新型冠状病毒核酸检测质量控制物质研究及应用进展

新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒引起的呼吸道传染性疾病,其大流行是一场严重的公共卫生事件。新冠病毒核酸检测是新冠病毒感染、新冠肺炎确诊的依据,因而其检测质量在疫情防控中尤为重要。使用新冠病毒核酸检测质量控制物质以监控检测全过程,是保证检测结果准确可靠的有效手段。该文对常见新冠病毒质量控制物质的类型、特点及应用进行论述,以期为新冠病毒质量控制物质的合理选用提供参考借鉴。     

新型冠状病毒核酸快速检测临床规范化应用专家共识

在新型冠状病毒肺炎防控工作中,为缩短检测时间,减少实验过程中所需的辅助仪器设备、降低对实验室空间大小的要求,临床上开始出现向即时检测（POCT）发展的新型冠状病毒核酸检测方法。由于这些方法尚未达到理想的POCT要求,本共识暂时以行业内普遍使用的“快速检测”来描述。为规范新型冠状病毒核酸快速检测的临床应用,中国医学装备协...     

新型冠状病毒核酸检测的主要影响因素及控制措施

新型冠状病毒肺炎于2020年2月11日被世界卫生组织(WHO)命名为COVID-19(coronavirus disease 19)。自COVID-19疫情暴发以来,核酸检测作为病毒感染的直接证据在疾病的诊断、治疗和防控中起到关键作用。但因部分病例确诊前多次核酸检测均呈阴性,核酸检测结果的可靠性受到临床广泛质疑。这种“假阴性”结果除与检测方法的检出能力有关外,还与标本的采集、保存、运输以及疾病的进程和病毒特点密切相关。该文结合本实验室在核酸检测实践中遇到的一些实际问题,对影响核酸检测的分析前、中、后等多种因素进行分析和探讨,并提出提高核酸检测质量的具体措施。     

西安地区新型冠状病毒肺炎患者康复期2019-nCoV 核酸检测复阳结果分析

目的 研究西安地区新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019,COVID-19）患者康复期新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测复阳情况。方法 对2021 年12 月~2022 年2 月在西安秦皇医院的873 例COVID-19 患者康复期采集口咽和鼻咽拭子,应用实时荧光定量PCR 进行2019-nCoV 核酸检测,核酸复阳结果按性别、年龄、标本类型、靶标基因和Ct 值与转阴时间分别进行分组比较。结果 核酸检测复阳患者共201 例,阳性率为23.02%。不同性别（21.58%vs 24.81%）和年龄组（24.70 % vs 25.90%）核酸复阳率之间差异无统计学意义（χ2=1.272,3.223,均P>0.05）。双拭子（鼻咽+ 口咽）联合检测复阳率明显高于单鼻咽或单口咽拭子（23.02% vs 19.01%,5.84%）,且鼻咽拭子核酸复阳率明显高于口咽拭子,差异均有统计学意义（χ2=8.699,121.5,69.59 ,均P<0.05）。双靶标基因阳性标本数明显高于单靶标N 或ORF1ab 基因(55.30% vs 28.57%,16.13%),且单靶标N 基因阳性标本数明显高于ORF1ab 基因,差异均有统计学意义（χ2=31.83,72.51,9.679,均P<0.05）。不同区间Ct 值组间核酸转阴时间差异有统计学意义（F=16.66,P<0.001）,且转阴时间与复阳时的Ct 值呈显著负相关性（r= -0.539,P<0.05）。结论 COVID-19 患者康复期核酸复阳率仍较高,机制和原因尚不明确,仍需加强隔离管理和健康监测。     

1844例新型冠状病毒核酸检测及生物安全防护实践

目的通过新型冠状病毒核酸检测实践,探讨实时荧光定量RT-PCR检测新型冠状病毒的质量管理和生物安全防护。方法采集2020年1月30日-2020年2月28日就诊于深圳中医院发热门诊的患者(包括发热患者、湖北旅居者以及密切接触者、外地返深人员)的咽拭子、痰液、肺泡灌洗液、肛拭子等样本,共1844例,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测新型冠状病毒开放读码框1ab(ORF1ab)、核衣壳蛋白(N)基因。结果 1844例样本中,检测出阳性病例2例。结论严格的质量控制和有效的生物安全防护保证了新冠核酸检测安全高效的开展,及时准确的检测结果为新冠肺炎的早发现、早诊断、早治疗提供精准依据。     

新型冠状病毒核酸检测分析

2020年,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在国内和其他国家暴发流行。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法以其高灵敏度与强特异性,被认为是COVID-19的确诊方法。然而,SARS-CoV-2核酸检测对于阳性患者的阳性率仅有30%~50%,临床较多的疑似病例需多次核酸检测之后才得到阳性结果,使SARS-CoV-2核酸检测阳性作为确诊标准备受质疑。本文结合相关文献及在SARS-CoV-2核酸检测中的工作经验,从病原学、标本采集、核酸提取过程、试剂盒等各个方面对SARS-CoV-2核酸检测方法的影响因素进行深入探讨,对SARS-CoV-2检测出现假阴性或假阳性的原因进行分析与归纳总结,为检测的准确性提供依据,也旨在为基层医院的核酸检测工作提供一定的帮助。     

新型冠状病毒核酸临床检测要点及经验

2019年12月以来,新型冠状病毒感染引起的肺炎病例数快速攀升。因患者体内病毒核酸的存在是目前唯一的确诊依据,而目前临床上普遍反映核酸检测阳性率不够理想,故对病毒核酸检测的实验室条件、检验人员及检测过程中各个环节都有较高要求。本文着重阐述了新型冠状病毒核酸检测各个环节中的检测要点、最新的行业规范及共识内容,同时探讨临床检测中的疑难问题,以期为新型冠状病毒所致疾病的准确诊断提供理论依据。     

新型冠状病毒核酸和抗体联合检测的应用价值

目的探讨新型冠状病毒核酸检测和血清抗体检测对新型冠状病毒肺炎诊断的临床应用价值。方法收集26例新型冠状病毒肺炎患者确诊后不同时间段(第4、7、15、30、45天)血液和咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR技术检测病毒核酸,胶体金免疫层析法检测血清抗体(IgM和IgG)。结果 26例确诊患者病毒核酸检测转阴时间为(16.3±11.6)d,转阴当日IgM和IgG检出率分别65.38%和53.85%,IgM抗体在确诊后15 d检出率达到65.38%,而IgG抗体为46.15%,IgM抗体最早可在确诊4 d内检出,并在15 d左右达到峰值,而IgG抗体需7 d左右才可检出,并随着时间延长检出率持续上升。确诊患者经过治疗,病毒ORF1ab基因和N基因表达量在一周内出现明显下降,至观察截止时间点(45 d)仍有1例ORF1ab基因阳性和5例N基因阳性。结论新型冠状病毒感染早期,核酸检测或联合IgM抗体检测检出率高,感染中后期IgM和IgG抗体检测联合核酸检测可区别既往感染和无症状感染者。     

不同检测系统对新型冠状病毒核酸的检测结果分析

目的评价不同检测系统对新型冠状病毒(2019-n Co V)核酸的检测能力差异,为选择2019-n Co V核酸检测试剂提供指导。方法用本实验室在用的提取试剂、扩增试剂及扩增仪组合成8个检测系统,分别对国家卫生健康委临床检验中心2019-n Co V室间质评发放的12个样本进行检测。结果纳入统计指标的10个样本中,有5个2019-n Co V阴性样本,8个检测系统对5份阴性样本均为未检出,与预期结果相符,另5份2019-n Co V阳性样本中,8个检测系统均未检出202010(128 copies/m L),均检测出202004、202008、202011。对202002(640 copies/m L)弱阳性样本,只有B及D 2个检测系统检出,其余均未检出。B及D检测系统扩增试剂均为e扩增试剂,检测的符合率总体优于f扩增试剂。N区的阳性率高于ORF区,样本2019-n Co V拷贝数越低,这一现象越显著。A-D检测系统检测到的ORF1ab基因的阳性率高于E-H检测系统,A-D检测系统均使用的是b快速提取试剂,而E-H检测系统使用的是a提取试剂,提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。结论...     

新型冠状病毒核酸混采对检测结果的影响

目的:评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法:取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中,充分混匀后1∶2、1∶10稀释,加入灭活2019-nCoV病毒培养液,以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏...     

新型冠状病毒核酸检测循环阈值变化规律浅析

目的初步探讨新型冠状病毒感染者呼吸道标本核酸扩增循环阈值(cycle threshold,Ct值)变化规律。方法筛选2020年1月21日至2020年3月2日间安徽省某定点医院收治的45例新型冠状病毒感染确诊患者,用实时荧光逆转录聚合酶链反应技术对患者的痰液与咽拭子混合液进行检测,观察Ct值与发病天数、性别、年龄、疾病分型的变化规律。结果随着发病天数的增加,ORF1ab基因、N基因及E基因Ct值均不断升高,E基因首先消失,其次是ORF1ab基因,最后是N基因。出现症状后1~6 d男性与女性核酸Ct值均为最低值,差异无统计学意义(P>0.05);7~12 d Ct值逐渐升高,男性低于女性Ct值,两者差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段间Ct值差异无统计学意义(P>0.05)。不同病情分型间Ct值差异无统计学意义(P>0.05)。结论Ct值与患者出现症状的天数、性别有关,与年龄、疾病分型无关。     

新型冠状病毒血清特异性抗体检测技术应用探讨

2019年12月在武汉暴发的新型冠状病毒肺炎疫情发展迅速,早期诊断是疫情防控的关键。2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)核酸检测阳性虽是疑似患者确诊的“金标准”,但其操作繁琐、耗时长,检测结果易受标本质量、病毒感染部位及表达量等众多因素影响,因而核酸单项检测不能满足疫情期间对疑似病例快速筛查的要求。血清特异性抗体是诊断病毒感染的另一关键证据,抗体协同核酸检测可用于辅助诊断和快速筛查。本文从抗体产生特点、检测方法及其灵敏度/特异度、假阴性/假阳性检测结果分析、核酸与抗体联合检测等方面进行讨论,以期推动2019-nCoV血清抗体检测技术的建立与应用。     

医学检验实验室在区域新型冠状病毒核酸检测中的质量监管

目的 ：保证本市区域新型冠状病毒（新冠）核酸检测医学检验实验室的检测质量。方法 ：自2022年3月～5月,通过月度检查、蹲点督查、应急督查、盲样调查、留样再测等方法 ,加强对本市新冠病毒核酸检测的质量监管。结果：区域新冠核酸检测医学检验实验室在人员资质、业务培训、室内质量控制、结果判断、复检流程、报告上传、清洁消毒和医疗废物（医废）处理等方面存在不合格情况。开展新冠核酸检测实验室从3月18日疫情初期的29个,逐渐扩展到5月16日的98个,但不合格实验室数未明显增多。本市医学检验实验室盲样调查合格率为96.6%～100.0%,实验室留样再测结果与留样检测机构结果一致率为98.3%～100.0%。结论 ：本市区域新冠病毒核酸检测质量可控,没有发现系统性质量问题。多种措施并举的质量监管模式值得在区域新冠核酸检测质量监管中推广应用。     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。     

基于大规模人群新型冠状病毒核酸检测的经验介绍

摘要：根据国家新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情防治工作需要，为全力支援新疆新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测工作，2020年7月17日江苏省紧急组建了第一批省核酸检测医疗队驰援新疆。该文总结第一批核酸检测队在新疆2019-nCoV核酸检测工作的经验，为未来可能出现的COVID-19或其他突发公共卫生事件的大规模人群筛查工作提供参考。     

新型冠状病毒肺炎核酸检测中的假阴性分析及对策

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的疫情引发了全世界的关注。早期诊断对COVID-19的治疗、患者预后尤为关键。临床检验中发现早期的COVID-19患者核酸检测多次呈假阴性,特别是不同时间多次阴性结果后转为阳性,给临床诊断和疾病控制带来极大困扰。该文立足于疫情的早日防控,从临床、检验的不同视角,从标本采集、检测方法、产品稳定性等多方面剖析产生假阴性的可能原因,并且结合临床实践和检测技术,从整合特异性实验室指标,规范标本采集方式和过程,严格检测试剂的监管和审批等方面提出行之有效的方案,旨在为切实降低检测假阴性或假阳性率提供临床参考,为COVID-19临床准确诊断及疫情防控提供有力支撑。     

新型冠状病毒核酸检测高循环阈值情况分析

目的探讨新型冠状病毒核酸检测出现高循环阈值(Ct值)情况的原因。方法用实时荧光RT-PCR法检测疑似新型冠状病毒肺炎患者鼻咽拭子、肛拭子样本新型冠状病毒核酸,回顾性分析Ct值处于33~38的高Ct值样本在同一患者重复采样检测、不同品牌基因扩增仪检测及不同实验室相同型号仪器检测情况下结果的一致性。结果8例单靶位高Ct值阳性患者次日重复采样检测结果双靶标均为阴性。7例高Ct值样本有6例同一样本核酸在LC480及ABI 75002台扩增仪上检测结果不一致,包括ORF1ab基因检测结果不一致4例,N基因不一致4例,其中ORF1ab基因和N基因均不一致2例。5例高Ct值样本不同实验室相同基因扩增仪结果均不一致。结论该病毒核酸检测高Ct值时结果重复性较差,需要其他检测方法同时进行补充检测。     

一种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的　评估一种国产新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒是否满足临床SARS-CoV-2 核酸检测要求。 方法　采用15 例SARS-CoV-2 核酸阳性和15 例SARS-CoV-2 核酸阴性的临床样本,1 支SARS-CoV-2 RNA 干粉标准 品,5 支阳性定值参考品和5 支阴性定值参考品,对该试剂盒检测SARS-CoV-2 阴性和阳性符合率、精密度、检出限和 交叉反应进行验证。结果　20 例阴性和20 例阳性样本的N 基因和ORF1ab 基因阴阳符合率均为100%。2 例阳性样本 ORF1ab 基因重复性CV 为0.41%~0.56%,优于N 基因重复性,N 基因和ORF1ab 基因重复性、实验室总不精密度CV 均＜ 5%。检出限重复20 次的检出率为100%,SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体、与SARS-CoV-2 同种属病毒（人副 流感病毒1 型、鼻病毒、MERS,SARS,甲型流感病毒、乙型流感病毒、冠状病毒HKU1,NL63,229E 和OC43）之间不 产生交叉反应。 结论　该试剂盒阴阳性符合率一致,重复性好。SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体,与SARS-CoV-2 同 种属病毒不会产生交叉反应,适用于临床实验室和检测机构进行SARS-CoV-2 核酸筛查。     

两种RT-PCR 检测SARS-CoV-2 核酸试剂盒实验室应用评价

目的　应用两个厂家生产的试剂盒平行检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的肺炎（COVID-19）患者样本, 对其检测效果进行实验室应用评价。方法　A,B 两试剂盒共同靶基因为ORF1ab 和N,B 试剂盒增加靶基因E;两试 剂盒同为磁珠核酸提取,RT-PCR 扩增法。结果　298 份痰液、咽拭子、肛拭子和尿液标本中,两种试剂盒共同确认阳 性结果120 份,阴性结果178 份。其检测分别表达为:A 试剂盒ORF1ab 阳性120 份,N 阳性120 份,阴性178 份,内 标（IC）297 份,质控合格全覆盖;B 试剂盒ORF1ab 阳性120 份,N 阳性118 份,E 阳性120 份,阴性178 份,内标（IC） 298 份,质控合格全覆盖;阳性结果的Ct 值有限配对的t 检验,均P ＞ 0.05（ORF1ab:n=120,t=1.839,P=0.069;N:n=118, t=1.881,P=0.063）, 差异无统计学意义。结论　两种试剂盒表达的Ct 值趋同性较理想,标本的阳性表达上符合指南规定, 结果一致。A 试剂盒有内标（IC）1 份未能表达,不可忽视;B 试剂盒N 基因有2 份缺项需找原因克服,而具备的E 基 因提高了SARS-CoV-2 核酸检测的可控性。