17-羟-岩大戟内酯B对K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响.方法:将K562细胞分为3组,分别为:空白对照组,5-氟脲嘧啶组(浓度为100μmol·L-1),HJB组(浓度为6.25,12.5,25,50,100,200,400μmol·L-1).用不同浓度的药物作用24 h和200 μmol·L-1的HJB浓度作用不同时间(12,24,48 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,并与空白对照组和5-氟脲嘧啶组作对比;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)的相对活性.结果:与空白对照组相比,HJB对K562细胞的增殖有显著性抑制作用,并呈浓度依赖关系及时间依赖关系(P＜0.05),作用24 h后IC50为158.7μmol·L-1.HJB可诱导K562细胞凋亡,用50,100,200 μmol·L-药物分别处理细胞24h后,早期凋亡率较空白组明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase8的相对活性均较空白对照组升高(P＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论:HJB明显抑制体外K562细胞生长并诱导其发生凋亡,且死亡受体途径可能是诱导其凋亡的一个机制.     

小白菊内酯增强阿霉素和地塞米松对Jurkat白血病细胞增殖抑制及凋亡的研究

目的探讨小白菊内酯(PTL)增强阿霉素(Adr)和地塞米松(Dex)抗Jurkat细胞的白血病效应及可能机制。方法以Jurkat细胞株为研究对象,MTT法测定各药物对Jurkat细胞增殖抑制的影响,计算48h的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞仪检测药物作用后Jurkat细胞的凋亡率;应用免疫组化法检测药物作用后Jurkat细胞NF-κBp65蛋白的变化。结果PTL、Adr、Dex呈浓度依赖性地抑制Jurkat细胞增殖,48 h的IC50分别为8.11,0.53,324.35μmol/L。2、4、8、16μmol/L PTL联合500μmol/L Dex、0.25μmol/L Adr时较单用等剂量的Dex、ADM处理Jurkat细胞48h后的抑制率明显增高,两两比较差异均有统计学意义(P均小于0.05)。单用Dex、Adr、PTL及PTL联合Dex及Adr作用Jurkat细胞24h的凋亡率分别为(64.13±4.62)%、(68.18±4.11)%、(25.18±3.07)%、(77.05±4.35)%、(81.68±4.56)%,实验组的细胞凋亡率高于对照组(5.25±1.4)%(P均为0.00),PTL联合Dex及Adr组的凋亡率明显高于单用Dex及Adr组(P均小于0.05)。单药PTL、Dex及PTL联合Adr、Dex作用Jurkat细胞24h后的NF-κBp65的阳性积分明显低于对照组(P均为0.00),而Adr单药组则明显高于对照组(P=0.00),PTL联合组均明显低于单用组(P均低于0.05)。结论 PTL可通过抑制NF-κBp65信号通路,增强Adr、Dex抑制Jurkat白血病细胞增殖,促进其凋亡。     

双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡

目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制。方法:以1,10,30,50,100μmol·L~(~(-1))的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50μmol·L~(-1)的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50μmol·L~(-1)浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关。     

藤黄酸对K562细胞hERG 钾通道蛋白的调控作用

目的 探讨藤黄酸对白血病细胞系K562增殖、凋亡、细胞周期的影响.并观察藤黄酸对hERG钾通道蛋白的调控作用.方法 K562细胞以不同浓度藤黄酸(0.125～8.0 μmol/L)处理0～72 h后,MTT法观察藤黄酸对K562细胞生长抑制的情况,Annexin-Ⅴ/PI双标法及透射电镜检测细胞凋亡,PI 单染法检测细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR法分别检测藤黄酸对K562细胞内hERG通道的调控作用.结果 藤黄酸能明显抑制K562细胞增殖,具有时间-剂量依赖性,其24 h的IC50 为(2.637±0.208)μmol/L.此外,藤黄酸以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变.而藤黄酸的凋亡诱导效应可能与其诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期有关.hERG钾通道蛋白在人白血病K562细胞中表达量较高,藤黄酸对hERG钾通道蛋白及其表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系(P＜0.01).结论 藤黄酸可通过下调hERG钾通道蛋白的表达发挥较强的抗白血病效应,hERG钾通道有望成为白血病诊治的新靶标.     

鬼臼酰肼对白血病K562细胞株作用的实验研究

目的:研究鬼臼毒素衍生物鬼臼酰肼对K562白血病细胞的抑制增殖、诱导细胞凋亡作用.方法:采用集落形成实验、MTT比色法观察鬼臼酰肼对K562白血病细胞增殖的影响;流式细胞仪等技术手段研究鬼臼酰肼对K562细胞凋亡的影响.结果:鬼臼酰肼能抑制K562白血病细胞增殖,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01),抑制作用与剂量呈显著性正相关.鬼臼酰肼可诱导K562细胞的凋亡,在5.0 μg/ml处理48 h,鬼臼酰肼组凋亡百分率33.5%.结论:鬼臼酰肼具有抗肿瘤活性,鬼臼毒素衍生物的不同结构对抗肿瘤活性有一定影响.     

姜黄素联合PDTC体外抗白血病K562细胞的作用研究

目的探讨姜黄素联合PDTC体外抗K562细胞的作用。方法 MTT法检测姜黄素单独或联用PDTC后对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst33342染色法观察细胞凋亡形态;Western blot法检测Cleaved Caspase 3的表达活性。结果 10μmol·L~(-1)姜黄素联合25μmol·L~(-1)的PDTC后,可显著提高对K562细胞增殖的抑制活性,并显示出诱导细胞凋亡的形态学特征,使细胞Cleaved Caspase 3表达增加。结论姜黄素联合PDTC可增强抗K562细胞作用,机制与诱导K562细胞凋亡作用有关。     

佛手柑内酯通过PI3K/Akt信号通路诱导人肝癌细胞HepG2和Hep3B凋亡的机制

目的:探究佛手柑内酯通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路诱导人肝癌细胞Hep G2和Hep3B凋亡的机制。方法:设立佛手柑内酯(5,50,200μmol·L~(-1))组和空白组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测佛手柑内酯作用Hep G2和Hep3B细胞24,48 h细胞增殖;磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测相关m RNA和蛋白的表达含量;进行平板细胞克隆形成实验评价各组Hep G2和Hep3B细胞的克隆形成率与效果。结果:MTT实验表明,佛手柑内酯能明显抑制Hep G2和Hep3B细胞的增殖活性,且呈浓度依赖性;流式细胞仪分析结果表明,佛手柑内酯200μmol·L~(-1)组作用于Hep G2和Hep3B细胞48 h,有明显促凋亡作用(P 0. 05); Western blot结果显示,佛手柑内酯可以上调半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-8蛋白表达量(P 0. 05),并且下调B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),PI3K蛋白表达(P 0. 05); Real-time PCR显示PI3K,Akt m RNA相对表达量降低(P 0. 05);平板细胞克隆形成实验的结果显示,随着佛手柑内酯浓度的增加,各组细胞克隆形成率呈递减趋势,且佛手柑内酯200μmol·L~(-1)组作用降低明显(P 0. 05)。结论:佛手柑内酯对人肝癌细胞Hep G2和Hep3B的增殖存在抑制作用,其可能是通过PI3K/Akt信号通路诱导Hep G2和Hep3B细胞的凋亡。     

紫草素对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用和诱导人白血病K562细胞的凋亡

目的：研究紫草素对DNA拓扑异构酶I催化活性和K562白血病细胞凋亡的影响。方法：从K562白血病细胞提取拓扑异构酶I，通过DNA解螺旋试验评价该药对拓扑异构酶I催化活性的抑制作用。用MTT法测定了该药对K562白血病细胞增殖的抑制作用。应用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察了该药对细胞凋亡的诱导作用。结果：紫草素可显著抑制拓扑异构酶I的解螺旋活性(IC50=75．Oμmol/L)。该药能显著抑制K562的细胞增殖，并随剂量增大而抑制作用增强。紫草素O．3～3μmol/L对K562细胞作用24h后，其凋亡率为20％～70％。琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA“lad-der”。结论：紫草素显著抑制拓扑异构酶I的催化活性，并能诱导K562白血病细胞凋亡。     

柠檬醛胁迫下K562细胞生长增殖抑制和凋亡诱导研究

目的:研究柠檬醛对人白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法:采用本实验改良的MTT比色法和Annexin-V/PI双染色流式细胞术测定柠檬醛对K562细胞的增殖抑制率和凋亡诱导率;采用基于分光比色原理的各种试剂盒定量分析柠檬醛胁迫下K562细胞内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性.结果:K562细胞经柠檬醛作用后,6.9～444 mg·L-1柠檬醛抑制K562细胞增殖呈时效性及量效性;111,222mg·L-1柠檬醛可诱导K562细胞凋亡,前者主要表现为诱导早期凋亡活性(4 h:4.3%,24 h:36.6%),后者则主要表现为诱导晚期凋亡活性(4 h:23.9%,24 h:52.4%);柠檬醛作用于K562细胞引起细胞氧化应激的改变,111 mg·L-1柠檬醛作用3 h使K562细胞MDA水平上升为对照组的3.29倍,而GST活性几乎完全抑制.不同浓度柠檬醛作用均引起细胞GSH水平下降.结论:柠檬醛胁迫可有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,细胞内GSH含量下降、柠檬醛高蓄积及ROS水平上升可能是其抑制作用的重要分子机制,而ROS途径可能是柠檬醛诱导细胞凋亡机制之一.     

蛇葡萄素对K562/ADR细胞耐药性的逆转作用及机制研究

目的:研究蛇葡萄素与阿霉素合用对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR增殖的抑制作用及其机制.方法:MTT法测定蛇葡萄素与阿霉素合用对K562/ADR细胞的细胞毒作用,应用金正均公式进行联合用药效果分析;藻红蛋白标记抗体检测蛇葡萄素对K562/ADR细胞膜表面P-糖蛋白表达的影响;流式细胞术测定蛇葡萄素对K562/ADR细胞内阿霉素累积的影响.结果:1.25～5 mg·L~(-1)的蛇葡萄素能够明显逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性.1.25 mg·L~(-1)蛇葡萄素与低浓度阿霉素合用可表现出拮抗效应,而浓度在2.5 mg·L~(-1)以上的蛇葡萄素与阿霉素合用可表现出相加至协同效应.蛇葡萄素能够浓度依赖性减少K562/ADR细胞膜P-糖蛋白表达,增加细胞内阿霉素的浓度.结论:蛇葡萄素能通过抑制P-糖蛋白外排药物,促进抗癌药物在细胞内的累积,增强抗癌药物对耐药细胞的细胞毒作用,逆转肿瘤多药耐药.     

辣椒素诱导白血病和肝癌细胞凋亡的比较研究

目的:比较合成辣椒素(N-Vanillylnonanamide)诱导白血病细胞K562及其多药耐药K562/ADM、肝癌HepG2细胞凋亡的作用.方法:以K562细胞、K562/ADM细胞和HepG2细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞法测定细胞周期和Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡.结果:MTT示合成辣椒素可抑制白血病细胞和HepG2细胞的增殖,根据同时期半数抑制浓度(IC50)示HepG2细胞最敏感,K562细胞较K562/ADM细胞敏感.合成辣椒素可阻滞细胞周期.合成辣椒素诱导24小时后Annexin V/PI双染色显示白血病细胞和肝癌细胞凋亡率升高;白血病敏感细胞株和耐药细胞株的对舍成辣椒素敏感性相似.结论:合成辣椒素可抑制白血病和肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡;辣椒素对药物敏感和耐受的白血病细胞的作用相似.     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的观察丹参酮Ⅱ_A(TanⅡ_A)对HL60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮Ⅱ_A对造血细胞的作用机理。方法以HL60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡ_A对HL60,K562细胞的作用,利用PCRTRAP方法检测TanⅡ_A处理前后HL60,K562细胞端粒酶活性的改变。结果经05μg·mL^-1TanⅡ_A作用6d后,HL60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为756%和563%。经丹参酮诱导后,HL60,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL60及K562细胞的cmyc,bcl2基因表达,上调cfos基因表达。HL60,K562细胞在TanⅡ_A作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为308%,508%。结论TanⅡ_A可明显抑制HL60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡。     

苦参碱抑制慢性粒细胞白血病K562细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的研究苦参碱在体外对人慢性粒细胞白血病(慢粒)K562细胞的生长抑制作用并探讨可能的分子机制。方法光学显微镜下观察苦参碱作用前后K562细胞的形态学改变;联苯胺染色观测K562细胞的红系分化趋势;MTT法检测苦参碱对K562细胞的增殖抑制效应;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对K562细胞的周期改变及早期凋亡作用。结果与阴性对照组相比,0.05,0.1和0.2 g/L苦参碱作用下的K562细胞均出现红系分化趋势,其中0.05 g/L的分化趋势最明显;MTT结果显示0.2,0.5及1.0 g/L苦参碱对K562细胞的生长抑制率分别为25.88%,46.96%和63.04%(P均<0.01),其中效作用浓度(IC50)为0.6 g/L;苦参碱可使K562细胞周期阻滞于S期,阻止细胞的有丝分裂,同时可诱导K562细胞凋亡:0.05,0.1和0.2 g/L苦参碱对K562细胞的早期凋亡率分别是11.60%,69.81%和44.12%,明显高于对照细胞的自发凋亡率(1.49%)(P均<0.01)。结论苦参碱对体外培养的人慢粒K562细胞具有显著抑制增殖作用,且可诱导细胞向红系分化和早期凋亡。     

解毒化瘀含药血清抗白血病细胞及白血病多药耐药细胞的体外实验研究

目的:以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。方法:采用MTT比色法,选择白血病细胞K562、HL-60及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A、HL-60/A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果:解毒化瘀含药兔血清对K562、HL-60及K562/A、HL-60/A均有明显的抑制作用,且对其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论:解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞凋亡的影响.[方法]采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用流式细胞仪(FCM)及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况.[结果]不同浓度灵芪胶囊含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成.[结论]灵芪胶囊含药血清具有诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关.灵芪胶囊含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关.     

半枝莲逆转白血病细胞株K562/A02耐药性的实验研究

目的:探讨半枝莲对白血病细胞株K562/A02耐药性逆转能力的影响。方法:体外培养K562细胞,分别加入高三尖杉酯碱(HHT)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)3种药物得到耐药细胞株K562/A02,MTT比色法检测半枝莲含药血清对3种K562/A02耐药性逆转作用的影响。结果:不同浓度的半枝莲含药血清均能够逆转K562/A02细胞的多药耐药性。结论:半枝莲在一定程度上能够逆转肿瘤细胞的多药耐药性,提高对化疗药物的敏感性。     

Molecular mechanism of matrine-induced apoptosis in leukemia K562 cells

Matrine, a low toxic alkaloid purified from the Chinese herb Kushen, has been reported to induce apoptosis in leukemia K562 cells. In this study, the mechanism underling this apoptotic event was investigated. Treatment of K562 cells with matrine resulted in inhibition of cell survival more significantly than treatment of non-cancer fibroblast NIH3T3 cells. When K562 cells were incubated with matrine in higher than 0.2 mg/ml doses for 48 hours, the apoptotic cells were increased and both poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) and caspase-3 were cleaved in a dose dependent manner. General caspase inhibitor (z-VAD-fmk) or caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) almost completely suppressed matrine-induced apoptosis. In addition, matrine increased proapoptotic protein bax and caused the release of cytochrome C. Taken together, the results suggest that matrine induces a cytochrome C-mediated, caspase-dependent apoptosis.     

独角莲含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的：观察独角莲含药血清在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用血清药理学方法制备独角莲含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察独角莲含药血清对K562细胞增殖的影响;采用流式细胞仪（FCM）及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况。结果：不同浓度独角莲含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。当含药血清作用96h后,其抑制作用开始减弱。流式细胞仪检测显示,独角莲含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较（P〈0.01）;DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成。结论：独角莲含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖、促进细胞分化和诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关。独角莲含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。     

葡萄籽原花青素增强X射线辐射敏感性的实验研究

目的:研究葡萄籽原花青素(GSPs)对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞和人白血病K562细胞的X射线增敏作用,并探讨其作用机制。方法:应用SRB法和集落形成法测定GSPs对三株细胞的X射线增敏作用,单因素方差分析确定各因素对细胞杀伤的贡献,单击多靶模型曲线拟合计算增敏比。结果:SRB检测结果表明,GSPs可以抑制三株细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应;但对不同细胞的增殖抑制作用差异较大,对人白血病K562细胞的抑制作用最强,对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞的抑制作用较弱;对X射线增敏作用结果表明,GSPs对人白血病K562细胞的增敏作用最强,最佳增敏剂量为6.25～12.5μg/mL,对人肝癌HepG2和人宫颈癌Hela细胞的增敏作用相似,最佳增敏剂量为12.5～25μg/mL;集落形成法检测结果表明,应用增敏剂量的GSPs后,对人白血病K562细胞表现出较好的辐射增敏作用,平均致死剂量D0值和准阈剂量Dq减小,细胞对X射线辐射敏感性增加,亚致死损伤修复减少,增敏比为1.94。结论:GSPs可以增强肿瘤细胞对X射线的敏感性,最佳增敏剂量为12.5～25μg/mL,其机理可能通过抗氧化作用,调节细胞细胞内氧平衡,诱导细胞产生G1期阻滞而发挥辐射增敏作用。