应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达

逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达折细胞因子ｍＲＮＡ。这项技术又叫细胞因子ｍＲＮＡ扩增测定技术（即ＭＡｐｐｉｎｇ）。可同时测定各种细胞中多种细胞因子ｍＲＮＡ。操作过程包括ＲＮＡ分离、ｍＲＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增、产物检测等。根据定量细胞因子ｍＲＮＡ原理和方法的不同，可分为半定量ＰＣＲ法、竞争性定量ＰＣＲ法、内参标定量ＰＣＲ法、ＨＰＬＣ－ＰＣＲ法以及酶     

定量逆转录PCR检测丙肝病毒RNA

在反应体系中加入定量的突变型ＨＣＶ－ＲＮＡ模板进行竞争逆转录ＰＣＲ（ＣＲＴ－ＰＣＲ）可以定量测定标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ基因组拷贝数。ＣＲＴ－ＰＣＲ研究表明，随肝病进展，患者血清ＨＣＶ－ＲＮＡ复制水平持续增高；血清病毒含量高者对干扰素治疗反应差。     

应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达

逆转录ＰＯＲ（ＲＴ－ＰＵＲ）可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达的细胞因子ｍＲＮＡ。这项技术又叫细胞因子ｍＲＮＡ扩增测定技术（即ＭＡｐｐｉｎｇ）。可同时测定各种细胞中多种细胞因子ｍＲＮＡ。操作过程包括ＫＮＡ，分离、ｍＫＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增、产物检测等。根据定量细胞因子ｍＲＮＡ原理和方法的不同，可分为半定量ＰＣＲ法、竞争性定量ＰＣＲ法、内参标定量ＰＣＲ法、ＨＰＬ－ＰＣＲ法以及酶联免疫定量ＰＣＲ５种方法。该法由于非常敏感，易产生假阳性结果，一般实验中常设置阴性对照，本文拟就有关问题作一综述。     

逆转录和PCR检测HCV RNA负链

PCR是一种极其敏感的检测方法,但用该方法检测组织中的HCV时就不能鉴别是血中的HCV沾染组织表面,还是组织中本身就存在。HCV是单股正链RNA病毒,在HCV复制细胞中就会有负链RNA作为模板合成基因组RNA。作者检测了血浆、外周血单个核细胞(PBMC),以及肝组织中的正链和负     

用逆转录套式PCR检测风疹病毒RNA

目的：介绍一种简便的快速准确检测标本中风疹病毒ＲＮＡ的分子撑方法髟于诊断孕妇感染和胎和的先天性感染风前病毒。方法：选择风疹病毒基因组中编码膜糖蛋白Ｅ１基因中的一个片段作为靶序列进行Ｂ Ｒｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ扩增，扩增片段的长度用Ｋｏｄａｋ数码凝胶分析软件１Ｄ２．０３版本进行分析，并用内切酶酶切进行证实。结果：风疹病毒在早孕妇女中的阳性率为１．６３％；在中妊娠羊水中的阳性率为１．１７％。在畸形的儿或死     

单细胞逆转录PCR实验方法研究

目的：探索建立稳定可靠的单细胞RT-PCR实验体系。方法：以人β-actin和DPH2L基因为靶基因，通过各个环节上实验条件的比较优化，对单细胞RT-PCR扩增单个细胞中特异性目的基因和全细胞mRNA两种方法的扩增效果进行深入研究，并结合琼脂糖凝胶电泳和DNA测序技术，分析该方法的灵敏性、特异性、重复性和忠实性。结果：单个细胞中的全部mRNA均得到了扩增，扩增成功率为75%，产物经核酸定量均可达到μg水平，足够常规分子生物学实验之用。β-actin和DPH2L基因均得到特异性扩增产物，未见基因组DNA污染，经BLAST比对为100%吻合，不同条件下扩增成功率在30%~90%之间。结论：单细胞RT-PCR是一种行之有效的单细胞基因表达的研究工具，提高Mg2+反应浓度并采用巢式引物有利于提高扩增成功率。     

HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验

1995年 ,美国Ｓｉｍｏｎｓ等和Ｌｉｎｎｅｎ等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒 (ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶ)的基因组 ,并建立了检测血清ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶＲＮＡ的逆转录套式聚合酶链反应 (ＲＴ ｎＰＣＲ)方法。但是 ,该检测方法的灵敏度存在着较大差异。本实验使用Ａ～Ｅ共 5套ＰＣＲ引物 ,基中Ａ、Ｂ、Ｄ为自行设计的ＨＧＶ 5′端非编码区引物 ,目的产物长度分别为36 8ｂｐ ,15 8ｂｐ及 2 2 0ｂｐ ;Ｃ引物为参照文献设计的核心区引物 ,目的产物为30 2ｂｐ ;Ｅ引物为李倬副研究员设计的ＮＳ3区引物 ,目的产物长度为 5 91ｂｐ。采用改良的…     

逆转录PCR克隆L—选择素cDNA

本文为从转录水平研究Ｌ－选择素表达的调节机制，利用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件及ＥＭＢＬ数据库选出人与大鼠Ｌ－选择高源性但与其它细胞因子及其受体无高源性的ｃＤＮＡ片段，设计ＰＣＲ引物，一步法分离Ｂ系Ｒａｊｉ细胞ＲＮＡ，逆转当ＰＣＲ扩增目的的片段，ＨｉｎｆⅠ酶切初步确定后，将片段插入ＰＵＣ１９质粒ＨｉｎｃⅡ位点，转化ＪＭ１０９大肠杆菌，经测序初步证实扩增克隆片段与设计相符。     

逆转录PCR克隆L－选择素cDNA

本文为从转录水平研究Ｌ─选择素表达的调节机制，利用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件及ＥＭＢＬ数据库选出人与大鼠Ｌ─选择素高同源性但与其它细胞因子及其受体无高同源性的ｃＤＮＡ片段，设计ＰＣＲ引物，一步法分离Ｂ系Ｒａｊｉ细胞ＲＮＡ，逆转录ＰＣＲ扩增目的片段，ＨｉｎｆⅠ酶切初步确定后，将片段插入ＰＵＣ１９质粒ＨｉｎｃⅡ位点，转化ＪＭ１０９大肠杆菌，经测序证实扩增克隆片段与设计相符。     

逆转录─巢式PCR在一管中同时检测丙型与庚型肝炎病毒

逆转录┐巢式ＰＣＲ在一管中同时检测丙型与庚型肝炎病毒谭文杰夏宁邵丛郁庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高。本室根据对ＨＧＶ与ＨＣＶ基因序列的分析，分别选取５′ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）区的两...     

逆转录-聚合酶链反应方法检测乙型脑炎病人标本

目的 逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测乙型脑炎（乙脑）病人标本方法的建立和评估。方法 建立ＲＴ－ＰＣＲ法,了解该方法用于乙脑病毒检测的敏感性,特异性,并用于临床疑似乙脑病人血清及脑脊液（ＣＳＦ）标本的检测,并与反向被动血凝抑制实验（ＲＰＨＩ）方法进行比较分析。结果 用该ＲＴ－ＰＣＲ法检测高顺生株（高株）敏感性可达６４ＰＦＵ。共检测临床疑似乙脑病人标本３８份,对ＣＳＦ中乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）     

多重PCR检测儿童呼吸道感染常见病毒

目的 对深圳、粤东地区儿童呼吸道病毒感染进行监测、分析,探讨其流行规律.方法 2006年6月-2008年6月,于汕头大学附属医院、深圳市第四人民医院、揭阳市人民医院采集毛细支气管炎、支气管肺炎、喘息支气管炎等的患儿咽拭子或鼻咽分泌物标本686份,多重PCR进行9种呼吸道病毒检测.结果 在686例标本中病毒阳性362例(52.77%),其中呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒(RSV)感染占首位,达到31.22%(113/362),其次是鼻病毒(RHV)为16.85%(61/362),最低是流感病毒B型(IVB)占0.83%(3/362),流感病毒A型(IVA)占14.36%(52/362),副流感病毒1型(PIV1)和副流感病毒3型(PIV3)分别占7.73%(28/362)和8.29%(30/362),腺病毒(AdV)达到9.67%(35/362),而人博卡病毒(hBOV)和人偏肺病毒(hMPV)分别占6.08%(22/362)和4.97%(18/362).结论 RSV、RHV及IVA是华南地区儿童呼吸道感染的主要病毒病原,混合感染以RSV、IVA联合其他病毒感染为主,诊治时应根据所感染病原体制定有针对性的措施.     

巢式PCR检测日本血吸虫感染的研究

本研究通过设计2对巢式引物扩增日本血吸虫高拷贝的Sjα1基因片段,建立检测日本血吸虫感染的巢式PCR技术,并对感染小鼠血清、全血样本以及实验和现场钉螺样本进行检测.建立的巢式PCR方法特异性扩增日本血吸虫420 bp的Sjα1片段,和曼氏血吸虫没有交叉,基因组DNA作为模板时最低检测量为0.1fg.小鼠感染日本血吸虫后2周的血清样本中即能检测出特异性DNA,建立的方法能同时检测血清和全血标本.钉螺实验感染4 h后能检测到日本血吸虫DNA,现场采集钉螺的检测结果显示比传统的镜检方法敏感性高.建立的巢式PCR检测日本血吸虫感染具有较高的敏感性和特异性,为疾病诊断和媒介调查提供了新的分子生物学检测技术. PCR技术,并对感染小鼠血清、全血样本以及实验和现场钉螺样本进行检测.建立的巢式PCR方法特异性扩增日本血吸虫420 bp的sja1片段,和曼氏血吸虫没有交叉,基因组DNA作为模板时最低检测量为0.1fg.小鼠感染日本血吸虫后2周的血清样本中即能检测出特异性DNA,建立的方法能同时检测血清和全血标本.钉螺实验感染4 h后能检测到日本血吸虫DNA,现场采集钉螺的检测结果显示比传统的镜检方法敏感性高.建立的巢式PCR检 日本血吸虫感染具有较高的敏感性和特异性,为疾病诊断和媒介调查提供了新的分子     

用PCR技术检测女性生殖道NUC感染

淋病奈瑟菌（Neisseriagonorrhoeae，NG）,解脲脲原体（Ureaplasmaurealytium，uu）和沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，CT）三种病原体，简称NUC，是女性生殖道感染最常见的病原体，常引起宫颈炎，孕妇感染后，可引起流产、死胎、胎膜早破、胎儿宫内发育迟缓等，还可因分娩导致急慢性输卵管炎及新生儿感染。因此，近年来，NUC感染已逐渐引起国内外学者的注意。1995年3月至1996年6月，我院应用聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）技术检测465例女性生殖道感染患者宫颈拭子NGDNA，UUDNA及CTDNA，现报告如下。材料和…     

荧光定量PCR检测泌尿生殖道UU感染

解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)是引起非淋菌性尿道炎(NGU)的主要病原体之一[1],是男女泌尿生殖道中一种常见的支原体,并且是女性下生殖道的主要定植者[2].近年来,从国内外已有的报道来看,UU感染率呈现逐渐增高的趋势[3,4].为了解泌尿生殖道解脲支原体的感染情况,我们对19449例UU的检测结果进行了分析和总结,现报告如下.