人工体神经-内脏神经反射弧传出通路神经追踪研究

目的：研究大鼠人工体神经－内脏神经反射弧传出神经元胞体及其纤维末梢的分布。方法：将建立了人工体神经－内脏神经反射弧的11只模型大鼠随机分为3组（n＝4、4、3），分别用荧光金（FG）结合快蓝（FB）、辣根过氧化物酶（HRP），麦芽凝集素－辣根过氧化物酶（WGA－HRP）逆行顺行神经追踪。结果：左侧盆神经节（MPG）注射FG，尿道外括约肌（EUS）左侧注射FB后，可见FG、FB单标神经元及FG和FB双标神经元主要分布于脊髓L3尾部至L5头侧左侧前角。膀胱肌层注射HRP后，在左侧MPG可见HRP阳性神经元，WGA－HRP注射入脊髓L4左侧前角顺行追踪显示，左侧MPG4和EUS内有HRP阳性神经末梢。结论：躯体运动神经（L4VR）可以再生替代内脏传出和躯体运动混合神经，再生的神经纤维部分直接支配EUS，部分终止于MPG，在MPG内换元，由节后神经元支配膀胱，躯体运动神经元同时支配MPG和EUS可能是人工体神经－内脏神经反射弧控制排尿的主要神经解剖学基础。     

体神经-内脏神经吻合后再生神经逆行追踪和组织化学研究

目的 对大鼠体神经-内脏神经（副交感神经）吻合后再生神经的物质转运功能和递质性质进行定性研究。方法 在建立了人工体神经-内脏神经膀胱反射弧的5只大鼠的左侧盆神经节（MPG）、尿道外括约肌（EUS）分别注射荧光金（FG）和快蓝（FB），通过逆行追踪检测再生神经的物质转运功能，酶组织化学方法检测再生神经中的乙酰胆碱酯酶（AChE）。结果 逆行追踪结果显示FG、FB单标神经元及FG和FB双标神经元主要分布于脊髓L3尾部至L5头侧左侧前角。神经吻合口远心端和近心端，以及支配膀胱的节前有髓神经纤维，支配EUS的有髓神经纤维多为AChE反应阳性。结论 人工体神经-内脏神经膀胱反射弧建立后，再生的传出神经有物质转运功能，体神经-内脏神经（副交感神经）吻合后再生神经纤维多为胆碱能。     

人工体神经-内脏神经反射弧恢复截瘫后直肠功能的神经追踪研究

目的 研究正常和建立人工体神经-内脏神经反射弧脊髓损伤大鼠肛门外括约肌-脊髓、直肠-盆神经节-脊髓之间的神经通路。方法 正常及建立人工体神经-内脏神经反射弧后截瘫的(以下简称模型组)雄性SD大鼠，用荧光金(FG)注射至肛门外括约肌(EAS)、直肠壁内、盆神经节(MPG)，行逆行神经追踪；模型组大鼠，采用麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶(WGA-HRP)作为顺行神经示踪剂，在大鼠脊髓左侧L4前角注入WGA-HRP。结果 正常组和模型组大鼠直肠壁注入FG后，MPG主体部可见大量标记神经元。正常组将FG注射入MPG后。FG标记神经元位于脊髓L6～S1骶髓副交感核(SPN)、后联合灰质核。正常鼠FG注射入肛门外括约肌后．标记神经元主要位于L5～S1脊髓的背内侧核(DM)区．背外侧核(DL)区可见少量标记神经元。模型组大鼠将FG注入盆神经节或肛门外括约肌后，左L4前角均可见FG标记神经元；左L4前角注入WGA-HRP后，肛门外括约肌和左侧MPG中均可见HRP阳性神经末梢。结论 正常大鼠盆神经节支配直肠的神经元主要分布于MPG主体部；脊髓内支配盆神经节的神经元主要位于脊髓L6～S1节段SPN；支配肛门外括约肌的运动神经元主要位于L5～S1脊髓DM区。建立人工反射弧后。大鼠L5～S1脊髓L4前根与L6前根吻合后所形成的“异类神经纤维”在MPG换元后，支配直肠壁和EAS。     

人工体神经-内脏神经反射弧控制下大鼠盆底横纹肌运动神经元的定位分布

目的研究正常大鼠及建立人工体神经-内脏神经反射弧截瘫后，支配大鼠盆底肌肉运动神经元胞体的分布。方法雄性SD大鼠35只，随机分为正常组（n=10）：大鼠不作任何处理；模型组（n=25）：大鼠建立人工体神经一内脏神经反射弧截瘫。于造模后6个月，取正常组（n=10）及模型A组（n=20）大鼠行荧光金（fluorogold，FG）注射至尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌及肛门外括约肌，行逆行神经追踪，荧光显微镜观察FG阳性神经细胞。采用麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶（malt agglutinator binding horseradish peroxidase，WGA—HRP）作为顺行神经示踪剂，取模型B组（n=5）大鼠左侧L1前角注入WGA—HRP，经3，3’，5，5’-四甲基联苯胺（3，3’，5，5’telramethyl benzidine，TMB）-HRP显色后，光镜下观察大鼠尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌及肛门外括约肌内神经纤维末梢。结果注射FG后，正常组：尿道外括约肌或坐骨海绵体肌标记神经元位于脊髓L5～S1段前角背外侧核；球海绵体肌或肛门外括约肌，标记神经元位于脊髓L5-S1段前角背内侧核；模型A组：尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌及肛门外括约肌，左侧L1前角均可见FG标记神经元。模型B组：大鼠左侧L1前角注入WGA—HRP后，尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌及肛门外括约肌内可见大量神经纤维末梢着色。结论正常大鼠盆底横纹肌运动神经元主要位于L4前角，人工体神经-内脏神经反射弧下盆底横纹肌运动神经元主要分布于L4前角；脊髓L4前根与L6前根吻合后形成的“异类神经纤维”发出运动神经纤维支配尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌及肛门外括约肌。     

人工体神经-内脏神经反射弧传出神经元递质研究

目的研究大鼠人工体神经-内脏神经反射弧传出神经递质性质。方法将建立了人工体神经-内脏神经反射弧的8只模型大鼠随机分为2组(n=4)，1组大鼠的左侧盆神经节(MPG)内注射荧光金(FG)，2组大鼠的尿道外括约肌(EUS)注射辣根过氧化物酶(HRP)，通过免疫组织化学方法显示FG、HRP阳性标记细胞中的中的胆碱已酰转移酶((3hAT)。结果FG、HRP逆行追踪结果显示，FG、HRP阳性标记细胞主要分布于脊髓L3尾部至L5头侧左侧前角。FG标记和ChAT阳性双标细胞约占FG标记阳性细胞的88％(133／151)；HRP标记和ChAT阳性双标细胞约占HRP标记阳性细胞的91％(93／102)。结论人工体神经，内脏神经反射弧传出神经元的神经递质主要是乙酰胆碱，体神经和内脏神经(副交感节前神经)吻合后再生神经主要递质没有改变。     

雄性大鼠盆底横纹肌运动神经元的定位分布

目的：探讨研究正常雄性大鼠盆底横纹肌运动神经元的定位分布。方法：分别用辣根过氧化物酶(HRP)、荧光金(FG)注射于正常雄性SD大鼠的尿道外括约肌、坐骨海绵体肌、球海绵体肌、肌门外括约肌，行逆行神经追踪。结果：尿道外括约肌或坐骨海绵体肌注射HRP或FG后，标记神经元位于脊髓L5～S1段前角背外侧核；球海绵体肌或肛门外括约肌注射HRP或FG后，标记神经元位于脊髓L5～S1段前角背内侧核。结论：雄性大鼠支配盆底横纹肌的运动神经元位于两个区域：支配坐骨海绵体肌运动神经元聚集分布于脊髓L5～S1(以L6多见)段前角背外侧核；支配球海绵体肌和肛门外括约肌的运动神经元主要聚集分布于脊髓L5～S1(以L6多见)段前角背内侧核。     

大鼠膀胱低位控制中枢的形态学研究

目的从形态学上研究膀胱交感中枢和副交感中枢之间的联系。方法通过神经追踪的方法，在SD大鼠的腹下神经和盆节给予银光金（FG），确定膀胱的交感和副交感低位控制中枢的部位，于膀胱交感控制中枢及骶副交感核（SPN）分别给予辣根过氧化物酶（HRP）和结合麦芽凝集素的辣根过氧化物酶（WGA-HRP），分别在腰6至骶1（L6-S1）和腰1至腰2（L1-L2）节段检测逆行标记细胞和顺行标记末梢，并且通过免疫组织化学的方法鉴别副交感节前神经元（乙酰胆碱转移酶阳性）和中间神经元。结果腹下神经和盆节给予FG。逆标交感节前神经元主要位于L1，L2节段的后联合核（DCN）及双侧中间侧细胞柱（IML）。副交感节前神经元位于L6，S1节段的骶副交感核（SPN）。于L1-L2节段IML区给予HRP，在SPN的背内侧发现有逆标胞体较小的非胆碱能性神经元。于SPN中电泳入WGA-HRP，在L1-L2节段的IML区发现有顺行标记的神经末梢。结论膀胱的低位交感中枢和副交感中枢之间存在有形态学上的联系，骶副交感核（SPN）背内侧组的中间神经元可能在两者之间起协调作用。     

大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配

目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.     

大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配

目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.     

大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配

目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.     

内脏神经-体神经端侧吻合后神经再生方式的研究

目的 通过内脏神经-体神经端侧吻合建立人工体神经-内脏神经反射弧大鼠模型25只,荧光双标追踪技术研究神经再生方式.方法 在成活的21只模型鼠左侧盆神经节(MPG)内注射0.5μl荧光金(FG),腰4前根(L_4VR)的外周神经-坐骨神经注射1μl快蓝(FB)进行逆行神经追踪.应用组织化学方法 对吻合口远端的神经根(L6VR)进行甲苯胺蓝染色.结果 逆行追踪结果显示FG单标和FG-FB双标神经元主要分布于脊髓L_4左侧前角,FB单标神经元主要分布于脊髓L_3-L_6左侧前角.脊髓腰4节段每张切片上FG单标神经元、FB单标神经元、FG-FB双标神经元数目分别为(20.8±3.3)、(5.7±1.3)、(10.3±0.7).吻合口远端(L_6VR)再生的神经经甲苯胺蓝染色后可见轴突呈深蓝色.结论 逆行追踪结果证明内脏神经.体神经端侧吻合建立人工体神经.内脏神经反射弧后,体神经可以通过侧枝发芽的方式长入并替代内脏神经.     

Neuroanatomical studies on the urine storage facilitatory areas in the cat brain. Part I. Input neuronal structures to the nucleus locus subcoaruleus and the nucleus radicularis pontis oralis]

Input neuronal structures to the nucleus locus subcoeruleus (LSC) and the nucleus reticularis pontis oralis (PoO) were investigated by the horseradish peroxidase (HRP) study in cats. Under halothane anesthesia, a double barreled electrode was inserted into the LSC where electrical stimulation increased bladder capacity and the external urethral sphincter muscle activity, and into the PoO where chemical stimulation with carbachol increased bladder capacity and decreased the external urethral sphincter muscle activity. After identification of these regions, the HRP was ionphoretically injected into the LSC or PoO. By injecting the HRP into the LSC, retrogradely HRP labeled cells were located broadly in the frontal, rectal, orbitalis, rostral cingulate, internal aspect of posterior sigmoidal and anterior sylvian gyli, nucleus corticomedialis of amygdala, lateral area of the hypothalamus, paraventricular hypothalamic nucleus, substantia nigra, periaqueductal gray, reticular formation of the mesencephalon, pons and medulla, cerebellar nuclei and intermediate gray of the spinal cord. By injecting the HRP into the PoO, retrogradely HRP labeled cells were located broadly in the frontal, rectal, orbitalis, internal aspect of the posterior sigmoidal and anterior sylvian gyli, lateral area of the hypothalamus, paraventricular hypothalamic nucleus, periaqueductal gray, reticular formation of the mesencephalon, pons and medulla, cerebellar nuclei and intermediate gray of the spinal cord. These areas where HRP labeled cells were located mostly corresponded to the areas where electrical stimulation evoked either bladder relaxation or contraction in the previous reports. The LSC and the PoO seem to perform important roles in the neuronal mechanism for urine storage, receiving the inputs which facilitate or inhibit micturition from the extended areas between the cerebral cortex and the sacral spinal cord.     

体神经-内脏神经吻合术修复脊髓损伤大鼠排便功能及机制研究

目的 应用肛肠动力学和神经形态学技术观察体神经-内脏神经吻合术后,在脊髓损伤(SCI)大鼠的所形成的再生异类神经通路对肛管直肠的支配功能及直肠平滑肌-肛门外括约肌的协同,并探讨其机制.方法 在成年雄性SD大鼠(250～300 g)的L4～L6椎管内,将左侧L4前根(L4VR)与左侧L6前根(L6VR)分别离断后,通过端端显微吻合技术,人工建立L4VR～L6VR异类神经前根.保留L4背根(L4DR)来传导传人信号.术后12周行T9～T10椎间脊髓横断,8周后将12只模型大鼠随机分为2组(n1=8,n2=4).取1组8只模型大鼠进行肛肠动力学研究;取2组4只模型大鼠进行神经形态学研究.结果 (1)电刺激吻合口近端神经及左侧坐骨神经,在引起直肠压力升高的同时出现肛门外括约肌的肌电活动大幅减弱;而电刺激自身对照侧L6VR,在引起直肠压力升高的同时出现肛门外括约肌肌电活动明显增强.(2)主要在模型鼠脊髓L4节段左侧前角(脊髓L3尾部至L5头侧均有阳性神经元)可见FG与TMR双标神经元及FG、四甲基罗丹明单标神经元;正常鼠神经逆行追踪未见双标神经元.结论 体神经-内脏神经吻合术可有效修复脊髓损伤大鼠肛管直肠功能,改善脊髓损伤后的直肠平滑肌-肛门括约肌协同失调.在模型大鼠脊髓L4节段新出现的双标神经元同时支配着盆神经节和肛门外括约肌,这可能是体神经-内脏神经吻合术修复模型大鼠排便功能主要神经解剖学基础.     

Efferent and afferent neuronal hypertrophy associated with micturition pathways in spontaneously hypertensive rats

Elevated nerve growth factor secreted by bladder smooth muscle may be associated with noradrenergic hyperinnervation of the bladder and hyperactive voiding in spontaneously hypertensive rats (SHR) and rats with bladder outlet obstruction. The present study was undertaken to determine if changes occur in efferent and afferent pathways supplying the SHR bladder similar to those in rats with bladder outlet obstruction. Fluoro-Gold (FG) retrograde tracing studies were conducted to examine the postganglionic efferent limb (major pelvic ganglion; MPG) and sensory afferent limb (L₁, L₂, L₆, and S₁ dorsal root ganglion; DRG) of the micturition reflex pathway of the SHR and Wistar-Kyoto (WKY) normotensive rat. A significant increase in cross sectional area profiles for labeled neurons in the MPG was observed in SHRs (830.5 ± 9.0 μm²) as compared to WKYs (736.3 ± 16.6 μm²). Neuronal cell areas in L₂ (1,010.9 ± 18.6 μm²) and S₁ (1,024.6 ± 28.3 μm²) of SHRs were significantly larger than those of WKYs (L2, 865.3 ± 12.6 μm²; S1, 778.3 ± 11.2 μm²). There was an increase in number of labeled cells in L₆ within SHRs over WKYs. These results provide evidence that both efferent and afferent changes in neuronal innervation of the bladder occur in SHRs. The SHR strain may represent a genetic model to study changes in micturition reflex pathways that result from alterations in neuronal morphology such as those that occur with urethral outlet obstruction. Neurourol. Urodynam. 16:293–303, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.