大连市肠道病毒71型VP1区段基因特征分析

目的:了解大连市手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)分离株的基因特征。方法:从手足口患者粪便标本中分离EV71病毒,经RT-PCR扩增VP1全长,并进行核苷酸序列分析。结果:4株EV71分离株与C4亚型代表株具有较高的核苷酸和氨基酸序列同源性。在系统进化树上,4株EV71分离株与C4亚型代表株处于同一分支。结论:大连市手足口病患者中分离的EV71属C4亚型。     

北京地区2006-2008年肠道病毒71型VP1区基因特征分析

目的 了解2006-2008年北京地区分离的不同来源肠道病毒71型(EV71)VP1区基因特征.方法 从手足口病例、急性弛缓性麻痹病例和健康儿童的粪便、咽拭子和疱疹液标本中分离EV71病毒株,选取其中9株EV71分离株,采用RT-PCR扩增VPl区全长基因片段并进行序列测定、系统发生树构建、核苷酸同源性及组内和组间进化距离分析.结果 9株EV71在系统发生树上与C基因型中的C4亚型代表株属同一分支;在核苷酸同源性分析中,9株分离株与C4亚型代表株的同源性达到92.1%～93.9%,明显高于与C1、C2、C3亚型代表株的同源性(分别为88.8%～89.5%、89.4%～90.0%和88.4%～89.3%);三种不同来源的分离株病毒之间具有较高的同源性(95.9%～100.0%),但与1998年分离的C4亚型代表株的同源性却较低(分别为93.3%～93.9%和92.1%～92.9%).在进化距离的分析上,C4亚型内各组间距离较大,尤其是亚型代表株与分离株之间距离最大(D=0.052～0.071).结论 2006-2008年北京地区流行的EV71仍然是C4亚型,在同一时间不同地区、不同来源、不同疾病状态卞分离的EV71在VP1区全长基因序列上无明显差别;但是随着时间推移,核苷酸变异的不断积累,出现新亚型的概率也在不断增加,因此有必要加强分离株的监测以掌握EV71的变异趋势.     

浙江省肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析

目的研究浙江省手足口病患者中肠道病毒（EV）71型分离株的病毒基因特征。方法采集手足口病患者粪便、疱疹液和咽拭子标本，进行病毒分离和逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）特异性扩增进行鉴定，同时选取其中6株EV71分离毒株，对其抗原决定簇部位VP1区进行核苷酸序列测定并参考EV71A、B、C各基因型的参考毒株和以往中国EV71的分离毒株进行同源性分析和构建系统发生树。结果从14份标本中分离出EV9株，经中和试验和RT—PCR特异性扩增，均证实为EV71。其中6株EV71分离毒株与A、B基因型参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为82．9％～85．5％和94．9％～98．0％；与C基因型比较，同源性分别为89．2％～94．1％和97．0％～99．0％。而与C基因型的C1、C2、C3、C4亚型代表株的核苷酸同源性分别为91．0％～92．2％、90．2％～90．3％、89．2％～89.5％、96．7％～96．9％，其中与国内以往分离到的C4亚型毒株的核苷酸同源性可达93.8％～97．1％。在系统发生树上，这6株毒株均在C基因型中，与属C4亚型的11株毒株属同一分支。结论浙江省手足口病患者中分离的EV71毒株属C基因型的C4亚型。     

2009年河南肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的了解河南省2009年肠道病毒71型（EV71）流行株VP1基因特征。方法采用RT-PCR方法从手足口病患者粪便、咽拭子样品中扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建序列遗传发育树。结果 262份样品中,VP1基因RT-PCR扩增鉴定结果显示111份样品阳性,选取其中20份样品进行VP1基因全序列测定,结果显示其与C4亚型代表株核苷酸同源性为90.8%～93.6%,氨基酸同源性为94.0%～99.3%。结论河南省手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型。     

2008年余姚市肠道病毒71型检测与VP1基因特征分析

目的研究2008年余姚手足口病主要病原肠道病毒71型(EV71)毒株的分子生物学特征。方法收集手足口病患者粪便样品,用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EV71,选择5个代表性样品进行VP1基因的扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用DNAstar软件进行比对分析。结果 52例手足口病患者大便样品中检测到EV71阳性,阳性率为69.3%。5个代表株与A、B和C基因型标准株VP1基因核苷酸同源性分别为81.9%~82.2%、83.7%~84.3%和94.9%~95.3%,5个毒株之间的核苷酸同源性波动于96.2%~99.9%。在基因系统发生树上,这5个毒株均属于C基因型。结论本研究表明引起2008年余姚手足口病的主要病原是EV71毒株,它属于C基因型。     

北京市2008年肠道病毒71型VP1编码区基因特征分析

目的了解北京市2008年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD）流行期间,人肠道病毒71型（Human Enterovirus71,HEV71）分离株的VP1编码区基因特征。方法采集发病1～3d的咽拭子标本33份,采用人横纹肌肉瘤（Human Rhabdomyosarcoma,RD）细胞进行EV分离,用特异引物通过逆转录-聚合酶链反应扩增进行毒株鉴定。对分离到的HEV71进行VP1编码区全长扩增,并对扩增产物采用双脱氧链终止法进行序列测定,Bioedit7.0.5和Mega3.1软件进行序列比对和系统进化树分析。结果从33份咽拭子标本中共分离到16株病毒,经鉴定：HEV7114株,柯萨奇病毒（Coxsackie Virus,CV）A组16型（CVA16）2株,其中1例为HEV71和CVA16混合感染。对10株HEV71进行了VP1编码区全序列测定,10株病毒的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.5%～100%和98.9%～100%;与安徽省阜阳市2008年流行株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.4%～99.1%;与C4基因型代表株的核苷酸序列同源性〉92%。基于HEV71的VP1编码区核苷酸序列构建亲缘性关系树,北京市2008年流行株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型中的C4a分支;且10株病毒处于四个相对独立的进化分支。结论北京市2008年从HFMD患儿分离的HEV71均为C4亚型,且属于2004年以来我国的优势分支——C4a。亲缘性分析提示,此次流行中至少存在4个HEV71传播链。由于近年来HEV71在中国持续大规模流行,迫切需要对HEV71进行连续的分子流行病学监测,及时阐明现阶段流行毒株的基因特征,为疾病预防控制提供病毒学依据。     

杭州市肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析

目的了解杭州市2008年和2011年肠道病毒71型(EV71)流行株VP1基因特征。方法手足口病患者咽拭子、粪便等样本先通过荧光RT-PCR方法初筛,然后选部分肠道病毒71型阳性样本进行病毒分离、培养;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定上述培养物,并扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建基因进化树。结果从2008年和2011年手足口样本中分离到EV71阳性毒株各4株,VP1基因全序列测定结果显示其与C4亚型代表株核苷酸和氨基酸的相似性最高,分别为93.8%～95.2%、99.0%～99.7%。结论杭州市手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型。     

2010年济南地区人肠道病毒71型VP1区基因特征的分析

[目的]研究济南地区肠道病毒71型（EV71）的基因特征。[方法]对2010年济南地区手足口病病人的粪便、咽拭子等标本,通过RT—PCR扩增EV71VP1基因片段;选取EV71阳性的18株进行VP1全基因序列测定,用DNAS—TAR、Mega．4．0软件进行同源性分析,并构建系统进化树。[结果]与EV71A型和B型代表株亲缘性较远,核苷酸（氨基酸）同源性分别为81．8％～82．7％（83．7％～85．ooA）和94．3％～94．9％（97．3％～97．6％）;与C型代表株亲缘性较近,核苷酸（氨基酸）同源性为87．5％～99．1％（98．3％～100．0％）;18株EV71之间在VP1区核苷酸和氨基酸水平上有一定差异,同源性分别为97．1％～100．0％和99．3％～100．0％。构建系统进化树表明,18株EV71与C4亚型处于同一簇,属EV71型C4基因亚型。[结论]20LO年济南地区流行的EV71属肠道病毒71型属C4基因亚型。     

哈尔滨市肠道病毒71型VP1区基因序列分析

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病,多发于5岁以下婴幼儿,可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡,个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症^[1],个别重症患儿病情进展快,可导致死亡^[2].在临床上EV71与CoxA16感染所引起的HFMD 难以区别,由于EV71还能够引起多种与神经系统相关的疾病,逐渐地为各国卫生工作者所重视^[3].     

肠道病毒71型广西株的种系进化分析

目的 通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)VP1节段核苷酸序列,进行EV71广西株种系进化分析.方法 采集病例的心包液、疱疹液和呼吸道分泌物,用RT-PCR进行鉴定和扩增VPl区序列,并对VPl区全基因序列进行测定,同源性分析和构建系统发生树.结果 将病例的心包液、疱疹液和呼吸道分泌物同时扩增到特异片段,测序证实为EV71.广西株与安徽阜阳的分离株同源性最高,大于99%,没有发生核苷酸插入和缺失;在系统发生树上,广西株处于C基因型C4亚型分支上.结论 肠道病毒71型广西株VPl区基因全长891bp,属于EV71 C基因型C4亚型.应加强广西EV71分子流行病学监测,阐明广西EV71流行株的基因型别和基因特征.     

肠道病毒71致病机制的研究进展

肠道病毒71(EV71)是引起手足口病(HFMD)的主要病原体之一,同时也是肠道病毒属中能引起无菌性脑膜炎、脑炎和脊髓灰质炎样麻痹等多种神经系统相关疾病的一种病原体.20世纪90年代后期以来,EV71在亚太地区多次流行,期间有很多关于该病毒引起的婴幼儿神经源性肺水肿病例及死亡病例的报道,引起了人们的高度重视.因此,阐明...     

2016-2017年盐城地区手足口病病原谱构成及EV71型肠道病毒VP1基因特征

目的 了解2016-2017年盐城地区手足口病肠道病毒病原谱分布情况,并对鉴定为EV71型肠道病毒VP1基因进行分子进化特征分析。方法 通过实时荧光RT-PCR方法对2016-2017年盐城市疑似手足口病咽肛拭子标本进行肠道病毒阳性标本的筛选,对非EV71非CVA16其他肠道病毒进行分子分型,RT-PCR扩增EV71型肠道病毒VP1基因片段并测序,采用相应的生物信息软件进行核苷酸及氨基酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2016-2017年盐城市手足口病原主要以其他肠道病毒为主,EV71和CVA16仍占有一定比例。共有12个基因型肠道病毒的流行,分别为EV71、CVA16、CVA2、CVA4 、CVA6、CVA8、CVA9、CVA10、ECHO3、ECH09、ECHO13、CVB4。其中,CVA6型为绝对优势流行株。遗传进化树显示,盐城地区EV71型代表株属于C4基因型C4a基因亚群的毒株,盐城代表株在C4a基因亚群进化谱中进化为两个主流分支。其中,盐城地区2016年8株代表株和2017年26株共34株处于较强传播链中。重症病例EV71型代表株在进化树呈散在性分布,没有单独聚集成簇。结论 2016-2017年盐城市手足病病原有多种基因型的肠道病毒同时流行,CVA6是优势病原体,EV71型属于C4基因型C4a基因亚群的毒株,EV71型肠道病毒仍是引起重症的主要型别。     

2010一2011年湖南省郴州市手足口病EV71型VP1区基因序列分析

目的了解2010-2011年湖南省郴州市手足口病EV71病毒的基因特征,为手足口病的预防控制提供科学依据。方法从2010-2011年郴州市各县（市、区）送检的手足口病肛拭子标本中随机挑选60份标本采用RD细胞进行病毒分离,采用Realtime—RT—PCR方法检测肠道病毒核酸,挑选14株致细胞病变阳性且EV71核酸检测阳性的标本（其中2010年的4株均为郴州市手足口流行夏季高峰期分离株,2011年的毒株主要为冬季高峰期分离株）,采用RT—PCR法扩增出EV71分离株的VP1区片段,随后进行VP1区核苷酸序列测定和分析,并使用生物信息学方法作基因特性分析。结果郴州市14株EV71毒株在生物进化树上与CAa亚型的代表株属同一分支。14株EV71毒株之间核苷酸序列的同源性在96．1％～100．0％之间,氨基酸序列的同源性在99．3％～100．0％之间;与A、B、C各基因型和亚型代表株EV71VP1编码区核苷酸和氨基酸序列同源性分析表明,郴州各分离株与安徽阜阳2008年毒株C4a亚型代表株（EU703812）的同源性最高,其中核苷酸同源性在91．8％-93．3％之间,氨基酸同源性均为99．3％。14株分离株与安徽阜阳2008年毒株（C4a亚型代表株）VP1区段的氨基酸编码序列进行比较,发现K98E、S283T和A293S3处位点变异,重症病例与普通病例的EV71病毒VPI氨基酸变异无明显差异。结论2010-2011年郴州市手足口病的优势毒株EV71属于C4a基因亚型。郴州市各县（市、区）的EV71亲缘关系近,毒株基因较稳定,未发现氨基酸突变位点与病例类型有关联。     

2010年致白城市手足口病流行的肠道病毒71型基因特征

目的分析2010年致白城市手足口病流行的肠道病毒71型基因特征。方法对2010年白城市6株EV71分离株VP1编码区基因全长逆转录-聚合酶链反应扩增后进行序列测定,使用Bioedit软件和MEGA 4.0软件进行同源性、基因亲缘关系分析。结果白城市2010年的6株EV71分离株均属于C4a基因亚型,6株白城分离株间的核苷酸同源性为98.6%～100.0%,并形成2个传播链,传播链1的白城4株病毒与吉林省2010年流行株代表株JL-HFM-10-5病毒亲缘关系最近,核苷酸同源性99.7%～100.0%,传播链2的2株白城流行株与2008年的阜阳流行株和2009年的2株吉林省流行株亲缘关系最近,核苷酸同源性99.3%～99.4%。结论 2010年白城市至少有两个EV71传播链致手足口病流行,传播链1的病毒在吉林省内和白城部分县区循环传播导致手足口病的流行;传播链2的病毒已经在国内传播较长时间,提示EV71病毒跨地域迅速而广泛传播特点。     

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型抗体筛查在手足口病中的应用及相关性

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)抗体筛查在手足口病中的应用及相关性.方法 采用酶联免疫吸附法对确诊的281例手足口病患儿进行血清EV71-IgM抗体和CA16-IgM抗体检测.结果 EV71-IgM抗体阳性144例(51.2％,144/281),CA16-IgM抗体阳性90例(32.0％,90/281),EV71-IgM和CA16-IgM双阳性17例(6.0％,17/281),即抗体阳性确切例数为217例,抗体阳性率为77.2％(217/281).EV71-IgM抗体阳性率与CA16-IgM抗体阳性率比较差异有统计学意义(x2=21.35,P＜0.01),总体男性与女性抗体阳性率[95.1％(135/142)比71.2％(99/139)]比较差异有统计学意义(x2=8.22,P＜0.01).结论 早期进行EV71-IgM和CA16-IgM抗体联合检测,对临床诊断手足口病及监控治疗具有重要意义.     

2007-2010年上海市静安区儿童手足口发病情况分析和病原学研究

目的分析上海市静安区2007-2009年手足口病发病情况,并分析2009-2010年静安区监测点儿童手足口病病原型别及肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）VP1区基因特征。方法分析上海市静安区2007-2009年手足口病流行概况;收集2009年4月～2010年12月辖区内儿童医院、幼托机构手足口病患儿咽拭标本,并进行实时荧光RT-PCR检测,确定手足口病病原型别。选择2010年不同月份共19份（含1份重症病例）EV71 PCR阳性标本,接种Vero细胞进行病毒分离培养,并设计特异引物对EV71 VP1全序列进行核苷酸序列测定、比对,构建系统发生树。结果 2008年静安区手足口病发病率明显增高,2009年发病数稳中略降,病例以发生在幼托机构为主。2009年病例咽拭标本实时荧光RT-PCR检测结果显示,柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CoxA16）阳性率为51.0%（52/102）,EV71阳性率为15.7%（16/102）,其他肠道病毒属阳性率2.9%（3/102）;2010年CoxA16和EV71阳性率均为31.3%（36/115）,其他...     

2007-2010年上海市静安区儿童手足口病情况分析和病原学研究

目的 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病发病情况,并分析2009-2010年静安区监测点儿童手足口病病原型别及肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71) VP1区基因特征.方法 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病流行概况;收集2009年4月～2010年12月辖区内儿童医院、幼托机构手足口病患儿咽拭标本,并进行实时荧光RT-PCR检测,确定手足口病病原型别.选择2010年不同月份共19份(含1份重症病例)EV71 PCR阳性标本,接种Vero细胞进行病毒分离培养,并设计特异引物对EV71 VP1全序列进行核苷酸序列测定、比对,构建系统发生树.结果 2008年静安区手足口病发病率明显增高,2009年发病数稳中略降,病例以发生在幼托机构为主.2009年病例咽拭标本实时荧光RT-PCR检测结果显示,柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CoxA16)阳性率为51.0％ (52/102),EV71阳性率为15.7％ (16/102),其他肠道病毒属阳性率2.9％ (3/102);2010年CoxA16和EV71阳性率均为31.3％ (36/115),其他肠道病毒属阳性率10.4％( 12/115).19株EV71分离株与2008年安徽阜阳EV71分离株同属C基因型中的C4a亚型,核苷酸同源性达95.0％ ～97.1％,氨基酸同源性为95.1％ ～98.3％.结论 静安区手足口病发病率2008年明显增高,2009年发病数稳中略降.2009-2010年静安区手足口病主要病原体为EV71和CoxA16,其他肠道病毒属引起的手足口病有所增加,需加强对其他肠道病毒属的鉴定.