人非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的研究

目的　探讨人类非小细胞肺癌组织中p1 6基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法　应用控制模板DNA量的银染PCR SSCP技术检测 40例非小细胞肺癌手术切除标本中p1 6基因第 2外显子。结果　 40例中有 1 3例发生纯合缺失 ,3例发生突变 ,缺失及突变率为 40 %。其缺失及突变率与肺癌的临床分期有密切关系 (P <0 .0 5)。结论　p1 6基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要作用。如     

肺癌p16基因纯合缺失,突变,表达及临床意义

目的探讨P16基因的改变与肺癌生物学行为的关系。方法控制正常细胞对肿瘤组织污染后，用聚合酶链反应一单链构型多态性分析（PCR－SSCP）和免疫组织化学法对60例肺癌组织P16基因纯合缺失、突变、表达进行了研究。结果小细胞肺癌无P16基因纯合缺失、突变和蛋白表达异常。非小细胞肺癌P16基因纯合缺失率和突变率分别为40．5％和5．7％且与肿瘤细胞的分化程度、组织类型、转移和预后明显相关。非小细胞肺癌P16蛋白表达缺失率为42．3％，与p16基因纯合缺失有高度的一致性，两者的缺失符合率为76％。结论P16基因异常和失活可能与非小细胞肺癌的组织学类型、分化和预后有一定关系。     

非小细胞肺癌中脆性组氨酸三联体基因异常的探讨

目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中作用机制及其与临床病理间的关系。方法:通过PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-硝酸银染色方法检测40例非小细胞肺癌及其癌旁肺组织与FHIT基因紧密连锁的D3S1300位点杂合性缺失(LOH),并比较其与各临床病理的关系。结果:1)FHIT基因在肺癌组和对照组杂合性缺失的发生率分别为70.0%和0,两组比较有显著性差异(P<0.001)。2)发生FHIT基因杂合性缺失的28例肺鳞癌患者中23例(82.1%)有吸烟史;发生FHIT基因杂合性缺失的12例肺腺癌患者中7例(58.3%)有吸烟史。FHIT基因杂合性缺失与吸烟因素及肺癌组织类型具有相关性(P<0.05)。3)FHIT基因杂合性缺失的发生率与年龄、性别、临床分期、淋巴结转移等临床病理间无明显相关性。结论:非小细胞肺癌FHIT基因杂合性缺失与吸烟因素密切相关,提示FHIT基因可能是烟中致癌物的靶分子。     

肺癌组织中p16基因缺失的初步研究

目的　探讨p16基因缺失与肺癌发生的关系。方法　采用PCR方法检测 48例肺癌组织标本中p16基因缺失的情况 ,其中包括 2 3例原发性小细胞肺癌 (SCLC)和 2 5例原发性非小细胞肺癌 (NSCLC)。结果　在 2 3例SCLC中没发现p16基因缺失 ,而 2 5例NSCLC中 ,7例存在p16基因缺失 ,缺失率达 2 8%。结论　结果提示p16基因的变异与原发性非小细胞肺癌的发生及发展相关。     

人非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的研究

目的 探讨人类非小细胞肺癌组织中ｐ１６基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法 应用控制模板ＤＮＡ量的银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测４０例非小细胞肺癌手术切除标本中ｐ１６基因第２外显子。结果 ４０例中有１３例发生纯合缺失，３例发生突变，缺失及突变率为４０％，其缺失及突变率与肺癌的临床分期有密切关系（Ｐ〈０．０５）。结论ｐ１６基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要作用。     

非小细胞肺癌组织中FHIT、P53和P16蛋白的异常表达及其与临床病理的关系

目的 :研究非小细胞肺癌组织 (NSCLC)中脆性组氨酸三联体 (FHIT)蛋白 (Fhit)、P5 3蛋白 (P5 3)和P16蛋白 (P16 )异常表达及其与临床病理的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中Fhit、P5 3及P16的表达 ,用 χ2 检验分析其异常表达与临床病理参数之间的相关性。结果 :NSCLC组织中Fhit、P5 3及P16的异常表达率分别为 6 2 .2 % (5 6 / 90 )、4 8.9% (4 4 / 90 )和 4 6 .7% (4 2 / 90 ) ;除了Fhit异常表达显著多见于鳞癌 (SqCC ,P <0 .0 0 1)和吸烟者 (P =0 .0 32 )、P16多见于非鳞癌 (non SqCC)以及P5 3异常多见于N2淋巴结转移 (P =0 .0 39)外 ,三者的异常表达与其他临床病理参数 (包括年龄、性别、肿瘤大小和分期等 )均无相关性。结论 :Fhit的表达缺失 ,与P5 3、P16异常表达一样 ,是非小细胞肺癌中常见事件。     

nm23和TGFβ_1在人体非小细胞肺癌中的表达及其临床病理关系的探讨

目的　探讨转移抑制基因nm2 3及转化生长因子 β1基因在人非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达水平及其临床病理关系。方法　应用免疫组化方法对 83例人非小细胞肺癌组织中转移抑制基因nm2 3及转化生长因子 β1基因表达蛋白水平进行了研究。结果　nm2 3和TGFβ1表达水平与肺癌的TNM分期、细胞分化程度及肺癌的转移有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　nm2 3、TGFβ1基因表达水平同时降低 ,预示肺癌的转移和预后不良。     

WWOX蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨WWOX基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化方法检测50例肺鳞癌,31例肺腺癌及20例癌旁正常组织中WWOX基因蛋白的表达,并分析其与病理指标(组织类型、细胞分化程度、淋巴结转移、临床分期)及临床特征之间的相关性.结果 WWOX基因在72.8%的非小细胞肺癌中失表达或表达减少,而在相邻正常肺组织中有80.0%正常表达.WWOX基因的表达与组织类型、细胞分化程度密切相关(P＜0.05),在肺鳞癌和低分化癌中WWOX基因失表达或表达减少.结论 WWOX蛋白在非小细胞肺癌组织中呈低表达,该蛋白表达的缺失可能在不同类型非小细胞肺癌的形成中发挥了不同的作用.     

肺癌组织中p16基因缺失的初步研究

目的：探讨p16基因缺失与肺癌发生的关系。方法：采用PCR方法检测48例肺癌组织标本中p16基因缺失的情况，其中包括23例原发性小细胞肺癌（SCLC）和25例原发性非小细胞肺癌（NSCLC）。结果：在23例SCLC中没发现p16基因缺失，而5例NSCLC中，7例存在p16基因缺失，缺失率达28％。结论 ：结果提示16基因的变异与原发性非小细胞肺癌的发生及发展相关。     

非小细胞肺癌不同组织标本中P16基因的PCR-SSCP分析

目的 :研究非小细胞肺癌 (NSCLC)不同来源与病理分期类型的组织标本中P16基因表达的相互关系。方法 :应用PCR -SSCP方法 ,检测 2 8例手术标本、2 1例支气管镜活检及 2 7例恶性胸水NSCLC患者中P16基因的表达。结果 :2 8例Ⅰ期手术标本中 8例P16基因发生改变 (2 8 6 % ) ,其中 5例纯合性缺失 ,3例点突变 ;2 1例支气管镜活检中 ,8例P16基因发生改变 (38 1% ) ,其中 3例纯合性缺失 ,5例点突变 ;2 7例恶性胸水标本中 ,17例P16基因发生改变 (6 3 0 % ) ,其中 16例纯合性缺失 ,1例点突变。恶性胸水患者的P16基因改变率与Ⅰ期手术标本、支气管镜活检相比较 ,有显著性差异 (分别为P <0 0 1、P<0 0 0 5 )。在 76例NSCLC中 ,Ⅰ期患者的P16基因改变率为 30 0 % (9/ 30 ) ,Ⅱ期患者为 5 0 % (2 / 4 ) ,Ⅲ期患者为 5 1 6 % (16 /31) ,Ⅳ期患者为 5 4 5 % (6 / 11)。Ⅰ期患者的P16基因改变率与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者相比较 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 )。腺癌患者的P16基因改变率为 4 5 0 % (18/ 4 0 ) ,鳞癌患者为 4 2 3% (11/ 2 6 ) ,而腺鳞癌混合型为 4 0 0 % (4/ 10 ) ,经统计学分析 ,三者无显著性差异。而鳞癌患者的P16基因突变率为 2 3 1% (6 / 2 6 ) ,腺癌患者为 7 5 % (3/ 4 0 ) ,二者有显著性差异 (P <0 0     

多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究

目的 深入研究视网膜母细胞瘤（ＲＢ）内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用ＳＳＣＰ分析、ＤＮＡ序列测定以及多重ＰＣＲ等技术,检测分析ＲＢ肿瘤内Ｒｂ、ｐ５３,ｐ１６,ｐ１５及ｐ１２等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约７４％的ＲＢ肿瘤有Ｒｂ基因点突变,１６％显示,ｐ１６基因缺失,但ｐ５３及ｐ２１基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 ＲＢ的发病和病变的进展主要是由于以Ｒｂ基因为核心的代谢     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

Mechanisms by which eucaryotic genes evolve

Summary This paper reviews our current efforts to understand the evolutionary origin of the ovomucoid gene. Sequence analyses have suggested that introns were present in the primordial ovomucoid gene before birds and mammals diverged, about three hundred million years ago. Our work suggests that the present ovomucoid gene has evolved from a primordial ovomucoid gene by two separate intragenic duplications followed by the addition of a final segment which codes for a secretory signal sequence. The three domains of the secreted peptide and also the signal sequence, are constructed by an apparent assembly of exons which code for individual peptide segments. The exact position of introns within the ovomucoid gene has been defined and the results support the theory that introns separate gene segments that code for functional domains of proteins and provide insight into the manner by which eucaryotic genes were constructed during the process of evolution.     

含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析

克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体（ＧＲ）基因片段,为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模型奠定基础。和ＰＣＲ扩增小鼠ＧＲ基因第二外显子上５６２ｂｐ的核酸片段作为探针,筛选小鼠基因组文库,共获得６个阳性克隆。对Ｃ１０克隆进行详细的测序和酶切图谱和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析事一６．５ｋｂ的基因片段。该片段含完整的ＧＲ基因第二外显子,基或分别有３．９ｋｂ和１．４ｋｂ的ＤＮＡ片段可作为下一步构     

MTX耐药基因在骨髓干细胞中的高效表达

以脂质体为载体，把突变的抗ＭＴＸ的耐药基因转染到小鼠的造血干细胞中，用不同浓度的ＭＴＸ对细胞进行筛选。结果发现同一浓度下已转染基因组的细胞接种率大于未转染基因组的细胞接种率，未转染组对ＭＴＸ耐受性差，克隆形成率低。行卡方检验，同一浓度下的组间差异显著（Ｐ〈０．００１）。ＰＣＲ分析证实抗ＭＴＸ的耐药基因在造血干细胞中有效表达，该实验为进一步研究ＭＴＸ治疗的肿瘤患者减少骨髓毒性，提供了有参考价值的资料     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。