β-榄香烯抗氧化损伤作用的实验研究

目的:利用内皮细胞氧化损伤模型和鹌鹑饵食性高脂血症模型,研究β-榄香烯的抗氧化损伤作用.方法:采用过氧化氢(H2O2)建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤模型,观察不同浓度(0.1、1、10 mg/L)β-榄香烯对细胞内活性氧水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响;采用高脂饲料喂养法建立鹌鹑高脂血症模型,观察β－榄香烯对鹌鹑血清SOD活性、MDA和一氧化氮(NO)含量的影响.结果:β-榄香烯可降低内皮细胞内活性氧水平,升高SOD活力,降低MDA含量;β-榄香烯升高鹌鹑血清中SOD活性和NO含量,降低MDA水平.结论:β－榄香烯具有较强的抗氧化、清除氧自由基及保护血管肉皮细胞作用.     

啤酒花及其活性成分黄腐酚抗糖皮质激素性骨质疏松的作用研究

目的 研究对啤酒花及其活性成分黄腐酚抗糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）作用。方法 腹腔注射地塞米松（DEX）造模,并结合Micro-CT及Elisa试剂盒检测等方法,对小鼠股骨的骨微结构、骨密度及血清骨生化指标进行评价。同时,采用DEX损伤成骨细胞,对其增殖、分化水平及骨形成相关蛋白的表达进行评价。结果 啤酒花提取物及黄腐酚可显著改善GIOP小鼠的骨微结构破坏,增强骨密度,改善骨小梁参数。在成骨细胞水平上,啤酒花及黄腐酚既可促进DEX损伤成骨细胞的增殖、分化,又可提高骨钙素（BGP）、骨形成蛋白2（BMP-2）以及成骨特异性转录因子（Runx-2）的表达水平,促进骨形成。结论 该研究首次明确了啤酒花及黄腐酚具有抗GIOP作用,为抗骨质疏松药物的开发提供了新资源。     

巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用及基于网络药理学的机制研究

目的 探讨巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的骨形成作用及其机制。方法 以新生24 h Wistar大鼠所分离的成骨细胞为研究对象,用 Aβ1-42 寡聚体对成骨细胞进行损伤,并用巴戟天丸组方水提物进行药物干预。分别采用MTT法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、过氧化氢酶（CAT）活性检测、超氧化物歧化酶（SOD）活性检测、谷胱甘肽（GSH）活性检测以及丙二醛（MDA）活性检测。采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨形态发生蛋白2（BMP2）、成骨特异性转录因子（RUNX-2）、骨保护蛋白（OPG）的表达水平;明确巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用后,采用网络药理学方法对潜在的作用机制进行预测。结果 巴戟天丸组方可显著促进Aβ损伤成骨细胞的增殖,提高 ALP、SOD、GSH 活性,抑制MDA活性,并促进骨形成相关蛋白BMP2、RUNX-2、OPG的表达。网络药理学分析显示,巴戟天丸组方发挥改善Aβ损伤成骨细胞的作用主要与AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路以及神经活性配体与受体的相互作用通路等有关。结论 明确巴戟天丸组方具有改善Aβ损伤成骨细胞的作用,并通过网络药理学方法探究其相关作用通路,为传统方剂巴戟天丸抗骨质疏松的临床应用提供借鉴。     

抗脑衰胶囊对Aβ25-35诱导的神经元损伤作用的影响

目的探讨抗脑衰胶囊对Aβ25-35诱导的皮质神经元损伤作用的影响。方法采用Aβ25-35（10μmol/L）处理原代培养的大鼠皮质神经元损伤模型,加入抗脑衰胶囊含药血清共培养24h,倒置显微镜下观察神经元的形态变化,应用MTT法测定神经元存活率。结果与模型组相比,抗脑衰胶囊含药血清共培养组神经元的生存状态明显改善,神经元存活率明显提高。结论抗脑衰胶囊可显著对抗Aβ25-35对神经元的神经毒性作用,提高细胞存活率。     

阿魏酸钠对抗Aβ25-35诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的 探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响.方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸(20μmol/L)、Aβ25-35(5μmol/L)、Aβ25-35(5μmol/L)+谷氨酸(20μmol/L)孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸( 50μmol/L)诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Westem blot观察阿魏酸钠的保护作用.结果 单独应用Aβ25-35(5μmol/L)和单独加入谷氮酸(20μmol/L)引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%+1.5%增加到43%±8%:阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低.结论 阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡.     

阿尔茨海默病中β-淀粉样蛋白毒性作用的研究现状

阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)是老年期痴呆症中最常见的一种进行性神经变性疾病,在65岁以上老年人中的发病率为7%-10%,80岁以上老年人中发病率大约为40%[1].     

阿尔茨海默病中β-淀粉样蛋白毒性作用的研究现状

阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)是老年期痴呆症中最常见的一种进行性神经变性疾病,在65岁以上老年人中的发病率为7%-10%,80岁以上老年人中发病率大约为40%[1].     

石杉碱甲通过阻断Aβ-ABAD复合物诱导的线粒体损伤改善APP/PS1小鼠认知和记忆功能障碍的研究

目的 探讨石杉碱甲(HupA)是否能减少β-淀粉样蛋白(Aβ)-淀粉样蛋白结合醇脱氢酶(ABAD)(Aβ-ABAD)复合物诱导的线粒体损伤改善阿尔茨海默病(AD)(APP/PS1)小鼠的认知和记忆功能障碍.方法 检测Aβ-ABAD复合物,评估线粒体功能和小鼠认知和记忆能力.结果 HupA可显著改善APP/PS1小鼠脑细...     

槲皮黄酮对Aβ诱导小神经胶质细胞损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮黄酮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导小神经胶质细胞(BV-2)损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养BV-2细胞,利用Aβ诱导BV-2细胞发生损伤;将低(10μg/m L)、中(20μg/m L)、高(40μg/m L)3种浓度槲皮黄酮对细胞进行处理,共24 h,采用CCK8实验对BV-2细胞的增殖情况进行评价,应用ELISA试剂盒对细胞培养基上清中炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平进行分析,采用免疫印迹技术分析β-分泌酶(BACE)、早老素(PS1)、呆蛋白(NCT)蛋白表达水平,并对脑啡肽酶(NEP)、胰岛素降解酶(IDE)表达水平进行检测。结果采用Aβ诱导可较好地构建BV-2细胞损伤模型,经过低、中、高3种剂量的槲皮黄酮处理后,BV-2细胞的相对存活率较模型组显著增加(P<0.05);药物处理组细胞培养基上清中IL-6、TNF-α表达水平低于模型组(P<0.05);Western blot结果显示,槲皮黄酮组BACE、PS1、NCT蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05);槲皮黄酮可以促进Aβ消化酶NEP、IDE的表达。结论槲皮黄酮对Aβ诱导的BV-2细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制Aβ分泌酶表达和激活Aβ消化酶表达有关。     

IL-10对Aβ1-42诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的保护作用

目的研究IL-10对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法 48只大鼠随机均分为正常对照组(A组)、PBS对照组(B组)、Aβ1-420.1、0.2、0.4mM注射模型组(分别为C1、C2、C3组)和IL-10 80μg/ml预处理注射组(D组)。注射2d后,Morris水迷宫测定大鼠潜伏期,Western blot法检测海马组织中APP的表达量。结果与A、B组相比,C1、C2、C3组大鼠水迷宫实验潜伏期、APP蛋白表达均呈浓度依赖性的增加(P<0.01);而D组潜伏期、APP蛋白表达较C3组明显减少(P<0.05)。结论海马内注射IL-10能抑制Aβ1-42诱导的AD大鼠水迷宫潜伏期及海马内APP表达的增加,提示IL-10可能抑制由Aβ1-42诱导的AD神经炎症。     

铅与Aβ的蓄积机制的研究进展

铅暴露与阿尔茨海默病发病的关联性已被国内外很多实验研究结果所证实。最近试验研究结果显示铅在CP中的蓄积导致了大脑中Aβ含量的显著提高。其机制不完全明了,最近研究进展显示可能与铅影响胰岛素降解酶（IDE）的活性和铅导致APP过度表达有关。     

姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡的抑制作用

目的探讨姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和凋亡的抑制作用。方法采用体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分为溶剂对照组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)+姜黄素1,5和10μmol·L~(-1)保护组及姜黄素10μmol·L~(-1)对照组;噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,酶活性法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以考察细胞损伤程度;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法测定细胞凋亡;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3的活性;Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶3表达。结果与溶剂对照组比,Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组细胞存活率显著降低(P<0.01)。与Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组比较,姜黄素5和10μmol·L~(-1)缓解了Aβ_(1-42)诱导的细胞存活率下降(P<0.05),降低了Aβ_(1-42)诱导的乳酸脱氢酶释放水平(P<0.01)和细胞早期及晚期凋亡率(P<0.01)。姜黄素抑制了Aβ_(1-42)诱导的细胞线粒体膜电位去极化作用(P<0.01);姜黄素1~10μmol·L~(-1)抑制了Aβ_(1-42)诱导的胱天蛋白酶9及胱天蛋白酶3级联激活作用,且呈浓度依赖性(r=0.990,P<0.01;r=0.996,P<0.01)。姜黄素10μmol·L~(-1)对照组以上指标与溶剂对照组无明显差异。结论姜黄素可能通过升高线粒体膜电位、降低胱天蛋白酶活性抑制Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡。     

芥子酸对Aβ42诱导PC12细胞损伤的改善作用及机制

目的 研究芥子酸对β-淀粉样蛋白42(Aβ42)诱导PC12细胞损伤的改善作用及机制.方法 将PC12细胞分为对照组、模型组、芥子酸组、激活磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂组、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制剂组,各抑制剂组先分别加入LY294002和U0126(均为10 μmol/L)培养1h;然后除对照组...     

尼古丁对Aβ_(25-35)诱导学习记忆障碍小鼠的治疗作用

目的探讨nAChR激动剂尼古丁对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的学习记忆障碍小鼠模型的治疗作用以及可能的作用机制。方法小鼠侧脑室注入凝聚态Aβ25-354.5μl。次日,用药组给予尼古丁0.2和2 mg.kg-1(ip,bid×7d),对照组及模型组ip生理盐水。给药结束4 d后(造模成功后11 d),进行各组行为学及皮层、海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)活性指标的检测。结果定位航行实验发现,训练d 4,模型组小鼠的上台潜伏期和游泳距离明显高于对照组和0.2、2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.01);空间搜索实验发现,实验d 5撤除平台,模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的时间百分比明显低于对照组(P<0.01)和0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.05);模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的距离百分比明显低于对照组(P<0.01),但与0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组无差别(P>0.05)。酶活性检测发现尼古丁治疗组的AChE及ChAT的活性较对照组明显升高(P<0.01);尼古丁治疗组(2 mg.kg-1)MDA的活性较模型组明显降低(P<0.01),尼古丁治疗组(0.2 mg.kg-1)的活性较模型组无改变(P>0.05);尼古丁治疗组的GSH活性较模型组明显升高(P<0.01)。结论尼古丁能够改善Aβ25-35诱导痴呆小鼠的学习记忆功能障碍,该作用与其增强ChAT的活性以及抗氧化应激有关。     

拟人参皂苷F11抗阿尔茨海默病作用的Aβ相关机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经退行性疾病,其主要病理特征为Aβ过度沉积形成的老年斑、Tau蛋白过度磷酸化形成的神经纤维缠结等。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物。我们前期研究结果显示,PF11具有拮抗东莨菪碱、D-半乳糖和LPS所致实验动物的认知障碍的作用,同时显著降低过度磷酸化Tau并减轻神经炎症,提示PF11可能通过干预AD发病的多种机制来实现改善认知障碍的作用。本文进一步评价PF11对AD模型动物认知功能障碍的改善作用,尤其对Aβ的产生及清除的相关机制。方法 (1) 6月龄和12月龄APP/PS1转基因小鼠灌胃给予PF11(8 mg·kg~(-1)),分别在给药3个月、1个月后进行行为学实验,并检测小鼠海马和皮质脑区中淀粉样蛋白前体蛋白(APP)及Aβ1-40的表达水平。(2)灌胃给予6月龄雄性SAMP8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg~(-1)),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP、β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。(3)构建p EGFP-Rab5及p RFP-Rab7质粒并转染至原代小胶质细胞中,观察Rab转换。考察PF11对小胶质细胞吞噬、降解Aβ寡聚体(o Aβ)作用的影响,研究PF11对小胶质细胞内吞-自噬-溶酶体系统的保护作用。结果 (1) PF11给药可明显改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力,并可显著减少小鼠海马和皮质脑区中APP与Aβ1-40的表达水平。(2) PF11(8和32 mg·kg~(-1))可显著改善SAMP8小鼠的认知能力,显著减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积,降低BACE1的表达水平,并可促进APP从细胞质向质膜的转运,提示PF11可能通过影响APP的剪切过程及亚细胞定位来减少Aβ的生成。此外,PF11(8和32 mg·kg~(-1))显著增加小鼠海马和皮质脑区中APP与Rab11的共定位,提示PF11可以促进APP与循环内含体结合从而减少Aβ的生成。(3) o Aβ可通过调节转录因子EB(TFEB)的核易位和延缓Rab的转化而阻碍溶酶体的自噬降解系统。PF11(30～100μmol·L-1)可通过促进自噬小体及内含体的成熟并恢复溶酶体功能,发挥促进小胶质细胞吞噬及降解Aβ的作用。结论 PF11可显著改善APP/PS1转基因小鼠、SAMP8小鼠的学习记忆障碍,同时减少小鼠海马和皮质脑区中Aβ的沉积。其机制与减少Aβ生成、促进其降解等多环节有关。     

与Aβ42结合的噬菌体展示多肽的淘选

阿兹海默症（Alzheimer’s disease, AD）,即老年痴呆,是一种十分常见的神经系统退行性疾病,β-淀粉样蛋白（Aβ）在细胞外异常聚集、沉积是其致病机制之一。目的：筛选与Aβ42集合的噬菌体多肽。方法：本实验以Aβ42寡聚体为靶蛋白,对随机环形噬菌体七肽库进行筛选,对于筛选的结果用酶联免疫吸附试验进行验证。结果：得到200株噬菌体克隆,全部为阳性并且部分与Aβ42的结合力极强。结论：通过对随机环形噬菌体七肽库筛选可得到与靶蛋白（Aβ42）结合的噬菌体阳性克隆,理论上这些阳性噬菌体所展示的多肽可以作为配体与Aβ42（受体）结合,而这种结合则有可能影响Aβ42寡聚体的聚集和沉淀,从而为阿兹海默症的治疗提供某些支持。     

甲硫哒嗪损伤大鼠学习记忆伴随脑β-淀粉样蛋白的升高

目的观察甲硫哒嗪损伤大鼠学习记忆是否伴随脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)水平的升高,探讨甲硫哒嗪引起认知功能受损的机制。方法20只大鼠随机分为对照组和甲硫哒嗪组,连续2wk分别腹腔注射生理盐水和治疗剂量的甲硫哒嗪(10mg·kg-1)。用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,用放射免疫分析法测脑组织Aβ含量,用免疫组织化学染色检测β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)表达,用RT-PCR方法测定脑中3种APP、α及β-分泌酶mRNA表达。结果甲硫哒嗪组大鼠学习记忆能力下降,脑组织Aβ含量升高(P<0.05),是对照组的1.3倍;脑皮质和海马区APP蛋白表达增高(P<0.05);除APP695、α-分泌酶mRNA表达变化无统计学意义外,脑组织APP751和APP770 mRNA表达升高(P<0.05),相对表达量之和是对照组的2.5倍;β-分泌酶mRNA表达升高(P<0.05),是对照组的2.6倍。结论脑内Aβ水平的增加,可能是甲硫哒嗪引起认知功能损害的原因之一。     

Aβ的神经毒性及治疗

Aβ（β-amyloid peptides,Aβ）是阿尔茨海默症（Alzheimer＇s disease,AD）发病过程中的核心因子。随着研究的逐渐深入,越来越多的证据表明Aβ在AD的发生、发展中起到主导作用。本综述主要针对Aβ的神经毒性及其复杂的分子机制展开叙述,而后同时就其神经毒性机制展开研究两大类治疗药物。     

原花青素对 Aβ25-35诱导的小鼠学习记忆损伤的影响

目的：观察原花青素对淀粉样β蛋白25‐35（Aβ25‐35）诱导的小鼠学习记忆损伤的影响。方法将30只雄性2月龄C57bl／6小鼠随机均分为五组：E组为空白对照;其余四组采用双侧侧脑室注射Aβ25‐35制备的小鼠学习记忆损伤模型后,D组为模型对照,A、B和C组分别用原花青素50、100和150 mg／kg灌胃,连续30 d。D组和E组采用灭菌双蒸水灌胃。采用Y迷宫测试小鼠短期学习记忆能力;HE染色观察小鼠海马CA1区神经元损伤情况;化学比色法测定小鼠血清中丙二醛（MDA）、羟自由基（OH －）、谷胱甘肽（GSH）、总抗氧化能力（T‐AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）表达水平;Western blot测定硝基络氨酸（NTS）、过氧化物还原酶1（Prdx‐1）在小鼠海马组织中的表达。结果与D组比较,A、B和C组小鼠短期学习记忆能力较好,CA1区深染神经细胞比例呈剂量依赖性下降,血清GSH、T‐AOC和SOD含量增高,且海马组织中NTS表达水平降低,Prdx‐1表达水平升高（ P＜0．01或P＜0．05）。结论原花青素能改善Aβ25‐35诱导的小鼠氧化应激水平,从而减轻小鼠海马神经退行性病变和小鼠学习记忆损伤。     

四烯甲萘醌保护成骨细胞氧化损伤的作用研究

目的 考察四烯甲萘醌(MK₄)对成骨细胞氧化损伤的保护作用,阐明MK₄防治骨质疏松作用机制。方法 采用过氧化氢(H₂O₂)刺激小鼠成骨细胞系（MC3T3-E1）氧化应激模型,考察细胞活力、ALP活性和骨结节面积,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,JC-1检测线粒体膜电势,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率,RT-PCR法考察氧化应激相关基因FoxO1、FoxO3、SOD、Bcl-2和bax等的mRNA表达。结果 10 μmol/L四烯甲萘醌能显著提高H₂O₂刺激的成骨细胞增殖、ALP活性、骨结节形成面积和增强细胞膜电势,显著降低H₂O₂刺激的成骨细胞内丙二醛和活性氧水平,同时显著降低成骨细胞凋亡率和细胞凋亡因子bax/Bcl-2的mRNA表达水平,显著提高抗氧化酶SOD和转录因子FoxO1、FoxO3的mRNA表达。结论 四烯甲萘醌可通过调控FoxO通路保护成骨细胞氧化损伤和通过下调bax/Bcl-2比例,降低成骨细胞凋亡。