实时荧光探针定量PCR在小儿沙眼衣原体肺炎诊断中的临床应用研究

目的观察荧光定量PCR在小儿沙眼衣原体肺炎诊断中的应用价值及探讨不同年龄阶段小儿沙眼衣原体(CT)肺炎的临床特点。方法将我院2004年1~12月份收治60例小儿CT肺炎做研究对象,根据年龄分组,对各组患儿均通过咽拭子或吸痰法获取标本,进行CT—DNA定量分析;回顾性总结分析60例CT肺炎。结果60例标本中,106拷贝数5例,105拷贝数6例,104拷贝数10例,103拷贝数39例;小婴儿CT肺炎往往无发热性肺炎,易合并细菌感染;3岁以上儿童则易出现发热、肺部体征大多阴性,而X线多表现为节段性肺炎,其临床经过类似支原体肺炎。结论1.实时荧光定量PCR检测CT—DNA是诊断小儿沙眼衣原体肺炎最直接、最客观的指标。2.CT肺炎在不同年龄阶段的临床表现存在显著差异。     

荧光定量PCR检测稽留流产患者沙眼衣原体和解脲支原体结果分析

目的探讨沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）感染与孕妇稽留流产的相关性,以及荧光定量PCR在稽留流产病因检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR检测稽留流产患者宫颈分泌物标本中的CT-DNA和UU-DNA的含量。结果 138例稽留流产患者中72例感染CT或UU,总检出率53.62%,其中CT阳性率21.74%,UU阳性率42.03%,混合感染10.14%。与正常人群对照差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论泌尿生殖系统CT和UU的感染与稽留流产有密切相关性,荧光定量PCR对稽留流产患者CT和UU的检测简单、快速、准确。     

荧光定量PCR对不育症患者解脲支原体和沙眼衣原体感染情况的研究

目的用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)定量检测不孕不育患者解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)基因,观察UU、CT感染情况与不孕不育的关系,探讨实时荧光定量PCR在不孕不育患者诊断和治疗中作用。方法采用FQ-PCR技术检测标本402份。结果 UU阳性率是32.8%,其中男性UU阳性率是21.4%,女性UU阳性率是44.3%。CT阳性率是16.2%,其中男性CT率是11.4%,女性CT率是20.9%。UU感染率在男性、女性患者有极显著性差异(P<0.01),而CT感染率在性别之间有显著性差异(P>0.05)。结论解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)是引起男女不育的主要原因之一,实时荧光定量PCR检测UU、CT基因具有操作简单、反应时间短、重复性好、结果客观准确、敏感性和特异性好等优点,其结果对临床诊断、治疗有一定指导意义。     

妇科疾病中的解脲脲原体、沙眼衣原体Nesed-PCR检测

目的探讨UU、CT在本地区妇科疾病中的发病率及其致病作用,方法收集535例妇科阴道炎、不孕症、宫颈炎、附件炎等疾病患者的阴道分泌物,应用nested PCR(nPCR)技术检测解脲脲原体(UU)及沙眼衣原体(CT)核酸.结果393人检测解脲脲原体(UU),UU-DNA阳性192例(48.8%);142人检测沙眼衣原体(CT),CT-DNA阳性32例(22.5%).结论解脲脲原体(UU-DNA)、沙眼衣原体(CT-DNA)与妇科疾病的发生关系密切,特别是阴道炎的妇科患者.     

三温式PCR检测婴儿呼吸道感染性疾病中的CT—DNA

沙眼衣原体(CT)是婴儿呼吸道感染性疾病的重要病原菌.长期以来,应用血清学检测CT敏感性低、特异性差,且CT的常规培养颇为困难.近年来随着PCR技术的问世,感染性疾病的基因诊断在临床上的应用和推广,同时也为快速诊断CT在儿科呼吸系统疾病中的感染提供了灵敏而特异的手段.现将我院对患有呼吸道感染性疾病的124例婴儿的咽分泌物用PCR技术检测CT-DNA的结果报告如下.     

FQ-PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体

目的观察解脲支原体和沙眼衣原体的感染与不孕不育的关系。探讨实时荧光定量PCR技术在不孕不育患者的诊断和治疗中的作用。方法采用实时荧光定量PCR技术检测45对不孕不育夫妇女性宫颈分泌物、男性精液或前列腺标本中的解脲支原体-DNA和沙眼衣原体-DNA含量。结果不孕不育患者解脲支原体-DNA阳性率37.78%,沙眼衣原体-DNA阳性率28.89%,解脲支原体或沙眼衣原体的总感染率为52.22%,正常对照组则分别为15.00%、8.33%、20.00%,两组间有显著性差异。不孕不育组中解脲支原体的感染率明显高于沙眼衣原体（P〈0.05）。女性患者解脲支原体DNA载量和沙眼衣原体-DNA载量均高于男性患者（P〈0.05）。结论解脲支原体和沙眼衣原体是引起男女不孕不育的重要原因之一。荧光定量PCR技术用于诊断引起不孕不育的解脲支原体或沙眼衣原体泌尿生殖道感染是完全可靠的。     

沙眼衣原体感染后热休克蛋白与稽留流产相关性研究

目的探讨沙眼衣原体(CT)感染后热休克蛋白-60(HSP-60)与稽留流产的关系。方法采用荧光定量聚链酶反应(PCR)方法,对72例稽留流产患者和正常人工流产患者进行沙眼衣原体检测,将正常人工流产CT-DNA阴性者随机选择72例作为对照组。再采用免疫组化方法检测蜕膜组织内HSP-60表达,采用HPLAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统检测单位面积中各项免疫组化阳性颗粒平均光密度值。结果HSP-60阳性细胞光密度值,A组:116.36±22.63,B组:139.67±32.26,对照组:221.12±29.87;A组HSP-60表达强于对照组,对比有明显差异(P<0.001)A组与B组对比无明显差异(P>0.005)。结论沙眼衣原体感染后,HSP-60蜕膜组织内表达强度与稽留流产呈正相关性;可认为是稽留流产发生的重要原因之一。     

荧光定量PCR检测新疆地区不孕不育患者UU、CT结果分析

目的利用实时荧光定量PCR技术了解新疆地区不孕不育患者解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（CT）感染情况,通过对实验结果的统计学处理分析不孕不育与UU、CT感染率及感染量之间的关系,方法采用实时荧光定量PCR技术检测新疆地区不孕不育患者及能正常生育人群解脲支原体-DNA和沙眼衣原体-DNA含量并进行统计学分析。结果不孕不育患者UU-DNA阳性率52.18%,CT-DNA阳性率3.65%,正常对照组则分别为46.08%、1.00%,两组间的差异显著性有统计学上的意义,不孕不育组UU和CT的感染率明显高于对照组（P〈0.05）。不同性别,不用民族的UU阳性检出率不同。结论新疆地区不孕不育患者中UU和CT感染是引起男女不孕不育的重要原因之一,且女性UU阳性率高于男性,维吾尔族UU阳性率高于其它民族。     

小儿支原体、衣原体感染肺炎300例临床分析

目的 深入探讨小儿肺炎支原体肺炎(MP)及沙眼衣原体肺炎(CP)的临床发病特点,以提高对小儿支原体、衣原体感染性肺炎的临床发病及诊治水平.方法 回顾性分析我院于2006～2009年两年期间收治的300例小儿支原体、衣原体感染肺炎患者的临床诊疗资料,并依据不同年龄段患儿的临床特点进行分析归纳,深入分析小儿支原体、衣原体感染肺炎的临床表现及诊治特点.结果 小儿支原体肺炎感染在年龄分布上具有较大差异,感染率最高的阶段为5～14岁组(P<0.05),可知支原体肺炎感染多见于大年龄组,而混合感染则无明显的年龄差别(P>0.05).治疗手段沙眼衣原体肺炎一般以红霉素为主,肺炎支原体肺炎主要以阿奇霉素为主,疗效确切.结论 肺炎患儿一旦被确诊,且持续性发热或反复咳嗽的治疗效果不明显时,宜进行病原学或血清学检测,以便确诊或排除肺炎支原体及沙眼衣原体感染肺炎,尽早进行对症治疗.     

荧光定量聚合酶链反应检测宫颈炎患者沙眼衣原体感染的临床应用

目的了解宫颈炎患者沙眼衣原体的感染状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术,对426例宫颈炎患者沙眼衣原体的感染状况进行了检测。结果在上述426例宫颈炎患者中检测出沙眼衣原体阳性标本60例,阳性率为14.08%(60/426)。结论在宫颈炎患者中沙眼衣原体有较高的感染率。     

荧光定量PCR检测沙眼衣原体及临床应用

目的：用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）检测沙眼衣原体的含量,探讨FQ－PCR在衣原体性尿道炎诊断中的价值。方法：应用荧光探针标记引物的荧光定量聚合酶链反应对172例疑为沙眼衣原体感染患者标本进行检测,并与常规PCR（电泳－EB染色）进行比较。结果：FQ－PCR阳性率为19．8％,常规PCR法为20．9％,两法符合率为63．9％。女性宫颈分泌物标本FQ－PCR阳性为29．2％,常规PCR法为16．7％;男性分泌物FQ－PCR阳性率为16．9％,常规PCR法为13．8％。FQ－PCR特异性较常规PCR法高。结论;FQ－PCR在扩增中实时在线检测,并选择理想的标准曲线做出较精确的临值分析,具有较高的特异性和敏感性,对病原体的诊断有一定的临床意义。     

荧光定量PCR对1501例NGU患者病原体基因检测结果分析

目的用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术准确度定量检测江门市区凝有非淋菌性尿道炎患者沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（UU）基因,进一步了解UU、CT的感染情况,为临床治疗提供依据。方法运用实时荧光定量PCR法（FQ-PCR）对1501例凝有非淋菌性尿道炎患者同时进行CT、UU检测。结果CT的阳性率是13.1%,UU的阳性率是33.9%,二者之间阳性率比较有显著性差异。结论1.江门市区非淋菌性尿道炎患者病原体CT、UU中占有一定比例,二者之间感染率比较有显著性差异。2.荧光实时定量PCR检测UU、CT具有操作简单、反应时间短、重复性好、结果客观准确、敏感性和特异性好等优点,其结果对临床诊断、治疗有一定指导意义。     

肺炎衣原体及肺炎支原体临床血清学检测试剂的研发及应用

目的 通过实验获得工程重组肺炎支原体和肺炎衣原体的抗原,探讨其临床诊断价值;分析儿童肺炎支原体和肺炎衣原体的发病情况.方法 采集医院收治的社区获得性肺炎患儿的血标本进行肺炎支原体和肺炎衣原体检测,并通过PCR方法得到肺炎衣原体的特异性抗原Cpn-MOMP和Cpn-CPAF和肺炎支原体P1-C和P1-B基因片段,应用工程重组抗原进行肺炎衣原体抗原特异性及灵敏度检测和肺炎支原体的灵敏度实验.结果 肺炎支原体及肺炎衣原体感染的阳性率随着年龄的增长而增加,肺炎衣原体冬季发病率较高.PCR方法可以得到完整的Cpn-MOMP和Cpn-CPAF基因片段,且Cpn-MOMP重组抗原产量高特异性较好.重组肺炎支原体P1-C和P1-B抗原产量较满意.结论 肺炎支原体及肺炎衣原体感染阳性率逐年升高,通过重组的Cpn-MOMP和Cpn-CPAF抗原可用于肺炎衣原体感染的血清学检测,具有临床应用前景.     

实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的研究

目的采用TaqMan探针建立检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法。方法根据沙眼衣原体外膜蛋白A的基因（ompA）序列设计引物和探针,以克隆的ompA部分基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量检测方法。结果建立的荧光定量PCR检测方法的最低检出限为5 copies/反应,检测线性范围100～107线性关系良好（r2=0.997）,比巢式PCR敏感100倍;且与鹦鹉热衣原体、淋球菌、解脲脲原体、大肠杆菌等病原菌DNA以及人基因组DNA均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。以巢式PCR作参比,建立的荧光定量PCR法检测沙眼衣原体的阳性符合率为100.00%,阴性符合率为95.09%,总符合率为96.81%。结论建立的检测沙眼衣原体实时荧光定量PCR具有特异性强和敏感性高的特点,可快速检测样本中微量沙眼衣原体DNA,适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选。     

FQ—PCR检测盆腔炎患者沙眼衣原体感染120例临床分析

目的 为了解盆腔炎患者沙眼衣原体感染状况。方法 采用荧光定量聚合酶链反应技术，对120例盆腔炎患者沙眼衣原体感染状况进行了检测。结果 在上述120例盆腔炎患者中检测出沙眼衣原体阳性标本20例，阳性率为16．67％。结论 在盆腔炎患者中沙眼衣原体有较高的感染率。     

361例男性不育患者沙眼衣原体感染的检测分析

目的了解男性不育患者沙眼衣原体的感染状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术,对361例男性不育患者沙眼衣原体的感染状况进行了检测。结果在上述361例男性不育患者中检测出沙眼衣原体阳性标本41例,阳性率为11.36%(41/361)。结论男性不育患者中沙眼衣原体有较高的感染率。     

532例患者淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体DNA定量(FQ-DNA)检测分析

目的 为了解性病患者中淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体流行情况.方法 用荧光定量PCR方法 对532例患者定量检测淋球菌DNA、沙眼衣原体DNA和解脲支原体DNA.结果 性病患者的三种病原体中NG总感染率为5.26%(28/532)、CT总感染率为11.28%(60/532)、UU总感染率为54.89%(292/532);以UU单项感染模式极显著高于其它模式(P<0.001);总体比较女性阳性率多于男性(x2=138.9,P<0.001).各模式的UU DNA载量均显著低于各模式中的NG和CT(P<0.05),NG和CT载量无统计学差异(P>0.05).结论 性病患者的三种病原体检测中以UU感染最为常见;各感染模式以UU单项感染最多见;女性感染率显著多于男性;定量结果 显示UU更多地表现为慢性感染.     

孕妇解脲支原体、沙眼衣原体感染的诊断与药物干预

目的探讨妊娠期孕妇解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）感染的发病率及其对感染者的治疗效果。方法对108例妊娠妇女采用核酸杂交的方法检测宫颈分泌物,对标本UU、CT-DNA进行DNA扩增、核酸杂交检测。结果 108例妊娠早中期孕妇宫颈分泌物UU、CT的阳性率分别是33.33%,7.41%,口服阿奇霉素治疗后检测UU、CT阳性率分别是17.59%,1.85%。两组间有显著性差异（P=0.001或P=0.002）。结论解脲支原体、沙眼衣原体是妊娠期妇女感染的常见病原体,临床治疗效果显著值得推广应用。     

不同方法检测沙眼衣原体的性能验证

沙眼衣原体是革兰氏阴性病原体，在自然界中传播很广。近年来，由沙眼衣原体感染而导致的非淋菌性尿道炎、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎等已超过淋球菌感染而居性传播疾病之首，从而引起不孕不育。我国学者汤非凡等分离沙眼农原体的成功，更引起了全世界对沙眼衣原体的广泛深入研究。在性病的治疗过程中，沙眼衣原体的正确诊断成为当务之急。我院在沙眼衣原体检测方面，主要应用细胞培养法、快速免疫层析法和荧光定量PCR。     

多重实时荧光定量PCR对9种常见呼吸道病原体检测

目的探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测9种常见呼吸道病原体的临床应用价值。方法采用Primer Express3.0(ABI)和Primer3 Input 4.0设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限和特异性。并对204例临床标本中副流感病毒1、2、3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒进行回顾性检测。结果 MRT-PCR法检测病原体的最低检出限达103copies/m L,特异性达100%,无交叉反应。204例咽拭子标本中,MRT-PCR检出呼吸道合胞病毒23例,副流感病毒1、2、3型13例,腺病毒15例,肺炎支原体15例,肺炎衣原体3例,甲型流感病毒13例与乙型流感病毒6例。该结果与其他试剂报告结果完全一致。结论多重实时荧光定量PCR具有快速、准确、特异性强等特点,在呼吸道病原体检测方面有重要价值。