闭合性颅脑损伤早期大鼠海马差异蛋白质研究

【目的】研究大鼠闭合性颅脑损伤后24h海马中蛋白质表达的变化及其特点。【方法】选成年雄性sD大鼠随机分为手术对照组及损伤后24h组，复制Marmarou落体打击闭合性颅脑损伤大鼠模型，应用双向电泳技术分析大鼠脑损伤后24h海马中蛋白质表达的改变。【结果】双向电泳分离结果显示，采用pH3～10胶条，与手术对照组比较，损伤后24h有7个蛋白质点有表达量上的差异，并有2个蛋白质点消失，新出现1个蛋白质点；采用DH4～7胶条，与手术对照组比较，损伤后24h有7个蛋白质点有表达量上的差异，并有1个蛋白质点消失，新出现3个蛋白质点。【结论】大鼠闭合性颅脑损伤早期（24h）可引起海马蛋白质表达发生变化。     

低剂量X射线全身照射诱导小鼠脾细胞蛋白分子变化

为了深入了解辐射对细胞蛋白质表达的影响，采用双向电泳技术检测低剂量Ｘ射线全身照射诱导小鼠脾细胞核及胞浆蛋白分子变化。结果表明，７５ｍＧｙＸ射线照射后４ｈ细胞核出现４个新蛋白点；２个增强蛋白点。照射后细胞浆出现６个新蛋白点；１个增强蛋白点和３个减弱蛋白点。正常细胞浆的３个蛋白点在照射后消失。正常细胞浆中２个蛋白点在照射后分别减弱和消失，而在细胞核中增强和出现，提示低剂量辐射促进细胞核及细胞浆大分子物     

电离辐射对小鼠胸腺细胞蛋白质表达的影响

目的 :观察低剂量 X射线全身照射诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达变化及对细胞内外蛋白质交换的影响。方法 :采用双向电泳方法。结果 :75m Gy X射线全身照射小鼠后 4h,细胞浆出现 5个新蛋白点、4个增强蛋白点及 3个减弱蛋白点。正常细胞浆中的 5个蛋白点在照射后消失。照射后细胞外液出现 1个新蛋白点、1个增强蛋白点及 1个减弱蛋白点。正常细胞外液中的 3个蛋白点在照射后消失。正常细胞浆中的 2个蛋白点在照射后分别减弱和消失 ,而在细胞外液中出现和增强。正常细胞外液中的 2个蛋白点在照射后消失 ,而出现在细胞浆中。结论 :低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达变化 ,并促进细胞内外大分子物质的交换     

低剂量X射线全身照射诱导小鼠脾细胞蛋白分子变化

为了深入了解辐射对细胞蛋白质表达的影响，采用双向电泳技术检测低剂量Ｘ射线全身照射诱导小鼠脾细胞核及胞浆蛋白分子变化。结果表明，７５ｍＧｙＸ射线照射后４ｈ细胞核出现４个新蛋白点；２个增强蛋白点。照射后细胞浆出现６个新蛋白点；１个增强蛋白点和３个减弱蛋白点。正常细胞浆的３个蛋白点在照射后消失。正常细胞浆中的２个蛋白点在照射后分别减弱和消失，而在细胞核中增强和出现，提示低剂量辐射促进细胞核及细胞浆大分子物质的交换。     

电离辐射对小鼠胸腺细胞蛋白质表达的影响

目的：观察低剂量Ｘ射线全身照射诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达变化及对细胞内外蛋白质交换的影响。方法：采用双向电泳方法。结果：７５ｍＧｙＸ射线全身照射小鼠后４ｈ,细胞浆出现４个新蛋白点、４个增强蛋白点及３个减弱蛋白点,正确细胞浆中的５个蛋白点在照射后消失。照射后细胞外液出现１个新蛋白点、１个增强蛋白点及１个减弱蛋白点。正常细胞上液中的３个蛋白 在照射后消失。正常细胞浆中的２个蛋白点在照射后分别减弱和消失     

荷瘤大鼠60Co局部照射后骨髓蛋白质的差异表达

目的:观察荷瘤大鼠受60Co局部照射后骨髓中蛋白质的差异表达.方法:制备荷瘤大鼠动物模型,60Co局部照射后分别提取荷瘤组和照射组大鼠骨髓蛋白质,运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析2组荷瘤大鼠骨髓蛋白质的差异表达.结果:荷瘤大鼠经60Co局部照射骨髓有24个蛋白点表达发生变化,其中出现2个新蛋白点,4个蛋白点表达量下降,1个蛋白点表达量升高,17个蛋白点在照射后消失.结论:60Co局部照射可诱导荷瘤大鼠骨髓蛋白质差异表达.     

热休克蛋白对烧伤后肾脏抗氧化酶的保护作用

目的 研究严重烧伤和热预处理大鼠肾脏热休克蛋白72(HSP72)表达，严重烧伤和热预处理后大鼠肾脏杭氧化酶的变化，讨论了热休克蛋白72的细胞保护机制。方法 将大鼠分为烧伤组，热休克预处理后烧伤组，对照组三组。观察对照及处理后1、3、6、12、24h共6个点；采用用免疫印迹观察蛋白质表达的变化。结果 (1)热休克预处理后大鼠肾脏热休克蛋白表达峰值是在12h，在24h其表达水平仍比正常对照高。(2)热预处理后大鼠肾脏MDA含量低于烧伤组；SOD、CAT活性高于烧伤组。结论 热休克蛋白具有保护肾脏抗氧化酶活性的作用，热预处理能够减轻严重烧伤后，肾损伤。     

全身~(60)Co-γ射线照射大鼠小肠绒毛微循环的改变

作大鼠回肠外置于腹部皮下手术,开两个观察口。伤口愈合后进行~(60)Co-γ射线10Gy全身照射。照射前及照射后观察小肠绒毛微循环变化。结果表明。照后6h,绒毛微血管网模糊或轻度扩张;照后24h,绒毛微血管扩张,血流速度稍慢;照后48h,上述改变加重;照后72h,毛细血管网消失,微血管驰张伴有血流速度明显减慢或血流淤滞,组织学检查显示绒毛裸露与微血管扩张。本实验证明,超致死剂量全身照射后小肠绒毛微循环有明显的规律性变化。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞双向电泳分析

目的 分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞蛋白质表达谱的变化.方法 分别抽取系统性红斑狼疮患者及健康对照者外周血,分离单个核细胞,抽提总蛋白,进行双向电泳,电泳胶银染显色,用ImageMasterTM 2D Platinum 5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质.结果 对照组凝胶蛋白点匹配率为(71±4)%,SLE组匹配率为(72±4)%.对照组凝胶共检出蛋白点(791±17)个,SLE组检出(781±17)个.有11个蛋白点在SLE患者组表达上调,9个表达下调.结论 SLE患者外周血单个核细胞蛋白质表达发生了明显改变,为从淋巴细胞蛋白质谱变化的整体角度上阐明SLE发生的分子机制及免疫调控通路奠定了基础.     

miR-34a在辐射损伤时对细胞周期的调控作用

目的探讨60Coγ射线诱发大鼠肝脏BRL细胞辐射损伤时p53激活诱导的miR-34a改变对细胞周期的调控作用。方法以大鼠BRL肝细胞为研究对象,予4 Gy60Coγ射线照射后,分别培养4、12、24、48 h。采用流式细胞技术检测各组BRL细胞周期的变化,实时定量PCR检测各组细胞中miR-34a mRNA和c-myc mRNA表达水平的变化,Western blot方法检测各组细胞中p53蛋白和Myc蛋白的表达。结果 60Coγ射线4 Gy照射后4 h即出现G2期阻滞（P〈0.05）,至照射后24 h,G2期阻滞恢复;照射后12 h起,S期细胞减少（P〈0.05）,出现G1阻滞,48 h仍未恢复。照射后4 h p53蛋白和miR-34a mRNA表达增加（P〈0.05）,12 h均有下降（P〈0.05）,24 h和48 h已基本回至正常水平,而c-myc在照射后4 h开始呈持续降低趋势,48 h有所恢复。结论细胞在电离辐射引起DNA损伤后,早期即激活了p53蛋白,p53蛋白调节miR-34a表达,可能再经由miR-34a的靶基因c-myc介导,使细胞阻滞于G1和（或）G2期进行DNA修复。     

严重烫伤后大鼠外周血中性粒细胞和淋巴细胞TNF-α的表达

目的 研究大鼠烫伤后外周血中性粒细胞和淋巴细胞的TNF-α mRNA表达的动态变化，以了解严重烫伤对外周血中性粒细胞和淋巴细胞表达TNF-α的影响。方法 复制30％体表面积Ⅲ度烫伤大鼠模型；分离外周血中性粒细胞和淋巴细胞；提取总RNA，采用RT-PCR分析TNF-α mRNA的表达。结果 PMN中TNF-α mRNA的表达在伤后的6～24h内较伤前明显上调，而淋巴细胞在伤前未发现,TNF-α mRNA的明显表达,但伤后3～48h表达急剧上升；两者均于伤后12h达高峰，以后缓慢下降，至48h仍维持较高水平。结论 大鼠烫伤早期外周血中性粒细胞和淋巴细胞TNF-α mRNA的表达明显上调，表明严重烫伤可显著影响血中性粒细胞和淋巴细胞TNF-α的表达。     

损伤与正常脊髓蛋白质组的差异分析

目的从整体水平探究损伤与正常脊髓在蛋白质组表达上的差异，并寻找两者间的差示蛋白。方法以横断损伤和正常大鼠脊髓为研究对象，应用三氯乙酸／丙酮法制备蛋白样品，经双向电泳和银染，分别获取大鼠损伤和正常脊髓的蛋白质组双向电泳银染图谱，通过图像扫描及图像分析，建立损伤与正常脊髓蛋白质组的匹配差示图谱，分析两者在蛋白质组表达上的变化。结果损伤脊髓蛋白质组图谱经图像分析后，可检测到746个蛋白点，正常脊髓蛋白质组图谱可检测到847个蛋白点；蛋白质组匹配差示图谱的分析发现，两者间存在411个差示蛋白，即：损伤脊髓蛋白质组中有155个蛋白点在正常脊髓蛋白质组中未找到相应的匹配蛋白点；同时，正常脊髓蛋白质组中也有256个蛋白点在损伤脊髓蛋白质组中未找到相应的匹配蛋白点。结论损伤与正常脊髓的蛋白质组存在明显差异。     

γ射线对人淋巴细胞Cx43和Egr-1基因转录表达影响

目的研究γ射线对人外周血淋巴细胞Cx43和Egr-1基因转录表达的影响。方法对数生长期的淋巴细胞,分别给予2、4和6Gy的60^Coγ射线照射,并于照射前（对照组）和2Gy照射后4、8、12、24、48和72h及不同剂量照射后12h,分别提取总RNA,反转录成cDNA。利用实时荧光定量PCR技术,检测各组Cx43和Egr-1基因表达改变。结果人外周血淋巴细胞Cx43 mRNA表达水平在2Gy照射后4～12h明显增高,为对照组的6．74倍以上（P〈0．05）;24～72h,其表达水平与对照组相比没有明显变化。不同剂量照射后12h,2Gy和6Gy时表达水平高,是对照组的10．52倍以上（P〈0．05）。Egr-1 mRNA表达水平在2Gy照射后的8h和24h增高,但没有统计学意义;4、12、48和72h,Egr-1 mRNA表达水平比对照组显著降低（P〈0．05）。不同剂量照射后12h,2Gy时,Egr-1 mRNA表达水平比对照组降低（P〈0．05）,4Gy时,其表达水平接近对照组,6Gy时,表达水平增高,为正常对照组的7．94倍（P〈0．05）。结论γ射线照射后能够明显上调Cx43基因表达。Egr-1要达到表达水平增高倍数和Cx43倍数相同,所需剂量比Cx43大。     

NADH对昆明小鼠辐照后造血系统的影响

目的 探讨NADH对小鼠辐照后造血系统的影响。方法 昆明小鼠60只．随机分为3组，每组20只，实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别为正常对照组、辐照前注入生理盐水组和辐照前注射NADH药物组。生理盐水和NADH药物均采用腹腔注射，2次／d，照射前3d给药。辐照采用6．0Gy ^60Co一次性辐照小鼠。尾静脉采血计数连续观察辐射后不同时期对外周血白细胞总数的影响；辐照后24h，取股骨骨髓涂片，显微镜下计算骨髓有核细胞数和其分裂指数；通过DNA琼脂糖凝胶电泳观察昆明小鼠辐照后24、48h骨髓细胞凋亡的改变。结果 NADH能够抑制受照后小鼠外周血白细胞减小,增加骨髓有核细胞数及分裂指数,但并不能抑制DNA凋亡片段形成。结论 NADH能够明显抑制辐射诱导的造血系统损伤,但并不通过抑制骨髓细胞凋亡途径。     

体外循环心内直视术对外周血单个核细胞蛋白质表达谱的作用

目的:观察体外循环(CPB)心内直视术患者外周血单个核细胞蛋白质表达谱的变化.方法:11例体外循环心内直视术患者,分别于体外循环前(T0)、体外循环主动脉开放后1 h(T1)和术毕(T2)3个时点抽取动脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),采用双向电泳和质谱方法比较、分析3个时间点差异蛋白的表达,并采用Western blot进行验证.结果:双向电泳和质谱鉴定出12个差异蛋白,其中S100A9表达量于CPB后1 h达到高峰,手术结束时开始下降,但未回复到术前水平(P<0.05).结论:体外循环能上调外周血单个核细胞S100A9等蛋白的表达.     

BH3-only成员参与辐射诱导的小鼠肝细胞凋亡

目的 研究细胞凋亡及凋亡相关基因的表达在急性肝脏辐射损伤中的作用。方法 采用BALB/c小鼠以⁶⁰Co γ射线进行全身照射,建立急性肝脏辐射损伤动物模型,光镜和电镜观察病变48 h。然后采用蛋白质印迹分析法检测肝组织中Caspase 3、Caspase 8、Bcl-2、Bcl-x_L、Bax、Bad、PUMA和Slug蛋白表达,并采用原位末端标记法（TUNEL染色）检测细胞凋亡。结果 辐照后4 h出现肝细胞变性和凋亡,辐照后12 h出现细胞坏死,辐照后24~48 h 肝细胞凋亡达到峰值并检测到Caspase 3激活;Bcl-2在辐照后4~24 h上调,于辐照后48 h回落;PUMA在辐照后4~48 h上调;Bcl-x_L、Bad在辐照后6~48 h上调;Bax、Slug仅在辐照后12 h上调。结论 辐射诱导的PUMA、Bad表达上调与辐辐照后肝细胞凋亡增加有关。     

丙泊酚对糖尿病大鼠海马组织蛋白质表达影响的蛋白组学研究

目的采用蛋白组学方法研究丙泊酚对2型糖尿病Goto-Kakizaki(GK)大鼠海马组织蛋白质表达的影响。方法将清洁级GK大鼠随机分为对照组(n=12)、丙泊酚麻醉组(n=12)和参数组(n=5),丙泊酚组和参数组腹腔注射丙泊酚100 mg/kg,在1 h和2 h后追加剂量50 mg/kg,维持麻醉3 h,对照组采用同样方法给予等体积生理盐水。丙泊酚组分别在麻醉结束后3、24、72 h和1周4个时间点随机选取3只大鼠,取海马组织,双向电泳法分离蛋白后进行凝胶扫描和图像分析,与相应时间点的对照组进行比较,选取4倍差异点进行质谱分析。观察参数组丙泊酚给药后0.5、1.5和2.5 h时间点血气分析指标的变化。结果与对照组相比,丙泊酚组麻醉后3 h发现7个蛋白点下调,24 h有3个蛋白点下调,72 h有2个蛋白点下调,1周则出现2个蛋白点上调,经质谱鉴定发现14个差异表达蛋白,涉及氧化还原、能量代谢、突触信息传递、细胞骨架和运动、细胞凋亡等生物学过程。血气分析指标监测结果显示:参数组丙泊酚给药后0.5 h与2.5 h时点的pH值和氧分压(PaO2)比较差异有统计学意义(P<0.05),但均在正常生理指标范围内。结论丙...     

自发性高血压大鼠心肌组织蛋白质谱差异分析

目的研究自发性高血压大鼠蛋白质表达谱的改变。方法取自发性高血压大鼠和正常血压对照WKY大鼠左心室游离壁心肌组织,提取全部蛋白质后以双向电泳分离蛋白质,经考马斯亮蓝染色、图像分析后选取7个差异在2倍以上的蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析。结果双向电泳可分离454±45个蛋白质,点平均匹配率为91.1%。其中27种蛋白质表达差异2倍以上,质谱鉴定出的6种蛋白质分别为与能量代谢相关的丙酮酸脱氢酶E1α和肌酸激酶,与细胞应激相关的葡萄糖调节蛋白58和αB-晶体蛋白,与细胞生长、凋亡相关的三结构域蛋白50（Tripartite Motif Protein 50,TRIM 50）和LIM-only蛋白家族成员LIM domains（FHL）。其中除肌酸激酶表达下调外,其他5种均较正常血压WKY大鼠上调。结论自发性高血压大鼠在出现明显的血压改变和心肌肥大之前已经出现能量代谢、应激和细胞生长调控相关蛋白质表达的改变。     

高强度聚焦超声辐照小鼠胚胎后胎盘组织细胞原癌基因c-fos的改变

目的 探讨高强度聚焦超声(HIFU)终止妊娠的可能性并观察HIFU辐照小鼠胚胎后胎盘组织细胞c-fos的表达改变.方法 HIFU 6种声强各60 s 体内直接照射妊娠第7 d小鼠胚胎,妊娠15 d时观察各组胚胎死亡率;孕鼠右侧子宫胚胎不照射作为对照,左侧子宫胚胎(实验组)采用完全抗孕声强12 W/cm 2×60 s照射,照后24、48、72、96 h留取胎盘,免疫组化技术检测胎盘组织细胞c-fos表达情况.结果 对照组胚胎总死亡率为12.2%,实验组中声强3 W/cm2、6 W/cm2及≥ 9 W/cm2组的胚胎死亡率分别为25.0%、72.9% 和100%.HIFU辐照胚胎后24 h胎盘组织细胞c-fos表达增加,72 h增加最明显,96 h表达下降.结论 HIFU抗早孕具有潜在的可行性,HIFU辐照胚胎可诱导胎盘组织细胞c-fos表达增加.     

离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射对caspase-3蛋白表达的影响。方法：采用体外传代培养的小鼠EL-4淋巴瘤细胞为实验材料；采用单克隆抗体免疫荧光标记，FACScan流式细胞仪(FCM)检测蛋白表达的变化；采用PI荧光标记及FCM测定细胞凋亡的变化；量效实验, 观察0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的变化；时效实验, 观察4.0 Gy照射后2、4、8、12、24、48及72 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达的变化。结果：量效实验表明，0.5、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。0.5、1.0及4.0 Gy 照射后24 h EL-4细胞凋亡明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。 时效实验表明，4.0 Gy照射后8、12及24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高, 与同时间点假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.01或P<0.001)。结论：电离辐射可诱导EL-4细胞caspase-3蛋白表达增高。同时诱导EL-4细胞凋亡。