益气养阴方及其拆方对急性髓细胞白血病小鼠骨髓细胞hTERT及其启动子甲基化表达的影响

目的探讨益气养阴方治疗急性髓细胞白血病的可能作用机制。方法 40只NOD-SCID小鼠经60Co照射后,尾静脉注射KG1a细胞1×106个,建立急性髓细胞白血病动物模型后随机分成4组,每组10只。模型组予生理盐水灌胃;扶正组予扶正方浓缩药液(1.08g/ml)灌胃;祛邪组予祛邪方浓缩药液(0.92g/ml)灌胃;全方组予益气养阴方浓缩药液(2g/ml)灌胃。各组均0.2ml/次,每日2次,共28天。采用PCR-ELISA法检测骨髓细胞端粒酶活性;荧光定量PCR法检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)-mRNA及其启动子甲基化的表达。结果扶正组、祛邪组和全方组小鼠骨髓细胞端粒酶活性、hTERT-mRNA和hTERT启动子甲基化的表达较模型组明显降低(P0.05或P0.01),全方组端粒酶活性、hTERT-mRNA和hTERT启动子甲基化的表达低于扶正组与祛邪组(P0.05或P0.01)。结论益气养阴方治疗急性髓细胞白血病的机制可能与降低端粒酶活性、hTERT及其启动子甲基化的表达水平有关。     

益气养阴方及其拆方对急性髓细胞白血病小鼠细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的观察益气养阴方及其拆方对小鼠细胞凋亡率及相关蛋白c-myc、survivin的影响,探讨其作用机制。方法 NOD-SCID小鼠经60Co照射后,尾静脉注射KG1a细胞1×106个造模;随机分为对照组、全方组、扶正组、祛邪组。治疗组给予相应药物灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组化法检测c-myc、survivin蛋白表达。结果与对照组比较,治疗组细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.01);治疗组淋巴结c-myc、survivin蛋白表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。全方组对各指标的影响均优于扶正组和祛邪组(P0.05)。结论益气养阴方通过降低c-myc、survivin蛋白表达,诱导白血病细胞凋亡,起到治疗作用。     

益气养阴方及其拆方对急性髓细胞白血病细胞细胞周期及相关蛋白的调控研究

目的:研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对细胞周期及相关蛋白p21在人急性髓细胞白血病(acutemyeloid leukemia,AML)中表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的作用机制。方法:NOD-SCID小鼠经60Co照射后,尾静脉注射KG1a细胞1×106个,分成4组。对照组予生理盐水,实验组分别予益气养阴方、扶正方、祛邪方中药制剂灌胃。采用流式细胞术法检测细胞周期;免疫组化法检测p21蛋白的表达。结果:流式细胞术法检测细胞凋亡率:益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。免疫组化法检测c-myc、survivin蛋白的表达:对照组与益气养阴组、扶正组、祛邪组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药益气养阴方可升高p21蛋白的表达,诱导白血病细胞停滞在G1期,对AML治疗具有作用。     

附子多糖抗心肌细胞凋亡的Smac/Diablo机制研究

目的:建立体外缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,以模拟在体心肌细胞缺血/再灌注损伤,观察附子多糖(FPS)对H/R后心肌细胞凋亡的影响,并以Smac/Diablo为切入点探讨其作用机制。方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧模型,随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧组(H/R)、附子多糖(0.1、1、10mg/mL)组。MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,荧光定量PCR检测BCL-2 mRNA的表达量,Western blot检测胞浆Smac/Diablo蛋白的表达。结果:与对照组比较,H/R组细胞存活率降低,细胞凋亡率显著增加,BCL-2 mRNA的表达量减少,胞浆中Smac/Diablo的表达增加。与H/R组比较,经附子多糖处理24 h后,附子多糖可呈剂量依赖性增加心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡率,促进BCL-2 mRNA的表达,降低胞浆中Smac/Diablo的表达,在10 mg/mL浓度时保护效应达到峰值。结论:FPS可抑制缺氧复氧后心肌细胞凋亡的发生,作用机制可能与其促进BCL-2 mRNA的表达,保护线粒体,抑制Smac/Diablo的释放,从而阻碍细胞凋亡的线粒体信号转导有关。     

加味乌梅丸诱导胰腺癌sw1990细胞NOD-SCID小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察加味乌梅丸在体内诱导移植性人胰腺癌细胞凋亡的作用。方法将20只荷瘤小鼠分为对照组、用药组各10只。NOD/SCID小鼠皮下移植瘤造模成功后,用药组每日灌胃加味乌梅丸生药0.4 g/0.4 m L,对照组每日给予无菌注射用水0.4 m L。给药期间每5日测量并计算皮下移植瘤体积,绘制移植瘤生长曲线。20 d后处死小鼠,称取瘤质量,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,TUNEL染色标记细胞凋亡,观察细胞形态学改变。结果用药组移植瘤的体积的增长幅度明显小于对照组(P<0.05)。加味乌梅丸对NOD/SCID小鼠移植性人胰腺癌瘤抑瘤率为22%,流式细胞分析用药组的早期凋亡率为(29.6833±0.76)%,与对照组(17.0167±2.75)%相比,明显提高(P<0.01),TUNEL法检测用药组肿瘤细胞凋亡指数(A1)为(59.4±19.3)%,与对照组的(19.2±7.4)%比较明显提高(P<0.01)。结论加味乌梅丸可以通过促进肿瘤细胞的凋亡而发挥抑制肿瘤的作用。     

活血解毒润燥方干预干燥综合征小鼠颌下腺细胞凋亡促进因子Smac表达的机制研究

目的:将干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺细胞凋亡促进因子Smac的表达作为靶点,探究活血解毒润燥方对SS模型小鼠颌下腺组织形态、腺体功能、细胞凋亡的影响及其干预机制。方法:实验选取雌性BALB/c57小鼠为正常对照组,自发性雌性非肥胖型糖尿病(NOD/Ltj)小鼠为SS模型并随机分为模型组、白芍总苷胶囊组和活血解毒润燥方低、中、高剂量组,每组各15只。各组小鼠给药量按照人与动物体表面积比计算等效剂量,正常对照组、模型组小鼠灌胃10 ml/kg蒸馏水,白芍总苷胶囊组(0.234 g/kg)和活血解毒润燥方低剂量组(15.6 g/kg)、中剂量组(31.2 g/kg)、高剂量组(62.4 g/kg)分别灌胃给药,每日1次。药物干预8周后,无菌分离颌下腺,观察各组小鼠颌下腺形态、功能的改变,并分别应用免疫组化法(IHC)、蛋白免疫印迹法(Western blot)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定细胞凋亡促进因子Smac的表达。结果:与正常对照组比较,模型组唾液流量及颌下腺指数均显著降低(P<0.01),颌下腺组织病理学评分显著升高(P<0.01),IHC和Western...     

艾灸血浆对离体人胃黏膜上皮细胞损伤的保护作用及其线粒体细胞凋亡通路机制

目的:探讨艾灸血浆对胃黏膜细胞凋亡的影响,揭示艾灸对胃黏膜细胞的保护作用及其信号转导机制。方法:24名健康人随机等分为艾灸穴位组和艾灸非穴位组,分别艾灸中脘、关元和足三里穴及非穴位对照点各10 d。将人体胃黏膜上皮(GES-1)细胞分为空白组、模型组、艾灸穴位血浆组、艾灸非穴位血浆组,采用含8%乙醇的培养液造成GES-1细胞损伤模型,分别加以预先提取的灸前人体血浆、艾灸穴位和非穴位血浆。流式细胞技术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测细胞内热休克蛋白70(HSP70)、第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活物(Smac)、凋亡诱导因子(AIF)的表达;细胞免疫化学法检测半胱氨酸天冬酸蛋白酶-3、9(Caspase-3、9)的表达。结果:模型组与空白组比较,细胞凋亡率明显增加,HSP70、Smac、AIF、Caspase-3、Caspase-9表达均上调(均P<0.01);艾灸穴位血浆组与模型组比较,凋亡率明显下降(P<0.01),HSP70表达进一步提高(P<0.01),Smac、AIF、Caspase-3、Caspase-9表达下调(均P<0.01);艾灸非穴位血浆组与模型组比较,凋亡率、Smac表达下降,Caspase-3、Caspase-9表达也下调(均P<0.01),但高于艾灸穴位血浆组(P<0.05,P<0.01)。结论:艾灸中脘、关元和足三里穴位后提取的人体血浆能抑制GES-1细胞凋亡,其信号转导通路可能是:促进细胞内HSP70合成,通过线粒体凋亡通路,抑制Smac、AIF表达,同时阻断其与Caspase-9的结合,减少Caspase-3含量,抑制细胞凋亡。     

芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:研究芦丁对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为空白组,MPP+损伤模型组,芦丁干预组。模型组用1 mmol·L-1MPP+处理细胞48 h,干预组在MPP+损伤基础上,给予不同质量浓度芦丁(50,100,200,300 mg·L-1)。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色观察细胞核形态变化;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针标记法观察细胞内活性氧(ROS)的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞色素C(Cyt-C)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组中细胞活性显著降低(P0.01),Hoechst 33342染色下可见细胞胞体变小、核皱缩,细胞ROS显著升高(P0.01),线粒体膜电位显著降低(P0.01)。Western blot结果表明,模型组Cyt-C含量升高(P0.01),p-ERK1/2水平降低(P0.01)。与模型组比较,预先4 h给予不同浓度的芦丁(100,200,300 mg·L-1)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性(P0.05,P0.01),抑制ROS升高(P0.01),并恢复线粒体膜高能电位(P0.05)。Western blot结果显示,芦丁能够抑制MPP+引起的Cyt-C蛋白升高(P0.01)和p-ERK1/2蛋白降低(P0.05,P0.01)。结论:芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关。     

银杏叶提取物对非小细胞肺癌PC-9细胞增殖的影响

目的探讨银杏叶提取物(EGB)对非小细胞肺癌(NSCLC)PC-9细胞增殖抑制的作用机制。方法 EGB浓度设为70、105、140、210、280 mg/L,作用于体外培养的PC-9细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞抑制率;Hoechst33258荧光染色法观察细胞核变化;ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)及凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达。结果 EGB作用24、48、72 h对PC-9细胞均有抑制作用,IC50分别为195.45、179.63、142.23 mg/L。105、140、210 mg/L EGB能够诱导PC-9细胞凋亡,引起细胞核固缩,形成凋亡小体,同时SOD活性增强,MDA含量降低(P0.05,P0.01,P0.001)。Western blot检测结果表明,EGB作用48 h后Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C及AIF蛋白表达明显增强,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01,P0.001)。结论 EGB能够有效抑制NSCLC PC-9细胞的增殖,其机制可能是通过线粒体凋亡途径诱导PC-9细胞凋亡、抗氧化及清除自由基实现的。     

参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的 观察参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对急性白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响.方法选取近交系8～12周龄DBA-2雄性小鼠尾静脉注射L1210淋巴细胞白血病株建立白血病小鼠模型,随机分为空白对照组及治疗组,治疗组分别给予参芪扶正注射液、参芪联合放射、参芪联合hTR反义核酸、参芪联合hTR反义核酸及放射治疗,疗程结束后活杀部分小鼠,采用端粒重复扩增(TRAP)-ELISA方法检测治疗后小鼠骨髓细胞的端粒酶活性,采用AnnexinV-FITC及PI双染,FACScan流式细胞术定量检测细胞凋亡率,观察各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性、细胞凋亡率的变化.结果成功建立L1210/DBA-2白血病小鼠模型,检测到白血病小鼠的骨髓细胞端粒酶活性较正常小鼠明显升高,细胞凋亡率较正常小鼠下降;经参芪扶正注射液以及联合治疗后,各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性明显下降,细胞凋亡率升高,以参芪联合hTR反义核酸及放射治疗组疗效最为显著,与其他各组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论急性白血病骨髓细胞端粒酶活性高表达可能是其治疗的靶点;参芪扶正注射液联合hTR反义核酸可通过下调端粒酶活性水平,促进白血病细胞的凋亡,对白血病小鼠放疗有一定增敏效应.     

安寐丹通过线粒体介导的海马神经细胞凋亡改善睡眠剥夺模型大鼠的学习记忆水平

目的:探讨安寐丹通过线粒体介导海马神经细胞凋亡对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响。方法:48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、安寐丹低、中、高剂量(4.86,9.72,19.44 g·kg~(-1)·d~(-1))组和艾司唑仑组(0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只。通过自制睡眠剥夺箱进行持续性睡眠剥夺14 d。以Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的含量。透射电镜观察海马区神经元线粒体形态结构,免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测海马区细胞色素C(Cyt-C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白及Bcl-2,Bax mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组上平台潜伏期、游泳总路程延长,初次到达平台时间延长,跨越平台次数减少,目标象限时间显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,Bax蛋白及mRNA水平显著升高(P0.01),线粒体结构破坏,嵴断裂,肿胀变形;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,安寐丹低、中、高剂量组明显改善SD大鼠空间探索和定位航行水平(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平升高,Bax蛋白及mRNA水平明显降低(P0.05,P0.01);线粒体损伤改善,水肿减轻;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著下降(P0.01)。结论:安寐丹能够改善睡眠剥夺大鼠学习记忆水平,其作用与线粒体介导的海马神经细胞凋亡,降低Cyt-C,Caspase-3等蛋白表达相关。     

线粒体信号通路Cyt-c和Apaf-1表达及艾灸足阳明经穴保护胃黏膜损伤机制的研究

目的:通过观察急性胃黏膜损伤后细胞凋亡线粒体信号转导途径中关键物质细胞色素C(Cyt-c)、凋亡激活因子-1(Apaf-1)表达及艾灸"足三里"、"梁门"穴对胃黏膜细胞凋亡的影响,探讨艾灸预处理保护胃黏膜损伤作用的内在机制。方法:24只wister健康大鼠随机分为3组,8只/组,即捆绑对照组、模型对照组和艾灸穴位组。采用Western-blot方法检测大鼠胃黏膜Cyt-c的表达,免疫组化方法检测大鼠胃黏膜细胞凋亡指数(AI)、Apaf-1表达。结果:模型对照组AI、Cyt-c和Apaf-1表达上调,与捆绑对照组相比具有非常显著性差异(P0.01);艾灸穴位组AI、Cyt-c和Apaf-1表达降低,与模型对照组比较具有显著性或非常显著性差异(P0.05或P0.01)。结论:无水乙醇灌胃可引发急性胃黏膜损,经线粒体Cyt-c→Apaf-1信号转导途径启动细胞凋亡程序,而艾灸足阳明胃经"足三里"、"梁门"穴预处理可以抑制细胞凋亡,其保护胃黏膜损伤作用的内在机制可能与下调线粒体凋亡通路Cyt-c和Apaf-1表达有关。     

从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用

目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

清心胶囊对病毒性心肌炎小鼠不同分期T细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)不同分期T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:参照文献方法复制VMC急性期和恢复期BALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)无论急性期还是恢复期,模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC急性期、恢复期小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,无论急性期还是恢复期,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,急性期、恢复期模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,急性期、恢复期治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P分别＜0.01、0.05),bcl-2表达均显著升高(P分别＜0.01、0.05),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);无论急性期还是恢复期,Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC急性期、恢复期均存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.     

电针对失坐骨神经大鼠腓肠肌细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的:观察电针疗法对失坐骨神经大鼠腓肠肌细胞凋亡及相关蛋白的影响,探讨电针对失坐骨神经骨骼肌萎缩的延缓效应及其可能机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组21只。采用切断坐骨神经法制备腓肠肌萎缩大鼠模型。电针组电针患侧"足三里""承山"穴,每日1次,每次10min,各组分别在术后7、14、21d取材。TUNEL法检测腓肠肌细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达,RT-PCR法检测腓肠肌Caspase-3mRNA表达。结果:模型组各时点细胞凋亡指数均高于假手术组(P0.05),电针组的细胞凋亡指数显著低于模型组(P0.05)。模型组各时点腓肠肌Bcl-2蛋白表达较假手术组显著降低(P0.05),Bax、Cyt-C以及Caspase-3蛋白表达均明显升高(P0.05)。术后14、21d,电针组与模型组比较,Bcl-2蛋白表达显著升高(P0.05),Bax、Cyt-C及Caspase-3蛋白表达则明显降低(P0.05)。各组大鼠腓肠肌的Caspase-3mRNA表达与蛋白表达结果基本一致。结论:电针能够促进腓肠肌Bcl-2的表达并抑制Bax、Cyt-C和Caspase-3的表达,从而抑制肌细胞的凋亡,这可能是电针延缓失神经性骨骼肌萎缩的机制之一。     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞色素-C的影响

目的观察丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞色素-C（Cyt-C）的变化。方法Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组、NBP治疗组、NBP预防组、NBP预防治疗组,每组再分为缺血再灌注6h,12h,24h3个亚组。采用改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,HE染色观察形态学变化,免疫组化法检测脑组织细胞Cyt-C变化,TUNEL法原位检测凋亡细胞。结果假手术组脑组织中可见少许Cyt-C表达和凋亡细胞,模型组Cyt-C表达和凋亡细胞数较假手术组显著增加,于6h达高峰,之后逐渐下降,各时间点与假手术组比较均有统计学意义（P〈0.01）;丁苯酞治疗组Cyt-C表达和凋亡细胞数均减少,各时间点与模型组比较有统计学意义（P〈0.01）;丁苯酞预防组与模型组比较有统计学意义（P〈0.05）;丁苯酞预防加治疗组较丁苯酞治疗组Cyt-C比表达和凋亡细胞数减少（P〈0.05）。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后给予丁苯酞治疗能下调Cyt-C表达,同时减少神经细胞凋亡,提示丁苯酞可能通过抑制神经细胞Cyt-C的释放起到减少细胞凋亡,保护神经元的作用。     

川楝素诱导K562细胞凋亡及其与自噬关系的体外研究

目的 研究川楝素诱导人慢性髓系白血病K562细胞发生凋亡,并探讨凋亡与自噬的关系.方法 采用MTT比色法,检测不同浓度川楝素对K562细胞增殖抑制率的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,透射电镜观察K562细胞超微结构的改变,免疫细胞化学法检测蛋白Apaf-1、LC3-Ⅱ的表达.结果 川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性(P＜0.01).50nmol/L川楝素处理细胞72h后,K562细胞早期凋亡率为54.20％,与川楝素处理组相比,3-MlA预处理组,凋亡率为68.30％.透射电镜下可见典型的凋亡小体和自噬体.免疫细胞化学法结果显示,K562细胞Apaf-1、LC3-Ⅱ蛋白表达较对照组增强(P＜0.01).结论 川楝素能够有效诱导K562细胞同时发生凋亡和自噬性死亡,当阻断自噬的发生,加速了凋亡的进程,在此过程中Apaf-1、LC3-Ⅱ蛋白上调.     

六味地黄汤对慢性肾衰竭大鼠线粒体凋亡途径的影响

目的:观察六味地黄汤对慢性肾衰竭大鼠线粒体凋亡途径的影响。方法:将45只雄性SD大鼠随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)及手术组(25只),手术组进行5/6肾切除造模,造模成功后再随机分为模型组及治疗组。治疗组予以6.75 g·kg~(-1)六味地黄汤灌胃,其余3组予以等体积蒸馏水灌胃,各组均给药8周。检测各组大鼠血肌酐、血尿素氮及尿蛋白定量水平;苏木素-伊红(HE),马松(Masson)染色观察肾组织形态学变化;电镜观察肾小管上皮细胞中线粒体超微结构变化;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素C(Cyt C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白及mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮及尿蛋白定量水平显著升高(P0.01),治疗组较模型组上述指标得到改善(P0.05);正常组及假手术组大鼠肾脏未观察到明显病理变化及线粒体结构破坏,模型组存在不同程度的肾小管萎缩和扩张,间质性炎性细胞浸润和胶原沉积,以及线粒体肿胀和断裂,治疗组较模型组上述病灶明显减轻;与正常组比较,模型组细胞凋亡显著增多(P0.01),Bax,Caspase-3表达显著升高(P0.01),Bcl-2表达显著降低(P0.01);与模型组比较,治疗组细胞凋亡显著减少(P0.01),Bax,Caspase-3表达显著降低(P0.01),Bcl-2表达显著升高(P0.01);正常组及假手术组Cyt C主要定位在线粒体,模型组细胞质中Cyt C表达显著增加(P0.01),治疗组较模型组细胞质中Cyt C表达显著减少(P0.01)。结论:六味地黄汤可减轻肾纤维化,延缓肾功能进展,其机制可能是通过保护线粒体结构及调控线粒体凋亡途径相关蛋白的表达减少细胞凋亡。     

病毒性心肌炎小鼠T淋巴细胞凋亡的调控与清心胶囊的干预作用

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:复制VMCBALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI 双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P＜0.01),bcl-2表达均显著升高(P＜0.01、),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);与正常组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达无显著性差异(P＞0.05),Fas、bcl-2表达仍有显著性差异(P＜0.05);而Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC发病过程中存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.