氯化锂通过AKT/GSK-3β阻滞近端肾小管上皮细胞周期在G2期

目的探讨氯化锂（LiCl）是否影响近端肾小管上皮细胞（HK-2 细胞）的细胞周期及其信号通路。方法将不同浓度（5、 12.5、20、25 mmol/L）的LiCl作用于HK-2细胞不同时间（12、24、48、72 h）,采用流式细胞术检测细胞周期变化,CCK-8测定HK-2 细胞的活力,Western blotting 检测细胞周期G2 期的关键蛋白Cyclin B1、CDK1 以及AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白的表达 量。结果流式细胞术结果提示LiCl以时间-浓度依赖的方式使HK-2细胞的G2细胞周期比例逐渐增加（P<0.05）,CCK-8结果 提示HK-2 细胞的活力随LiCl 作用的时间-浓度的增加而降低（P<0.05）,Western blotting 显示Cyclin B1、CDK1、p-GSK-3β、β- catenin蛋白含量随着时间以及浓度的增加而增加,而AKT磷酸化水平随着时间及浓度的增加而减少（P<0.05）。结论LiCl可 能通过激活AKT/GSK-3β信号通路使HK-2细胞阻滞在G2期。     

糖原合成酶激酶-3β磷酸化 促进人腹膜间皮细胞转分化的实验研究

目的：探讨糖原合成酶激酶（GSK）-3β磷酸化在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用。方法：从人腹膜组织中分离和培养人原代腹膜间皮细胞。观察GSK-3β抑制剂氯化锂（LiCl）对HPMC GSK-3β磷酸化的影响,在不同时间点（0,1,3,6,12 h）和不同浓度（0,5,10,20,40 mmol/L）LiCl下Western 印迹检测p-GSK-3β和总GSK-3β表达水平的变化。Western 印迹检测20 mmol/L LiCl作用HPMC不同时间,α-SMA和E-cadherin蛋白的表达。间接免疫荧光染色方法检测α-SMA的表达和分布。结果：LiCl促进HPMC GSK-3β磷酸化在一定范围内呈浓度依赖性和时间依赖性（P＜0.05）,但总GSK-3β水平不变（P＞0.05）。20 mmol/L LiCl干预HPMC 24 h后,α-SMA表达显著增高（P＜0.05）,E-cadherin表达显著下调（P＜0.05）。间接免疫荧光结果显示20 mmol/L LiCl作用24 h后α-SMA表达显著增高（P＜0.05）。结论：GSK-3β磷酸化能诱导HPMC发生上皮-间质细胞转分化,为治疗腹膜纤维化提供了新的思路。     

氯化锂对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖、凋亡及Fas、Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:研究氯化锂(LiCl)对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:以40、80、150mmol/L的LiCl作用于U2-OS细胞24、48和72h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;作用48h后,流式细胞术法检测细胞凋亡率,并分析细胞周期;RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、Caspase-3mRNA的表达。结果:随LiCl作用剂量的增加,U2-OS细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率和Fas、Caspase-3mRNA表达量亦增加(F=61157.480,70.828和418.072,P<0.001);细胞周期分析显示细胞被阻滞于S期(P<0.001)。结论:LiCl可能通过促进凋亡基因Fas、Caspase-3的表达,抑制U2-OS细胞增殖并诱导凋亡。     

环孢素A对体外人系膜细胞cyclin E,cyclin D1,p27kip1蛋白表达的影响

目的探讨环孢素A(CsA)对人系膜细胞增殖的抑制作用及细胞周期蛋白D1、E、p27kip1表达影响。方法人系膜细胞常规体外培养,分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的CsA(0.1,1,5μmol/L)干预。药物作用24,48,72 h后MTT比色法测定细胞增殖情况。药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期。药物作用48 h后Western blot法检测细胞中cyc-lin D1、cyclin E、p27kip1蛋白质表达情况。结果 CsA对人系膜细胞具有时间、浓度依赖性抑制作用;且浓度依赖性阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。CsA浓度依赖性下调cyclin D1、cyclin E蛋白,上调p27kip1蛋白的表达(P<0.05)。结论 CsA通过下调cyclin D1、cyclin E蛋白,上调p27kip1蛋白的表达,调节细胞周期调控通路,阻滞细胞于G0/G1期,有效抑制人系膜细胞的增殖。     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。     

低毫安的电化学疗法对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期及c-myc和cyclin E蛋白表达的影响

目的探讨低毫安(10 m1A)的电化学治疗对体外人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期分布及c-myc和cyclin E表达的影响。方法电化学治疗后培养6h和24h的细胞用MTT法、流式细胞术、免疫组化法测定细胞抑制率、细胞周期分布及细胞c-myc和cyclin E蛋白的表达。结果与对照组相比,治疗组人乳腺癌MCF-7细胞抑制率均随电量增加依次增高(P<0.05);治疗组随电量的增加处于G0/G1期的比例逐渐增高,而S期细胞比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期变化不明显(P>0.05);治疗组c-myc和cyclin E表达随电量的增加阳性细胞数逐渐减少。电化学治疗后培养24h比6h各组指标变化显著。结论电化学治疗能通过调节人乳腺癌MCF-7细胞c-myc和cyclin E蛋白的表达,促使细胞G0/G1期阻滞,从而抑制细胞生长。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞fractalkine表达及其凋亡的研究

目的探讨高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)fractalkine(FKN)表达与细胞凋亡的可能机制。方法对数生长期的HUVECs,分为正常组(N)、高糖组(HG)、氯化锂(lithium chloride,LiCl)组(LiCl)、高糖+LiCl组(HG+LiCl)。5.5 mmol/L的低糖DMEM培养的HUVECs种板10 h后按以上分组加入10 mmol/L的LiCl预处理2 h,再用33.3 mmol/L的高糖干预48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测β-catenin及p-GSK-3β(Ser9),免疫荧光FITC法检测FKN蛋白水平变化,RT-PCR检测GSK-3β和FKN mRNA水平变化。结果①与正常组比较,高糖诱导的HUVECs凋亡率明显增加(P<0.05)。与高糖组比较,LiCl可明显降低高糖环境下HUVECs的凋亡率(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05)。②与正常组比较,高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);GSK-3βmRNA水平及FKN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)。③与高糖组比较,LiCl+高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达升高(P<0.05),GSK-3βmRNA水平(P<0.05)及FKN蛋白和mRNA(P<0.05)水平降低。结论高糖诱导的HUVECs凋亡可能与Wnt信号通路抑制和抑制FKN表达上调有关。     

Effect of Cigarette Smoke Extract on the Proliferation of Human Airway Epithelial Cells and Expression and Activation of FAK

The effect of cigarette smoke extract (CSE) on the proliferation of human airway epithelial cells and the possible mechanism was studied. After airway epithelial cells were treated with different concentrations of CSE for 24 h, the cell proliferation was measured by MTT and the distribution of different cell cycles by flow cytometry. The FAK expression level was detected by Western blot and the degree of tyrosine phosphorylation by immunoprecipitation. The results showed that CSE could inhibit the proliferation of human airway epithelial cells, arrest the epithelial cells in G1 phase of cell cycle, dramatically decrease the number of epithelial cells in S and G2 phases； Meanwhile CSE could decrease the expression level of FAK and the degree of its tyrosine phosphorylation. The above effects of CSE were concentration-dependent. The expression of FAK and the degree of its phosphorylation was positively correlated to the increased number of epithelial cells in G1 phase, and negatively to the number of epithelial cells in S and G2 phases. It was concluded that the mechanism by which CSE could inhibit the proliferation of human epithelial cells was contributed to the increased expression and activation of FAK.     

敌百虫对人成神经瘤细胞SH-SY5Y增殖与分化的影响

目的观察敌百虫（trichlorfon,TCL）的对神经细胞增殖与分化的影响。方法用敌百虫（0～500μmol／L）染毒SH-SY5Y细胞,分别作用24h和48h,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期;采用维甲酸（ATRA）诱导SH-SY5Y细胞分化,并用100μmol／L敌百虫染毒处理,观察细胞神经突起长出的长度及其与细胞体的大小之比,来判定神经元分化程度。结果敌百虫对细胞的增殖有显著的抑制作用,且显现剂量依赖相关和时间依赖相关。染毒24h和48h测得TCL对SH—SY5Y细胞的半数抑制浓度（IC50）分别是225μmol／L和177μmol／L。细胞诱导分化实验结果显示,对照细胞突起较长较多,而敌百虫处理神经细胞的突起则较少较短,提示敌百虫具有抑制神经突起生长的作用。流式细胞术分析表明,100μmol／L和200μmol／L敌百虫染毒24h或48h对SH-SY5Y细胞的运行周期产生显著影响,使细胞周期阻滞在G2／M期,但并没有使细胞产生凋亡。结论敌百虫可抑制神经突起的生长;敌百虫对SH—SY5Y细胞的增殖抑制与其对细胞周期的影响（阻滞细胞周期于G2／M期）有关。     

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的：观察庆大霉素对体外培养的肾小管上支细胞凋亡的诱导作用；研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cyclinE、CDK2和p27^kipl蛋白表达的改变，并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法：0．2～3．2mg／ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带，流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96h时细胞内cyclinE、CDK2和p27^Kipl的蛋白表达。结果：庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用，庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性：庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。随着庆大霉素浓度的增加，细胞内cyclinE和CDK2蛋白表达逐渐下调．而p27^Kipl蛋白表达则逐渐上调。结论：厌大霉素诱导的LLC—PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK2表达下调以及p27^Kipl表达上调有关。     

甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

目的 探究甘草查尔酮A（LCA）对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法 通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC50）;不同浓度LCA（0、10、20及40 μmol/L）处理H226细胞48 h,通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响,通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1,以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响,并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况;选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型,随机分为两组（对照组和LCA处理组）,腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量,从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,与空白组比较,随着LCA浓度的增加,细胞存活率明显降低,48 h的IC50为28.3 μmol/L;流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期（P<0.05）,Western blot的结果显示,LCA处理后,CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低（P<0.05）;PI3K和Akt的表达无明显变化,但是它们的磷酸化水平（p-PI3K和p-Akt的表达）显著降低（P<0.05）;裸鼠荷瘤实验表明,LCA可使肿瘤体积和质量明显减小（P<0.05）。结论 LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞,其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。     

紫草素抑制人气道平滑肌细胞的增殖

目的 研究紫草素对体外培养的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响.方法 组织块贴壁法原代培养传至4～8代的HASMCs,经40、20、10、5、2、1、0.5 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用12、24、48 h后,应用MTS法测定紫草素对HASMCs的细胞增殖的影响;经40、20、10、5 ?mol/L及0 ?mol／L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用流式细胞术分析紫草素对细胞周期的影响;经20 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用SP免疫细胞化学法检测紫草素对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,20 ?mol/L和40 ?mol/L的紫草素均可有效抑制细胞增殖(均P<0.05),以48 h最为显著(抑制率分别为30.1％与42.9％),但两者之间无显著性差异(P0.05).(2)20 ?mol/L及40 ?mol/L的紫草素均可显著提高G0/G1期比例(P<0.05),阻滞细胞周期进程,但两者之间无显著性差异(P0.05).(3)20 ?mol/L的紫草素可显著下调PCNA的表达(P<0.01).结论 紫草素对HASMCs具有明确的抗增殖作用.     

双丁酰环腺苷酸抑制甲状腺癌细胞株 FTC-133增殖

目的：探讨双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)对甲状腺癌细胞株 FTC-133增殖的影响。方法将 FTC-133细胞进行常规培养,分为对照组,处理组(dbcAMP 0.5、1.0、2.0 mmol/L)共4组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、生长曲线法观察0.5、1.0、2.0 mmol/L dbcAMP 经24 h、48 h 对甲状腺癌细胞株 FTC-133细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,使用反转录定量 PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹实验(Western Blotting)方法检测 Raf1的 mRNA 和蛋白表达水平。结果与对照组比较,不同浓度 dbcAMP 和时间处理的 FTC-133细胞增殖均受抑制,并表现出时间-剂量依赖性;S 期细胞显著减少,G2/M期细胞显著增加;Raf1 mRNA 和蛋白水平明显减低。结论dbcAMP 显著降低甲状腺癌细胞株 FTC-133的增殖能力,促进凋亡,可能与激活 ERK MAPK 通路有关。     

基于Wnt/β-链蛋白信号通路观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响

目的 观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响,并结合Wnt/β-链蛋白信号通路初步探讨高糖对骨髓基质细胞增殖的影响。方法 从Wistar大鼠下颌骨中分离培养骨髓基质细胞,分别给予不同糖浓度(5.5和16.5 mmol/L)干预,采用噻唑蓝法观察骨髓基质细胞1、3、5、7 d时的增殖情况,采用流式细胞仪对高糖干预5 d细胞进行细胞周期检测,Western免疫印迹检测5 d时β-链蛋白和细胞周期蛋白D1的表达,实时定量多聚酶链反应检测淋巴增强因子-1和细胞周期蛋白D1的mRNA表达。结果 噻唑蓝法检测结果显示,1 d骨髓基质细胞在两种糖浓度中的光密度值差异无统计学意义(P=0.700),3、5、7 d时16.5 mmol/L组的细胞光密度值显著低于5.5 mmol/L组(P=0.006,P=0.002,P=0.003)。5 d的细胞周期结果显示,与5.5 mmol/L组细胞相比,16.5 mmol/L组细胞可以抑制细胞从G1期向S期转化,16.5 mmol/L组细胞的增殖指数显著低于5.5 mmol/L组(P=0.014)。与5.5 mmol/L组相比,16.5 mmol/L组细胞明显抑制β-链蛋白的表达,同时Wnt/β-链蛋白通路中淋巴增强因子-1 mRNA及下游细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制。结论 高糖环境可以通过抑制Wnt/β-链蛋白信号通路中关键因子β-链蛋白、淋巴增强因子-1及下游与细胞增殖相关靶基因细胞周期蛋白D1的表达,进而抑制骨髓基质细胞的增殖。     

维甲酸对大鼠气道上皮细胞增殖影响实验研究

目的 探讨维甲酸对体外培养大鼠气道上皮细胞增殖的影响.方法 原代无血清培养法获取大鼠气道上皮细胞,细胞角蛋白CK19免疫组化染色进行鉴定,不同浓度维甲酸（10^-9～10^-4g/L）作用于气道上皮细胞,MTT法观察维甲酸对细胞增殖的影响,不同组进行PCNA免疫组化染色计阳性细胞数.结果 原代培养气道上皮细胞CK19免疫组化染色阳性,维甲酸作用后细胞增殖率高于对照组,其中10^-7g/L浓度组作用最强,PCNA阳性细胞数最高.结论 低浓度维甲酸可促进体外培养气道上皮细胞增殖.     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导人晶状体上皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞

目的 探讨姜黄素对人晶状体上皮细胞株SRA01/04（HLEC-SRA01/04）细胞周期和凋亡的影响及其相关分子机制,为姜黄素治疗和预防后发性白内障提供理论依据。方法 体外培养HLEC-SRA01/04细胞,加入终浓度分别为0 μmol/L（对照组）以 及20、40和60 μmol/L的姜黄素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测HLEC-SRA01/04细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western blot法检测姜黄素对HLEC-SRA01/04细胞中caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin B1、CDK1、β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果 MTT显示：随着姜黄素的浓度逐渐增加,HLEC-SRA01/04细胞较对照组抑制率逐渐增高（P<0.001）;随着作用时间的延长,各实验组HLEC-SRA01/04细胞增殖抑制率均逐渐增高（P<0.001）;流式细胞仪结果显示：各组中HLEC-SRA01/04细胞凋亡率和细胞G2/M期比例随姜黄素浓度增加逐渐增高,而线粒体膜电位随着姜黄素浓度增加逐渐下降（P<0.001）。Western blot 实验显示：随着姜黄素浓度的增加,HLEC- SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9和Bax的表达量逐渐增高,Bcl-2、Cyclin B1、CDK1和β-catenin的表达量逐渐降低,同时Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白Cyclin D1和c-myc表达量也逐渐降低。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HLEC-SRA01/04细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而诱导其凋亡。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究三羟异黄酮(genistein,Gen)对乳腺癌细胞株MCF鄄7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT比色法观察Gen对MCF鄄7细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,Westernblot分别检测周期素B(cyclinB)、周期素E(cyclinE)蛋白表达情况。结果:Gen(≥10μmol/L)对MCF鄄7细胞生长有显著抑制作用,细胞生长阻滞于G2/M期,cyclinB蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系;但对cyclinE蛋白表达无影响。结论:Gen抑制MCF鄄7细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其导致cyclinB蛋白积累有关,与cyclinE蛋白表达无明显关系。     

氯化锂调节趋化因子Fractalkine表达抑制缺氧复氧诱导的血管内皮细胞损伤

目的:观察缺氧复氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(Human umbillcal vein endothelial cells,HUVECs)损伤和趋化因子(Fractalkine,FKN)表达变化及氯化锂(Lithium chloride,LiCl)的干预效应。方法:体外培养HUVECs并随机分为对照组、缺氧复氧组和LiCl 5、10 mmol/L组。MTT法测定HUVECs的存活率,流式细胞术检测HUVECs凋亡率,免疫细胞荧光技术检测HUVECs的FKN蛋白表达,RT-PCR技术检测HUVECs的FKN mRNA表达。结果:与对照组比较,缺氧复氧组HUVECs存活率显著降低但凋亡率显著增高(P<0.01)且FKN mRNA和蛋白质表达也显著增高(P<0.01);与缺氧复氧组比较,LiCl 5、10 mmol/L组HUVECs存活率显著增高但凋亡率显著降低(P<0.01)且FKNmRNA和蛋白质表达也明显降低(P<0.05)。结论:缺氧复氧上调FKN表达诱导HUVECs损伤(存活率降低、凋亡率增加);LiCl预处理能够下调FKN表达,显著减轻缺氧复氧导致的HUVECs损伤。     

过氧化氢诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

目的研究过氧化氢(H2O2)对正常人支气管上皮细胞(HBE)HMGB1表达、移位和释放的影响。方法四唑盐(MTT)法检测不同浓度H2O2对支气管上皮细胞活力的影响;蛋白免疫印迹方法分别检测H2O2刺激HBE胞核,胞浆以及细胞培养上清中HMGB1浓度。免疫荧光观察HBE的HMGB1的定位和H2O2刺激后对HBE HMGB1的移位的影响。结果 125μmmol/L刺激对HBE活力无影响,而250μmmol/L会导致细胞活力下降(与对照组组比较,P<0.05),但是不引起细胞死亡,400μmmol/L(与对照组比较,P=0.000)导致HBE死亡。在浓度依赖性实验,与对照组比较12.5、125、250μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后培养上清HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中与对照组比较,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12、24 h后细胞上清中的HMGB1显著升高(P<0.05);12.5μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后,HBE胞浆蛋白明显增加,胞核蛋白减少。而免疫荧光检测示HMGB1高丰度分布正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞浆,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12 h,HMGB1明显从HBE胞核向胞浆转位;125μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后观察到HMGB1移位分布到胞膜上。结论 H2O2可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达、转位和释放,提示HMGB1可能参与了哮喘,COPD等慢性炎症疾病气道的氧化应激过程。