柱前衍生化RP-HPLC测定白芷中氨基酸含量

目的建立柱前衍生RP-HPLC法测定白芷中游离氨基酸含量的方法,并测定不同产地的白芷样品中游离氨基酸含量。方法样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,经与白芷中氨基酸柱前衍生,并以高效液相色谱法测定其含量,色谱条件采用Waters Symmetry RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相以[50mmol/L乙酸钠缓冲液(以冰醋酸调至p H6.5)](A)-[乙腈-甲醇-水(60:20:20)](B)进行梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 m L/min,检测波长254nm。结果 17种氨基酸均能达到基线分离,17种氨基酸的平均回收率在95.48%~104.30%之间,RSD在3.2%~4.9%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏,准确,重现性和稳定性良好,适用于对白芷中的氨基酸含量进行研究,为白芷药材的质量控制和评价提供了科学依据,不同产地的白芷样品中氨基酸的含量存在差异,必需氨基酸的比例也存在差异。     

HPLC法同时测定不同厂家珍珠明目滴眼液中17种氨基酸的含量

目的建立HPLC法同时测定珍珠明目滴眼液中17种氨基酸的含量,比较9个不同生产厂家的19批珍珠明目滴眼液中17种氨基酸的含量差异。方法以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂,对样品进行衍生处理后,采用HPLC法测定。色谱柱为Venusil-AA氨基酸分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为0.1 mo L·L~(-1)醋酸钠缓冲液(pH 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱;流速:1.0 mL·min~(-1);检测波长:254 nm;柱温:38℃。结果 17种氨基酸质量浓度在相应的范围内呈良好的线性关系(0.993 0);17种氨基酸平均回收率在90.3%~108.4%之间,RSD在0.30%~3.31%之间。结论不同厂家的珍珠明目滴眼液中游离氨基酸含量存在较大差异。     

柱前衍生RP-HPLC法测定黄芩中氨基酸含量

目的采用柱前衍生RP-HPLC法对黄芩中游离及总氨基酸进行测定。方法以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱为Ultimate Amino Acid氨基酸分析专用柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A为乙腈-水(80∶20,V/V),B为三水合醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈(93∶7,V/V),梯度洗脱;检测波长为254 nm。结果 21种氨基酸在0.002 5~2.500 0 mmol/L内呈良好的线性关系(R20.999 0)。21种游离氨基酸平均回收率在93.72%~105.03%之间,RSD在0.81%~3.15%之间(n=6);总氨基酸平均回收率在95.22%~102.04%之间,RSD在0.47%~2.44%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合黄芩中氨基酸含量测定。     

不同产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱及含量测定研究

目的建立12个产地锁阳水溶性部位的HPLC指纹图谱、3种成分同时测定及主成分分析(PCA)评价方法。方法采集5个省(区)12个市(区/州/旗)的95批锁阳,提取水溶性部位。采用WondaSil C18-WR色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液(9∶91)为流动相,流速0.8 mL/min,柱温30℃,检测波长258 nm,进样量10μL,建立HPLC指纹图谱及没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量测定方法。对12个产地锁阳水溶性部位的指纹图谱进行相似度分析,以指纹图谱共有峰峰面积为变量建立PCA模型,进行质量评价与产区鉴别,采用载荷分析寻找不同产区样品共有峰差异。结果 12个产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱的主要色谱峰一致,共指认出16个共有峰,除阿拉善左旗、阿拉善右旗、和田样品外,其余产地样品指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9。没食子酸、原儿茶酸、儿茶素分别在0.022～0.330、0.002～0.030、0.080～1.200μg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.999 8、0.999 3、0.999 4,平均加样回收率分别为100.54%、99.82%、99.62%,RSD分别为1.71%、1.95%、2.07%。锁阳水溶性部位没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量分别为0.031 3～7.031 6、0.025 5～0.396 3、0.003 5～0.793 4 mg/g。PCA可将锁阳样品按12个市级产区、5个省级产区进行质量评价与归类分析,载荷分析筛选出导致不同产地锁阳水溶性部位整体质量差异的5个化学成分。结论本研究建立的分析方法稳定、准确、可靠,可用于不同产地锁阳的综合质量评价及产区鉴别。     

柱前衍生RP-HPLC测定女贞子中21种氨基酸含量

目的:建立一种采用柱前衍生RP-HPLC检测女贞子中游离氨基酸和水解氨基酸含量的方法。方法:采用HPLC,用异硫氰酸苯酯进行柱前衍生,采用梯度洗脱的方法,检测女贞子中游离氨基酸和水解氨基酸含量。结果:21种氨基酸线性范围在0.002~0.270 mmol·L~(-1),r均≥0.999 5;21种游离氨基酸的平均加样回收率在88.33%~99.88%,RSD为0.6%~2.5%,水解氨基酸的平均加样回收率在90.32%~99.91%,RSD为0.5%~2.5%。结论:该方法适合测定女贞子中游离及水解氨基酸的含量。     

雌、雄地鳖中17种氨基酸的含量测定及指纹图谱研究

目的:建立地鳖17种游离氨基酸的HPLC-FLD指纹图谱,考察雌、雄地鳖中17种氨基酸成分的含量差异。方法:0.1 mol/L盐酸超声提取游离氨基酸,OPA为衍生试剂,Agilent ZOBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A为磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L,pH=7.5),流动相B为甲醇-乙腈-水(45∶45∶10),梯度洗脱,FLD检测器激发波长340 nm,发射波长450 nm,流速1.0 m L/min,柱温30℃。结果:建立了地鳖中游离氨基酸HPLC指纹图谱,标定了21个共有峰,采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"进行相似度评价,15批雌地鳖药材相似度均不低于0.97;定量分析了地鳖中17种氨基酸成分,不同批次地鳖样品中各氨基酸含量差异较大,湖北产较江苏、河北产总游离氨基酸含量高;地鳖雌虫与雄虫总游离氨基酸含量比较,雌虫显著高于雄虫。结论:所建立的地鳖指纹图谱准确、重复性好,可为地鳖质量控制标准的建立提供数据依据;地鳖雌、雄虫中17种氨基酸含量差异较大,为传统以地鳖雌虫入药提供新的科学依据。     

柱前衍生-HPLC法测定不同产地流苏石斛16种游离氨基酸含量及其聚类分析

目的建立同时测定流苏石斛中16种游离氨基酸的方法,并分析不同产地流苏石斛中游离氨基酸含量及聚类分析。方法采用柱前衍生化-HPLC建立流苏石斛中16种游离氨基酸的含量测定方法,通过R语言聚类热图、SPSS聚类分析对不同产地流苏石斛进行聚类分析。结果结果表明,该方法准确可行,专属性强,可同时测定流苏石斛中16种游离氨基酸含量,两种聚类方法结果均表明流苏石斛具有明显的产地聚类特性,以云南产流苏石斛游离氨基酸含量最高。结论柱前衍生化-HPLC法适用于流苏石斛中16种游离氨基酸的同时测定;不同产地流苏石斛游离氨基酸含量差异较大,可为流苏石斛质量评价、优良种质及栽培基地选择等提供依据。     

广东道地药材巴戟天中17种氨基酸含量分析研究

目的:建立RP-HPLC法测定广东道地药材巴戟天中游离氨基酸和结合氨基酸含量的方法,为其资源开发及药效物质研究提供参考。方法:采用超声辅助提取和微波消解法分别制得游离氨基酸和水解氨基酸溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定氨基酸含量。结果:17种氨基酸在试验浓度范围内,线性关系良好,相关系数r≥0.9995,游离氨基酸加样回收率为96.80%～101.63%,RSD%为1.61%～3.71%,水解氨基酸加样回收率为97.97%～104.92%,RSD%为0.62%～3.21%。结论:该测定方法简便快捷、精密度高、重复性好,可用于巴戟天中游离氨基酸和结合氨基酸含量测定。     

柱前衍生RP-HPLC法测定泽泻中氨基酸的含量

目的 分析不同产地泽泻中氨基酸含量及其特征性。方法 采用邻苯二甲醛(OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC)联合柱前衍生RP-HPLC测定泽泻中的17种氨基酸。结果 氨基酸质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，r均在0．99以上。不同产地泽泻中氨基酸含量有一定差别。结论 该方法适宜泽泻药材中氨基酸含量的测定。     

不同品种、产地瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱研究

目的:建立瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱,并比较研究不同品种、产地瓜蒌皮氨基酸含量差异,为科学评价与有效控制瓜蒌皮质量提供依据。方法:采用异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生试剂,色谱柱为Eclipse XDB C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相A:乙腈-水(4∶1),流动相B:醋酸钠-乙腈溶液(93∶7),梯度洗脱;流速:1m L/min;检测波长:254nm;柱温为30℃。结果:建立了瓜蒌皮中19种游离氨基酸类成分液相指纹图谱共有模式,并对不同产地瓜蒌皮药材进行了相似度比较和聚类分析。结论:本方法简便、快速、重复性好,可用于鉴别和区分不同来源的瓜蒌皮药材,为全面控制瓜蒌皮药材的质量提供依据。     

基于傅里叶变换红外光谱及化学计量学方法的不同产地锁阳药材分类鉴别

目的:基于傅里叶变换红外光谱(FTIR)及化学计量学方法实现不同产地锁阳药材的分类鉴别。方法:采集5个省(区) 12个市(区/州/旗)的106批锁阳药材,以透射方式采集样品的FTIR光谱数据并进行光谱预处理,建立锁阳FTIR指纹图谱并进行光谱解析,以相关系数法计算不同产地锁阳的FTIR相似度,求取不同产地锁阳FTIR平均光谱的一阶导数(1D)光谱,以预处理后的1D光谱数据建立基于主成分分析(PCA)的软独立建模分类(SIMCA)鉴别模型,以前6个主成分建立正交偏最小二乘法(OPLS)鉴别模型。结果:不同产地锁阳FTIR指纹图谱的走势及主要吸收峰位基本一致,共指认出了16个共有特征吸收峰;不同产地锁阳FTIR指纹图谱的相似度及1D光谱均有显著、唯一的特征;所建SIMCA模型可实现不同省级产区锁阳的分类鉴别,所建OPLS模型可实现不同市级产区锁阳的精确分类鉴别,12个产地锁阳的分类鉴别体现了明显的地域聚集性特点。结论:基于FTIR及化学计量学方法能够实现不同产地锁阳药材的分类鉴别。     

基于39项指标建立不同产地锁阳综合质量评价的模糊综合评价法模型

目的 建立模糊综合评价法(FCE)模型综合评价不同产地锁阳药材质量,为锁阳的综合质量评价提供新思路.方法 采集甘肃、内蒙古、新疆、青海、宁夏5个省份13个市/地区/州/旗的60批锁阳样品,从指标性成分、氨基酸、无机元素三方面测定39个评价指标的含量,构建锁阳药材的综合质量评价指标体系,将39个评价指标从高到低划分为4个...     

不同产地锁阳近红外光谱鉴别分析

目的研究5个省份锁阳的近红外漫反射光谱(NIRDRS)指纹图谱,为不同产地锁阳的鉴别提供依据。方法采用NIRDRS指纹图谱技术,测定甘肃、新疆、宁夏、内蒙古、青海产锁阳干燥恒重粉末的全成分NIRDRS指纹图谱,结合二阶导数光谱、化学计量学技术,快速鉴别锁阳产地,探究不同产地锁阳的成分。结果在近红外吸收范围内,不同产地锁阳在8408、7327、6846、6360、6013、5785、5189、4698、4386、4317cm-1处均有较强的振动吸收,表明不同产地锁阳主要化学组分构成相似。二阶导数红外光谱结合相似度分析和主成分分析结果表明,不同产地锁阳成分的差异与地理位置有明显对应性。通过主成分分析可以得出比原始图谱更多的成分信息,在4150、4260、4340、4660、4940、5330、5680、5880、5980、6110、6470、7190、8320cm-1处的吸收峰对区分5个产地锁阳贡献较大。结论NIRDRS指纹图谱结合化学模式识别能有效鉴别不同产地锁阳,并为锁阳的质量评价提供依据。     

柱前衍生HPLC测定川明参中18种氨基酸含量

川明参为常用的药食两用药材,含有丰富的氨基酸。而不同产地川明参因地理位置和生态环境不同,所含氨基酸的种类和含量也不同。为此,该研究首先建立了柱前衍生HPLC测定川明参中18种氨基酸含量的方法。其次从四川省川明参的主要产地采集了24份川明参样品,根据地理位置将这些川明参样品的产地分为4个产区,测定不同产区样品中的18种氨基酸,并运用t检验及主成分分析法对这4个产区样品中的氨基酸进行综合分析。结果表明:川明参中18种氨基酸在70 min内分离良好;浓度与峰面积之间的线性关系良好(r≥0.9991,n=6);加样回收率为97.38%~101.3%(n=6),检测限为0.003~0.379μg·mL-1。说明建立的方法能准确测定川明参中多种氨基酸的含量。对川明参中氨基酸t检验的结果表明,组氨酸、胱氨酸、亮氨酸、缬氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸的含量在4个产区之间具有显著性差异(P<0.05),其余氨基酸的含量差异不显著。经主成分分析法,提取前5个因子计算综合得分,4个产区得分由高至低分别为B(0.603,n=10)、C(0.2058,n=3)、A(-0.2827,n=7)、D(-1.167,n=4)产区。B区川明参中氨基酸的总量最高(12.5 mg·g-1)。由此可见,川明参含有多种氨基酸。从氨基酸总量的角度,四川阆中市、苍溪县(B区)为栽培川明参的适宜区。     

柱前衍生RP-HPLC测定菊米中17种氨基酸的含量

目的:探讨菊米中基本氨基酸组成和不同加工方式、不同采收期对氨基酸含量的影响,为菊米的质量和加工利用提供科学依据。方法:采用柱前衍生处理样品,建立HPLC方法,分析菊米中氨基酸组成及含量,评价不同加工处理和不同采收期的菊米质量差异。结果:菊米中含有17种必需和非必需氨基酸,机械加工样品氨基酸含量高于手工加工。通过t检验,除脯氨酸和胱氨酸外,其余15种氨基酸在两种加工方法处理菊米样品中均存在显著差异。通过氨基酸含量的偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),加工方法对天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、缬氨酸和赖氨酸的影响最大(VIP1),两种加工方法区分明显,可以判断加工方法的优劣。不同采收时期的菊米样品氨基酸含量差异不明显(P0.05),说明采收时期对氨基酸成分影响较小。结论:利用柱前衍生-HPLC法分析菊米营养成分氨基酸可作为评价菊米质量评价的方法之一,采用机械加工可保证菊米的质量。     

利用柱前在线衍生-高效液相色谱法测定培植牛黄及天然牛黄中18种氨基酸的含量

目的:建立1种利用高效液相色谱同时测定培植牛黄药材中18种氨基酸含量的方法。方法:以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂。色谱柱为AJS-02氨基酸分析专用柱C18(150 mm×4.6 mm,3μm);流动相A为磷酸氢二钠-四硼酸钠缓冲液(pH 8.2),流动相B为甲醇-乙腈-水(9∶9∶2),梯度洗脱;流速为1.6 mL·min^-1;柱温为50℃;检测波长为338 nm(一级氨基酸)和262 nm(二级氨基酸)。结果:各个氨基酸在线性浓度范围内,峰面积与内标比值与浓度呈良好的线性关系(除Lys外,r>0.9990),平均回收率为90%~110%。结论:本方法准确、灵敏、简便,适用于培植牛黄药材中门冬氨酸等18种氨基酸的含量测定。     

珍珠透骨草HPLC指纹图谱及抗炎活性的谱效关系

目的:建立珍珠透骨草药材的HPLC指纹图谱,并研究其与抗炎活性之间的谱效关系。方法:采用HPLC法建立珍珠透骨草的指纹图谱;在相似度评价基础上,结合聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),对其中的共有峰进行评价;建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型考察珍珠透骨草的抗炎活性,灰色关联度分析(GRA)和偏最小二乘回归分析(PLSR)研究谱效关系。结果:建立了珍珠透骨草的HPLC指纹图谱,确定了其中24个色谱峰为共有峰,相似度除了S2和S5,均在0. 907以上,通过对照品比对法指认了其中4个峰。HCA结果表明,全部样品被聚为四类,与PCA结果基本一致,结合偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)发现,5,6和7号峰为造成珍珠透骨草样品组间差异的3个标志性化合物。不同来源的珍珠透骨草药材均有不同程度的抗炎活性,谱效关系表明,1,4,5,6和10号峰是与抗炎活性关联较大的正相关峰。结论:建立了珍珠透骨草药材的HPLC指纹图谱,并确定1,4,5,6和10号峰为5个与抗炎活性密切相关的成分,为药材质量控制提供更全面的参考。     

柱前衍生化RP-HPLC法分析龟板中氨基酸

目的采用柱前衍生RP-HPLC法对龟板中13种氨基酸进行分析。方法用6mol/L HCl水解提取龟板中总氨基酸,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用外标法,梯度洗脱的方式分析。结果13种氨基酸在40min内均可得到很好的分离,回收率(除甘氨酸外)为91.68%~106.26%,RSD为0.718%~4.386%。结论所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便,且采用普通的C18色谱柱,可广泛用于含有多种氨基酸样品的分析。     

柱前衍生-HPLC法对水蛭的指纹图谱及其16种氨基酸含量测定研究

目的建立18批水蛭药材游离类氨基酸柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的分析方法,并完成对水蛭中16种游离和水解氨基酸成分的同时定量。方法加水超声提取游离氨基酸,以6 mol/L盐酸提取水解氨基酸;基于异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生法,以氨基酸分析专用色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠(pH 6.5)-乙腈(93∶7),B为乙腈-水(4∶1);流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温40℃进行梯度洗脱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012 A版)”、SAS和SIMCA-13.0进行药材的相似度评价和聚类分析。结果建立了18批水蛭药材中游离氨基酸HPLC指纹图谱的共有模式,确定25个共有峰,并指认16种氨基酸成分;18批药材相似度均高于0.960;聚类分析与主成分分析结果一致,均将药材分为3类;含量测定结果表明不同批次的药材中氨基酸含量差异较大,水解氨基酸中含量最高的谷氨酸范围为7.26~18.36 mg/g,游离氨基酸含量最高的丙氨酸范围为1.43~4.39mg/g。结论建立了18批水蛭药材中游离类氨基酸的HPLC指纹图谱,同时测定了18批水蛭药材中游离和水解氨基酸的含量,该方法准确,重复性好,可全面反映水蛭药材的氨基酸信息,为该药材的质量控制提供一定的参考依据。     

OPA-FMOC在线衍生化法测定氨基酸的含量

目的:建立了测定氨基酸的在线衍生化方法.方法:以邻苯二甲醛( OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯为衍生化试剂,对其氨基酸进行在线衍生化色谱分析.色谱柱:Zorbax Eclipse-AAA氨基酸分析柱(4.6 mm ×150 mm,5μm),流动相A为40mmol·L-1 Na2HPO4(用8 mol·L-1氢氧化钠溶液调pH 7.8),流动相B为乙腈-甲醇-水(45:45:10)梯度洗脱,流速2 mL·min -1,检测波长338,262 nm,柱温40℃.结果:氨基酸浓度在一定范围内,此法可以测定27种氨基酸的含量,但不适合清开灵注射液中氨基酸的含量测定.结论:该方法不能对清开灵注射液中氨基酸进行准确定量.