指标的真实性和可靠性。方法　用PCR SSCP 银染法检测 5 4例原发性肺癌患者和 114例良性肺疾患者痰标本中p5 3基因第 5 - 8外显子的点突变 ,同时进行痰涂片细胞学检查。结果　p5 3突变在肺癌组检出率为 5 5 5 6 % (30 /5 4 ) ,非肺癌组检出率为 1 75 % (2 /114) (P <0 0 0 1)。痰标本检测p5 3基因突变作为肺癌临床诊断监测指标的灵敏度 5 5 5 6 %、特异度 98 2 5 %、阳性似然比 31 75。肺癌组p5 3阳性检出率 5 5 5 6 % (30 /5 4 )与痰涂片瘤细胞阳性检出率 35 19% (19/5 4 )比较 :差异性有显著意义 (P <0 0 5 ) ,关联性有极显著意义 (P <0 0 1)。肺癌组p5 3检出率与性别、吸烟指数、病理分型、疾病分期均无明显关系 ,但与年龄有密切关系 ,高龄患者 ( 6 0岁 )检出率高 (P =0 0 2 )。非肺癌组一例慢性阻塞性肺病 (COPD)患者检测到E5突变 ,随访四年 ,确诊为肺鳞癌。结论　PCR SSCP 银染法检测痰标本p5 3突变可以在可疑肺癌患者 (如吸烟者合并慢性肺疾患 )中作为一项随访监测指标 ,将有助于肺癌早期临床诊断。     

p53基因和FHIT基因联合检测在肺癌早期诊断中的意义

目的探讨p53基因突变和FHIT基因缺失在肺癌的筛查和早期诊断中的应用价值。方法收集利用自荧光支气管镜(AFB)活检的27例正常支气管黏膜、74例非典型增生、23例原位癌、161例浸润癌及32例良性病变新鲜标本,应用聚合酶链式反应(PCR)及DNA测序技术检测p53基因突变,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及DNA测序技术检测FHIT基因表达缺失。结果在正常黏膜、非典型增生、原位癌、浸润癌及良性病变中p53基因突变率分别为:0、27.0%、52.2%、67.7%、0。FHIT基因缺失率分别为:0、55.4%、65.2%、66.5%、9.4%。两基因联合检测阳性率分别为:0、56.8%、86.9%、90.7%、9.4%。非典型增生与原位癌组织中p53基因突变差异有统计学意义(P<0.05),非典型增生、原位癌、浸润癌组织FHIT基因缺失差异无统计学意义(P>0.05),组织病理学分类不同的浸润癌组织p53基因突变率和FHIT基因缺失率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p53基因突变和FHIT基因缺失在肺癌及非典型增生组织中是频发事件,在肺癌的发生发展中起重要作用,两基因联合检测可提高肺癌诊断的敏感性及特异性,对肺癌的早期诊断有重要意义。     

重组p53基因腺病毒注射液胸腔灌注治疗恶性胸水的临床疗效观察

目的观察重组p53基因腺病毒（rAd-p53）注射液胸腔灌注治疗恶性胸水的临床疗效。方法45例恶性胸水患者均行胸腔穿刺彻底引流后通过胸腔闭式引流管灌注rAd—p53,用量为1×1012VP×2支,4周后根据胸水量的变化进行疗效评价。结果45例患者中完全缓解（CR）20例,部分缓解（PR）19例,稳定（SD）4例,进展（PD）2例,总有效率达86．7％（39／45）。达到CR的20例病人中,有16例病人胸水在3个月内没有再出现。各肿瘤病种之间没有差异。所有患者主要副反应为自限性发热,体温在37．5℃～39．1℃之间,12h～24h后均可自行恢复正常。结论rAd-p53注射液胸腔灌注治疗恶性胸水的有效率高、疗效确切、副作用可以耐受,值得临床进一步应用观察。