重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

甲醛对HepG2细胞胆汁酸代谢影响

目的 观察甲醛(FA)对人肝癌HepG2细胞内胆汁酸合成和外排影响,探讨甲醛引起肝细胞损伤机制.方法 以不同浓度甲醛对HepG2细胞染毒12、24和48 h,采用细胞毒性试验(MTT法)检测细胞活性;以不同浓度甲醛对HepG2细胞染毒24和48 h,采用化学-酶法测定HepG2细胞内总胆汁酸(TBA)含量;采用实时定量...     

丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响

目的探讨丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响及其调控机制。方法体外培养HepG2细胞,采用不同浓度(0.01~100μmol/L)丝氨酸处理,CCK8法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HepG2细胞的增殖、迁移及粘附功能;采用1μmol/L丝氨酸处理,Western blot检测pERK和pAKT。结果与空白对照组细胞相比,1μmol/L丝氨酸处理组显著促进HepG2细胞的增殖,且在48 h和72 h差异具有统计学意义(P0.05)。1μmol/L丝氨酸处理组24 h的迁移促进率为6%(P0.05)。0.01和1μmol/L丝氨酸处理组对HepG2细胞粘附功能的促进率分别为15%(P0.05)和20%(P0.01)。1μmol/L丝氨酸处理组ERK和AKT活性(pERK和pAKT)明显升高。结论丝氨酸通过促进ERK和AKT磷酸化促进HepG2细胞的增殖、迁移和粘附。     

镉暴露对HepG2细胞NRF2信号通路影响

目的 探讨镉暴露对HepG2细胞转录因子NF-E2相关因子2（NRF2）信号通路的影响。方法 采用甲臢比色法测定CdCl₂（0、1、2.5、5、10、25、50、100、200 μmol/L）处理24 h后,HepG2细胞活力变化;应用蛋白免疫印迹法检测CdCl₂（1、2、5、10、20 μmol/L）处理细胞6 h后,NRF2蛋白水平;采用RT-qPCR方法检测10 μmol/L CdCl₂处理细胞2、4、6、12、24 h后,GCLC、GCLM、HO1 和 AKR1C1 mRNA水平变化,检测CdCl₂（1、2、5、10、20 μmol/L）处理细胞6 h后,GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 mRNA水平变化。结果 HepG2细胞活力随镉处理剂量升高而降低（P<0.05）;与对照组（0.60±0.01）比较, 1、2、5、10、20 μmol/L镉处理组HepG2细胞NRF2蛋白表达水平[分别为（0.65±0.01）、（1.37±0.04）、（1.94±0.05）、（2.24±0.07）、（2.22±0.05）]均明显升高（P<0.05）;与对照组比较,镉处理6 h时,HepG2细胞内GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 mRNA水平[分别为（45.76±7.04）、（114.21±5.23）、（59.52±1.50）、（674.13±27.12）]明显升高（P<0.05）;与对照组比较,5 μmol/L镉处理组HepG2细胞内GCLC和GCLM mRNA水平[分别为（24.77±2.16）、（29.93±0.67）]升高,2 μmol/L镉处理组HepG2细胞内HO1和AKR1C1 mRNA水平[分别（28.55±2.02）、（186.32±12.63）]升高（P<0.05）。结论 镉暴露能激活HepG2细胞系中NRF2信号通路。     

细胞外钙对HepG2细胞内钙浓度的影响

目的 研究不同浓度细胞外钙对HepG2细胞内钙的影响并初步阐明细胞内钙变化的机制.方法 给予不同浓度钙培养液作用24 h后,用Fluo-3/AM染色剂对HepG2细胞进行染色,应用流式细胞仪检测其细胞内钙浓度的变化;利用阻断剂对钙通道进行阻断,寻找细胞内钙变化的原因;应用siRNA干扰对找寻到的钙通道进行沉默,进一步确认引起钙变化的钙通道.结果 细胞内钙浓度随细胞外钙浓度的升高而升高,当细胞外钙浓度为2.75 mmol/L时,细胞内钙钙荧光强度值达到最大为(123.25±12.95);钙池操纵的钙通道(SOC)阻断剂-La3+可显著抑制外钙引起的内钙升高(P＜0.01);应用siRNA沉默TRPC1通道后可显著抑制外钙引起的内钙变化.结论 随细胞外钙浓度升高,肝细胞内钙浓度显著增高;TRPC1参与的钙池操纵的钙通道可能是引起细胞内钙离子升高的主要通道.     

二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对Hep G2细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(Hep G2细胞)为对照组,分别以50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒Hep G2细胞为处理组,培养24 h后通过Annexin V/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(Western blotting)技术检测Hep G2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况。结果与对照组相比,400μmol/L DCAN处理组可诱导Hep G2细胞凋亡(P<0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P<0.05)。DCAN作用于Hep G2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。结论高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导Hep G2细胞凋亡。     

极低频磁场对HepG2细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究极低频电磁场是否影响细胞内钙离子浓度 ( [Ca2 +]i)。方法　Fura 2负载HepG2细胞分别在 1.5 5mT(均值 )、16Hz脉冲磁场处理 6 0min ,30 0mT、2Hz旋转磁场处理 5min后 ,用荧光光度计检测 [Ca2 +]i;实时检测 0 .9mT(有效值 )、16Hz正弦磁场对 [Ca2 +]i的影响。结果　在 1.5 5mT、16Hz脉冲磁场处理后 ,对照组和处理组R值 (F34 0nm　　 F380nm　　 )分别为 2 .4 5 19± 0 .2 378、2 .5 2 6 6± 0 .2 915 ,30 0mT、2Hz旋转磁场处理后R值分别为 1.36 5 0± 0 .0 6 2 6、1.36 0 2± 0 .0 771。 0 .9mT、16Hz正弦磁场处理下R值数据点拟合趋势线斜率比 [r(50 1～ 1 0 0 0 )　　　 r(0～ 50 0 )　　 ]分别为 1.12 13± 0 .4 5 5 9、1.0 72 7± 0 .1971,截距之比 [b(50 1～ 1 0 0 0 )　　　 b(0～ 50 0 )　　 ]分别为 0 .9912± 0 .0 0 98、0 .9979± 0 .0 0 6 0 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　在本实验条件以及所采用的分析方法下未发现磁场对HepG2的 [Ca2 +]i产生影响     

HepG2肝癌细胞行为的PCC实时检测研究

利用压电细胞芯片检测体系对HepG2肝癌细胞的行为进行24h实时监测,得出典型响应曲线,结合组织培养板进行的模拟对照实验和HepG2肝癌细胞的生长特性,将响应曲线分为游离期、黏附期、平台期3个行为时段,并分析和计算在各行为时段的基本特性和平均用时;还利用双胰酶法计算出电极表面的细胞平均贴壁率为76.8%。结果反映了PCC检测信号与细胞行为的对应性及利用PCC探索细胞行为及影响因子的可行性,并验证了PCC技术检测细胞行为的快速和灵敏性能。     

硫胺素、核黄素抗氧化作用与相关疾病研究进展

硫胺素和核黄素的功能主要是以辅酶或辅基的形式参与机体能量代谢。近年来有关两者抗氧化性能的报道日益增多，研究发现硫胺素和核黄素的缺乏可削弱机体的抗氧化能力，对心血管疾病、肿瘤、神经发生和DNA损伤等产生影响。本文旨在从抗氧化角度对硫胺素和核黄素与部分常见疾病的关系作一综述。     

铜对肝癌HepG2细胞IL-8的表达和分泌的影响

目的探讨铜对肝癌细胞株HepG2的IL-8分泌及其mRAN表达的影响。方法分别用ELISA法和RT-PCR测定不用铜添加组HepG2细胞上清液中IL-8浓度和细胞内IL-8mRNA表达丰度。结果在一定范围内培养细胞上清中IL-8水平和细胞内mRNA表达丰度与培养基中铜浓度成正比,而铜离子超过一定浓度后二者水平反而降低。结论在一定范围内铜元素可使肝癌细胞的IL-8分泌和表达增加,铜对肝癌的影响可能是通过促使血管生成因子IL-8的分泌与表达。     

063 硫胺素、核黄素抗氧化作用与相关疾病研究进展

硫胺素和核黄素的功能主要是以辅酶或辅基的形式参与机体能量代谢.近年来有关两者抗氧化性能的报道日益增多,研究发现硫胺素和核黄素的缺乏可削弱机体的抗氧化能力,对心血管疾病、肿瘤、神经发生和DNA损伤等产生影响.本文旨在从抗氧化角度对硫胺素和核黄素与部分常见疾病的关系作一综述.     

赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（cox-2）抑制剂赛莱西布（celecoxib）对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理HepG2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、DNA梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对HepG2细胞增殖和凋亡及其COX-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对HepG2细胞胱氨酸蛋白酶3（clasepase-3）蛋白质的表达及活性的影响。结果12．5，25，50μmol／L的赛莱西布作用于HepG2细胞后，HepG2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状DNA条带；干预组HepG2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高。与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布明显抑制HepG2细胞cox-2活性。与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论赛莱西布可通过cox-2通路和easpase3通路抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡。     

硫胺素、核黄素营养现况与中老年人抗氧化水平的相关性

目的分析硫胺素和核黄素营养状况与机体抗氧化水平及血糖、血脂水平的关系。方法选取上海市区314名中老年人作为调查对象,采用连续三日24小时膳食回顾法计算每日营养素摄入量,尿负荷实验测定机体硫胺素、核黄素营养水平,同时测定其血浆超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、空腹血糖（FBG）、总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平。结果膳食硫胺素平均摄入量为（0．82±0．36）mg／d,其中达到或超过推荐摄人量（RNI）的比例为11．8％,低于60％RNI的比例为51．3％;核黄素平均摄入量为（0．91±0．48）mg／d,其中达到或超过RNI的比例为17．2％,低于60％RNI的比例为49．4％。尿负荷实验结果显示,机体硫胺素缺乏的比例为65．0％,核黄素缺乏的比例为58．6％。与正常组相比,硫胺素、核黄素不足和缺乏组的MDA、FBG、Tc和TG水平呈升高趋势,SOD活性呈下降趋势,其中硫胺素缺乏组的MDA、FBG和Tc与正常组间差异有统计学意义（P〈0．05）。FBG、TC与尿硫胺素水平呈弱负相关（r=-0．246、r=-0．154,P〈0．05）,MDA、TG与尿核黄素水平呈弱负相关（r=-0．136、r=-0．297,P〈0．05）。结论上海部分地区中老年人硫胺素、核黄素营养水平较低,硫胺素、核黄素营养水平与机体抗氧化水平呈弱正相关趋势,与血糖、血脂水平呈弱负相关趋势。     

几丁聚糖对氯化镉致HepG2细胞DNA氧化损伤的影响

环境重金属镉可通过自由基链式反应机制导致脂质过氧化、DNA氧化损伤和基因突变。几丁聚糖是一种带正电荷的活性物质，将其用作清除带有负电荷的含氧自由基非常有效。笔采用单细胞凝胶电泳技术，以代谢酶较为完整的人肝肿瘤（HepG2）细胞为靶细胞，研究氯化镉对HepG2细胞DNA的损伤作用，以及几丁聚糖对氯化镉致HepG2细胞DNA损伤的影响，期望寻找到一种无毒副作用的环境重金属镉的拮抗剂。     

染料木黄酮对HepG2细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调控作用

目的探讨染料木黄酮（Gen）对HepG2人肝癌细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调节作用。方法体外培养HepG2细胞,将HepG2细胞在含有0、0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen的培养液内分别培养24、48、72h后,用MTT法检测细胞增殖活性。用分别含0、0．01、1．00、10．00、50．00μmol／LGen的完全培养液培养HepG2细胞24h,收集细胞,分别进行细胞内总胆固醇（TC）含量检测、实时荧光定量PCR检测细胞低密度脂蛋白受体（ldlr）、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（hmgcr）基因的mRNA表达和蛋白印迹法检测核转录因子SREBP-2的表达。结果0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen分别作用于HepG2细胞24h,0．01、0．10、1．00μmol／LGen组细胞增殖率高于溶剂对照组（均P〈0．05）;作用48、72h,1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen组细胞增殖率均低于溶剂对照组（均P〈0．05）。1.00、10．00、50．00μmoL／LGen与HepG2细胞共同孵育24h,HepG2细胞内TC水平分别为（1．81±0．15）、（2．29±0．17）、（2．88±0．08）mmol／L,均高于对照组[（1．44±0．17）mmol／L],且随着Gen浓度升高,呈增加趋势（R2=0．48,P〈0．01）;各Gen实验组的hmgcr和ldlr基因的mRNA表达水平随着Gen浓度升高而升高（R2分别为0．53、0．79,均P〈0．01）。1．00、10．00、50．00μmol／LGen组蛋白表达灰度值均高于对照组（均P〈0．01）。结论染料木黄酮能够调节细胞内胆固醇的代谢,其作用机制可能与调控SREBP-2通路有关。     

稳定转染CDK2干扰RNA的人肝癌HepG2细胞系的建立

目的建立稳定转染CDK2干扰RNA的人肝癌HepG2细胞系。方法用Lipofectamine^TM 2000法将已构建好的特异性的携带绿色荧光蛋白的CDK2干扰RNA的重组质粒P^Genesil-1-CDK2转染入HepG2细胞，经G418筛选后获得稳定转染细胞株，并用倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白，利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后的HepG2细胞CDK2 mRNA的表达。结果倒置荧光显微镜观察与KT-PCR检测，结果显示获得重组质粒P^Genesil-1-CDK2稳定转染的细胞克隆。结论建立了可稳定转染CDK2干扰RNA的人肝癌HepG2细胞系，为进一步研究细胞周期调控蛋白激酶对肝细胞癌的治疗与开发新的特异性药物提供了实验依据。     

染料木黄酮对脂肪变HepG2细胞甘油三酯水平和Lipin 1表达的影响

目的 研究染料木黄酮(genistein,Gen)对油酸(oleic acid,OA)诱导的脂肪变HepG2细胞胞核内Lipin1水平以及培养基和胞浆内甘油三酯水平的影响.方法 在HepG2细胞中分别或联合加入0～640μmol/L的Gen,0～2.0 mmol/L的OA干预,用MTT法测定细胞活性,以确定适宜的OA建模和Gen的干预浓度.之后,采用OA建立HepG2细胞脂肪变模型,用Gen干预24h,收集培养基上清和细胞分别测定甘油三酯水平,Western blot检测胞核Lipin1的表达.结果0.5 mmol/L OA为造模最佳干预浓度,可同时提高培养基和细胞中甘油三酯的含量,10～50 μmol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的状态,并且呈现剂量效应关系(P＜0.05),同时,胞核内Lipin1水平增加(P＜0.05).结论 Gen能抑制OA诱导的HepG2细胞脂肪变,并可能与Lipin1的核转移有关.     

基于微孔板的人HepG2细胞体外彗星试验方法的研究

目的运用微孔板体外培养技术,建立人HepG2细胞的体外彗星试验方法,为进一步建立体外高通量筛选方法提供依据。方法选用人HepG2细胞,运用96孔板体外细胞培养技术,建立微孔板的彗星试验方法,结合中性红检测细胞毒性的方法,选择20种化合物对所建方法进行验证。结果阳性和阴性对照物用所建方法与体内试验所获结果一致,验证结果显示,8种遗传毒物在体外彗星试验中均获得阳性结果,灵敏度为100%,且当细胞的相对活力>50%时,拖尾率及尾长均与剂量呈正相关。12种非遗传毒物中,11种物质呈阴性反应,1种物质呈阳性反应,特异性为91%。结论运用微孔板体外细胞培养技术,可在1块96孔板上同时检测4~5种受试物,并在无S9的情况下能检测出直接与间接诱变剂,并可界定出引起遗传毒性的作用剂量,提高了筛选的速度,减少了受试物等的用量,具有发展成为体外高通量筛选方法的良好条件。     

树豆酮酸A对HepG2细胞体外糖代谢影响

目的 探讨树豆酮酸A对HepG2细胞糖代谢影响及机制。方法 体外培养HepG2细胞,实验设10^-3、10^-4、10^-5、10^-6 mol/L树豆酮酸A组,作用24 h,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测HepG2细胞葡萄糖消耗量,ELISA法检测糖代谢相关酶己糖激酶（HK）和丙酮酸脱氢酶（PDH）活性。结果 10^-3、10^-4、10^-5 mol/L树豆酮酸A组HepG2细胞葡萄糖消耗量分别为（8.650±0.319）、（8.231±0.182）、（8.136±0.402）mmol/L,明显高于对照组[（6.521±0.056）mmol/L],差异有统计学意义（P < 0.05）;10^-3、10^-4 mol/L树豆酮酸A 组HepG2细胞内HK含量分别为（882.91±30.72）、（718.25±20.67）pg/mL,明显高于对照组[（616.65±17.24）pg/mL];10^-3 mol/L 树豆酮酸A组 HepG2细胞内PDH含量为（1 526.69±66.74）pg/mL,明显高于对照组[（1 204.73±55.72）pg/mL],差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 树豆酮酸A在体外可促进HepG2细胞对葡萄糖的摄取,具有降糖活性,其作用机制可能与增强糖代谢相关酶己糖激酶和丙酮酸脱氢酶活性有关。     

血浆miR-138水平与冠心病的关系及对HepG2细胞Sirt1基因的影响

目的 探讨血浆miR-138水平与冠心病（coronary heart disease,CHD）的关系及对HepG2细胞沉默信息调节因子（sirtuin type 1,Sirt1）基因mRNA表达的影响,评价血浆miR-138应用于CHD临床诊断的价值。方法 选取2018年1月-2020年1月在医院诊断CHD并完成冠状动脉造影的患者30例为病例组（CHD组）及健康人员28例为对照组。检测两组血浆miR-138的水平及HepG2细胞Sirt1基因mRNA表达水平;通过单因素分析及多因素Logistic回归分析血浆miR-138的水平与CHD的关系,并通过ROC曲线评估血浆miR-138的水平对CHD的诊断价值。结果 单因素分析显示,CHD组血浆miR-138的水平显著低于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;多因素Logistic回归分析显示,血浆miR-138的水平降低,发生CHD的危险性增加（P<0.05）。ROC曲线下面积AUC=0.768(95%CI:0.626～0.909),临界值=0.00162,此时血浆miR-138诊断CHD的灵敏度=73.333%,特异度...