kielin/chordin样蛋白在肝纤维化模型中的动态表达及骨形成蛋白-7干预后的表达变化

目的 观察kielin/chordin样蛋白(kcp)在肝纤维化小鼠模型中的动态表达及骨形成蛋白-7(BMP-7)干预对其表达的影响,探讨治疗肝纤维化的新靶点.方法 健康雄性ICR小鼠50只,分为正常对照组(10只)、模型组(30只)和BMP-7干预组(10只),模型组再按造模不同时间点分4、8、12周3个亚组,每组10只.模型组小鼠皮下注射四氯化碳制备肝纤维化小鼠模型,BMP-7干预组在造模后第8周开始腹腔注射人重组BMP-7,持续4周.造模后各组小鼠下腔静脉采血测定血清ALT、AST和Alb;肝组织经HE和Masson染色后光学显微镜下观察各组病理变化;采用RT-PCR、免疫组织化学和Western印迹法分别检测各组kcp mRNA及蛋白表达情况.各组间均数比较采用单因素方差分析.结果 模型组血清ALT、AST升高,A1b降低,12周时达峰值,BMP-7干预组有所缓解,各组间比较,差异有统计学意义(F值=23.501、34.600、16.244,均P＜0.05).正常对照组kcp mRNA和蛋白表达很低,模型组则逐渐升高,BMP-7干预组有所缓解,差异有统计学意义(F值=30.362、10.727,P＜0.01或0.05).kcp mRNA表达水平与转化生长因子β1( TGF-β1)、BMP-7 mRNA表达水平均呈正相关(r=0.760、0.769,均P＜0.05).结论 BMP-7能改善小鼠肝纤维化;kcp可能参与肝纤维化发生发展过程,有望成为肝纤维化治疗的新靶点.     

小鼠酒精性肝纤维化复合模型的建立及肝组织骨桥蛋白和转化生长因子β1的表达

目的 快速建立小鼠酒精陛肝纤维化模型,为酒精性肝纤维化发病机制及防治策略的研究奠定基础.方法 64只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、四氯化碳组、乙醇组、溶剂对照组及乙醇+四氯化碳组.乙醇+四氯化碳组小鼠,造模前4周以含4％乙醇Lieber-DeCarli液体饲料喂养,第5周起联合5％四氯化碳腹腔注射,于造模第0、4、5、6、7、8周各处死6只.其余各组小鼠于造模第8周处死.采用酶法检测小鼠血清ALT及AST水平;HE及Masson染色观察肝组织病理学变化,并对肝脂肪变、炎症活动及纤维化程度评分.免疫组织化学染色观察肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化;实时定量RT-PCR及Western blot方法检测肝组织骨桥蛋白(OPN)及转化生长因子β 1 (TGFβ1)mRNA及蛋白表达动态变化.结果 乙醇+四氯化碳组小鼠于造模第4周出现轻～中度肝脂肪变,第5周出现炎细胞浸润,窦周出现纤维组织沉积,第6～7周肝小叶内可见点、灶状肝细胞坏死,炎细胞浸润、窦周纤维组织沉积呈进行性加重,第8周肝细胞片状坏死,桥接纤维化形成.免疫组织化学染色显示:α-SMA主要表达于活化肝星状细胞及纤维组织沉积区域,随造模时间延长表达逐渐增强.乙醇+四氯化碳组小鼠肝组织OPN表达随造模时间延长逐渐增强,第0、4、5、6、7、8周mRNA相对表达量依次为1.01±0.13、0.80±0.20、1.83±0.25、2.94±0.19、3.45±0.31及5.99±0.17,各组比较,F=476.270,P＜ 0.01;蛋白相对表达量依次为0.19±0.06、0.48±0.05、0.52±0.06、1.02±0.10、1.52±0.11及1.50±0.08,各组比较,F=298.027,P＜0.01.TGF β 1表达自第5周明显上调,并呈持续高表达,mRNA相对表达量依次为1.03±0.18、1.07±0.23、3.19±0.40、3.31±0.28、1.58±0.18及2.08±0.26,各组比较,F=85.546,P＜0.01;蛋白相对表达量依次为0.24±0.08、0.28±0.12、1.26±0.16、0.96±0.12、1.09±0.25、1.10±0.20,各组比较,F=43.639,P＜0.01.结论 Lieber-DeCarli乙醇液体饲料喂养联合微量四氯化碳腹腔注射可成功建立小鼠酒精性肝纤维化模型,符合酒精性肝纤维化病理特点及病变过程.肝组织OPN及TGFβl表达在酒精性肝纤维化发生及进展中发挥重要作用.     

骨形成蛋白-7及其受体mRNA在大鼠肾间质纤维化模型中的表达

骨形成蛋白-7(bone morphogenetic pmtein-7，BMP-7)属于转化生长因子β(TGF-β)超家族，是一个重要的肾脏保护细胞因子，目前有关BMP-7及其受体在肾间质纤维化中的表达国内尚未见报道。本实验观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏BMP-7及其受体的动态表达，为以后研究提供实验依据。     

Smad7与肝纤维化

转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝纤维化形成过程中具有重要作用.Smad蛋白家族是TGF-β细胞内信号转导的重要分子,其中Smad7能够抑制TGF-β信号转导通路,介导细胞内负反馈,从而阻断TGF-β介导的肝纤维化.此文就Smad7抑制肝纤维化机制作一综述.     

骨形态发生蛋白-7生物学功能的研究进展

最初发现骨形态发生蛋白(BMP)-7的作用是异位诱导成骨,并根据这一特点应用于治疗临床一些难治性骨缺损疾病.新近发现BMP-7还与泌尿系统、生殖系统关系密切,可用于治疗动物模型中缺血性肾病、炎性肾病、高转换率肾性骨营养不良和血管钙化等.因此,BMP-7具有广泛的功能与应用前景.     

雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子β1、骨形成蛋白7及Gremlin表达的影响

目的:观察雷公藤多苷(TW)对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织转化生长因子β1( TGF-β1)、骨形成蛋白7(BMP-7)、Gremlin表达的干预,阐明TW延缓肾间质纤维化的机制. 方法:40只雄性SD大鼠随机分为实验组及对照组.实验组行高糖高脂饮食,并以链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为DN组和TW治疗组.治疗组经(日)灌胃TW(50 mg/Kg·d),第2、4、8、16周称鼠重并查24h尿蛋白定量及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),第16周处死大鼠抽取血液,观察血清生化指标,摘除肾脏行组织切片,观察肾间质纤维化程度,免疫组化检测肾组织内TGF-β1、BMP-7、Gremlin的表达,借助RT-PCR和Western blotting方法检测肾组织内TGF-β1、BMP-7、Gremlin核酸及蛋白的表达. 结果:TW能减轻模型鼠蛋白尿,改善血清白蛋白,降低血清肌酐、尿素氮.下调模型鼠肾组织内TGF-β1、Gremlin的核酸及蛋白表达,上调BMP-7的核酸及蛋白表达.结论:TW可延缓肾组织纤维化,其机制可能与TW抑制促纤维化TGF-β1及下游细胞因子Gremlin的表达,上调抗纤维化因子BMP-7的表达相关.     

骨形态发生蛋白7对肺纤维化大鼠胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对肺纤维化大鼠肺组织炎症、纤维化程度及转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 将雄性Wister大鼠48只随机分为正常对照组、纤维化组、小剂量组和大剂量组,每组12只.气管内灌注博莱霉素A5制作肺纤维化模型.对小剂量组和大剂量组动物,每天分别以100 μg/kg、500 μg/kg剂量腹腔注射BMP-7.各组在制作模型后第14、28天随机处死6只大鼠.HE、Masson染色观察肺组织病理变化,测定组织胶原含量,免疫组织化学测定肺组织中Ⅰ型胶原蛋白及TGF-β1的表达,半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织TGF-β1 mRNA的表达.结果 BMP-7处理后第14、28天肺组织炎症及纤维化程度均低于纤维化组,差异有统计学意义(P＜0.05).BMP-7使14 d、28 d时肺组织胶原含量较同期纤维化组胶原含量减少(P＜0.05).经过BMP-7处理,14 d、28 d时肺组织Ⅰ型胶原和TGF-β1蛋白的表达均较纤维化组减弱(P＜0.05).BMP-7使肺组织TGF-β1 mRNA的表达水平较同期纤维化组降低(P＜0.05).而且BMP-7的上述作用在大剂量时更明显(P＜0.05).结论 在博莱霉素A5诱导的大鼠肺纤维化模型中,BMP-7可以剂量依赖的方式抑制肺组织炎症及纤维化程度,其可能机制可能与BMP-7抑制TGF-β1在肺组织的表达有关.     

燃煤型氟中毒大鼠骨形成蛋白表达变化研究

目的 复制燃煤型氟中毒大鼠模型,并观察骨形成蛋白-2(BMP-2)和骨形成蛋白-3 (BMP-3)在不同染氟剂量和染氟时间大鼠血清中的表达变化.方法 断乳4周80～ 120 g清洁级SD大鼠120只,按体质量随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组30只,雌雄各半.食用病区煤烘玉米,复制燃煤型氟中毒动物模型.对照组、低氟组、中氟组、高氟组的含氟量分别为6.30、9.56、15.89、23.00mg/kg.各组分别于染氟第30、90、180天时股动脉放血法处死10只动物,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清BMP-2和BMP-3水平.结果 ①BMP-2测定结果:染氟第90、180天时,血清BMP-2组间比较差异有统计学意义(F值分别为385.08、173.98,P均＜0.01).其中低氟组、中氟组、高氟组在染氟第90天时[(18.80±0.43)、(22.22±0.85)、(25.14±0.69)μg/L]和第180天[(7.98±0.68)、(8.97±0.78)、(15.04±0.89)μg/L]血清BMP-2表达高于对照组[(12.54±1.29)、(7.53±0.97)μg/L,P均＜0.05],且BMP-2表达随着染氟剂量的增加而增加(P均＜0.05).4组不同染氟时间血清BMP-2组内比较差异有统计学意义(F值分别为55.42、511.58、686.35、671.64,P均＜0.01).其中染氟第90天时,各组血清BMP-2[(12.54±1.29)、(18.80±0.43)、(22.22±0.85)、(25.14±0.69)μg/L]均高于同组染氟第30天时[(11.75±1.15)、(11.42±1.07)、(11.38±0.92)、(11.15±1.03)μg/L,P均＜0.05];染氟第180天时,各组血清BMP-2[(7.53±0.97)、(7.98±0.68)、(8.97±0.78)、(15.04±0.89)μg/L]均低于同组染氟第90天时(P均＜ 0.05).②BMP-3测定结果:染氟第30、90、180天时,血清BMP-3组间比较差异无统计学意义(F值分别为0.7215、1.2951、0.0964,P均＞0.05).结论 大鼠较长时间摄人过量氟,刺激BMP-2表达增强,但随着摄氟时间延长,氟对BMP-2的表达呈现抑制作用.氟对BMP-3表达的影响不及对BMP-2敏感.     

缬沙坦对2 型糖尿病大鼠肾脏骨桥蛋白和骨形态发生蛋白-7 表达的影响

目的探讨缬沙坦对2型糖尿病大鼠（T2DM）肾脏骨桥蛋白（OPN）和骨形态发生蛋白-7（BMP-7）表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为3组:对照组、DM模型组和缬沙坦治疗组[25mg/（kg·d）]。高脂、高糖喂养联合小剂量链脲佐菌素建立T2DM模型。缬沙坦治疗12周末,测定血压、血糖、尿白蛋白（UAL）排泄量;应用光镜观察肾脏病理变化;采用免疫组化、实时定量PCR技术测定肾组织BMP-7、OPN、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）蛋白及mRNA的表达。结果与对照组比较,DM组大鼠UAL及肾组织ED-1阳性细胞数明显升高（P<0.01）;肾组织BMP-7mRNA及蛋白的表达下调（P<0.01）,而OPN、纤连蛋白及TGF-β-1的表达显著上调（P<0.01）。缬沙坦干预后明显减少UAL的排泄（P<0.01）,并显著抑制肾组织巨噬细胞浸润及TGF-β₁、OPN和纤连蛋白过度表达（P<0.05）,同时上调BMP-7的表达（P<0.01）。结论缬沙坦减少肾组织巨噬细胞浸润及细胞外基质,对糖尿病性肾病有保护作用,其机制可能与下调TGF-β₁和OPN及恢复BMP-7的表达有关。     

小异质二聚体伴侣在大鼠肝纤维化中的动态表达及意义

目的 观察小异质二聚体伴侣(SHP)在大鼠肝纤维化进展过程中的动态表达变化及 其意义.方法 30只健康雄性SD大鼠分为对照组6只,模型组24只,模型组再按不同时间点分为2、4、6、8周4个亚组.二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型.造模后分别在不同时间点取大鼠门静脉血并留取肝脏标本,肝组织经HE和Masson染色后观察各组病理变化;RTPCR和Western印迹法检测SHP mRNA及蛋白在造模过程中的动态变化.各组间均数比较采用单因素方差分析.结果 模型组第4、6周肝纤维化明显,血清ALT、AST升高,4周时达高峰,分别为(169.2±16.2)、(193.3±31.1)U/L; Alb逐步下降,6周时最低;各时间点与对照组比较差异均有统计学意义(FAST=83.10,FALT=104.63,FAlb=54.24;均P＜0.05).造模后,SHP mRNA及蛋白在正常肝组织中都有少量表达,模型组表达显著增加,第4周达高峰,分别为0.4494±0.0555和1.1155±0.1546,第6、8周逐渐降低,且明显低于对照组;转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA表达水平逐步增高,于4周时达高峰,为0.9625±0.1196,各模型组与对照组相比,差异均有统计学意义(F=25.740、171.383、118.393、94.343,均P＜0.05).直线相关分析提示,SHP mRNA与TGFβ1mRNA呈正相关(r=0.593,P＜0.01).结论 SHP在肝纤维化进展过程中的表达呈先升高后下降的趋势,提示可能在肝纤维化发生发展过程中发挥重要作用.     

骨形态发生蛋白7/Smads信号通路及其在肝纤维化进程中的作用

肝纤维化是由于各种病因导致肝损伤后,机体对损伤进行修复的过程。近年来研究发现骨形态发生蛋白(BMP)7及其下游的Smads蛋白可以通过不同的途径拮抗转化生长因子(TGF)β1的致肝纤维化作用,包括诱导细胞外基质降解,抑制细胞凋亡,减少多种促炎症因子的表达,促进肝细胞再生等,探讨了BMP-7/Smads信号通路在肝纤维化过程中的作用。     

瘦素特异性小干扰RNA对实验性肝纤维化的影响

目的 研究针对大鼠瘦素基因的小干扰(si)RNA对肝纤维化的治疗效果.方法 将40只雄性SD大鼠平均分为4组,正常对照组皮下注射橄榄油溶液3 ml/kg,2次/周,共6周;肝纤维化模型组皮下注射60% CCl4 3 ml/kg,2次/周,共6周;siRNA治疗组和阴性对照组均于皮下注射60% CCl4 3 ml/kg,2周后尾静脉分别注射siRNA或阴性对照质粒0.2 mg/kg.每周测体质量1次,根据体质量调整药物用量.设计针对瘦素mRNA的siRNA,并构建其表达载体;用脂质体方法通过尾静脉注射转染入CCl4诱导的肝纤维化大鼠体内,然后分别采用逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学方法检测瘦素与Ⅰ、Ⅲ型胶原在肝脏组织中的表达.免疫组织化学资料采用等级资料秩和检验.PCR结果采用单因素方差分析进行统计学处理,P＜0.05时用SNK法进行多重比较.结果 瘦素mRNA在正常对照组组、肝纤维化模型组、siRNA治疗组和阴性对照组的相对表达量分别为0.75±0.03、2.34±0.14、0.90±0.06、2.31±0.13,各组比较,F=797.64,P=0.000,差异有统计学意义;Ⅰ型胶原mRNA在各组的相对表达量分别为1.10±0.11、2.75±0.13、1.27±0.08、2.77±0.12,各组比较,F=695.71,P=0.000,差异有统计学意义;Ⅲ型胶原mRNA在各组的相对表达量分别为0.62±0.07、1.52±0.09、0.85±0.08、1.51±0.07,各组比较,F=371.57,P=0.000,差异有统计学意义.结论 针对瘦素基因的siRNA对肝纤维化有明显的治疗作用.     

大麻素受体1在慢性乙型肝炎肝纤维化发生和发展中的作用

Sato等[1]和Teixeira Clerc等[2]先后发现大麻素受体1(CB1R)在慢性肝病发展过程中起着独特作用.为深入研究CB1R在慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化发生、发展过程中的作用,我们用免疫组织化学染色法检测肝组织中CB1R表达情况,分析CB1R半定量评分与纤维化分期、血清转化生长因子(TGF)β1、ALT以及HBV DNA水平等指标的相关性,为今后以CB1R为靶点进行抗肝纤维化治疗提供依据.     

Antifibrotic effect of N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline on bile duct ligation induced liver fibrosis in rats

AIM:To investigate the preventive effect of N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline (AcSDKP) on bile duct ligation (BDL)induced liver fibrosis in rats. METHODS:Liver fibrosis in rats was induced by BDL and AcSDKP was infused subcutaneously for 2 wkvia a osmotic minipump (Alzet 2ML4) immediately after BDL operation. After scarifying, serum and liver specimens were collected. Hematoxylin and eosin staining, Sirius red staining, enzyme linked immunosorbent assay, Western blot or real-time polymerase chain reaction were used to determinate liver functions, histological alterations, collagen deposition, mRNA expression of markers for fibroblasts, transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and bone morphogenetic protein-7 (BMP-7). RESULTS:When compared to model rats, chronic exogenous AcSDKP infusion suppressed profibrogenicTGF-β1 signaling, α-smooth muscle actin positivity (α-SMA), fibroblast specific protein-1 (FSP-1) staining and collagen gene expression. Col Ⅰ, Col Ⅲ, matrix metalloproteinase-2, tissue inhibitors of metallopro-teinase-1 and tissue inhibitors of metalloproteinase-2 mRNA expressions were all significantly downregulated by AcSDKP infusion (2.02 ± 1.10vs 14.16 ± 6.50, 2.02 ± 0.45vs 10.00 ± 3.35, 2.91 ± 0.30vs 7.83 ± 1.10, 4.64 ± 1.25 vs 18.52 ± 7.61, 0.46 ± 0.16 vs 0.34 ± 0.12, respectively, P 0.05). Chronic exogenous AcSDKP infusion attenuated BDL-induced liver injury, inflammation and fibrosis. BDL caused a remarkable increase in alanine transaminase, aspartate transaminase, total bilirubin, and prothrombin time, all of which were reduced by AcSDKP infusion. Mast cells, collagen accumulation, α-SMA, TGF-β1, FSP-1 and BMP-7 increased. The histological appearance of liver specimens was also improved. CONCLUSION:Infusion of exogenous AcSDKP attenu-ated BDL-induced fibrosis in the rat liver. Preservation of AcSDKP may be a useful therapeutic approach in the management of liver fibrosis.     

亲环素B、D在肝纤维化模型中的变化及其意义

亲环素B在体内分布广泛,与多种疾病相关,特别是与自身免疫性疾病关系密切.亲环素B的下降与HCV抑制程度相关,提示抑制亲环素B表达可能会影响HCV引起的肝病的结局如肝纤维化与肝硬化等[1].亲环素D是另外一个重要的结合蛋白,其被结合后能够抑制线粒体通透性转换功能.Rehman等[2]发现,胆管结扎小鼠模型可以通过线粒体通透性转换抑制肝脏坏死,这可能也与亲环素D的结合有关.而对于亲环素B和D在肝硬化以及肝纤维化中的作用报道较少.在本研究中,我们观察了亲环素B与D在肝纤维化肝脏中的表达,并验证了干扰其表达后肝纤维化指标的变化.     

Bone morphogenetic protein-2 is a negative regulator of hepatocyte proliferation downregulated in the regenerating liver

INTRODUCTIONBone morphogenetic proteins (BMPs) were first identified in the 1960s[1]. BMPs are multi-functional growth factors that belong to the transforming growth factor beta (TGF-β) superfamily[2]. Mature BMPs are 30-38 kDa proteins that utilize BMP …