脑源性神经营养因子转基因细胞移植和神经节苷脂对大鼠脊髓损伤N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

目的研究脑源性神经营养因子（BDNF）转基因细胞移植和神经节苷脂（GM-1）对大鼠脊髓损伤N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体的影响。方法将成年大鼠分为四组，A组：单纯脊髓损伤组；B组：脊髓损伤＋AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组；C组：脊髓损伤＋GM-1组；D组：脊髓损伤＋AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植＋GM-1组。伤后1、3、7、14d采用[^3H]MK-801放射性配基分析法检测大鼠损伤后脊髓NMDA受体的变化。结果发现各组[^3H]MK-801放射性配基分析最大结合容量都有不同程度的减少，其减少程度顺序是A组〉B组〉C组〉D组。结论应用GM-1和BDNF转基因细胞移植后可以通过影响脊髓NMDA受体，从而减轻脊髓继发性损伤。     

N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂MK-801胚胎脊髓移植后大鼠损伤脊髓凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801胚胎脊髓移植后对大鼠脊髓细胞凋亡的影响.[方法]将动物分为大鼠脊髓半切洞损伤后,分为应用胚胎脊髓和MK-801治疗组(A组),大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组(B组),单纯脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组(C组).手术后1、3、7、14 d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测(TUNEL),以及Bcl-2蛋白免疫反应表达的测定(免疫组化法).采用计算机图像分析技术,进行定量分析.[结果]A、B、C三组中均发现凋亡细胞及BCL-2蛋白免疫反应阳性细胞,图像分析发现,细胞凋亡率为:C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为:A＞B＞C.[结论]大鼠脊髓损伤后应用NMDA受体拮抗剂MK-801和胚胎脊髓移植能抑制脊髓损伤后细胞凋亡.     

胚胎脊髓移植联合应用MK-801促进大鼠脊髓损伤后功能恢复

目的　研究胚胎脊髓移植并应用N 甲基 D 天门冬氨酸 (NMDA)受体拮抗剂MK 80 1能否促进半切洞脊髓损伤后功能恢复。方法　将成年大鼠分为 3组 ,A组 :单纯脊髓半切洞损伤组 ;B组 :脊髓半切洞损伤 胚胎脊髓移植组 ;C组 :脊髓半切洞损伤 胚胎脊髓移植 MK 80 1组。手术后应用联合行为评分 (CBS)、感觉诱发电位 (SEP)、运动诱发电位 (MEP)检查。结果　 3组CBS得分A组>B组 >C组 ,SEP和MEP潜峰时A组 >B组 >C组 ,统计学分析差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　胚胎脊髓移植联合应用NMDA受体拮抗剂MK 80 1能够促进脊髓损伤后功能恢复     

胚胎脊髓不同移植方法对大鼠损伤脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

创伤后一个重要的继发性损伤是释放兴奋性氨基酸 (EAA) ,随后作用于N 甲基 D 天门冬氨酸受体 (NMDAR )。NMDAR是EAA受体的一种重要亚型 ,参与EAA释放的调节。近年来发现中枢神经系统损伤时NMDAR过度激活可引起神经细胞内Ca2 + 超载和Na+ 积蓄 ,由此产生细胞内高渗压和激活细胞内一系列钙依赖性酶学反应 ,导致神经细胞的凋亡和死亡[1] 。我们用胚胎脊髓、大网膜以及腺病毒介导的脑源性神经生长因子 (AxCA BDNF)基因转染的成肌细胞移植 ,应用免疫组织化学和氚标记的地卓西平马来酸盐 ( [3 H]MK 80 1)放射性配基分析 ,观察上…     

体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将动物分为：大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组（A组）,大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组（B组）,脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（C组）大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（D组）。手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化法）。采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势。结论：大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

胚胎脊髓移植与甲基强的松龙联合应用治疗脊髓损伤的实验研究

目的 :探讨胚胎脊髓移植 (FST)与大剂量甲基强的松龙 (MP)联合应用治疗脊髓损伤的效果。方法 :选用SD大鼠 5 0只 ,随机分为A、B、C、D、E 5组 ,前 4组行T12脊髓半切损伤后为治疗组。A组行大剂量MP与FST联合应用 ;B组行大剂量MP治疗 ;C组为FST治疗 ;D组为单纯半切损伤 ;E组为空白对照。治疗后 2 4h及 8周时行脊髓体感诱发电位检查 ,观察行为变化 ,并对各组损伤区脊髓横断面神经纤维数进行统计学分析。结果 :A组与B、C、D组之间脊髓体感诱发电位及损伤区神经纤维计数均存在明显差异 (P <0 0 5 ) ,行为学无明显改变。结论 :大剂量甲基强的松龙与胚胎脊髓移植联合应用治疗脊髓损伤可起协同促进损伤脊髓修复的作用。     

嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研究

[目的]探讨嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的可行性和疗效.[方法]制备Wistar大鼠脊髓半切模型,随机分4组:局部移植组(A)、静脉移植组(B)、D/F12静脉移植组(C)、空白对照组(D).定期行CBS功能评分及组织学检查,评价脊髓修复情况.[结果]A、B两组功能恢复和组织学改变与对照组有显著差别,A、B两组间无显著差别.[结论]嗅鞘细胞静脉移植可向脊髓损伤部位迁移并修复损伤脊髓,该移植方式即简化了操作,又有较好疗效,具有良好的临床推广和使用价值.     

胚胎脊髓移植联合甲基强的松龙治疗脊髓损伤的实验研究

目的采用胚胎脊髓移植及大剂量甲基强的松龙联合应用治疗脊髓损伤,观察两者有无协同作用.方法雄性SD大鼠50只,随机分为5组,A、B、C、D组为T12急性脊髓右侧半横断损伤后治疗组,A组给大剂量甲基强的松龙及胚胎脊髓移植联合治疗;B组行大剂量甲基强的松龙治疗;C组行胚胎脊髓移植治疗;D组为单纯损伤;E组为空白对照.治疗后24 h及8周后观察大鼠一般行为及运动功能变化,评分分析.病理观察包括治疗后8周神经纤维记数对比及辣根过氧化物酶示踪观察.结果病理学形态观察示A组损伤区横断面神经纤维记数较B、C、D组明显增多(P＜0.01);A、C组在损伤区注入的辣根过氧化物酶可扩散至损伤区远、近端各约1.0 cm处.除A组左下肢感觉有部分恢复外,无明显行为学改变.结论大剂量甲基强的松龙及胚胎脊髓移植可协同修复损伤脊髓.     

脑源性神经生长因子转基因细胞移植和大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF）体外转基因成肌细胞移植和静脉内注射大剂量甲基强的松龙（MP）对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：120只Wistar大鼠分为：脊髓挫伤组（A组），脊髓挫伤后AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（B组），脊髓挫伤后静脉内注射大剂量MP治疗组（C组），脊髓挫伤后同时应用AxCA-BDNF和MP组（D组）。手术后1、3、7、14、28d用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况，并用计算机图像分析技术对脊髓损伤区细胞凋亡（TUNEL法）和Bcl-2蛋白表达（免疫组化法）进行定量分析。结果：四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞．图像分析发现四组凋亡细胞核数为A组〉B组〉C组〉D组；Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D组〉C组〉B组〉A组。大鼠后肢功能恢复和电生理检查也有类似的变化趋势。结论：体外转基因成肌细胞移植和大剂量MP都能抑制大鼠脊髓损伤后的细胞凋亡，促进大鼠后肢功能恢复，两者联合应用具有协同作用。     

强啡肽对大鼠行为学和脊髓组织学改变的影响及受体机制

目的探明强啡肽(Dyn)对脊髓的损伤效应及其受体机制。方法观测大鼠鞘内注射DynA(1-13)或联合注射Kappa阿片受体拮抗剂nor-BNI或兴奋性氨基酸(EAA)的NMDA受体拮抗剂MK-801后的运动功能和脊髓病理学变化。结果注射30nmolDyn组3d时,Tarlov运动功能评分下降,脊髓前角神经元数目减少,GFAP阳性神经胶质细胞数轻度增生。14d时,Tarlov运动功能评分未恢复,神经胶质细胞增生明显。而鞘内联合注射100nmol nor-BNI、100nmol MK-801后3d时与单纯Dyn组结果相似,14d时Tarlov运动功能评分明显恢复,脊髓前角神经元数目较Dyn组多,GFAP阳性神经胶质细胞增生不明显,nor-BNI组与MK-801组间比较差异不显著。结论Dyn鞘内注射可使大鼠运动功能、脊髓组织损害,而nor-BNI或MK-801有对抗其损害作用。Dyn的病理作用是通过Kappa阿片受体和EAA的NMDA受体两种途径介导的。     

骨髓基质细胞体外分化移植治疗大鼠脊髓损伤的初步研究

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞体外分化为神经干细胞后移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性。[方法]骨髓基质细胞经培养及定向分化为神经干细胞，后者由5-溴脱氧尿嘧啶核苷法标记，制备大鼠脊髓损伤模型，伤后第9d移植神经干细胞，实验分组：细胞移植组、PBS填充组、正常对照组。应用组化法观察移植细胞是否存活，取材前24h显露坐骨神经，行辣根过氧化物酶逆行示踪法观察脊髓损伤处的修复重建。[结果]骨髓基质细胞在定向分化为神经干细胞后标记并移植于脊髓损伤区，标记的阳性细胞可在受体脊髓内检测到，辣根示踪技术显示细胞移植组较PBS填充组阳性细胞明显增多，差别有统计学意义。[结论]大鼠骨髓基质细胞在体外分化为神经干细胞后移植于脊髓损伤区，移植细胞可以存活，并参与脊髓损伤处神经传导通路的结构重建。     

Effects of methylprednisolone and MK-801 on functional recovery after experimental chronic spinal cord injury

STUDY DESIGN: An experimental study was conducted to evaluate the effects of methylprednisolone and MK-801 after the compressive injury of spinal cord in rats. OBJECTIVES: To investigate the effect of methylprednisolone and non-competitive NMDA antagonist MK-801 in long-term functional outcome after spinal cord injury (SCI). METHODS: A randomized group A of Sprague-Dawley rats were treated with MK-801 (1.0 mg/kg, n=10; Group A) after a compression injury. A group of methylprednisolone (MP)-treated (30 mg/kg, n=10; Group B) and non-treated animals (n=9; Group C) were included for comparison. The functional motor outcome such as inclined plane (IP), toe spreading reflex (TSR), and modified Tarlov scale (TS) were measured in each animal at regular time points up to 8 weeks post-treatment. Histologically the injury site was scored in four groups and immunohistochemically Wallerian Degeneration (WD), astrocytosis and expression of beta-amyloid protein was identified. RESULTS: In examining the IP data, no significant difference was recognized between the group means (P-value>0.5). For the TSR, there were no differences in the group responses. For the TS, the differences were not statistically significant. Only group B showed significance in cavitation scores compared to group A (P>0.0094), WD was significantly different than group C (P>0.03), astrocytosis was significantly higher than group A (P>0.001) and modest presence of beta-amyloid protein. CONCLUSION: Our data indicate that one time bolus administration of MK-801 lacks any significant effect on axonal function in chronically injured rats. Daily bolus administration of MP at 30 mg/kg also did not ensure a better functional outcome. Immunohistochemically we have been able to show significant differences in WD, astrocytosis and small insignificant changes in beta-amyloid protein.     

NBQX treatment improves mitochondrial function and reduces oxidative events after spinal cord injury

The purpose of this study was to examine the effects of inhibiting ionotropic glutamate receptor subtypes on measures of oxidative stress events at acute times following traumatic spinal cord injury (SCI). Rats received a moderate contusion injury and 15 min later were treated with one of two doses of 1,2,3,4-tetrahydro-6-nitro-2,3-dioxo-benzol[f]quinoxaline-7-sulfonamide disodium (NBQX), MK-801, or the appropriate vehicle. At 4 h following injury, spinal cords were removed and a crude synaptosomal preparation obtained to examine mitochondrial function using the MTT assay, as well as measures of reactive oxygen species (ROS), lipid peroxidation, and glutamate and glucose uptake. We report here that intraspinal treatment with either 15 or 30 nmol of NBQX improves mitochondrial function and reduces the levels of ROS and lipid peroxidation products. In contrast, MK-801, given intravenously at doses of 1.0 or 5.0 mg/kg, was without effect on these same measures. Neither drug treatment had an effect on glutamate or glucose uptake, both of which are reduced at acute times following SCI. Previous studies have documented that drugs acting on non-N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors exhibit greater efficacy compared to NMDA receptor antagonists on recovery of function and tissue sparing following traumatic spinal cord injury. The results of this study provide a potential mechanism by which blockade of the non-NMDA ionotropic receptors exhibit positive effects following traumatic SCI.     

Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤的表达

[目的]探讨红细胞生成素诱导肝癌细胞株配体-B1 (Ephrin-B1)在大鼠脊髓损伤的表达变化.[方法]将60只成年Wistar大鼠分正常组、假手术组、伤后3、7、14 d及28 d组.假手术组大鼠不损伤脊髓,损伤组大鼠采用Allen's氏打击法损伤T10脊髓.分别在各个时间点取材,免疫荧光和Western Blot检测Ephrin-B1蛋白表达情况.[结果]免疫荧光结果显示Ephrin-B1在正常、假手术和损伤脊髓的灰质和白质中均有表达,但在损伤脊髓组织中表达较高,脊髓组织中的星形胶质细胞表达Ephrin-B1.Western Blot显示损伤组比对照组Ephrin-B1蛋白含量显著增加(P＜0.01),从伤后3d开始持续到伤后28 d;伤后14 d蛋白含量达到高峰,明显高于对照组及伤后其他组(P＜0.01);伤后28 d蛋白含量较14 d减少(P＜0.01),与伤后7d相比无显著性差异(P＞0.05).[结论]Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤后表达升高,伤后14d表达升高显著,表达于脊髓的星形胶质细胞.     

跳水致颈髓损伤早期综合治疗的疗效评价

[目的]探讨跳水致颈髓损伤早期综合治疗的临床效果。[方法]2001～2005年27例跳水致颈脊髓损伤患者，其中脊髓完全性损伤15例，脊髓不完全性损伤12例。早期综合治疗方案包括：（1）全身治疗：维持呼吸道通畅和有效循环血容量，保证收缩压在90mmHg以上；血氧饱和度在90％以上；（2）早期应用大剂量甲基强的松龙或地塞米松等药物治疗；（3）颅骨牵引制动或颈椎复位；（4）早期进行手术减压植骨融合内固定术；（5）术后早期行高压氧治疗。术后定期复查x线片观察损伤节段的稳定性和植骨融合率以及有无内固定并发症。以ASIA分级标准和感觉、运动评分判定脊髓神经功能恢复情况。[结果]27例患者随访6～36个月，平均28个月；本组病例无术中、术后并发症，切口愈合良好；术后3个月复查x线片，损伤节段稳定，植骨融合良好，无钢板断裂、螺钉松动脱落等现象。13例患者神经功能获得改善，总有效率为48．1％，其中完全性损伤组有效率为20％，不完全性损伤组有效率为83．3％。完全性损伤患者ASIA分级变化不明显，但其评分较入院时可有相应的增加，不完全性损伤患者ASIA分级和感觉运动评分均有明显的提高。[结论]颈髓损伤后早期综合治疗可以促进脊髓神经功能恢复。     

对大鼠脊髓损伤应用红花注射液的保护作用

[目的]采用重物下降打击法,制备相当于中度大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的模型,探讨红花注射液对SCI的保护效果。[方法]将72只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、脊髓打击损伤组(B组)、甲基强的松龙组(methylprednisolone sodium succinate,MPSS)(C组)、红花溶液组(D组),每组18只。B、C、D组根据改良的重物撞击装置制备脊髓急性打击损伤动物模型,C、D组在脊髓打击损伤后即刻分别腹腔注射MPSS 30 mg/kg和红花溶液100 mg/kg,观察并检测4组大鼠SCI后1、24、48 h 3个不同时间点后肢运动功能评分变化以及脊髓组织病理学、组织含水量、乳酸(lactic acid,LD)含量、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的改变。[结果]术后A组大鼠功能完全恢复;C组或D组与B组相比,大鼠后肢运动功能24、48 h 2个时间点均有所改善,但24 h时已出现明显差异(P<0.05)...