氯喹及超氧化物歧化酶对脑缺血再灌注大鼠自由基和血栓素A2－前列环素代谢的影响

用四血管阻断法造成大鼠全脑缺血，３０ｍｉｎ后再恢复双侧颈总动脉血流３０ｍｉｎ，此时大鼠脑组织过氧化脂质（ＬＰＯ），血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）含量和ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－前列腺素Ｆ１α（ＰＧＦ１α）比值明显增高，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性显著降低，但６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量无明显变化。用氯喹预防或ＳＯＤ治疗，能明显抑制脑缺血再灌注大鼠脑组织内ＬＰＯ含量和ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值增高，阻止脑组织内ＳＯＤ活性降低，但对脑组织ＴＸＢ２和６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量均无明显影响     

再生障碍性贫血患者细胞免疫功能与造血细胞因子的研究

目的：进一步探讨再生障碍性贫血（再障）的免疫发病机制，阐明细胞免疫、造血细胞因子在再障患者中发生变化的基础与临床意义。方法：用单抗试剂盒，采用改良ＡＰＡＡＰ法及酶联免疫试剂盒，采用ＥＬＩＳＡ法对３８例再障患者及２０名正常人外周血Ｔ细胞亚群，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达以及外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定。结果：再障患者外周血ＣＤ４细胞减低、ＣＤ８细胞增高、ＣＤ４／ＣＤ８降低或倒置，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达率增高。再障患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平增高。相关分析发现Ｇ－ＣＳＦ与ＣＤ４细胞及ＣＤ４／ＣＤ８呈正相关，而与ＩＦＮα呈负相关；ＩＬ－６与白细胞数及ＣＤ４细胞呈负相关；ＴＮＦα与ＣＤ８细胞呈正相关而与ＣＤ４／ＣＤ８呈负相关；ＩＬ－８与ＣＤ８细胞及ＨＬＡ－ＤＲ呈正相关。结论：细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在再障发病中起一定的作用。     

家兔脑缺血再灌注损伤机制的研究

用家兔四动脉闭塞法建立急性完全性脑缺血后给予再灌注，观察缺血前后及再灌注后脑组织部分电解质和含水量、脑组织和血液丙二醛（ＭＤＡ）、环核昔酸（ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ）、血栓烷Ｂ＿２（ＴｘＢ＿２）、６－酮－前列腺素Ｆ＿（１α）（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性改变。结果：再灌注后实验组脑组织Ｃａ￣（２＋）、ＭＤＡ、ＴｘＢ＿２和ｃＡＭＰ较对照组升高（Ｐ＜０．０５），ＧＳＨ－Ｐｘ活性、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量降低（Ｐ＜０．０５）；实验组血液中ｃＡＭＰ含量高于对照组（Ｐ＜０．０５）。提示脑组织Ｃａ￣（２＋）过载、氧自由基增多、ｃＡＭＰ／ｃＯＭＰ和ＰＧＩ＿２／ＴＸＡ＿２比值异常在脑缺血再灌注损伤中起着重要的作用。     

肺癌患者血小板功能及血浆D—二聚体的测定

测定７５例肺癌患者血小板α颗粒膜蛋白ＧＭＰ－１４０、血小板粘附试验（ＰＡｄＴ）、血小板聚集试验（ＰＡｇＴ）、血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６－酮－前列腺素Ｆ１α（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）、血浆因子Ⅷ凝血活性（Ⅷ∶Ｃ）、血浆血管性假血友病因子（ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄＦａｃｔｏｒ，ｖＷＦ）、纤维蛋白原（Ｆｇ）、血浆Ｄ－二聚体（Ｄ－Ｄ）的水平。结果除ＰＡｇＴ、６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α外其余均较正常人显著升高（Ｐ＜０．００１）。表明肺癌患者血液处于高凝状态，血小板功能增强，继发性纤溶活性亢进。及时应用抑制促凝物质活性及血小板活性的药物可能有助于肺癌的治疗。     

血小板生成素突变体的克隆和扩增及其融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的研究

目的：通过获得编码血小板生成素（Ｔｐｏ）成熟肽Ｎ端１～１９６个氨基酸的突变体ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＪＭ１０９中的表达，为Ｔｐｏ进一步的结构和功能研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术，将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９载体并测序，然后克隆到表达载体ｐＭＡＬ－ｃ２上。结果：转化重组质粒ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＴｐｏＭ的大肠杆菌经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导４～５小时，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白（ＭＢＰ／ＴｐｏＭ）的分子量约为６．３万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的３７％。结论：经ＰＣＲ方法扩增的Ｔｐｏ基因突变体可在大肠杆菌中高效表达，为Ｔｐｏ突变体的进一步结构和功能研究以及Ｔｐｏ抗体的制备打下了基础。     

丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因重组技术，从湖南地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中克隆了ＨＣＶ包膜蛋白基因片段（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１），经与已知基因型的ＨＣＶ－１，ＨＣＶ－Ｊ，ＨＣＶ－Ｊ６和ＨＣＶ－Ｊ８进行核苷酸序列的比较分析，这些基因片段属１ｂ型ＨＣＶ基因。将克隆基因重组于表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中，在大肠杆菌内进行高效表达，获得了融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析证实这些融合蛋白具有ＨＣＶ的特异抗原活性，提示这些融合蛋白可用于ＨＣＶ感染的临床诊断和发病机理的研究。     

肝硬化患者血浆和腹水中肿瘤坏死因子及白细胞介素6水平研究

对４５例肝硬化患者血浆及腹水中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）及白细胞介素６（ＩＬ－６）水平测定。结果发现合并有自发性细菌性腹膜炎（ＳＢＰ）患者，血浆ＴＮＦ－α、ＩＬ－６水平及腹水中ＴＮＦ－α水平与无ＳＢＰ者相比无明显变化；而腹水ＩＬ－６水平显著升高，经有效治疗后，迅速下降，以１０００ｎｇ／ｍｌ为界，检出ＳＢＰ敏感性为１００％，特异性为８４％。死亡患者最初ＴＮＦ－α及ＩＬ－６水平明显高于存活患者。提示测定该患者腹水ＩＬ－６有助于ＳＢＰ诊断及治疗，结合ＴＮＦ－α可判断患者预后。     

MIP-1α和PF4对造血干/祖细胞作用的对比研究

目的：研究化疗时巨噬细胞炎症蛋白（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－１α，ＭＩＰ－１α）和血小板第４因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆａｃｔｏｒ４，ＰＦ４）对造血干／祖细胞的保护作用。方法：骨髓标本１３份，脐血标本１０份。分４组：Ａ组为ＭＩＰ－１α，Ｂ组为ＰＦ４，Ｃ组ＭＩＰ－１α＋ＰＦ４，Ｄ组空白为对照组，分别检测其细胞周期、细胞活性、集落形成能力等。结果：３个实验组细胞的Ｓ     

白血病和骨髓增生异常综合征患者红细胞酶及同工酶谱的改变

目的：调查白血病和骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者红细胞酶和同工酶谱改变的患病率，并研究其临床意义。方法：采用ＩＣＳＨ介绍的方法及ＰＡＧＥ电泳测定红细胞酶活性及ＰＫ和ＡＤＡ同工酶，采用ＦＰＬＣ系统纯化ＡＤＡ同工酶，分析酶蛋白的生化性质。结果：患病率：在２２９例白血病和ＭＤＳ患者中，Ｇ６ＰＤ缺乏为４３．１％，ＰＫ缺乏为２７．８％。ＭＤＳ患者中的酶缺乏患病率：ＰＫ缺乏为５０．０％，Ｇ６ＰＤ缺乏为４８．０％，ＰＮＰ缺乏为３９．１％；酶过多患病率：ＡＤＡ过多为６９．６％，ＥＮＯＬ过多为４０．０％，ＡＬＤ过多为３０．４％。慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的ＰＫ活性增高，而ＰＫ同工酶型均正常。急性白血病患者采用抗肿瘤抗生素后Ｇ６ＰＤ和６ＰＧＤ活性减低（Ｐ＜０．０５）。ＭＤＳ红细胞酶缺陷显著多于ＡＤＡ２同工酶表达见于ＡＭＬ（Ｍ４和Ｍ５）的单个核细胞及慢性粒－单核细胞白血病（ＣＭＭＬ）的红细胞，但ＡＬＬ不表达（Ｐ＜０．００１）。ＡＤＡ同工酶纯化分析示正常结构。结论：红细胞酶的检测可作为ＣＭＬ的预后参数，作为急性白血病抗肿瘤药物耐药预示指标，有助于ＭＤＳ－ＲＡ和再障、ＣＭＬ与ＣＭＭＬ的鉴别诊断。     

重组人造血干细胞因子基因在人造血干／祖细胞的转移和表达

目的：拓展造血干细胞因子（ＳＣＦ）的研究和基因治疗途径。方法：利用基因重组技术，构建了编码可溶性人ＳＣＦ基因的逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ＳＣＦ，应用脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ基因转移法将重组质粒导入Ψ２和ＰＡ３１７病毒包装细胞，经Ｇ４１８选择性培养基筛选，获得产重组病毒的包装细胞ＰＡ３１７／ＳＣＦ，其病毒效价为（２．４～８．５）×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，继而感染人造血干／祖细胞。应用多聚酶链反应、ＡＰＡＡＰ免疫组化染色和化学发光－直接酶标法检测人ＳＣＦ基因在细胞中转移和表达。结果：逆转录病毒载体介导的ｒｈＳＣＦ基因在人造血干／祖细胞中获得有效转移和表达。结论：为进一步研究ＳＣＦ的生物学特性及开展干细胞移植等提供了一定的途径。     

人粒系巨噬系克隆刺激因子基因导入真核细胞及其表达

目的：获得带糖链、近天然的重组人粒系巨噬系克隆刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ），以期为临床提供更安全、稳定的细胞因子。方法：采用基因重组技术，构建编码ｈＧＭ－ＣＳＦ的稳转载体ｐＭＥｎｅｏ－ｈＧＭ－ＣＳＦ，以酶切和猴肾细胞ＣＯＳ瞬时转染鉴定后，用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法将重组质粒导入中国仓鼠卵细胞（ＣＨＯ）。结果：经Ｇ４１８加压筛选（８００μｇ／ｍｌ～１ｍｇ／ｍｌ），获得可表达ｈＧＭ－ＣＳＦ的细胞株。常规或载体培养ＣＨＯ－ｈＧＭ－ＣＳＦ细胞株上清可直接刺激ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株的增殖，ＭＴＴ测定活性单位可达１×１０７ｕ／Ｌ原液。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析显示ｒｈＧＭ－ＣＳＦ主带在２８ＫＤ位左右，为２Ｎ糖链型。结论：此ＣＨＯ－ｈＧＭ－ＣＳＦ细胞株表达稳定，活性较高，具有开发价值。     

慢性阻塞性肺疾病粒细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子的表达及 …

探讨Ｇ－ＣＳＦ及ＴＮＦα在慢性阻塞性肺疾病发病中的作用和临床意义。方法：应用ＥＬＩＳＡ法测定４３例ＣＯＰＤ急性期患者和３９例ＣＯＰＤ稳定期患者血清Ｇ－ＣＳＦ和ＴＮＦα水平，并同健康正常人对照。结论Ｇ－ＣＳＦ和ＴＮＦα参与ＣＯＰＤ发病，监测血清Ｇ－ＣＳＦ和ＴＮＦα有助于对患者病情判断及疗效观察。     

MIP-1α和血小板第4因子对造血干细胞化疗药物损伤的保护作用

目的 研究巨噬细胞炎性蛋白（ＭＩＰ－１α）、血小板第４因子（ＰＦ４）及二联合对造血干细胞化疗药物损伤的保护效应及其分子机制。方法 将骨髓、脐血单个核细胞及白血病细胞株ＨＬ－６０分别予ＭＩＰ－１α、ＰＦ４、ＭＩＰ－１α＋ＰＦ４、ＰＢＳ预处理４８ｈ,再经柔红霉（ＤＮＲ）孵育２４ｈ后,用锥虫蓝９台盼蓝）拒染法测细胞活性,用流式细胞仪测细胞仪测细胞周期及ＣＤ３４＾＋、ＣＤ３８＾－细胞含量,细胞集落培养、     

脑胶质瘤患者白细胞介素6和血小板衍化生长因子的变化

探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）和血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）在脑胶质瘤发病机理中的作用及临床意义。用酶联免疫吸附试验和生物活性法检测了２７例脑胶质瘤患者手术前后脑脊液（ＣＳＦ）中ＩＬ－６和ＰＤＧＦ的含量，并与对照组比较，结果脑胶质瘤患者ＣＳＦ中ＩＬ－６，ＰＤＧＦ含量（２．０４±０．０２μｇ／Ｌ，（１９１±２１）×１０＾３Ｕ／Ｌ）平均高于对照组（０．５１±０．０１μｇ／Ｌ，（４１±９）×１０＾３Ｕ／     

人CD34抗原基因在痘苗病毒系统中的表达

从ｐＵＣ１８－３４重组质粒双酶切分离得到编码人ＣＤ＿（３４）抗原的全长ｃＤＮＡ片段，将此基因插入痘苗病毒载体ＳｍａＩ位点，构建了重组质粒ＮＳＡ１１７５－３４。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，将质粒ｐＪＳＡ１１７５－３４导入已被野生痘苗病毒感染的ＴＫ￣－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人ＣＤ＿（３４）抗原基因的重组痘苗病毒。经活细胞免疫荧光（ＩＦＡ）和碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）检测表明，重组痘苗病毒能够特异地表达人ＣＤ＿（３４）抗原。人ＣＤ＿（３４）抗原基因的表达，为探讨ＣＤ＿（３４）抗原结构和功能以及研制ＣＤ＿（３４）单克隆抗体奠定了基础。     

神经元特异烯醇化酶的纯化方法

从牛脑制备ＮＳＥ纯品。纯化步骤依次为硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换层析，Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ－ｓ－３００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换层析。所得ＮＳＥ纯品，ＰＡＧＥ呈单一区带，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ亚基分子量４６ＫＤ，ＩＥＦ－ＰＡＧＥ ｐＩ４．７～４．９，同工酶电泳仅显示γγ酶活性区带，酶比活性３０．１Ｕ／ｍｇ蛋白，得率３８．６％。     

热休克蛋白的抗凋亡作用

热休克蛋白（ＨＳＰｓ），尤其是ＨＳＰ７０、ＨＳＰ２７对热休克、氧化应激、电离射线、ＴＮＦ－α等引起的细胞凋亡有保护任用，其作用机制与ＨＳＰｓ抑制应激激活蛋白激酶，抑制凋亡基因Ｐ５３和Ｂａｘ的表达，抵制凋亡信号转导中的蛋白水解酶和抑制氧自由基生成，以及对细胞线粒体功能的保护作用有关。     

大黄对SIRS和MODS患者肿瘤坏死因子α及白介素的影响

目的：探讨大黄粉对全身炎性反应综合征和多器官功能障碍综合征（ＭＯＤＳ）患者肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）,白介素－１（ＩＬ－１）,ＩＬ－６的拮抗作用。方法：４０例虱在综合治疗的基础上经胃管给予大黄粉治疗,治疗前后检测血清ＴＮＦ－α,ＩＬ－１,ＩＬ－６的含量,并与正常对照组４０例结果进行比较。结果;在应激状态下,ＳＩＲＳ和ＭＯＤＳ患者的ＴＮＦα,ＩＬ－１和ＩＬ－６水平均明显高于正常对照组;应用大黄粉     

胃癌病人血清TNF-α和IL-6的水平变化及临床意义探讨

探讨胃癌病人血清ＴＮＦ－α和ＩＬ－６水平的变化及其临床意义。方法：利用ＥＬＩＳＡ法测定３５例胃癌病人血清ＴＮＦ－α和ＩＬ－６水平,并与胃良性肿瘤组和正常对照组相比较。结果：胃癌病人血清ＴＮＦ－α和ＩＬ－６水平明显增高（Ｐ＜０．０１）,并与疾病分期有关（Ｐ＜０．０５）,病灶切除后血清ＴＮＦ－α和ＩＬ－６水平明显降低（Ｐ＜０．０５）。结论：胃癌病人具有细胞免疫功能紊乱,血清中ＴＮＦ－α和ＩＬ－６水平的增高可能和疾病的发生发展有关,测定血清ＴＮＦ－α和ＩＬ－６可作为胃癌病人病情判断和疗效观察的指标之一。     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法