安宫牛黄丸对大鼠脑出血后TNF-α表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）后肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,HE染色计数各组48h血肿周围炎性细胞个数,RT-PCR分析各组TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组TNF-α蛋白的表达变化。结果安宫牛黄丸治疗明显减少大鼠实验性脑出血后血肿周围炎性细胞个数,抑制脑出血后TNF-αmRNA,TNF-α蛋白的表达。结论安宫牛黄丸能够有效降低大鼠脑出血后TNF-α的表达,对脑出血后的炎症反应具有抑制作用。     

PPARs激动剂对大鼠脑缺血再灌注早期炎症反应及血脑屏障通透性的影响

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）激动剂苯扎贝特对大鼠局灶性脑缺血再灌注早期炎症反应以及血脑屏障通透性的影响,探讨PPARs激动剂是否对缺血再灌注脑损伤有保护作用。方法：制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型（MCAO／R）,随机分为对照组和苯扎贝特干预组,每组10只。分别检测各组脑含水量以及脑组织伊文思蓝含量．观察PPARs激动剂对大鼠脑水肿和血脑屏障破坏程度的影响;紫外分光光度法检测脑组织髓过氧化物酶（MPO）活性;免疫组化法观察白介素-β（IL—1β）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达变化。结果：与对照组相比较,苯扎贝特治疗组大鼠脑含水量减少（P〈0．05）及脑伊文思蓝含量下降（P〈0．01）;缺血脑组织MPO活性降低（P〈0．01）;炎症因子IL-1β和MMP-9蛋白表达水平下降（P〈0．01）。结论：PPARs激动剂苯扎贝特能够减轻缺血再灌注早期血脑屏障损害。其保护作用与抑制炎症有关。     

水蛭素对大鼠脑出血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的作用

目的：研究水蛭素对脑出血后血脑屏障（blood brain barrier,BBB）通透性和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的影响。方法：采用自体动脉血注入法制作大鼠脑出血模型,伊文思蓝法检测BBB通透性,Western blot法检测claudin-5的表达。结果：脑出血模型组及水蛭素组BBB通透性于出血后明显增加（P〈0.01）,同时水蛭素组BBB通透性低于脑出血模型组（P〈0.01）;claudin-5的表达在脑出血模型组和水蛭素组于出血后明显减少（P〈0.01）,水蛭素组的表达明显高于脑出血模型组（P〈0.01）。结论：调节紧密连接相关蛋白claudin-5的表达,进而调节BBB的通透性可能是水蛭素抑制脑水肿形成的途径之一。     

丁苯酞联合依达拉奉对局灶性脑梗死大鼠皮质血脑屏障及咬合蛋白表达的影响

目的探讨丁苯酞联合依达拉奉对局灶性脑梗死大鼠皮质血脑屏障及咬合蛋白表达的影响。方法选取成年SD雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组、丁苯酞组、丁苯酞联合依达拉奉组,每组15只。各组于模型制作成功后72h采用伊文思兰渗出法检测大鼠血脑屏障通透性变化,免疫组织化学和Western blot检测损伤区周围皮质咬合蛋白表达变化。结果与对照组比较,模型组、丁苯酞组、丁苯酞联合依达拉奉组梗死区大脑皮层血脑屏障通透性均增加,皮质咬合蛋白表达均减少。与模型组相比,丁苯酞组和丁苯酞联合依达拉奉组皮质脑组织伊文思蓝渗出量减少,皮质咬合蛋白表达增加。与丁苯酞组比较,丁苯酞联合依达拉奉组伊文思蓝渗出量减少,咬合蛋白表达量增加。结论丁苯酞软胶囊可保护血脑屏障,增加大脑皮质咬合蛋白的表达。与依达拉奉联合应用保护血脑屏障、增加咬合蛋白表达作用更明显。     

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响

目的：通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的活性及脑组织中伊文思蓝的含量，探讨灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法：复制脑缺血再灌注模型，并于术前15min腹腔注射灯盏花素注射液10mg／kg，采用明胶酶谱分析法检测脑组织海马区明胶酶的活性，同时经尾静脉注射2％伊文思蓝，检测脑组织伊文思蓝含量。结果：脑缺血再灌注后明胶酶（A、B）活性增加；灯盏花素组MMP-9活性明显低于脑缺血再灌注组，而灯盏花素对MMP-2作用不显著。脑缺血再灌注后4h起脑组织伊文思蓝渗出逐渐增多，48h达高峰，以后有下降趋势。灯盏花素组于术后伊文思蓝渗出明显低于相应时间的脑缺血再灌注组（P〈0．05）。结论：灯盏花素具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B的活性、降低血脑屏障通透性的作用。     

安宫牛黄丸对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达及髓过氧化物酶活性的影响

【目的】观察安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔术致脓毒症模型大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGBI）mRNA表达及髓过氧化物酶（MPO）活性的影响。【方法】75只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,脓毒症模型组（cI．P组）,1α-氰基-（3,4-羟基）N-苄苯乙烯胺组[AG490组,术前0．5h皮下注射8mg／kg的Janusk激酶2（JAK2）抑制剂AG490],雷帕霉素（RPM）组[RPM组,术前0．5h皮下注射0．4111g／kg的信号转导和转录激活子（STAT）抑制剂RPM],安宫牛黄丸低、中、高剂量纽（术前0．5h和术后6h按1．0、2．0、3．0g／kg剂量灌胃）。于造模后24h活杀动物,留取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肺组织HMGBI mRNA表达水平,同时测定MPO活性。【结果】与正常对照组比较,CLP组肺组织HMGB1 mRNA表达显著增强（P〈0．01）,MPO活性显著增高（P〈0．05）。与CLP组比较,AG490组、RPM组以及安宫牛黄丸低、中、高剂量组HMGB1 mRNA表达显著下调（P〈0．01）,AG490组、RPM组以及安宫牛黄丸低、中剂量组MPO活性显著降低（P〈0．05或P〈0．01）、【结论】安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用与AG490、RPM等JAK/STAT信号通路抑制剂相似,可下调肺组织HMGB1基因表达,降低肺组织MPO活性,减轻腹腔感染所致的急性肺损伤。     

依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

[摘要] 目的 观察自由基清除剂依达拉奉对创伤性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨自由基清除剂保护血脑屏障的作用机制。方法 采用大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,通过测定渗出血管外的EB（伊蓝）含量来评价BBB通透性的变化,采用免疫组化的方法检测各组大鼠脑MMP-9的表达。结果 脑缺血再灌注后3h脑组织EB渗出量增加,1d时达到高峰,2d以后逐渐减小。MMP-9在缺血再灌注12h起显著显著增加,2d达高峰期,依达拉奉组脑组织EB渗出量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01)。结论 脑缺血后MMP-9表达增高,BBB通透性增加。自由基清除剂依达拉奉可以保护BBB,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关。     

脓毒症大鼠基质金属蛋白酶表达与血脑屏障通透性改变的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在脓毒症相关性脑病(SAE)发病机制中的作用。方法:通过盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒症大鼠模型,取健康雄性SD大鼠72只,随机分为对照组(C)、CLP 24 h模型组(CLP24 h)、CLP48 h模型组(CLP48 h)和CLP 72 h模型组(CLP72 h),每组18只。每组随机取6只大鼠用于伊文思蓝渗透法分析血脑屏障通透性变化,6只大鼠用于ELISA检测血清TNF-α和Western blot检测脑皮质紧密连接蛋白Occludin。另外6只用于免疫组化检测皮质区MMP-9表达。结果:与C组比较,TNF-α、血脑屏障通透性在造模后24 h升高(P<0.05),72 h达到最高;与C组比较,MMP-9在造模后72 h表达增高,Occludin在造模后72 h表达下降(P<0.05)。结论:脓毒症晚期脑MMP-9表达增多,Occludin表达下降,血脑屏障通透性改变可能是SAE的发病机制。     

远程缺血后处理对局灶性脑缺血大鼠血脑屏障通透性的影响

目的：探讨远程缺血后处理（ RIP）对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响及其脑保护作用机制。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型（MCAO）,并将大鼠随机分为Sham组、MCAO组、RIP组。 Sham组不进行线栓阻断血流,MCAO组仅造模,RIP组在MCAO模型再灌注开始时,用橡皮筋扎紧大鼠双下肢10 min／次,放开10 min,共3次。造模1、7 d后处死大鼠并取材。通过伊文思兰检测血脑屏障通透性,免疫组化检测MMP－9、TIMP－1的表达情况。结果与MCAO组比较,再灌注1 d及7 d,RIP组脑组织伊文思蓝含量均明显降低（P＜0.05）。再灌注1 d,RIP组TIMP－1的阳性细胞数较MCAO组明显增多（P＜0.05）,而MMP－9的阳性细胞数则明显减少（ P＜0.05）。再灌注7 d,与MCAO组比较,RIP组MMP－9、TIMP－1阳性细胞数差异均无统计学意义（ P＞0.05）。结论 RIP可抑制脑缺血后早期MMP－9的表达,提高TIMP－1水平,从而减轻血脑屏障的损害。     

饱和脂肪酸对大鼠主动脉MMP-9表达的影响及机制探讨

目的观察饱和脂肪酸对大鼠主动脉MMP-9表达的影响及非诺贝恃（Fcnofibrate）的保护作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为三组：对照组（n=10）、高脂组（n=10）、高脂加PPAR-a激活剂组（非诺贝特，n=10）。喂养20周后，RT-PCR测定大鼠主动脉MMP-9和PPAR-a的mRNA水平：Western blot测定大鼠主动脉MMP-9和PPAR-a的蛋白水平。结果（1）与对照组相比，高脂组大鼠血脂水平明显增高，加用非诺贝特后，大鼠血脂水平得以改善；（2）高脂组大鼠（HF）主动脉MMP-9的mRNA水平和蛋白水平均明显高于对照组（N）（P〈0．01），PPAR-a的mRNA水平和蛋白水平则低于对照组（N）（P〈0．05）：（3）高脂加PPAR-a激活剂组（HF＋FF）较之于高脂组（HF），PPAR-a的mRNA水平和蛋白水平明显增高（P〈0．01），而MMP-9的mRNA水平和蛋白水平则明显降低（P〈0．01）。结论高脂饮食可明显增加大鼠主动脉MMP-9表达，PPAR-a表达下降是其可能机制；PPAR-a激活剂（非诺贝特）可上调PPAR-a表达，降调MMP-9水平，可能对动脉AS的发生和发展起到保护作用。     

高压氧对蛛网膜下腔出血大鼠脑内基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在蛛网膜下腔出血(SAH)后的表达的影响及其对血脑屏障(BBB)的保护作用。方法:采用自体股动脉血枕大池单次注血法建立大鼠实验性SAH模型。造模成功后分不同时间点对HBO组给予高压氧暴露。并分不同时间点测脑含水量、BBB通透性及MMP-9的表达情况。结果:SAH后各组脑含水量、BBB通透性、MMP-9表达较Sham组显著升高(P<0.05),但在同一时间点HBO组较SAH组脑含水量、BBB通透性、MMP-9表达显著减少(P<0.05)。结论:HBO可能通过抑制MMP-9的表达,减轻了BBB的破坏,从而减轻脑水肿,对大鼠SAH后BBB具有保护作用。     

安脑平冲汤对大鼠脑出血后脑水肿及MMP-2/9蛋白表达的影响

目的观察安脑平冲汤对大鼠脑出血后脑组织含水量和MMP-2/9蛋白表达的影响。方法以Ⅳ型胶原酶注射法建立大鼠脑出血模型,观察正常组及假手术组、模型组、治疗组术后12 h、24 h、48 h、72 h、120 h大鼠脑组织含水量及MMP-2/9蛋白的表达水平。结果 (1)脑组织含水量:模型组术后各时点均高于假手术组(P<0.05),而治疗组各时点均低于模型组(P<0.05)。(2)MMP-2/9水平:模型组术后各时点较假手术组均升高(P<0.01);而治疗组与模型组比较,MMP-2蛋白表达在24～120h时点降低(P<0.05),12 h时点差异不明显(P>0.05);MMP-9蛋白表达在24 h、48h、120 h时点降低(P<0.05),12h和72h时差异不明显(P>0.05)。结论安脑平冲汤可以在一定程度上减少MMP-2/9蛋白的表达,减轻脑出血后脑水肿。     

大鼠脑出血后MMP-2和MMP-9的动态表达及七叶皂苷钠对其表达的影响

目的观察大鼠脑出血（ICH）后基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9蛋白动态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系,以及观察七叶皂苷钠对MMP-2、MMP-9表达的影响。方法Wistar大鼠250只随机分为4组：正常对照组10只、假手术组80只、ICH组80只和七叶皂苷钠治疗组80只,于制模后6、12、24、48、72、120h、7d和15d 8个时间点,测定各组血肿周围脑组织含水量、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果治疗组神经功能缺失较ICH组明显改善（P〈0.05）;6-120h治疗组血肿周围脑组织含水量较ICH组明显减少（P〈0.05）;ICH后MMP-2蛋白表达在6h达到高峰,12h时下降,与正常对照组相比,MMP-2蛋白表达具有统计学意义（P〈0.01）;治疗组MMP-2蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少（P〈0.01）;ICH后MMP-9蛋白表达在6h开始上升,24-48达高峰,72h时下降,与正常对照相比,具有统计学意义（P〈0.01）,其表达水平与血肿周围脑组织含水量呈正相关（r=0.949,P〈0.05）;治疗组MMP-9蛋白表达在各时间点ICH组明显减少（P〈0.01）。结论大鼠ICH后MMP-2、MMP-9蛋白的表达是ICH后早、中期脑水肿形成主要因素,七叶皂苷钠能降低MMP-2、MMP-9蛋白表达和脑组织含水量,对ICH具有保护作用。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血后脑水肿及MMP-9的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血(ICH)后脑水肿的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,断尾取自体血法制备大鼠ICH模型,治疗组于造模1小时后腹腔注射重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)60μg/kg。3组大鼠于术后6、12、24、48、72h和7d处死,干湿重法测定脑组织含水量,免疫组化染色观察MMP-9的动态表达。结果模型组脑组织含水量明显高于假手术组(P<0.05),在造模后48、72h最明显,且与6、12、24h和7d相比差异显著(P<0.05);治疗组脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05)。模型组脑组织MMP-9的表达明显高于假手术组(P<0.05);治疗组各时间点MMP-9的表达低于模型组(P<0.05)。结论 G-CSF可减轻ICH后脑水肿程度,其机制可能与G-CSF抑制MMP-9表达密切相关。     

大鼠脑出血后HIF-1α表达与血脑屏障通透性相关分析

目的探讨血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白的表达变化与血脑屏障（BBB）通透性之间的关系。方法SD大鼠56只随机分假手术对照组（sham组）和脑出血组（ICH组）。ICH组又分为6h组、24h组、3d组、7d组和14d组,每组8只。采用自体血脑内注射法建立脑出血动物模型,测定血肿周边脑组织中伊文思蓝（EB）外渗量,以EB外渗量反映BBB通透性的变化,以免疫组化方法检测脑出血后不同时间血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白表达情况,并应用干湿比重法测定脑组织含水量。结果脑出血后3d内,BBB通透性和脑组织含水量均呈进行性增加,并于出血后第3d达到高峰,此后逐渐下降,对照组与出血组脑组织含水量及BBB通透性比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;脑出血组HIF-1α蛋白阳性表达率60.42%（29/48）,对照组HIF-1α蛋白阳性表达率为0%,二者相比差异有统计学意义（P〈0.05）;脑出血后,HIF-1α蛋白表达于出血后3d达到高峰并维持到第7d,脑出血后不同时间阳性率比较差异有统计学意义（P〈0.05）。HIF-1α的表达变化与BBB通透性和脑组织含水量均呈正相关（P〈0.05）。结论HIF-1α在血肿周边脑组织中的表达与BBB通透性改变及脑水肿的形成和发展密切相关。     

电针水沟穴对高血压性脑出血大鼠脑水肿及血脑屏障影响的动态观察

目的:观察大鼠急性脑出血后脑水肿变化和血脑屏障(BBB)的损伤情况及电针水沟穴对其产生的影响。方法:在自发性高血压大鼠(SHR)的基础上,参照胶原酶加肝素脑内尾状核联合注射的方法造模。实验分为对照组、假手术组、模型组和电针组,各组按6 h、1 d、3 d、7 d再分为4个亚组。分别采用干湿重法和伊文斯蓝法观察各组大鼠脑组织含水量及伊文斯蓝(EB)含量的变化情况。结果:模型组各时相大鼠脑组织含水量和伊文斯蓝(EB)含量较对照组显著增加(P<0.01),电针组各时相大鼠脑组织含水量和EB含量与模型组相比都有显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:电针水沟穴可降低高血压性脑出血大鼠脑血管通透性,减轻脑水肿。     

大鼠局灶性脑挫裂伤不同损伤区域水通道蛋白4表达变化的实验研究

目的探索水孔通道蛋白4（AQP4）在局灶性脑挫裂伤（CCII）不同损伤区域表达变化,及其对创伤性脑水肿血脑屏障（BBB）的影响。方法雄性成年Wistar大鼠,随机分为假手术组和CCII组,其中CCII组分为损伤中心组和损伤外周组。参照改良Feeney’s自由落体硬膜外撞击法制作CCII模型。结果损伤中心组和损伤周围组脑组织含水量明显高于假手术组;免疫组织化学结果显示损伤中心组在各检测时间点的AQP4含量和伊文思蓝（EB）含量均明显高于假手术组和损伤周围组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CCII后AQP4蛋白的表达变化趋势和BBB的通透性相一致;损伤中心AQP4含量与损伤周围AQP4含量存在差异,这与相应区域的脑组织水肿类型相关。脑挫裂伤外周水肿带AQP4含量是降低的,损伤中心部位AQP4含量是升高的。损伤中心以血管源性脑水肿为主,脑挫裂伤外周水肿带以细胞毒性脑水肿为主。     

L-硝基-精氨酸甲酯对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障功能和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障功能和MMP-9表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将60只SD大鼠随机分为3组:1假手术组;2对照组;3L-NAME治疗组。用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,再灌注48h后干湿重法测定缺血脑组织含水量,用伊文思蓝测定血脑屏障通透性,免疫组织化学技术检测MMP-9的表达,同时电镜观察血脑屏障的变化。结果:脑缺血再灌注48h,对照组缺血侧脑含水量明显升高,EB含量也明显增加,电镜观察发现血脑屏障破坏严重,MMP-9的表达也较假手术组显著增加;而应用L-NAME处理的大鼠其缺血脑组织含水量明显减少,缺血侧EB含量较对照组也明显降低(P<0.05),同时电镜观察到血脑屏障的破坏减轻,而MMP-9表达水平也明显低于对照组。结论:L-NAME对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制MMP-9表达来实现的。     

安宫牛黄丸对自发性高血压脑出血大鼠血肿周围组织NF-κB及NO表达的影响

目的探讨原发性高血压脑出血后,安宫牛黄丸对血肿周围组织细胞凋亡与核转录因子-κB（NF-κB）的表达、NO含量的干预作用。方法采用自体血注入法制作脑出血模型,分为模型组、中药组、西药组、中西药结合组进行干预治疗研究,采用免疫组化方法测定NF-κB的表达,并测定血清中NO含量。结果中西药结合组、中药组、西药组NF-κB的表达明显高于模型组（P〈0.05）,各治疗组之间无统计学差异（P〉0.05）。中西药结合组血NO含量明显低于其他三组（P〈0.05）,中西药结合组、中药组、西药组脑组织血NO含量均低于模型组（P〈0.05）,中药组与西药组间NO含量相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论安宫牛黄丸结合西药应用于原发性高血压脑出血急性期可减轻急性期脑组织损伤,其作用机制可能与减少血NO含量有关。