人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性，探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD( )、120例RhD(-)和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出R}tD基因的10个外显子，120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23．33％)，19例样本10个外显子部分存在(占15．83％)，大部分为中间缺失型，73例样本10个外显子全缺失(占60．83／％)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性．主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

人RHD基因结构研究及意义

目的：研究RHD基因结构,重点检测启动子区,探究RHD基因的表达机制．方法：采用PCR—SSP方法,设计3对序列特异性引物,对60例无血源关系RhD( )汉族人样本、98例无血源关系RhD(-)汉族人样本和2例弱D型汉族人样本RHD基因启动子区约1000bp范围内的4个RHD基因特异性多态性位点进行检测．结果：RhD表型(-)／RHD基因型(一)个体启动子区全缺失,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体启动子区都不缺失．结论：RhD表型(-)／RHD基因型(-)个体符合RhD阴性的普遍机制,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体存在另一种RhD阴性机制。     

探讨RhD阴性表型中个体D基因多态性研究

目的:探讨RhD阴性表型中个体D基因的多态性.方法:随机抽取2014年11月至2015年10月采集的135例无亲缘关系的RhD阴性血液样本作为研究对象.采用抗人球蛋白试验(又称Coombs试验)来检测RhD阴性表型个体,并运用序列特异引物引导的PCR反应(简称PCR-SSP方法)对RhD阴性表型中个体基因结构特点进行分析与统计.结果:135例经Coombs试验检测为阴性表型个体中,检测结果显示为外显子完全缺失有75例,占比55.56%(75/135),外显子部分缺失29例,占比21.48%(29/135),外显子完整31例,占比22.96%(31/135);采用PCR-SSP法进行基因分型,RHD基因完整中RhD(1227A)占比16.30%(22/135),弱D15型占比0.74%(1/135),RHD阳性占比5.19%(7/135);检测RHD基因部分缺失中RHD-CE(2-9)-D占比5.93%(8/135),DVa(Has)占比0.741%(1/135),DVIⅢ占比0.74%(1/135).结论:我国RhD阴性人群的RhD基因基础结构呈现多态性特征,且不同地区的人群有着相同的Rh血型遗背景,今后可以尝试采用血清学与基因分型联合方法检测RhD阴性中的D抗原.     

安徽地区RHD(-)个体D基因外显子多态性检测

目的分析安徽地区RHD(-)个体的D基因的多态性。方法用PCR-SSP技术,对50例经血清学试验证实的真实RHD(-)个体3例弱D表现型个体15例DEL型个体进行外显子检测。结果发现本地区RHD(-)个体D基因外显子存在明显的多态性:15例DEL型个体D基因外显子均全部完整存在;3例弱D型个体中有2例存在完整的D基因,1例为缺失大部分外显子的DVIⅢ型;50例真实RHD(-)个体中,90%为外显子完全缺失,4%为外显子完整存在,但不表达D抗原;4%为缺失大部分外显子(存在第1、10外显子),不表达D抗原;另有2%为缺失两边外显子(存在第3、4、5外显子),不表达D抗原。结论PCR-SSP技术可用于RHD基因的研究,在本地区血清学鉴定的RHD阴性个体中存在较高比例的DEL型个体,同时,常规血清学RHD(-)个体D基因存在多态性。     

安徽地区RHD（-）个体D基因外显子多态性检测

目的分析安徽地区RHD（-）个体的D基因的多态性。方法用PCR—SSP技术，对50例经血清学试验证实的真实RHD（-）个体3例弱D表现型个体15例DEL型个体进行外显子检测。结果发现本地区RHD（-）个体D基因外湿子存在明显的多态性：15例DEL型个体D基因外显子均全部完整存在；3例弱D型个体中有2例存在完整的D基因，1例为缺失大部分外显子的D^Ⅵ Ⅲ型；50例真实RHD（-）个体中，90％为外显子完全缺失，4％为外显子完整存在，但不表达D抗原；4％为缺失大部分外显子（存在第1、10外显子），不表达D抗原；另有2％为缺失两边外显子（存在第3、4、5外显子），不表达D抗原。结论PCR—SSP技术可用于RHD基因的研究，在本地区血清学鉴定的RHD阴性个体中存在较高比例的DEL型个体，同时，常规血清学RHD（-）个体D基因存在多态性。     

天津地区RhD阴性围产期妇女RHD基因分型及Rh表型分析

目的 研究天津地区RhD阴性围产期妇女RHD基因分型,并分析不同基因型的RhC、c、E、e分布特征。方法 收集2017年1月至2019年12月在天津市第五中心医院就诊的RhD阴性围产期妇女标本104例,应用血清学方法进行Rh C、c、E、e表型鉴定;使用PCR-SSP法对间接抗人球蛋白试验(IAT)确认为Rh D阴性的样本进行RHD基因分型。结果 104例RhD初筛阴性个体中RhC/E血型分型结果显示,ccee 57例(54.8%),Ccee 29例(27.9%),cc Ee 10例(9.6%),CCee 4例(3.8%),CcEe 3例(2.9%),ccEE 1例(1%);RHD基因分型结果显示,全缺失RHD基因型70例(67.3%),DEL RHD 1227A纯合型13例(12.5%),RHD-CE(2-9)-D型10例(9.6%),弱D15型5例(4.8%),DEL RHD 1227A杂合型2例(1.9%),RhD阳性2例(1.9%),2例(1.9%)不能用此PCR-SSP方法确定其基因型。结论 RhD阴性围产期妇女的RHD基因型分子机制具有丰富的多态性,主要为RHD全缺失型,其...     

RhD阴性个体遗传多态性与抗-D同种免疫关系研究

目的：研究血清学RhD阴性个体的基因多态性与抗-D同种免疫的关系,探讨不同基因型个体的个性化输血策略。方法用盐水法及间接抗人球方法（IAT）确定RHD阴性个体,采用序列特异性引物（SSP-PCR）技术分析样本的RHD基因同时进行抗体筛选和抗体鉴定确定产生抗-D的样本。结果在有免疫史的336例入组者样品中,249例（74.1%）个体完全缺失RhD基因,l68例（20.2%）个体携带RHD1227A等位基因,19例（5.6%）携带RHD-CE（2-9）-D融合基因。抗体鉴定产生IgG抗-D的个体68例,63例（92.6%）完全缺失RhD基因,5例（7.4%）携带RHD-CE（2-9）-D融合基因,携带RHD1227A等位基因未检出产生抗-D的个体。结论血清学确定RhD阴性个体的RHD基因型具有丰富的多态性和不同的遗传学背景。真实RhD阴性和部分D个体有D抗原免疫时存在同种免疫风险,作为受血者应输用阴性血。基因型为RHD1227A患者不会产生抗-D,在输血时可输用阳性血。     

山东临沂地区RhD阴性无偿献血人群中RHD基因变异体的分析

目的 探讨临沂地区RhD阴性无偿献血人群RHD基因的变异体及其分子背景。方法 2011年采集24875人份全血,获得RhD初筛阴性标本111例,提取DNA后,采用序列特异性引物-多聚酶链反应(SSP PCR),进行以下三步实验：① 检测出缺失RHD基因的RhD阴性、DEL1227G＞A突变以及其他变异体;② 鉴定其他变异体的具体类型;③ 对有突变位点未检出型别的变异体进行测序。结果 临沂地区无偿献血人群中RhD阴性比例为0.45%,在111例RhD初筛阴性标本中,检测到1～10外显子全缺失76例,2～9外显子缺失9例,845G＞A突变3例,3～6外显子缺失3例,1227G＞A 突变18例,RHD(711DELC) 1例,Dva(Hus)1例。结论 临沂地区常规血清学筛查RhD阴性无偿献血人群中RHD基因存在多态性。     

长沙地区汉族RhD阴性个体RHD基因多态性研究

目的:研究长沙地区人群Rh阴性个体RHD基因多态性的分布及血清学表型与RH基因型之间的关系。方法:应用PCR-SSP技术检测长沙地区108名Rh阴性献血者的RHD基因和RHCE基因。结果:108例Rh阴性个体中,ccee表型66例、Ccee32例、CCee 7例、CcEe2例、ccEe1例;108例Rh阴性个体中68例RHD基因外显子完全缺失、24例完整、16例部分缺失。吸收放散试验检测出21例RhD放散型。结论:长沙汉族Rh阴性人群的RHD基因结构呈现多态性,常规血清学鉴定的RhD阴性者中存在较高比例的RhD放散型(Del型),且有可能带有完整的RHD基因。携带D基因的吸收放散试验阴性个体中具有C抗原者比例较高,但亦有cc表型存在,有别于文献中认为全属RhC抗原表达者的报告。     

PCR-SSP RHD基因定型方法的初步应用

目的采用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)进行RHD基因定型.方法采用新近报道的PCR-SSP RHD定型方法检测10例RhD阳性个体,包括2例哈萨克族人、2例蒙古族人、2例藏族人和4例维吾尔族人,以及11例RhD阴性个体(汉族10例、维吾尔族人1例),并通过测序和内含子检测分析1例汉族个体的RHD基因型.结果全部样品的PCR-SSP检测结果与血清学表型相符,1例汉族RhD阴性个体鉴定为D放散型,携带RHD1227A等位基因,1例个体的检测结果提示携带融合RHD基因.测序分析显示该融合基因的第1、2和第10外显子序列与正常RHD基因相应外显子相同,而缺失其余外显子,由于RHD基因和RHCE(e)基因的第2外显子序列相同,笔者采用PCR方法检测RHD基因第2内含子,结果为阴性,说明该个体携带的融合基因为RHD-CE(2-9)-D2等位基因.结论 PCR-SSP可用于中国人Rh血型D抗原基因定型.     

RHD gene polymorphism among RhD-negative Han Chinese

TheRhbloodgroupsystemwasfirstdescribed 60 yearsagointhecontextofacaseofhemolyticdiseaseinanewborn (HDN ) 1　ItisnowunderstoodthatthepathogenesisofHDNinvolvesmaternalalloimmunizationbyRhantigens TheRhbloodgroupsystemisthemostpolymorphicofhumanbloodgroupsconsistingofatleast45independentantigens.2 　ExceptfortheABOsystem ,Rhisthemostclinicallysignificantintransfusionmedicine Rhantigensareassociatedwithincompatiblehemolytictransfusionreactions,HDN ,andautoimmunehemolyticanemia Individualsa…     

等候肾移植患者中RHD阴性血液样品的基因分型及意义

目的 探讨等候肾移植患者中RHD阴性血型基因血清学与分子生物学的差异.方法 收集2006年1月~2016年1月广州市各器官移植中心等候肾移植的患者中经血清学检测为RhD阴性的血样103例,采用分子生物学方法(定量PCR-测序技术)进行RHD基因分型.血清学与分子生物学两种方法对RhD假阴性检出率行χ2检验.结果 103例血样中,RhD真阴性(即10个外显子全部缺失)56例(54.5%),RhD假阴性(即RhD阳性,但是10个外显子中有部分缺失、重复、错义突变)47例(45.6%).在47例RhD假阴性中,弱D(weak D)1例(2.1%)、部分D(partial D)13例(27.7%)、放散D(D-elution)33例(70.2%).血清学与分子生物学对RhD阴性识别的差异呈统计学显著性(P<0.05).结论 103例血清学检测出的RhD阴性中有45.6%通过分子生物学方法检测实际为RhD阳性变异体,说明血清学技术对识别RhD阴性呈较高错误率.利用分子生物学技术进行受者和供者RHD血型基因分型,对于精确肾移植配型具有重要的临床意义.     

中国人群真实RhD阴性个体和RhDel型RHD基因研究

为观察中国人群真实RhD阴性个体和RhD^el型RHD基因存在情况，采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选RhD阴性捐血者，通过吸收放散试验性确定其中RhD^el和真实RhD阴性，并采用PCR技术检测RHD基因第4内含子，对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术测定RHD基因第3，4，5，6，7，9和10个外显子，观察基因变异。筛选获得104名RhD阴性捐血者，吸收放散试验鉴定25名（24.0％）为RhD^el型，79名（76.0％）为真实RhD阴性；25例RhD^el全部检测到D基因exon4-intro4-exon5区域，79名真实RhD阴性个体中有5名（6.3％）个体（2名Ccdee，2名ccdEe）检测到D基因第4内含子；PCR-SSP结果显示5名个体中，4名存在全部被检测的D基因区域，1名个体（ccdEe）第5外显子检测阴性。结果表明抗人球蛋白试验确认的RhD阴性中国人存在高比率的RhD^el型，且均可检测出RHD基因第4内含子；若排除RhD^el，携带D基因的RhD阴性中国人的比率明显降低，且这些个体并非如经往报道的均为C抗原阳性。     

家族性帕金森病Parkin基因外显子缺失突变

目的: 研究Parkin基因外显子缺失突变与中国家族性帕金森病(PD)发病的关系,探讨Parkin基因缺失突变在家族性PD发病机制中的作用及与临床特点、手术疗效之间的关系.方法: 家族性PD患者36例为研究对象,正常人20例作为对照,提取外周血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测Parkin基因外显子4,6,7,10缺失情况,观察外显子的缺失分布及缺失率,并结合PD患者的手术疗效分析.结果: 家族性PD患者36例有10例外显子缺失突变,其中外显子4缺失8例,6和7缺失各1例,缺失突变率为27.8%,外显子10未发现异常,对照组中无缺失突变;有外显子缺失突变患者的手术疗效较好.结论: Parkin基因外显子4,6,7缺失突变是我国家族性PD的致病原因之一,PD患者的手术效果与Parkin基因外显子缺失突变与否有关.