套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV－DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传染科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果表明：在９２和ＪＨＢｓＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者５０例，占５４．３４％；在２８例ＨＢｅＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者２６例，占９２．８６％；在２０例ＨＢＶＭ均为阴性的病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者有６例，占３０．００％。证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原一抗体更加灵敏、可靠。     

HBV与HCV重叠感染的研究

应用ＰＣＲ法和套式ＰＣＲ法对深圳地区４４例ＨＢＶ血清学标志物阳性者进行ＨＣＶ－ＲＮＡ检测，并同时作ＨＢＶ－ＤＮＡ检测，以了解ＨＢＶ与ＨＣＶ重叠的感染情况，同时观察其血清ＡＬＴ的情况。结果发现，４４例患者中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性１２例（２７．２７％）；ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性２２例（５０．００％），抗ＨＣＶ阳性２１例（４７．７３％）．表明ＨＢＶ与ＨＣＶ的重叠感染率较高，应引起人们的重视。     

慢性肝病患者庚肝病毒RNA检测分析

应用逆转录酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）对９６例慢性肝病患者进行ＨＧＶ ＲＮＡ检测,结果：慢性肝炎９例,肝硬化５６例,肝癌３１例中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性分别为１例,６例,３例,总检出率为１０．４２％（１０／９６）在ＨＢＶ感染６３例,ＨＣＶ感染,８例及ＨＢＶ＋ＨＣＶ重叠感染１１例中,ＨＧＶ ＲＮＡ阳性分别为８例,１例和１例,在慢性肝病中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性与阴性组间,ＡＳＴ,ＡＬＴ水平无显著性差异（Ｐ〉０．     

慢性乙型肝炎病情再活动时血清HBV DNA水平的变化

目的 研究慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ复制水平与病情活动关系。方法 采用荧光标记定量ＰＣＲ的方法,测定一组急性发作的慢性乙型肝炎患者（其中ＨＢｅＡｇ阳性组３８例,抗ＨＢｅ阳性组２２例）病情活动期和恢复期的血清ＨＢＶ ＤＮＡ含量。结果 血清ＨＢＶＤＮＡ含量在活动期明显高于恢复期（Ｐ〈０．０５）。血清ＨＢＶ ＤＮＡ含量与丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、门冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）及总胆红素（Ｔ－ＢＬＬＩ）之间无相关性     

防止角膜移植传播乙型肝炎病毒的研究

为了检测角膜有无ＨＢＶ－ＤＮＡ，防止角膜移植传播乙型肝炎病毒（ＨＢＶ），应用ＰＣＲ技术对２９例乙型肝炎、乙型肝炎病毒感染患者和１０例健康人角膜的ＨＢＶ－ＤＮＡ进行了检测。同时对１１例乙型肝炎病毒感染患者的结膜和２６例乙型肝炎患者的泪液也进行了检测。结果ＨＢｓＡｇ阳性的１６例角膜有１１例（６８．７％）检测到ＨＢＶ－ＤＮＡ，１３例ＨＢｓＡｇ阴性的角膜有４只（３６．６％）ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性，１０例健康人角膜无１例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性。１１例乙型肝炎病毒感染患者的结膜中，有７例（６３．６％）ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性，２６例乙型肝炎患者的泪液中，有１４例（５３．８％）检测到ＨＢＶ－ＤＮＡ。说明角膜也是ＨＢＶ的贮存场地，临床不能应用乙型肝炎病毒感染者的角膜作供体行角膜移植术     

乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究

作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ｅ系统阳性的慢件乙型肝炎（乙肝）患者血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，筛选出乙肝ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）阳性／乙肝ｅ抗体（抗—ＨＢｅ）阴性和ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ阳性各２０份ＰＣＲ阳性血清，分别用人工合成的ＨＢＶ前Ｃ区基因寡核苷酸探针Ｍ０（无突变），Ｍ１（１点突变），Ｍ２（２点突变）进行斑点杂交，结果发现ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ附性慢性乙肝患含有１７例（占８５％）在１８９６位核苷酸发生点突变，形成终止密码，其中１０例（占５０％）发生２点突变。选突变ＰＣＲ产物直接测序，同样证实点突变的存在。提示乙肝患含ＨＢｅＡｇ阳性自然转换为抗—ＨＢｅ阳性、并不一定是病毒复制减弱，而可能足ＨＢＶＤＮＡ前Ｃ区发生了基因变异。     

PCR与ELISA法检测乙肝血清标志物对比分析

用ＰＣＲ技术检测４８例肝病患者，５５例非肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ，ＥＬＩＳＡ法检测其血清五项标志物，肝病组ＰＣＲ阳性率为３１．３％，非肝病组ＰＣＡ阳性率为１１．４％。ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｂ阳性组ＨＢＶ－ＤＮＡ１００％阳性；ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｂ阳性、ＨＢｅＡｂ阳性或阴性组ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性５０％；单项ＨＢｓＡｂ阳性组ＨＢＶＤＮＡ阳性２０％；五项标志物全阴ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性４．７％。结果表明，ＰＣＲ技术特异性强、敏感度高，但两种方法各有所长，不宜取代。     

350例病毒性肝炎患者检测HBV-DNA与HBV血清学标志物相关性研究

采用ＰＣＲ技术对３５０例各型病毒性肝炎进行检测，旨在研究血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－Ｍ之间的相关性，以确定ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义。并以ＨＢＶ－ＤＮＡ为依据进一步考察ＨＢＶ－Ｍ的临床价值。结果显示：在ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）病例中ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）者１０２例（９０．２７％），说明ＨＢｅＡｇ基本可反应病毒处于复制状态；在１３７例ＨＢｅＡｇ（－）／抗－ＨＢｅ（＋）中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）为６８例（４９．６３％），表明病毒活动并未终止；在抗－ＨＢｓ（＋）１４例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２例（１４．２９％），说明抗－ＨＢｓ出现后仍然可有ＨＢＶ复制；在ＨＢＶ－Ｍ均阴性的８５例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２３例（２７．０６％），说明不能单纯依靠ＨＢＶ－Ｍ检测来诊断乙肝，需定期查ＨＢＶ－ＤＮＡ或肝活体组织检查ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ。     

α－干扰素对外周血单个核细胞中HBVDNA的清除作用

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法动态观来了α－干扰素治疗的６例慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的清除情况。血清ＨＢＶＤＮＡ在治疗５周后（３－１０周）６例转阴，其中２例在结束治疗时复转阳性，ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ在治疗１５周（１２－２０周）时５例转阴，１例始终阳性，并出现ＡＬＴ复升高。结果显示α－干扰素能清除ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ，但滞后于血清病毒的清除，ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ持续阳性，可能使治疗中期效果较差。     

乙型肝炎病毒前S1、前S2抗原及e抗原与病毒DNA之间的相关分析

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物及HBV DNA之间的相关性。方法 应用定量PCR内标法检测HBV DNA,筛选出100例未经干扰素和核苷（酸）类似物治疗、丙氨酸氨基转移酶（ALT）／天冬氨酸氨基转移酶（AST）正常且HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者。用微粒子酶免分析法、ELISA方法检测乙肝血清学标记物。筛选出40名健康人作为质控对照。结果 HBV DNA阳性乙肝患者：（1）乙肝e抗原（HBeAg）阳性率为75％;乙肝e抗体（抗-HBe）阳性率25％;乙肝前s1抗原（PreS1-Ag）阳性率为69％;乙肝前S2抗原（PreS2-Ag）阳性率为77％;（2）75例HBeAg阳性患者中PreS1-Ag阳性54例,PreS2-Ag阳性60例;25例抗-HBe阳性患者中PreS1-Ag阳性14例,PreS2-Ag阳性17例。PreS1-Ag、PreS2-Ag阳性率在两种情况下的差异均无统计学意义（均P〉0．05）;（3）HBeAg阳性时,PreS1-Ag、PreS2-Ag均阴性的阴性率（8％）低于抗-HBe阳性时的阴性率（28％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;（4）PreS1-Ag与PreS2-Ag同为阳性、阴性的72例。结论 慢性乙型肝炎患者HBeAg、PreS1-Ag、PreS2-Ag阳性与HBV—DNA阳性的符合率较高。PreS1-Ag、PreS2-Ag阳性率与HBeAg的阳性无明确相关。PreS1-Ag、PreS2-Ag阴性率与抗-HBe阳性有较好的相关性。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

扶正祛邪饮联合替比夫定对慢性乙型肝炎HBeAg血清转换作用研究

[目的]探讨扶正祛邪饮联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎(CHB)的疗效,重点观察HBeAg血清转换指标。[方法]将研究对象按患者意愿分为联合组50例和对照组46例。对照组给予替比夫定片,联合组在对照组基础上于前6个月给予扶正祛邪饮。两组替比夫定疗程均为12个月。观察项目有临床症状、肝功能、HBVDNA、HBeAg及HBeAg/抗-HBe血清转换。[结果]两组患者治疗前后自身比较,ALT、AST、TBil、HBeAg转阴、HBeAg/抗-HBe血清转换、HBVDNA转阴等方面差异有显著性(P0.05);两组之间比较,联合组在ALT水平、HBeAg转阴率、HBeAg/抗-HBe血清转换率等早期应答方面要优于对照组(P0.05),但在治疗到12月时HBeAg转阴率、HBeAg/抗-HBe血清转换率虽然高于单药治疗组,但差异无统计学意义(P0.05)。[结论]扶正祛邪饮联合替比夫定片治疗CHB的早期疗效明显,肝功能恢复较快,且能促进HBeAg转阴和HB eAg/抗-HBe血清转换提前应答,可作为CHB治疗的辅助药物。     

Relationship between HBeAg and HBV DNA in patients with acute and persistent hepatitis B infection

The correlation between hepatitis B e antigen (HBeAg) and hepatitis B virus (HBV) DNA was studied in a number of hepatitis B surface antigen (HBsAg)-positive serum samples which had been submitted for routine hepatitis screening. In patients with either acute or persistent HBV infection, a good overall correlation between HBeAg and HBV DNA was noted, although in persistently infected patients with chronic liver disease, 28% of samples with hepatitis B e antibody (anti-HBe) were also positive for HBV DNA. Around 3% of the samples that were positive for HBV DNA were negative for HBeAg and anti-HBe while, conversely, 19% of HBeAg-positive sera were negative for HBV DNA. These results indicate that the presence or absence of HBeAg/anti-HBe may not necessarily reflect that of serum HBV DNA, particularly in persistent infection; this provides further support for the replacement of HBeAg/anti-HBe assays by detection of HBV DNA in the routine assessment of possible infectivity and chronic liver disease in HBsAg-positive patients.     

慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染

研究45例慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染。病例均为后发抗HCV阳性的慢性HBsAg携带者,无先抗HCV阳性而后HBsAg阳性的个案,这可能反映HBV和HCV两种病毒感染的先后次序、不同传播方式及HBV对HCV易感性的增进作用。用RT-PCR检出30/45例血浆HCV RNA阳性,不仅确证HCV重叠感染诊断,还证实HCV复制及传染性。23/30例HCVRNA阳性者有输血史,提示输血是其获得HCV重叠感染的主要途迳。用PCR检出25/45例血清HBV DNA阳性,其中抗HBe阳性者的HBV DNA检出率为42.9％(12/18),明显低于(P<0.001)我们前文报道,提示重叠HCV感染对HBV复制有抑制作用。此外有9例抗HBe阳性者,其HBV DNA阴性但HCV RNA阳性,反映HCV可能已取代HBV成为致肝损害的主要病因。     

乙肝病毒e抗原系统与HBV DNA的相关性研究

目的：探讨乙肝病毒e抗原系统与HBVDNA的相关性。方法：应用PCR方法检测HBVDNA,ELISA法检测乙肝病毒e抗原系统。结果：HBeAg（＋）的乙肝病人HBVDNA阳性率89．19％,抗HBe（＋）的乙肝病人HBVDNA阳性率60％,HBeAg及抗HBe均阴性的乙肝病人HBVDNA阳性率43．75％,HBeAg（＋）的各型乙肝HBVDNA阳性率无明显差别（P＞0．05）,抗HBe（＋）的各型乙肝以慢性中重度乙型肝炎患者HBVDNA检出率最高（75％）。结论：HBVDNA阳性率与乙肝感染类型无关,而与e抗原系统存在状态有关,HBeAg和抗HBe均阴性的患者中也有43．75％的病人有DNA复制。     

血清学标志阴性的慢性肝炎患者病理与临床

目的了解血清学标志阴性的慢性肝炎患者病理与临床特征。方法对62例血清学标志阴性反复肝功能异常的肝炎患者进行血清肝炎病毒学检测、肝穿刺病理和免疫组化检查、肝功能和凝血功能检查,对其中乙肝患者采用荧光定量PCR方法检测血清乙肝病毒DNA（HBVDNA）。结果62例患者临床诊断与病理诊断的符合率为53．2％,慢性肝炎轻度的符合率较高为69．1％。62例患者肝组织免疫组化检查示28例（45．2％）HBsAg和／或HBcAg阳性,可确诊为乙型肝炎。28例乙肝患者肝组织病理均有炎症病变,其中G1最高占13例（46．4％）,其次G2占10例（35．7％）,G4最少占2例（7．1％）;肝纤维化分期S0占12例（42．9％）,S1占7例（25％）,S4最少占1例（3．6％）。28例患者中10例（35．7％）检测血清HBVDNA阳性,平均（3．3±2．2）×10^3拷贝／ml,肝脏炎症分级及纤维化分期各组之间血清HBVDNA定量水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。HBVDNA阳性和阴性患者的各项指标比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。乙肝患者和非乙肝患者各项指标比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论血清学标志阴性HBV感染仍是我国原因不明肝病的主要病因之一,且多为慢性肝炎,HBVDNA仍低水平复制,临床表现轻,炎症分级和纤维化程度较轻,但仍可发展为肝硬化。     

原位杂交研究慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织内HBV DNA清除模式

用地高辛素探针原位杂交技术研究52例慢性HBV感染者肝内HBV DNA分布,发现在病毒高复制期,HBV DNA阳性肝细胞以弥漫性分布为主,肝细胞HBV DNA表型为胞浆型和核型,在病毒低复制期肝内HBV DNA阳性肝细胞以小叶聚集分布为主,多分布于灶性坏死和碎片状坏死区,在病毒非复制期,HBV DNA阳性肝细胞以局灶性分布为主,表型多为包涵体型和核型。提示在漫长的HBV感染过程中,肝内HBV DNA阳性肝细胞的分布经历弥漫性—小叶聚集性—局灶性的演变过程,该过程反映肝组织内HBV的清除模式。HBeAg(+)的慢性HBV无症状感染者肝组织病变轻可能是由于HBV DNA易装配为完整的病毒排出肝细胞的结果。说明免疫活性细胞攻击的靶细胞主要是含有HBV DNA的肝细胞。     

乙型肝炎患者治疗后血清中e抗原与病毒DNA水平的关系

目的 通过对乙型肝炎病毒血清学标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBcIgG)的检测及内标、外标两种聚合酶链反应(PCR)方法 检测乙型肝炎病毒载量的比对,更好地了解人体内乙型肝炎病毒携带情况,指导临床诊治.方法对经治疗后丙氨酸氨基转移酶(ALT)/天冬氨酸氨基转移酶(AST)正常、COBAS AMPLICOR定量PCR(内标法)检测不到乙肝病毒DNA(HBV-DNA)、用Abbott AxSYM微粒子酶免分析法(MEIA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性、表面抗体(抗-HBs)阴性、e抗原(HBeAg)阳性(HBeAg＞4 S/CO)、抗-HBe阴性、抗-HBcIgG阳性的42例血清,再用上海复星长征医学科学有限公司提供的HBV-PCR外标法荧光定量检测试剂盒,Light Cycler实时荧光定量PCR仪检测.结果 42例ALT/AST正常,HBeAg阳性(HBeAg＞4 S/CO以上),HBeAg的平均值42.26 S/CO.COBAS AMPLICOR定量PCR(内标法)未检测到HBV-DNA(＜300拷贝/ml)的血清;用Light Cycler定量PCR仪(外标法)检测HBV-DNA,有7例为阳性,7例HBV-DNA的平均含量3.1×105拷贝/ml,,阳性率17%.结论 乙型肝炎病毒e抗原阳性并不说明体内病毒复制一定活跃.经治疗后,病毒复制下降,部分患者e抗原仍阳性,e抗原何时消失有待进一步研究.血清学标志与HBV复制状态存在不一致性,兼顾内、外标两种PCR方法检测HBV-DNA更客观.     

乙型肝炎病毒DNA聚合酶活力测定及临床意义

采用特异性免疫沉淀法检测血清中HBV DNAP活力216例,结果:HBeAg和抗-HBcIgM阳性组的HBV DNAP检出率和活力水平明显高于阴性组(P<0.01);且随HBsAg的滴度升高而升高。在各类乙型肝炎病人中DNAP检出率依次为;重症肝炎和急性肝炎>肝硬化和慢性潘动性肝炎>慢性迁延性肝炎和携带者。抗-HBe阳性组和HBeAg、抗-HBe均阴性组各有25％、54.71％可测到DNAP活力。证明HBV DNAP活力测定是乙型肝炎早期诊断、病毒在体内复制及是否具有传染性的灵敏指标。