P物质纯化工艺的研究

<正> 概况P物质(Substance-P,简称SP)是1931年Von Euler发现的,但阐明其结果是1970年,Chang等人用牛下丘脑为原料获得纯品,测出其化学结构为11肽。Zuber等人也获得了较高生物活性的SP。数十年来人们从动物脑(牛、马、猪脑)提取SP,其工艺基本上类似于Zuber的纯化工艺。美国的Sigam公司已作为生化试剂出售(25美元/每毫克,1990)。国内东风生化试剂技术公司出售的是HPLC纯化的SP(105元/0.5毫克)。     

血红素纯化技术研究及质量检测

目的　研究血红素的纯化方法,并对纯化后的产品进行质量检测。方法　采用正交试验法,以溶剂氨溶液浓度、提取时间和固液比3个因素,每个因素选取3个水平进行正交试验,并采用HPLC对纯化试验所得血红素纯品的含量进行分析。最终采用常规测定Fe含量法对放大试验所得纯品进行含量确认。结果　因素B(提取时间)和因素C(固液比)对血红素含量有一定影响。结论　最佳工艺A₃B₂C₃,即用固液比为1∶35的1. 5%氨溶液提取10min,血红素纯度大于96%。     

血红素纯化技术研究及质量检测

目的研究血红素的纯化方法,并对纯化后的产品进行质量检测.方法采用正交试验法,以溶剂氨溶液浓度、提取时间和固液比3个因素,每个因素选取3个水平进行正交试验,并采用HPLC对纯化试验所得血红素纯品的含量进行分析.最终采用常规测定Fe含量法对放大试验所得纯品进行含量确认.结果因素B(提取时间)和因素C(固液比)对血红素含量有一定影响.结论最佳工艺A3B2C3,即用固液比为1:35的1.5%氨溶液提取10min,血红素纯度大于96%.     

荔枝核总黄酮提取分离工艺的研究

目的研究荔枝核中总黄酮提取纯化工艺。方法以总黄酮含量为考察指标,以固液比、提取次数、提取时间、乙醇浓度为考察因素,采用正交试验法优选提取总黄酮的最佳工艺;同时采用AB-8大孔吸附树脂对总黄酮粗品进行纯化。结果最佳工艺为:用8倍量的50%乙醇,提取3次,每次1h,合并滤液,滤液回收乙醇至无醇味,经过AB-8大孔树脂柱,先用40%乙醇洗脱,洗脱液弃去,再用80%的乙醇洗脱,收集洗脱液,洗脱液回收,浓缩,干燥,即荔枝核总黄酮部分,测定其含量为42.5%。结论本工艺简单可行,适用于工业大生产。     

溶栓素的分离纯化及特性测定

目的研究一种高效分离纯化溶栓素的方法并测定其pI和相对分子质量(Mr)。方法采用阴、阳离子交换色谱等技术分离纯化溶栓素并通过对缓冲体系的pH值、离子强度的调节及对初始供试品pH值的调节来优化纯化过程,以等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF PAGE)和SDS PHGE方法分别测定纯品的pI和Mr。结果溶栓素达到简捷、高效分离纯化的目的,电泳鉴定为一条蛋白质带,并测定溶栓素的pI为4 .5 0、Mr 为35 10 0。结论溶栓素的纯化工艺达到高纯度纯化程度,为进一步研究溶栓素奠定了基础     

P物质与高血压

<正> P物质(substance P,SP)是1931年由von Euler和Guddm首先发现的,但它的作用一直不清楚,40年后Chang和Leeman解决了它的纯化问题,随后阐明了它的结构并进行了人工合成,从此SP的研究才有了进一步的发展。SP是由11个氨基酸组成的多肽,其氨基酸序列为Arg~1-Pro~2-Lys~3-Pro~4-Gln~5-Gln~6-Phe~7-Phe~8-Gly~9-Leu~(10)-Met~(11)-NH_2,分子量1340u,主要分布在神经系统和肠胃道内,在生理活动中起神经递质     

开展活性肽-P物质的药用研究

1931年Von Euler发现马脑和肠的酸性醇溶液提取物中存在一种物质,它能促进离体兔肠收缩和血管扩张、降低血压,当时认为可能是一种多肽物质并称之为P物质(Substance-P,简称SP,下同)。后来SP为大家公认并沿用至今。但SP的一级结构,直到1970年才由Chang证明由8个氨基酸构成的11肽,分子量为1340,结构为:     

正交试验优选定心藤中总黄酮提取与纯化工艺

目的:优选定心藤中总黄酮提取和纯化工艺。方法:通过紫外分光光度法测定总黄酮含量,并采用正交设计试验法确定溶剂浓度、固液比、提取时间、提取次数对定心藤总黄酮提取的影响大小。同时,黄酮粗品用D-101大孔树脂纯化。结果:最佳提取工艺条件为乙醇浓度65%,固液比1∶10,提取2.5h,重复提取3次。黄酮粗品纯化后纯度可以达到86%以上。结论:本试验可为定心藤进一步研究和资源开发利用提供一定的科学依据。     

新疆核桃分心木总皂苷的提取纯化工艺研究

目的优选核桃分心木总皂苷的最佳提取纯化工艺。方法以齐墩果酸为对照品,利用紫外可见分光光度法测定核桃分心木中的总皂苷含量;利用单因素实验结果设计正交实验,考察了乙醇体积分数、提取时间、料液比和提取次数对核桃分心木总皂苷提取率的影响;利用大孔吸附树脂对核桃分心木总皂苷进行纯化工艺研究。结果最佳提取工艺为:加25倍量体积分数80%乙醇,80℃回流提取2次,每次2h;最佳纯化工艺为:采用D101大孔吸附树脂,最大上样量为180mL,水洗脱量8BV,洗脱剂体积分数50%乙醇,洗脱体积7BV。结论该法简易可行,效果较佳。     

海带多酚的提取分离纯化工艺研究

目的 建立海带多酚的提取及纯化工艺。方法 以乙醇浓度、提取时间、提取温度和料液比进行单因素试验,并在单因素试验基础上采用4因素3水平进行正交试验优化提取工艺,同时采用树脂进行纯化工艺优化。结果 确定最佳提取工艺为：采用85%乙醇为溶剂,以料液比1︰65,在65 ℃下搅拌提取1 h。在提取海带粗多酚后采用大孔吸附树脂进行分离纯化研究,筛选出最佳的大孔吸附树脂SZ-3,优化最佳层析条件,获得高纯度海带多酚（80%）。结论 本方法简便可行,可用于海带多酚的提取与纯化。     

液相色谱-质谱联用技术鉴定奥美沙坦酯有关物质

目的:采用液相色谱-质谱联用技术对奥美沙坦酯中有关物质进行结构鉴定。方法:采用LiChrospher C8(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-醋酸铵缓冲液为流动相梯度洗脱,对奥美沙坦酯有关物质进行分离;采用LC-MS/MS电喷雾正离子化测定各有关物质的相对分子质量和二级质谱,并进行结构解析。结果:检测到奥美沙坦酯粗品中11个有关物质,并推测出它们的化学结构均为奥美沙坦母核结构未发生变化的不同取代咪唑和四氮唑联苯衍生物。结论:色谱-质谱联用技术能够有效地用于药物中有关物质的鉴定,奥美沙坦酯有关物质研究可为其质量控制和工艺优化提供参考依据。     

复合溶剂选择性纯化紫杉醇的工艺研究

目的:研究复合溶剂选择性纯化紫杉醇的方法和工艺条件。方法:采用不同种类的溶剂在不同条件下对紫杉醇进行精制,以高效液相色谱法测定的紫杉醇粗品含量和主要杂质峰峰面积为指标,考察最佳的溶剂种类和工艺参数。结果:最佳工艺为纯化强极性杂质较高的紫杉醇,采用紫杉醇-丙酮-乙酸乙酯-正己烷(1g∶8mL∶6mL∶7mL)于-25℃冷冻24 h;纯化弱极性杂质较高的紫杉醇,采用紫杉醇-丙酮-三氯甲烷-正己烷(1g∶8mL∶6mL∶7mL)于-25℃冷冻24 h。结论:采用丙酮、正己烷分别与乙酸乙酯或三氯甲烷纯化紫杉醇,对于不同极性的杂质具有良好选择性,可用于紫杉醇的选择性纯化。     

P物质和神经降压肽对胃肠道的作用

五十多年前Euler和Gaddum在马肠和脑提取物中首次发现了P物质(SP)。经部分纯化的这种物质能明显降低血压,并收缩胃肠道平滑肌。1970年,Chang 等在牛下丘脑提取物中再次发现SP,并将其看作是一种催涎物质(Sialagogic substances),经纯化发现,它是一种11个氨基酸组成的多肽,具有如表1所示的氨基酸序列。SP 的C-端序列及其生物活性与其它统称为“速激肽”(Tachykinins)的肽类相似。除了存在于章鱼唾液腺中的章鱼涎肽(Eledoisin)外,其它肽主要从两栖类的皮中分离而得。在纯化SP 的过程中,发现另一种能产生皮肤血管舒张和发绀的物质,其化学性质     

超声提取法测定槐花中总黄酮含量

目的:用超声提取法测定槐花中总黄酮含量。方法:采用60%的乙醇超声提取槐花中的总黄酮,采用紫外可见分光光度法,在500 nm波长处测吸光度,计算样品中总黄酮的含量。结果:芦丁对照品溶液在4.0～20.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为99.7%,RSD=0.98%(n=5)。结论:本方法工艺简单,采用超声提取、纯化方法得到的黄酮类物质其纯度较高,并且测定总黄酮含量的方法可靠。     

萝藦总多糖的提取工艺优化

目的研究萝藦总多糖的提取纯化工艺。方法采用L9(34)正交实验确定萝藦总多糖的最优提取方法;选用无水葡萄糖为对照品,采用分光光度法,测定萝藦总多糖的含量。结果萝藦总多糖的最优提取方案为12倍药材的水浸泡3 h,回流提取2次,每次2 h,温度为85℃,其提取的总多糖得率为3.97%。结论提取时间对多糖的提取效率影响较大。确定的萝藦总多糖的提取工艺简单有效可行。     

3种不同离子交换树脂纯化细胞色素C的比较研究

目的比较3种不同树脂纯化细胞色素C(CytC)的效果。方法以健康猪的新鲜心肌为材料,采用酸化水提取,等电点沉淀杂蛋白,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析过滤后得到CytC粗品,再采用国产D-152、724弱酸性阳离子交换树脂、以及进口AmberliteGC-50等3种不同的离子交换树脂对CytC进行纯化,纯化后的CytC加入少量联二亚硫酸钠,通过分光光度法测定其浓度,并计算收率。结果采用国产D-152树脂的收率为85.09%,724弱酸性阳离子交换树脂的收率为82.54%,AmberliteGC-50的收率为91.97%。结论3种树脂中Amber-liteGC-50纯化CytC的效果最好。     

精制益母草生物碱提取纯化工艺研究

目的:优选精制益母草生物碱的提取纯化工艺。方法:采用平行设计法,以总生物碱提取量为判断指标,分别观察超声、回流、浸渍法提取益母草中生物碱的提取率,确定最佳提取工艺;以生物碱含量为判断指标,采用4种不同化学特性的ADS树脂,分别观察其在提取液不同pH环境、不同洗脱条件下,回收生物碱的量和纯度,确定最佳纯化工艺。结果:超声结合不同溶剂提取对精制益母草生物碱提取率的影响不同,以0.05%盐酸乙醇的提取干膏生物碱含量和提取率最高,平均生物碱提取率为0.373%;在回流法中,以0.05%盐酸乙醇的提取干膏生物碱含量和提取率最高,平均生物碱提取率为0.317%;在浸渍法中,以1%盐酸的提取干膏生物碱含量和提取率最高,平均生物碱提取率为0.410%。在纯化工艺方面,在提取液pH为6～8之间时,4种ADS大孔树脂对生物碱均有吸附作用,其中pH为8时ADS-B的静态吸附最强。结论:本研究建立了高效、稳定的精制益母草生物碱的提取和纯化工艺,可为进一步开发新型具有抗心肌缺血或心血管保护作用的新药奠定基础。     

绞股蓝皂苷XLIX对照品的制备与鉴定

目的研究绞股蓝皂苷XLIX的提取、分离、纯化和结构鉴定。方法采用正相制备色谱柱,以氯仿-甲醇梯度洗脱,得到绞股蓝皂苷XLIX粗品,再采用中压制备型液相色谱纯化,浓缩得绞股蓝皂苷XLIX纯品。UV、IR、MS、~1H-NMR和~(13)C-NMR测试数据确定结构。结果绞股蓝皂苷XLIX的分子式为C_(52)H_(86)O_(21),分子量为1046。结论测试数据结果与文献报导的gypenoside XLIX结构一致。     

八角多糖体外抗活性氧自由基作用的研究

目的提取八角多糖,并测定多糖含量和进一步研究其抗活性氧自由基的能力。方法采用热水浸提法及醇沉法提取八角多糖并利用Sevage法脱蛋白对其进行纯化;用苯酚-硫酸法测定经纯化后的八角多糖样品中纯多糖的含量。最后采用水杨酸法和邻苯三酚自氧化法分别研究八角多糖清除·OH自由基和O2-·自由基的效果。结果八角提取纯化后的多糖样品中纯多糖含量达1.34%。结论八角多糖清除O2-·自由基和·OH自由基的能力均较强。     

制备高效液相色谱法分离纯化乌拉立肽的研究

目的 对乌拉立肽粗品纯化并制备符合纯度要求的乌拉立肽纯品.方法 采用C18 (H) ODS柱(30mm×250 mm,10μm);流动相A为0.1％甲酸-水溶液,流动相B为100％乙腈;检测波长215 nm;体积流量30 mL/min;进样量60 mg.结果 RP-HPLC一步纯化后得到乌拉立肽质量分数达到98％.通过多次样品收集和冷冻干燥,制备了高纯度的乌拉立肽.结论 建立了乌拉立肽的纯化工艺,制备出符合要求的乌拉立肽纯品.