慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞树突超微结构的改变

目的：观察慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞树突超微结构特别是微管形态的改变，探讨慢性应激后产生的学习记忆及情绪障碍的可能机制。方法：实验于2003-01在汕头大学医学院进行。取健康清洁级雄性SD大鼠30只，随机分为对照组15只，应激组15只。应激组完成强迫游泳4周，对照组在笼中饲养4周后，测定两组大鼠海马CA3区锥体细胞一级树突的长度及直径，观察海马CA3区锥体细胞树突的超微结构。结果：慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞树突纵切面微管断裂，平行微管间距离变宽；横切面微管环不完整，单体分布不均匀；线粒体嵴模糊，偶可见空泡样变性。应激组大鼠海马CA3区锥体细胞一级树突的长度及直径分别为（98．51&;#177;17．48)，(6．41&;#177;0．94)μm，对照组为(125．35&;#177;18．69)．（5．67&;#177;0．83)μm，两组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：慢性应激可导致大鼠海马CA3区锥体细胞树突骨架尤其是微管的损害，并直接导致一级树突变短、变粗。     

重复经颅磁刺激对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马锥体细胞树突形态的影响

目的观察重复经颅磁刺激（rTMS）对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马CA1区锥体细胞树突形态的影响,并探讨其可能的作用机制。 方法将造模成功后符合标准的36只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和rTMS组,每组12只。采用两血管阻断法制作血管性痴呆模型。rTMS组于制模成功后给予rTMS治疗。对照组及模型组不给予任何治疗。于造模后第30天采用Morris水迷宫实验检测3组大鼠的学习记忆能力。学习记忆能力测试结束后取大鼠海马组织行Golgi-Cox染色,光镜下观察海马CA1区锥体细胞树突的分支、长度及树突棘密度的变化;应用免疫组织化学方法检测海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。 结果rTMS组在测试的第1、2、3、4天水迷宫逃避潜伏期分别为（47.32±15.44）s、（37.20±14.76）s、（25.16±11.55）s和（21.48±9.90）s,与模型组同时间点相比明显缩短（P<0.05）,rTMS组在原平台象限跨越相应平台次数达（8.25±1.75）次,较模型组明显增多（P<0.05）;和对照组相比,模型组及rTMS组海马锥体细胞一级树突的分支数、树突总长度及树突棘密度均明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。rTMS组海马锥体细胞树突的分支数、树突总长度及单位长度树突棘密度分别为（6.9±1.8）个、（935±108）μm和（0.72±0.19）个/μm,和模型组相比均有显著增加（P<0.05）。rTMS组BDNF阳性表达细胞数为(23.17±1.17)个/200倍视野,较模型组明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论rTMS能改善血管性痴呆大鼠学习记忆功能,机制可能与rTMS治疗能促进海马CA1区BDNF的表达,从而改善海马CA1区锥体细胞树突形态有关。     

衰老与海马CA1区锥体细胞退行性变及自由基和空间记忆的关系

目的:研究衰老大鼠记忆行为、自由基含量和CA1区细胞超微结构的特征以及衰老所致记忆减退的神经生物学机制。方法:雄性SD大鼠40只,青年和老年组各20只。应用Morris水迷宫测量大鼠空间记忆水平,分光光度计测量海马组织蛋白质的含量;巴比妥酸还原法测定海马脂质过氧化物含量;透射电镜观察海马CA1区锥体细胞的形态;体视学分析细胞内粗面内质网和线粒体的面数密度。结果:较之青年大鼠,衰老大鼠寻找平台的潜伏期延长(38与12s,t=8.04,P<0.01);跨平台次数的百分比减少(50%与82%,t=10.17,P<0.05)。海马脂质过氧化物(146.2与178.4nmol/g,t=5.61,P<0.01)、组织总蛋白(127.9与168.8μg比较,t=8.25,P<0.01)和非水溶性蛋白(21.1与34.3μg比较,t=9.53,P<0.01)的含量增高;海马CA1区250μm锥体细胞的数量(51.9与40.7个比较,t=6.55,P<0.01)、核仁体积(5.34与4.02μm3,t=7.71,P<0.01)、粗面内质网面密度(1.47与0.94μm2/μm3,t=6.55,P<0.01)减少。结论:海马CA1区锥体细胞的退行性变化是衰老致记忆减退的原因之一,而过量的脂质过氧化物可能是导致锥体细胞变性的原因。     

文拉法新对慢性应激引起海马CA3区细胞萎缩与凋亡的干预效应

目的：研究文拉法新对慢性应激引起的海马CA3区萎缩和凋亡的预防与治疗作用方法：实验于2004-06／2004-10在中南大学湘雅医学院病理学实验室完成，将SD大鼠随机分成对照组和3个实验组，用强迫性游泳4周的方法对大鼠进行慢性应激处理，断头处死后用石蜡切片苏木精一伊红染色法对海马CA3区组织进行切片染色，在电镜下观察CA3区神经元情况。同时观察各组实验期间的行为。结果：生理盐水对照组大鼠行为均表现正常；应激+生理盐水组大鼠均出现紧张度增加，探究行为受抑制，兴趣丧失或怿异行为；应激+阿米替林组多数出现探究行为抑制、兴趣减少等情况．未见怪异行为；应激+文拉法新组少数出现行为抑制，多数大鼠探究行为正常，未见震颤或怪异行为。生理盐水对照组未出现凋亡，其他各组发生凋亡的情况分别为：应激+生理盐水组：10／16(62％)，啦激+阿米替林组：6／16(38％)，应激+文拉法新组：3／16（19％)；经统计学检验表明．应激+阿米替林组出现凋亡的大鼠数和应激+生理盐水组差异没有显著性意义(P&;gt;0．05)，和应激+文拉法新组差异也没有显著性意义(P&;gt;0．05)。应激+文拉法新组和应激+生理盐水组差异存在显著性意义(x^2=6．652，P&;lt;0．05)。结论:文拉法新对于慢性应激所致的DA3区细胞萎缩与凋亡具有预防和治疗作用，且对探究行为无明显影响。     

文拉法新对慢性应激引起海马CA3区细胞萎缩与凋亡的干预效应

目的:研究文拉法新对慢性应激引起的海马CA3区萎缩和凋亡的预防与治疗作用。方法:实验于2004-06/2004-10在中南大学湘雅医学院病理学实验室完成,将SD大鼠随机分成对照组和3个实验组,用强迫性游泳4周的方法对大鼠进行慢性应激处理,断头处死后用石蜡切片苏木精-伊红染色法对海马CA3区组织进行切片染色,在电镜下观察CA3区神经元情况。同时观察各组实验期间的行为。结果:生理盐水对照组大鼠行为均表现正常;应激+生理盐水组大鼠均出现紧张度增加,探究行为受抑制,兴趣丧失或怪异行为;应激+阿米替林组多数出现探究行为抑制、兴趣减少等情况,未见怪异行为;应激+文拉法新组少数出现行为抑制,多数大鼠探究行为正常,未见震颤或怪异行为。生理盐水对照组未出现凋亡,其他各组发生凋亡的情况分别为:应激+生理盐水组:10/16(62%),应激+阿米替林组:6/16(38%),应激+文拉法新组:3/16(19%);经统计学检验表明,应激+阿米替林组出现凋亡的大鼠数和应激+生理盐水组差异没有显著性意义(P>0.05),和应激+文拉法新组差异也没有显著性意义(P>0.05),应激+文拉法新组和应激+生理盐水组差异存在显著性意义(χ2=6.652,P<0.05)。结论:文拉法新对于慢性应激所致的CA3区细胞萎缩与凋亡具有预防和治疗作用,且对探究行为无明显影响。     

衰老与海马CA1区锥体细胞退行性变及自由基和空间记忆的关系

目的：研究衰老大鼠记忆行为、自由基含量和CA1区细胞超微结构的特征以及衰老所致记忆减退的神经生物学机制。方法：雄性SD大鼠40只，青年和老年组各20只。应用Morris水迷宫测量大鼠空间记忆水平，分光光度计测量海马组织蛋白质的含量；巴比妥酸还原法测定海马脂质过氧化物含量；透射电镜观察海马CA1区锥体细胞的形态；体视学分析细胞内粗面内质网和线粒体的面数密度。结果：较之青年大鼠，衰老大鼠寻找平台的潜伏期延长(38与12s，t=8．04，P&;lt;O．01)；跨平台次数的百分比减少(50％与82％，t=10．17，P&;lt;O．05)。海马脂质过氧化物(146．2与178．4nmol／g，t=5．61．P&;lt;O．01)、组织总蛋白(127．9与168．8μg比较，t=8．25，P&;lt;O．01)和非水溶性蛋白(21．1与34．3μg比较，t=9．53，P&;lt;O．01)的含量增高；海马CA1区250μm锥体细胞的数量(51．9与40．7个比较，t=6．55．P&;lt;O．01)、核仁体积(5．34与4．02μm^3，t=7．71，P&;lt;O．01)、粗面内质网面密度(1．47与O．94μm^2／μm^3，t=6．55，P&;lt;O．01)减少。结论：海马CA1区锥体细胞的退行性变化是衰老致记忆减退的原因之一，而过量的脂质过氧化物可能是导致锥体细胞变性的原因。     

吗啡依赖性大鼠海马CA4区神经细胞的改变

目的：观察吗啡依赖性大鼠海马CA4区神经激肽B及神经肽Y细胞的变化，探讨其发病机制。方法：用皮下注射吗啡法建立雄性大鼠吗啡依赖模型。用免疫组织化学和图像分析方法观察大鼠CA4区神经激肽B和神经肽Y细胞的变化。结果：正常对照组大鼠海马CA4区单位面积神经激肽B，神经肽Y阳性反应物平均灰度值为98．3&;#177;6．3，197．5&;#177;6．14，实验组为215．2&;#177;9．1，238．4&;#177;8．35，与正常对照组比较，实验组神经激肽B，神经肽Y阳性反应物大量减少，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：神经激肽B及神经肽Y细胞减少与吗啡依赖性的发生、发展有关。     

慢性应激对大鼠海马长时程增强和氨基酸神经递质的影响

背景：严重或持久的应激是很多身心疾病的诱发因素，明显损害机体的认知功能。目的：观察应激状态下海马氨基酸的变化及慢性应激对大鼠海马长时程增强的影响。设计：完全随机对照动物实验。单位：汕头大学精神卫生中心。材料：实验于2000—12在汕头大学医学院完成。实验动物为SD成年雄性大鼠16只，随机分为对照组和应激组，每组8只。方法：应激组强迫游泳4周建立慢性应激模型，采用离体海马脑片（500μm）结合电生理的方法观测海马CA1区长时程增强的变化。在海马CA3区Schaffer侧支施加高频刺激后，观察CA1区锥体神经元群体峰电位幅值和场兴奋性突触后电位斜率的改变。应用高效液相色谱紫外检测法对海马氨基酸神经递质进行定量分析。主要观察指标：①以群体峰电位的幅值和场兴奋性突触后电位的斜率作为观察长时程增强变化的指标。②海马氨基酸含量变化。结果：实验第2周应激组大鼠溺水死亡1只，给予补充，其余全部进入结果分析。①对照组的群体峰电位幅值和场兴奋性突触后电位斜率在高频刺激后增大的幅度明显高于应激组（P〈0．05）。②对照组天冬氨酸和谷氨酸的水平明显低于应激组，[（2.425&;#177;0.211）μmol/g, （6.016&;#177;0.677） μmol/g, P〈 0.01; （4.746&;#177;0.609） μmol/g, （8.094&;#177;1.035） μmol/g, P 〈 0.01]，而两组间γ=氨基丁酸的含量接近，差异无显著性[（4.229&;#177;0.449） μmol/g, （4.249 &;#177;0.463） μmol/g, P 〉 0.05]。结论：慢性应激抑制海马CA1区长时程增强的形成，提高海马组织天冬氨酸和谷氨酸的水平，而对γ-氨基丁酸的含量没有影响。慢性应激所引起的海马兴奋性氨基酸的堆积可能是学习和记忆能力损害的神经生化基础。     

高压氧治疗对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马锥体细胞的影响

目的研究高压氧治疗对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马锥体细胞的影响。方法制作血管性痴呆大鼠模型,随机分成对照组、假手术组及治疗组,高压氧治疗30d后,用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马锥体细胞的变化。结果与对照组比较,治疗组大鼠空间记忆能力明显提高,海马锥体细胞数目明显增多。结论高压氧对血管性痴呆大鼠有明显治疗作用。     

吗啡依赖性大鼠海马CA4区神经细胞的改变

目的:观察吗啡依赖性大鼠海马CA4区神经激肽B及神经肽Y细胞的变化,探讨其发病机制。方法:用皮下注射吗啡法建立雄性大鼠吗啡依赖模型。用免疫组织化学和图像分析方法观察大鼠CA4区神经激肽B和神经肽Y细胞的变化。结果:正常对照组大鼠海马CA4区单位面积神经激肽B,神经肽Y阳性反应物平均灰度值为98.3±6.3,197.5±6.14,实验组为215.2±9.1,238.4±8.35,与正常对照组比较,实验组神经激肽B,神经肽Y阳性反应物大量减少,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:神经激肽B及神经肽Y细胞减少与吗啡依赖性的发生、发展有关。     

Comparison of 5-hydroxytryptamine1A-mediated hyperpolarization in CA1 and CA3 hippocampal pyramidal cells.

5-hydroxytryptamine (5-HT) hyperpolarizes hippocampal pyramidal cells in both areas CA1 and CA3 through an increase in potassium conductance. The receptor mediating the hyperpolarization in CA1 has been characterized as the 5-HT1A receptor, but has not been identified in area CA3. Intracellular recording techniques were used to record from CA1 and CA3 pyramidal cells in a hippocampal slice preparation. 5-HT agonists and antagonists were applied in known concentrations by bath perfusion. Antagonists were tested alone and for their ability to block the hyperpolarization elicited by 5-HT. The 5-HT1 agonist 5-carboxyamidotryptamine and 5-HT were full agonists and the 5-HT1A-selective ligand 8-hydroxydipropyl-aminotetralin hydrobromide was a partial agonist in both CA3 and CA1. The rank order potency was 5-carboxyamidotryptamine > 8-hydroxydipropyl-aminotetralin hydrobromide > 5-HT for both regions. The agonists were a half-log unit less potent and the maximum response elicited by 5-carboxyamidotryptamine and 5-HT was greater in area CA3 than in area CA1. The selective 5-HT1A antagonist BMY 7378 and the 5-HT1A/2 antagonist spiperone were competitive in area CA1, but insurmountable in area CA3. Other 5-HT antagonists that were not effective in blocking the 5-HT-mediated hyperpolarization included ketanserin, odansetron and BRL 24924. Based on these results, we conclude that the hyperpolarization elicited by 5-HT in areas CA1 and CA3 is mediated by the 5-HT1A receptor. However, there are significant differences in the nature of the 5-HT1A receptor-mediated hyperpolarization that may be attributed to differences in receptor-effector number, receptor-effector coupling and/or the structure of the recognition site.     

Na(+)/K(+)-ATPase inhibition upregulates NMDA-evoked currents in rat hippocampal CA1 pyramidal neurons

Na(+)/K(+)-ATPase and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor in hippocampus play very important roles in the regulation of learning and memory. Here, we showed that dihydroouabain (DHO, 10(-5)-10(-3) M), a Na(+)/K(+)-ATPase inhibitor, significantly potentiated NMDA current in rat hippocampal CA1 pyramidal neurons, which was blocked by PP2 (the selective Src tyrosine kinase inhibitor) and PD-98059 [the selective inhibitor of the mitogen-activated protein kinases (MAPK) cascade]. These findings reported here uncover that Src mediates the cross-talk between Na(+)/K(+)-ATPase and NMDA receptor to transduce the signals from Na(+)/K(+)-ATPase to the MAPK cascade and provide new insights into therapeutic target for deeper understanding of the nature of cognitive disorder.     

行为学训练对局灶性脑缺血大鼠梗死侧海马CA3区突触结构的影响

目的:研究行为学训练对局灶性脑缺血大鼠梗死侧海马CA3区突触结构的影响并探讨其机制。方法:48只健康雄性Wistar大鼠制成右侧大脑中动脉脑梗死模型后随机分为训练组和对照组,每组各24只,2组又随机分为7d、14d和21d3个时段进行观察,每个时段8只。训练组于造模1d后,给予Morris水迷宫训练,对照组置于普通笼中正常喂养,不给予干预。透射电子显微镜下观察各时间点不同组大鼠梗死侧海马CA3区突触结构参数的变化。结果:电镜下观察到各时段电针组梗死侧海马CA3区突触后致密物(PSD)厚度、活性区宽度、突触后膜曲率均较对照组明显增加,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:行为学训练可以改善局灶性脑梗死大鼠梗死侧海马CA3区突触结构参数的表达,促进神经功能的恢复,从而改善脑梗死大鼠的学习记忆能力。     

亚低温的脑保护作用与致痫大鼠海马CA3区钙超载状态

目的:检测海马CA1,CA3区域的钙离子荧光强度的变化,观察钙超载的情况,并观察亚低温对癫痫发作的影响,方法:实验于2003-03/08在华中科技大学同济医学院药理学实验室进行。①实验分为两部分:一部分14只大鼠用于钙超载的检测,其中7只用做致痫模型(癫痫组),7只用作对照组,另取5只用作尼莫地平的阻断试验(药物组)。另一部分28只用于观察不同温度致痫大鼠行为学和组织病理学改变。②用荧光倒置显微镜来测定癫痫状态下海马CA1,CA3区钙超载的情况,并用钙离子拮抗剂尼莫地平作用于海马脑片观察钙超载的情况。③28只大鼠分为头皮温度为41℃,37℃,32℃,26℃4组,通过对4组点燃大鼠行为学和海马组织病理学的变化观察亚低温对癫痫的脑保护作用。结果:47只大鼠均进入结果分析。①癫痫大鼠海马CA1,CA3区钙超载高于对照组,CA3区钙超载高于CA1区,在尼莫地平的作用下CA3区钙超载明显降低。②亚低温下癫痫的发作程度最轻,高温下癫痫的发作程度最重,随温度降低发作程度也递减。③不同温度海马组织学改变从重至轻依次为41℃组>37℃组>26℃组>32℃组。亚低温下CA3区神经元的丢失最少,温度越高,CA3区神经元的丢失越严重,温度越低,CA3区神经元的丢失也越轻。结论:钙超载参与了癫痫的发病,其中海马CA3区的钙超载在癫痫发病中起主要作用,而亚低温对脑有保护作用。     

亚低温的脑保护作用与致痫大鼠海马CA3区钙超载状态

目的：检测海马CA1，CA3区域的钙离子荧光强度的变化，观察钙超载的情况。并观察亚低温对赢瘸发作的影响。 方法：实验于2003-03／08在华中科技大学同济医学院药理学实验室进行。①实验分为两部分：一部分14只大鼠用于钙超载的检测，其中7只用做致瘸模型（癫痫组），7只用作对照组，另取5只用作尼莫地平的阻断试验（药物组）。另一部分28只用于观察不阿温度致痫大鼠行为学和组织病理学改变。②用荧光倒置显微镜来测定癫痫状态下海马CA1，CA3区钙超载的情况，并用钙离子拮抗剂尼莫地平作用于海马脑片观察钙超载的情况。③28只大鼠分为头皮温度为41℃，37℃，32℃，26℃4组，通过对4组点燃大鼠行为学和海马组织病理学的变化观察亚低温对癫痫的脑保护作用。 结果：47只大鼠均进入结果分析。①癫痫大鼠海马CA1，CA3区钙超载高于对照组，CA3区钙超载高于CA1区，在尼莫地平的作用下CA3区钙超载明显降低。②亚低温下癫痫的发作程度最轻，高温下癫痫的发作程度最重，随温度降低发作程度也递减。③不同温度海马组织学改变从重至轻依次为41℃组〉37℃组〉26℃组〉32℃组。亚低温下CA3区神经元的丢失最少，温度越高，CA3区神经元的丢失越严重，温度越低，CA3区神经元的丢失也越轻。 结论：钙超载参与了癫痫的发病。其中海马CA3区的钙超载在癫痫发病中起主要作用，而亚低温对脑有保护作用。     

Hyperexcitability of hippocampal CA1 neurons in brain slices of rats chronically administered clonazepam

The neuronal manifestations and mechanisms of sedative-anticonvulsant (benzodiazepine) drug withdrawal have been investigated in the CA1 region of hippocampal slices prepared from rats administered clonazepam for 1 month. Slices from clonazepam-treated rats exhibited epileptiform activity evidenced by multiple extracellular population spikes after orthodromic stimulation. These slices also demonstrated abnormally steep and variable stimulus intensity-population spike curves. Intracellular recordings showed spontaneous bursts and slow paroxysmal depolarizations. To investigate the neuronal activity before and immediately after drug withdrawal, slices from drug-naive and drug-exposed rats were maintained in solution containing the approximate concentration of clonazepam (20 nM) measured in the cerebrospinal fluid of clonazepam-treated rats. Compared to CA1 neurons in hippocampal slices from drug-naive animals, neurons from clonazepam-administered animals showed an increased tendency to fire in a bursting (i.e., epileptiform) pattern when the cell was depolarized by current injection, or by orthodromic or antidromic stimulation. Upon withdrawal of clonazepam from the perfusate, the frequency of spontaneous excitatory postsynaptic potentials and spiking activity increased in cells from clonazepam-treated animals and was associated with a shortening of the long-lasting postspike train after hyperpolarization. However, no change in the dendritic gamma-aminobutyric acid response was noted. This study indicates that abnormal epileptiform activity can be detected and studied in brain slices from animals chronically treated with clonazepam.     

氟哌利多对大鼠脑缺血海马CA1区锥体细胞持续钠通道电流的影响

背景：脑缺血后离子通道通透性的异常和神经细胞内外离子平衡的紊乱是缺血性脑损伤的重要因素，钠通道激活引起的去极化是脑缺血损伤的始动环节。 目的：采用膜片钳技术测定氟哌利多对脑缺血海马CA1区锥体细胞持续性钠通道电流的影响，分析氟哌利多是否对脑缺血损伤产生保护？ 设计：随机对照动物实验。 单位：上海交通大学附属第六人民医院麻醉科，上海交通大学附属第一人民医院麻醉科。 材料：实验于2002-04／2003-04在上海交通大学附属第一人民医院麻醉实验室完成。选择出生10-14d未断乳的SD大鼠14只，每只鼠各选择2个海马CA1区细胞，共28个细胞，随机分为4组：缺血对照组、氟哌利多3μmol／L组、氟哌利多10μmol／L组、氟哌利多30μmol／L组，7个／组。 方法：酶消化法急性分离全部大鼠脑海马CA1区锥体细胞，通过低氧和无糖法制备神经元缺血模型。选择贴壁良好、呈三角形或星形、胞体较亮，折光性良好、突起明显、胞浆均匀一致、核仁明显的细胞用于实验。采用“Y-tube”系统快速给药，氟哌利多3，10，30μmol／L组各自给予氟哌利多3，10，30μmol／L，缺血对照组不给药。全细胞膜片钳技术记录各组持续钠电流的基础值以及缺血3min和5min时钠通道电流的变化。 主要观察指标：①脑海马CA1区神经元正常持续钠电流的记录。②脑缺血时海马CA1区神经元持续性钠电流的记录。③不同浓度氟哌利多对脑缺血时持续性钠电流的影响。 结果：实验选用14只大鼠脑海马CA1区的28个细胞，全部进入结果分析。①脑海马CA1区神经元正常持续钠电流的记录：使用钙通道阻滞剂CdCl20．5mmol／L及钾通道阻滞剂TEA20mmol／L，在钳制电压-105mV、刺激电压-30mV下给予长为400ms的方波刺激，可记录到一个较小的、激活较晚且持续时间较长的内向电流，经河豚毒素阻断证实为持续性钠电流。②脑缺血时海马CA1区神经元持续性钠电流的记录：缺血对照组缺血3min时持续钠电流增加为正常情况的（1．60&;#177;0．21）倍，缺血5min时持续钠电流增加为正常情况的（2．87&;#177;0．45）倍，差异显著（P〈0．05）。③不同浓度氟哌利多对脑缺血时持续性钠电流的影响：缺血对照组、氟哌利多3，10，30μmol／L组持续钠电流的基础值分别是（77．42&;#177;15．17）pA，（87．44&;#177;21．56）pA，（84．13&;#177;20．06）pA，（80．22&;#177;19.30）pA，组间比较差异无显著性意义。缺血5min后氟哌利多3，10，30μmol／L组持续性钠电流分别为（105．36&;#177;17．16）pA，（94．74&;#177;18．88）pA，（84．88&;#177;13．94）pA，明显低于缺血对照组（21831&;#177;9．34）pA。 结论：在钳制电压-105mV、刺激电压-30mV条件下，脑缺血损伤时持续性钠电流增加，氟哌利多可能通过抑制持续性钠电流的增强而发挥神经元保护作用。。     

氟哌利多对大鼠脑缺血海马CA1区锥体细胞持续钠通道电流的影响

背景脑缺血后离子通道通透性的异常和神经细胞内外离子平衡的紊乱是缺血性脑损伤的重要因素,钠通道激活引起的去极化是脑缺血损伤的始动环节.目的采用膜片钳技术测定氟哌利多对脑缺血海马CA1区锥体细胞持续性钠通道电流的影响,分析氟哌利多是否对脑缺血损伤产生保护?设计随机对照动物实验.单位上海交通大学附属第六人民医院麻醉科,上海交通大学附属第一人民医院麻醉科.材料实验于2002-04/2003-04在上海交通大学附属第一人民医院麻醉实验室完成.选择出生10～14 d未断乳的SD大鼠14只,每只鼠各选择2个海马CA1区细胞,共28个细胞,随机分为4组缺血对照组、氟哌利多3 μmol/L组、氟哌利多10 μmol/L组、氟哌利多30μmol/L组,7个/组. 方法酶消化法急性分离全部大鼠脑海马CA1区锥体细胞,通过低氧和无糖法制备神经元缺血模型.选择贴壁良好、呈三角形或星形、胞体较亮,折光性良好、突起明显、胞浆均匀一致、核仁明显的细胞用于实验.采用"Y-tube"系统快速给药,氟哌利多3,10,30 μmol/L组各自给予氟哌利多3,10,30μmol/L,缺血对照组不给药.全细胞膜片钳技术记录各组持续钠电流的基础值以及缺血3 min和5 min时钠通道电流的变化.主要观察指标①脑海马CA1区神经元正常持续钠电流的记录.②脑缺血时海马CA1区神经元持续性钠电流的记录.③不同浓度氟哌利多对脑缺血时持续性钠电流的影响.结果实验选用14只大鼠脑海马CA1区的28个细胞,全部进入结果分析.①脑海马CA1区神经元正常持续钠电流的记录使用钙通道阻滞剂CdCl2 0.5 mmol/L及钾通道阻滞剂TEA 20 mmol/L,在钳制电压-105 mV、刺激电压-30 mV下给予长为400 ms的方波刺激,可记录到一个较小的、激活较晚且持续时间较长的内向电流,经河豚毒素阻断证实为持续性钠电流.②脑缺血时海马CA1区神经元持续性钠电流的记录缺血对照组缺血3 min时持续钠电流增加为正常情况的(1.60±0.21)倍,缺血5 min时持续钠电流增加为正常情况的(2.87±0.45)倍,差异显著(P＜0.05).③不同浓度氟哌利多对脑缺血时持续性钠电流的影响缺血对照组、氟哌利多3,10,30 μmol/L组持续钠电流的基础值分别是(77.42±15.17)pA,(87.44±21.56)pA,(84.13±20.06)pA,(80.22±19.30)pA,组间比较差异无显著性意义.缺血5min后氟哌利多3,10,30μmol/L组持续性钠电流分别为(105.36±17.16)pA,(94.74±18.88)pA,(84.88±13.94)pA,明显低于缺血对照组(218.31±29.34)pA.结论在钳制电压-105mV、刺激电压-30mV条件下,脑缺血损伤时持续性钠电流增加,氟哌利多可能通过抑制持续性钠电流的增强而发挥神经元保护作用.     

促红细胞生成素对大鼠脑组织缺血再灌注海马CA1区神经元的作用

目的:观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量以及凋亡细胞数量变化、热休克蛋白70表达的影响。方法:实验于2003-03/2004-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠66只,随机分为正常对照组6只、缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)、缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型,缺血2h后再灌注,促红细胞生成素治疗组经腹腔按200U/kg注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U/mL),生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2,6,12,24,48h,应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况,应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况,应用免疫组织化学法测定热休克蛋白70表达情况。结果:66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞的计数:生理盐水对照组再灌注后12,24,48h比正常对照组细胞数明显减少犤(268.6±44.5)个/视野,(240.8±22.5)个/视野,(201.8±30.7)个/视野,(337.3±45.3)个/视野,t=2.845～5.587,P<0.01犦,促红细胞生成素治疗组再灌注后12,24,48h比生理盐水对照组细胞数明显增加犤(286.7±33.8)个/视野,(271.9±30.4)个     

5-Hydroxytryptamine(7) receptor activation decreases slow afterhyperpolarization amplitude in CA3 hippocampal pyramidal cells

The 5-hydroxytryptamine(7) (5-HT(7)) receptor was originally defined by molecular biology techniques. The 5-HT(7) receptor protein and mRNA are found in brain areas, such as the CA3 subfield of the hippocampus, that are involved in various neuropsychiatric disease states. No functional response has previously been attributed to activation of the 5-HT(7) receptor in any of these brain areas. Calcium spike-induced slow afterhyperpolarizations (sAHP) were recorded from CA3 hippocampal pyramidal cells using intracellular recording techniques in a brain slice preparation maintained in vitro. A concentration-dependent inhibition of the sAHP amplitude was obtained when 5-HT was used as the agonist. To identify whether the 5-HT(7) receptor was one of the receptors mediating the inhibition of the sAHP amplitude, 5-HT agonists and antagonists were tested in the presence of WAY-100635 and GR-113808 to block 5-HT(1A) and 5-HT(4) receptor activation, respectively. The rank order potency of the agonists was 5-carboxyamidotryptamine (5-CT) > 5-HT > 5-methoxytryptamine (5-MeOT). Other agonists with high affinity at 5-HT(2), 5-HT(3), 5-HT(1B), 5-HT(1D), or 5-HT(6) receptors did not produce any response when tested at 10 microM. Ritanserin, mesulergine, and SB-269770 were competitive antagonists of the 5-CT inhibition of sAHP amplitude, with affinity (pA(2)) values of 6.8, 7. 9, and 8.8, respectively. Methiothepin was also an effective antagonist but was insurmountable. Other antagonists with affinity for the 5-HT(2), 5-HT(3), or 5-HT(6) receptor had no effect. Based on the rank order potency of the agonists and antagonists, one of the receptors that mediates the decrease in sAHP amplitude in CA3 hippocampal pyramidal cells was concluded to be the 5-HT(7) receptor.