苦参对铜绿假单胞菌生物膜干预作用的体外研究

目的 观察在体外苦参水煎液对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.a)生物膜(Biofilm,BF)的影响及其与左氧氟沙星(Levofloxacin,LFX)的协同杀菌作用.方法 试管二倍稀释法测定药物的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC);将不同浓度苦参水煎液作用于P.a,结晶紫染色法及激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscoPy,CLSM)评价药物对菌株黏附力的影响;苦参水煎液单独或联合LFX作用于BF,采用连续稀释法计数及CLSM对BF进行分析.结果 苦参水煎液能抑制P.a的黏附力;与LFX联合作用后,BF内存活菌数明显减少(P≤0.05).结论 苦参水煎液能抑制P.a生物膜的形成,并可增强LFX对BF内细菌的杀菌作用.     

铜绿假单胞菌耐药性监测研究

目的:观察和监测铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药变化,为临床合理使用抗生素提供依据。方法:连续检测2002年至2004年本院铜绿假单胞菌的耐药状况。药敏试验采用K-B纸片法,判定标准依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准。结果:铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药率有逐年升高趋势;对铜绿假单胞菌保持较高活性且耐药率<20%的抗生素有阿米卡星、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星。结论:铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药率较高,对铜绿假单胞菌感染的治疗,可首选阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、头孢吡肟、环丙沙星等。     

铜绿假单胞菌临床耐药性分析

由于激素和免疫抑制剂的长期应用,特别是广谱抗生素的大量使用和滥用,导致世界性细菌耐药性日趋严重[1].铜绿假单胞菌在医院感染中占有越来越大的比重.铜绿假单胞菌对多种类型的抗生素耐药,是临床治疗过程中抗生素的选择受到很大的限制.铜绿假单胞菌的耐药质粒不仅可以在同种细菌中传播,而且可以在异种细菌中引起耐药传播,使临床治疗更为复杂.我们对本院住院病人临床标本中分离的铜绿假单胞菌分布及耐药特点进行回顾性分析,结果如下.     

铜绿假单胞菌耐药分析

【目的】分析本院铜绿假单胞菌的耐药情况，为医院合理使用抗菌药提供可靠的实验依据。【方法】收集本院2001年3月-2004年2月间各种临床标本分离的铜绿假单胞菌214株，应用API细菌鉴定系统进行鉴定，并用K-B法进行药敏实验。【结果】铜绿假单胞菌对亚胺培南、哌啦西林／三唑巴坦、哌啦西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星的耐药率分别为1．0％、18．5％、20．3％、92．1％、90．6％、12．7％、15．1％、8．2％、32．3％、9．4％、8．9％。【结论】临床应根据药敏实验合理使用抗生素，以减少耐药菌株的产生。     

EMA-PCR方法快速检测铜绿假单胞菌活菌研究

目的 探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合（EMA-PCR）,建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法 以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用浓度和曝光时间优化试验。结果 PCR检测灵敏度为3×103 CFU/mL;曝光处理时间为10 min;EMA浓度≤5 μg/mL对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1 μg/mL EMA能有效抑制3×106 CFU/mL死菌扩增;1%活菌混合体系检测结果阳性。结论 EMA-PCR方法能有效快速检测铜绿假单胞菌活菌,能避免PCR检测可能造成的假阳性结果。     

外科病房铜绿假单胞菌耐药性分析

目的:了解我院外科病房铜绿假单胞菌对多种抗菌药物的耐药性,为临床抗感染提供依据。方法:采用回顾性分析方法统计256株铜绿假单胞菌的药敏结果。结果:铜绿假单胞菌耐药率较低的抗菌药物有头孢吡肟、头孢他啶、亚胺培南、环丙沙星、美洛培南。结论:根据体外药敏结果选择合适的抗生素,加强机体自身免疫力,是治疗铜绿假单胞菌的关键。     

铜绿假单胞菌的治疗策略

近年来铜绿假单胞菌感染明显增多,且治疗困难,已成为临床医师十分棘手的问题。本文以作者的经验为主,结合国内外近期文献进行综述,提出治疗的策略。     

铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的:了解本院2010年1-12月铜绿假单胞菌的分离情况及耐药特点.方法:从2010年1-12月老年住院患者的痰液、分泌物等标本中分离出102株铜绿假单胞菌,统计其样本来源、科室分布、对不同抗菌药物的敏感性.结果:在检出的102株铜绿假单胞菌中58株来自呼吸内科,占56.86%;其次为神经外科,占13.73%,比较敏感的抗菌药物依次是多粘菌素(100%)、亚胺培南(82.36%)、哌拉西林/他唑巴坦(74.51%).结论:铜绿假单胞菌为非发酵菌中的假单胞菌属,很容易造成机会性感染,临床应合理选用抗菌药物,从而减少耐药菌株的产生,有效抑制铜绿假单胞菌耐药率过快增长,同时应不断检测抗菌药物的敏感性,为临床合理用药提供科学依据.     

铜绿假单胞菌的临床分布和耐药性分析

目的 了解本院2010年临床分离铜绿假单胞菌(PA)的分布和耐药性情况.方法 采用纸片扩散法(K-B法)及琼脂稀释法进行药敏试验,以美国临床实验室标准委员会(CLSI)2009年版为判断标准,药敏结果使用WHO提供的WHONET5.4软件进行统计分析.结果 收集2010年本院非重复临床分离PA共116株,其中标本来源以痰为主占72.4%,主要分离科室为ICU,占53.4%.PA对哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南耐药率较低,分别为27.6%、15.1%、24.1和18.1%.结论 β内酰胺抑制剂复合物和碳青霉烯类药物的对其仍具有较高的抗菌活性.     

铜绿假单胞菌的耐药性特点

近年来下呼吸道铜绿假单胞菌(Pseudomnoas aeruginosa,PA)感染呈上升趋势,尤是慢性阻塞性肺病晚期和颅脑等重度创伤行机械通气后的病人,常在痰培养时发现PA感染。在所有院内感染致病菌中,PA已列入首位。为了解PA对常用抗生素的耐药性情况,本文参阅近年文献作一综述。     

4种三萜类化合物的微生物转化探讨

目的:对羊毛甾醇、桦褐孔茵醇、齐墩果酸和甘草次酸进行微生物转化研究.方法:采用液体土豆培养基对18种茵株进行振荡培养,对羊毛甾醇、桦褐孔茵醇、齐墩果酸和甘草次酸进行生物转化试验,发酵液用乙酸乙酯或正丁醇萃取并浓缩,萃取液采用薄层色谱鉴定转化结果.结果:黑曲霉3.795转化桦楬孔菌醇的发酵液中出现转化斑点;短刺小克银汉霉...     

滇重楼内生真菌转化万古霉素的研究

目的 利用滇重楼内生真菌生物转化万古霉素.方法 分离滇重楼内生真菌并筛查它们的生物转化能力.鉴定具有转化能力的内生真菌.结果 有2株内生真菌可以转化万古霉素.经鉴定为产黄青霉和Fusarium nematophilum.菌株G01和G03在添加万古霉素的液体培养基中培养6d后,HPLC （High Performance LiquidChromatography）分析发现,万古霉素的峰面积下降并有新吸收峰出现.结论 内生真菌发酵产生了某些新成分。     

梅花草提取物对幽门螺杆菌小鼠胃黏膜定植的影响及其机制

目的 探讨梅花草提取物对幽门螺杆菌（Hp）根除和胃黏膜的影响,阐明其在体内外抑菌消炎的机制。 方法 6周龄雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、Hp组、三联组、四联组、梅花草组、三联+梅花草组和四联+梅花草组。琼脂稀释法检测梅花草对Hp SS1标准株的最小抑菌浓度（MIC）,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测Hp定植黏附相关基因 mRNA表达水平。动物实验评估不同治疗方式对Hp的根除率,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,快速尿素酶试验（RUT）检测各组小鼠胃组织中Hp感染率,HE染色和透射电镜观察小鼠胃组织病理形态表现和超微结构。 结果 梅花草的MIC为10 g·L^－1。RT-qPCR法检测,与Hp组比较,梅花草组Hp定植黏膜相关基因Bab A、Cag A和Vac A mRNA表达水平均降低（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学检测,Hp组小鼠胃黏膜部分糜烂和溃疡,出血和充血明显,Hp感染阳性;梅花草组小鼠胃黏膜出血和溃疡明显改善,胃黏膜Hp感染呈阴性。RUT实验检测,与Hp组比较,梅花草组小鼠Hp感染率降低（P<0.05）,三联组和四联组小鼠Hp感染率降低（P<0.05）;与梅花草组比较,三联组和四联组小鼠Hp根除率差异无统计学意义（P>0.05）;与三联或四联组比较,三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠Hp根除率升高（P<0.01）。三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠胃黏膜组织得到修复,胃黏膜上皮细胞的线粒体亚细胞器和微绒毛结构完整。与Hp组比较,三联组、四联组、梅花草组、三联+梅花草组和四联+梅花草组小鼠血清中IL-2水平均升高（P<0.05）,IL-8和TNF-α 水平均降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 梅花草可以有效根除Hp和保护胃黏膜,其作用机制与降低Hp感染后IL-2、IL-8和TNF-α水平及保护胃黏膜亚细胞结构完整性有关。     

球形红细菌生物转化槲寄生中总三萜类化合物的测定

目的：建立槲寄生及球形红细菌转化槲寄生培养液中总三萜类化合物的含量测定方法,并对各个样品的含量进行比较研究。方法：采用紫外分光光度法,以齐墩果酸为对照品,5%的香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸为显色系统,535 nm波长处测定总三萜类化合物的含量。结果：齐墩果酸在2～12μg/ml的范围内线性关系良好,标准曲线回归方程为A=21.988C-0.072,r=0.989 5。75%的乙醇提取、半量常规培养基、游离球形红细菌培养,所得培养液（样品3）总三萜含量和槲寄生75%的乙醇提取液（样品1）相比增加141%。结论：经过球形红细菌转化可以增加槲寄生提取液中总三萜类化合物的含量。     

超声波辅助快速酶法革兰阴性杆菌鉴定系统的研制

目的缩短非发酵菌、弧菌及肠杆菌科革兰阴性杆菌的鉴定周期,加快微生物检验报告时间.方法研制一种可不需经过分科即能实现细菌的种级鉴定的21项7位码的细菌酶学生化反应鉴定系统（包括鉴定卡和检索系统）,制定超声波粉碎最佳方案并采用超声波粉碎细菌加快酶的释放,将细菌酶提取液注入鉴定卡中,35℃孵育4～8h观察结果.以标准菌株为质控,传统生化反应方法为金标准,同时与国产鉴定系统GYZ系列（15e、15n、9v）作比较,用室间质控菌株和临床菌株分别进行测试.最后对比经超声波粉碎与不经粉碎的差别,统计该鉴定系统相对于传统方法和国产鉴定系统GYZ系列对测试菌株的符合率,并计算出该鉴定系统鉴定各科细菌时所需时间.结果经标准菌株测试,超声波粉碎细菌前后生化反应无差别（快慢1h内）的有：糖类分解、硝酸盐还原、靛基质、硫化氢、尿素水解、七叶苷水解;轻微差别（快2h）的有：苯丙氨酸脱氨、DNA水解;差异显著（快4h以上）的有：精氨酸双水解、赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧、ONPG试验.3株标准菌株54项生化反应一致率96.3%;12株室间质控菌株鉴定种级符合率75%,属级92%,错误1株;65株经金标准传统双歧图表法确定的菌株鉴定种级符合率86%,属级95%,错误3株;与GYZ系列平行对照共测试临床分离菌株138株,117株结果相同,一致率85%（χ^2＝1.4546, P ＞0.05）.本方法对肠杆菌科和弧菌科细菌的鉴定只需4～6h,而对非发酵菌的鉴定为6～8h,比GYZ系统快12～40h.结论该鉴定系统能在不经过分科鉴定的情况下快速鉴定非发酵菌、弧菌及肠杆菌科革兰阴性杆菌至种级水平,为感染疾病的诊断节省宝贵的时间.与传统方法及国产鉴定系统GYZ系列有较好的种属级符合率.说明该系统有较好的研究和应用前景.     

甘草浸膏利胆作用的研究

目的：研究十二指肠给甘草浸膏后对大鼠的利胆作用。方法：胆总管插 管引流,分别收集给药后1、2、3、4、5小时的胆汁,计量并测定胆汗中直接胆红素含量。结果：10ml/kg、5ml/kg甘草浸膏能显促进麻醉大鼠的胆汁分泌,并能显增加单位时间内胆汁中直接胆红素的含量（P＜0．05,P＜0．01）。作用持续1－2小时。结论：甘草浸膏具有较好的利胆作用。     

桔梗细胞悬浮培养体系对斑蝥素的生物转化研究

目的 研究桔梗细胞悬浮培养体系对抗癌天然活性成分斑蝥素的生物转化，以获得具有新颖结构的斑蝥素衍生物。方法 往桔梗悬浮培养体系中加入斑蝥素并培养6d，培养液经萃取后采用色谱方法进行分离纯化，产物的结构根据光谱数据予以鉴定。结果分离得到了以2：1比例混合存在的两个转化产物。经光谱分析，两个产物鉴定为羰基还原为羟基的一对差向异构体1β-羟基斑蝥素(Ⅱa)及1a-羟基斑蝥素(Ⅱb)。结论 Ⅱa和Ⅱb均为未见报道的新化合物。桔梗细胞培养体系对斑蝥素具有较强的选择性还原作用，此转化反应可用于斑蝥素衍生物的制备。     

黄花蒿悬浮培养细胞对二氢青蒿酸的生物转化研究

目的 采用黄花蒿悬浮培养细胞研究二氢青蒿酸(Ⅰ)的生物转化。方法 向预培养 14 d 的黄花蒿细胞悬浮培养体系中加入底物二氢青蒿酸,培养 2 d 后终止转化。通过 TLC 和 HPLC 检测转化产物,利用硅胶、Sephadex LH-20 以及 ODS 柱色谱分离纯化转化产物,并根据理化数据和波谱技术鉴定转化产物的化学结构,最后利用 HPLC 考察共培养时间对转化率的影响。结果 二氢青蒿酸在黄花蒿培养体系中成功地进行了转化并分离得到两个转化产物：3-α-羟基二氢青蒿酸(Ⅱa)和3-β-羟基二氢青蒿酸(Ⅱb)。两个转化产物的最佳共培养时间均为 1 d,总的摩尔转化率分别为 2.6% (Ⅱa) 和 15.7% (Ⅱb)。结论 本研究首次利用黄花蒿培养细胞生物转化二氢青蒿酸,且得到一对区域特异性的羟基化转化产物。     

医院内病原菌的分离及耐药性研究

目的探讨医院内病原菌的分离及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法新乡医学院第一附属医院2005年1月至2006年12月各科室送检标本4 665份,应用MicroScan微生物分析系统,结合K-B法药敏试验对临床分离菌株进行鉴定和药物敏感性测定,以SPSS软件对结果进行统计分析。结果4 665份标本中,分离到1 358株病原菌,其中细菌1 217株,真菌141株;1 217株细菌中,革兰阴性(G-)杆菌800株,占65.7%;革兰阳性(G+)球菌417株,占34.3%。在G-杆菌中分离率居前5位的依次为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌;G-杆菌对亚胺培南的耐药性最低,耐药率为6.1%～15.4%,对其他常用抗菌药物的耐药率为8.2%～100%。G+球菌对万古霉素的耐药性最低,耐药率为1.8%～10.2%。结论医院临床分离菌株耐药率高,临床应根据病原检测及药敏试验结果针对性用药。     

长春花及银杏植物细胞悬浮培养对青蒿素的生物转化研究

目的：对抗疟药物青蒿素（Ⅰ）进行了生物转化研究。方法：利用长春花及银杏植物细胞悬浮培养细胞进行生物转化。用硅胶柱色谱进行产物的分离，波谱方法鉴定产物的结构。结果：此两种植物悬浮细胞体系均能将青蒿素转化成3α-羟基去氧青蒿素（Ⅱ）。结论：此两种植物悬浮细胞体系均有有效转化青蒿素。