清肠温中方通过miR-675-5p/VDR信号通路调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的机制研究

目的研究清肠温中方调控DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的作用机制。方法 24只SPF级雄性SD大鼠,按体质量依照随机数字表将其随机分为空白组、模型组、清肠温中方组。空白组自由饮用去离子水,同时予去离子水灌胃;模型组和清肠温中方组自由饮用4.5%DSS溶液制备UC模型,同时模型组给予去离子水,清肠温中方组予清肠温中方灌胃。7 d后麻醉大鼠后取血及结肠组织,应用Real time-PCR法检测结肠miR-675-5p、VDR m RNA、RORγt mRNA、Foxp3 m RNA的表达,ELISA法检测血清IL-10、IL-17的表达,免疫组织化学法检测ZO-1、Occludin的蛋白表达及分布。结果与空白组比较,DSS诱导的UC大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA及血清IL-17的表达较空白组明显升高(P 0.05或P 0.01),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较空白组明显降低(P 0.05或P 0.01);清肠温中方干预后,大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA、血清IL-17的表达较模型组明显降低(P 0.05),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较模型组明显升高(P 0.05或P 0.01)。结论清肠温中方可能通过降低mi R-675-5p的表达,靶向调控VDR信号通路,从而调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡、修复肠黏膜屏障损伤,达到治疗UC的目的。     

芍药汤通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控溃疡性结肠炎水液代谢及肠上皮通透性的作用机制

目的：基于“大肠主津”理论探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路在溃疡性结肠炎(UC)水液代谢及肠上皮通透性中的作用及芍药汤的干预机制。方法：将60只雄性SD大鼠分为空白组、模型组、美沙拉嗪组(0.42 g·kg^-1)、芍药汤低、中、高剂量组(11.1、22.2、44.4 g·kg^-1),每组10只。采用复合病因造模法建立UC湿热内蕴证大鼠模型,空白组和模型组分别给予生理盐水灌胃,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪灌胃,芍药汤低、中、高剂量给予对应剂量的芍药汤灌胃,灌胃周期为14 d。观察各组大鼠腹泻评分及粪便含水率变化,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸含量,免疫组化法检测各组大鼠结肠组织中水通道蛋白(AQP)8、AQP4及肠黏膜通透性相关蛋白ZO-1、Occludin的蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中cAMP、PKA、CREB蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组大鼠腹泻评分及粪便含水率显著增高(P<0.01),血浆...     

肠激安方对IBS-D大鼠肠道通透性的影响

目的:观察肠激安方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠道通透性的影响,探讨肠激安方治疗IBS-D的作用机制。方法:SD雄性乳鼠,随机分为5组,分别为正常组,模型组,匹维溴铵组(0.018 g·kg~(-1)),肠激安高、低剂量组(33.48,16.74 g·kg~(-1)),除正常组外,均采用"母婴分离+醋酸刺激+束缚应激"三因素结合的方法建立IBS-D模型。给药后,采用透射电镜观察大鼠肠黏膜超微结构;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血浆D-乳酸水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin),闭合蛋白-1(Claudin-1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Occludin,Claudin-1,紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA表达。结果:与正常组比较,IBS-D模型组大鼠肠黏膜上皮细胞损伤,微绒毛排列较稀疏,紧密连接间隙增宽,有的不甚明显;血浆D-乳酸水平明显升高(P0.05),结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达降低(P0.05),ZO-1 mRNA表达降低(P0.05)。药物治疗后,与模型组比较,各给药组大鼠肠黏膜细胞损伤修复;匹维溴铵组、肠激安方高剂量组血浆D-乳酸水平明显降低(P0.05),肠激安方低剂量组血浆D-乳酸水平有降低趋势,但不具有统计学差异。各给药组大鼠结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平,ZO-1 mRNA表达水平升高(P0.05)。结论:肠激安方对IBS-D的治疗作用可能是改善肠道通透性实现的。     

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin，ZO-1，Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10~(-3)g·kg~(-1)),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg~(-1))。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。     

基于结肠黏膜ICAM-1探讨芍药汤对溃疡性结肠炎(胃肠湿热证)大鼠的作用机制

目的采用RT-PCR和Western-blot检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因生成以及蛋白的表达水平,探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎(UC)可能的作用机制。方法随机将48只清洁级SD大鼠分为4组,分别为空白组、模型组、西药对照组(SASP组)以及芍药汤组,每组12只;模型组、芍药汤组及SASP组3组大鼠在成功制成胃肠湿热证模型基础上,再建立UC模型;造模完成后,各组大鼠分别进行疾病活动指数(DAI)评分,灌胃治疗2周,处死大鼠前对其进行第2次DAI评分,完毕后麻醉并处死各组大鼠;解剖后,取病变的结肠组织观察,进行组织大体形态损伤(CMDI)评分;随后,将病变最明显结肠组织肠段2 cm左右,平均分为两等分,分别用于检测ICAM-1基因的蛋白的表达。结果相比空白组,模型组大鼠的DAI及CMDI评分升高明显(P0.01),治疗后芍药汤组上述积分与模型组相比而言,下降明显(P0.05);在结肠组织ICAM-1蛋白表达方面,Western-blot结果显示,模型组大鼠灰度值较空白组明显下降,治疗后,芍药汤组与SASP组ICAM-1灰度值均有所上升,且与正常组水平相近;大鼠结肠组织中ICAM-1 m RNA生成方面,与空白组相比而言,模型组上升明显(P0.01),而在治疗后与模型组相比,芍药汤组及SASP组ICAM-1 m RNA生成水平显著降低(P0.01)。结论芍药汤通过抑制UC(胃肠湿热证)大鼠结肠黏膜组织中ICAM-1基因及蛋白的表达,从而改善UC大鼠的症状及体征,这可能是其治疗UC的作用机制。     

养胃解毒合剂对脓毒症模型大鼠肠屏障功能的影响与机制研究

目的:从肠屏障功能角度探讨养胃解毒合剂治疗脓毒症的作用机制。方法:140只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药正常剂量组、中药高剂量组、西药组、西药+中药正常剂量组、西药+中药高剂量组。采用HE染色技术观测各组大鼠肠道结构,分别采用实时荧光定量PCR技术与Western Blot技术检测肠屏障功能相关基因mRNA与蛋白表达。结果:(1)形态学结果显示:脓毒症模型大鼠肠组织细胞水肿严重,大量炎症细胞浸润,中药高剂量组与西药+中药高剂量组水肿明显改善,炎症细胞明显减少。(2)Western Blot与PCR结果显示:与正常组比较,模型组Occludin、Claudin-1和ZO-1基因mRNA与蛋白表达显著下调;与模型组比较,3种基因mRNA与蛋白在西药组、中药高剂量组、西药+中药正常剂量组、西药+中药高剂量组表达均显著上调;与西药组比较,西药+中药高剂量组Claudin-1和ZO-1基因mRNA与蛋白表达显著上调,Occludin蛋白表达显著上调。结论:高剂量养胃解毒合剂能够改善脓毒症大鼠的肠道屏障功能,与西药合用提高西药疗效,可能是通过上调肠组织Occludin、Claudin-1和ZO-1基因mRNA与蛋白表达水平实现的。     

基于PERK信号通路介导的细胞凋亡及杯状细胞破坏探讨芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠的作用机制

目的:通过检测溃疡性结肠炎(UC)大鼠p-PERK通路蛋白、C/EBP 同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量,探讨芍药汤对UC大鼠的作用机制。方法: 84只SD大鼠中随机抽取14只作为空白组,余下70只大鼠通过三硝基苯磺酸建立UC大鼠模型,除去死亡大鼠,随机分为模型组12只、柳氮磺吡啶组13只、芍药汤低剂量组12只、芍药汤中剂量组13只、芍药汤高剂量组13只。空白组、模型组用等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,柳氮磺吡啶组采用柳氮磺吡啶灌胃,芍药汤高、中、低剂量组按照芍药汤不同剂量灌胃。第14天进行疾病活动指数(DAI)评分。随后将大鼠处死并解剖,进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,并检测大鼠结肠p-PERK通路蛋白、C/EBP 同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量。结果: 与空白组比较,柳氮磺吡啶组及芍药汤不同剂量组大鼠DAI、CMDI评分均增高(P<0.05),与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分均降低(P<0.05),柳氮磺吡啶组与芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分比较无统计学差异(P>0.05); 与空白组比较,模型组、柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均上升(P<0.05); 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05); 与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05); 柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达无统计学差异(P>0.05); 与空白组比较,其他各组杯状细胞数量均下降(P<0.05); 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组杯状细胞数量均明显增加(P<0.05); 与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量均增加(P<0.05); 柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量比较无统计学差异(P>0.05)。结论: 芍药汤能抑制内质网应激PERK信号通路被激活,降低CHOP表达活性,减少细胞凋亡,抑制杯状细胞被破坏,保护肠黏膜屏障,改善UC大鼠的症状和体征,这可能是芍药汤治疗UC的作用机制。     

大黄通过调控紧密连接蛋白治疗大鼠脓毒症

目的:探究大黄治疗脓毒症大鼠的分子机制。方法:100只Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,大黄高、中、低剂量组(150,100,50 mg·kg~(-1)),除假手术组只暴露盲肠,不进行结扎与穿孔,其余各组采用盲肠结扎法制作大鼠脓毒症模型,记录各组大鼠死亡情况,采用细菌16S rRNA实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测大鼠结肠及肠系膜淋巴结、血液中金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌数量,采用q PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测大鼠结肠紧密连接蛋白紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)和闭锁蛋白(Occludin)水平。结果:与假手术组比较,脓毒症模型组大鼠病死率最高,不同标本的金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌检出率和数量明显升高,ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,大黄高、中剂量组大鼠病死率降低,大鼠不同标本的上述两细菌检出率和数量有所减低,细菌移位情况减少,大鼠结肠的ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:大黄可调控结肠紧密连接蛋白表达保护肠黏膜屏障,从而抑制脓毒症大鼠细菌移位治疗脓毒症。     

艾灸预处理“天枢”穴对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障保护的机制研究

目的：观察艾灸预处理“天枢”穴对UC大鼠的抗炎效应,探讨艾灸预处理“天枢”穴对UC大鼠肠黏膜屏障的保护机制。方法：SD雄性大鼠28只,随机分为正常组、模型组、隔药灸预处理组和温和灸预处理组,每组7只。造模前先予隔药灸、温和灸预处理干预7天;预处理后予模型组、隔药灸预处理组、温和灸预处理组4%葡聚糖硫酸钠水溶液连续饮用7天。采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化;免疫组化法和western blot法检测大鼠结肠组织分子的蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组结肠组织病理学评分显著升高,Occludin、JAM1、MUC2、ZO-1蛋白表达显著降低,NF-κBp65、IL-1β蛋白表达显著升高（P ＜ 0.05）;与模型组比较,隔药灸预处理组结肠组织病理学评分显著降低,Occludin、MUC2、JAM1、ZO-1蛋白表达显著升高,NF-κBp65、IL-1β蛋白表达显著降低（P ＜ 0.05）,温和灸预处理组结肠组织病理学评分显著降低,Occludin、MUC2、ZO-1蛋白表达显著升高,IL-1β蛋白表达显著降低（P ＜ 0.05）。结论：隔药灸预处理、温和灸预处理“天枢”穴均能升高UC大鼠肠黏膜屏障相关蛋白的表达,可能是艾灸有效预防减轻UC的机制之一。     

芍药汤经HMGB1调节湿热型溃疡性结肠炎大鼠MyD88和NF-κB的分子机制

目的:观察芍药汤对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型结肠组织中高迁移率族蛋白B_1(high mobility group protein B_1,HMGB_1)的调控,分析其对衔接蛋白髓样分化因子88(My D88)和核转录因子-κB(NF-κB)的影响,探讨芍药汤对湿热型UC的作用机制。方法:Wistar大鼠雌雄各60只,分为空白组、模型组、芍药汤高、中、低剂量组、柳氮磺砒啶组,以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)结合乙醇复合法复制湿热型UC大鼠模型,芍药汤高、中、低剂量灌胃,柳氮磺砒啶组予柳氮磺砒啶研磨成粉配置成与中药等体积液体灌胃,空白组及模型组予等体积生理盐水灌胃,连续21 d。取结肠组织,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time,PCR)法、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测mRNA及蛋白表达,苏伊红-木精(HE)染色观察病理切片。结果:与空白组比较,模型组HMGB_1,My D88,NF-κB蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05);与模型组比较,芍药汤各组、柳氮磺砒啶组HMGB_1,My D88,NF-κB蛋白及mRNA表达均有不同程度地下降,芍药汤高剂量组及柳氮磺砒啶组最为显著(P0.05)。结论:芍药汤可调控HMGB_1抑制TLRs信号通路中My D88,NF-κB基因表达,减弱湿热型UC的炎症反应。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠肠黏膜屏障的调控作用

目的观察脾阴虚状态下肠黏膜屏障的改变及滋补脾阴方药的调控作用。方法将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组(简称C组)6只和模型组(简称M组)14只。采用饮食不节与劳倦过度结合耗伤阴液法建立脾阴虚大鼠模型。脾阴虚造模后将M组随机分为脾阴虚组(简称S组)和滋补脾阴方药组(简称Z组)。每周收集粪便进行16S rRNA测序。采用qPCR技术检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA水平;Western Blot法检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达;ELISA法检测肠道炎症因子水平。结果在门水平上,S组较C组厚壁菌门比例增加(P0.05),拟杆菌门下降(P0.05),Z组较S组厚壁菌门减少(P0.01),拟杆菌门增加(P0.01);在属水平上,S组较C组乳杆菌属和Paraprevotella属比例升高(P0.05,P0.01),瘤胃球菌属和粘放线菌属下降(P0.01,P0.05);Z组比较于S组乳杆菌属比例明显减少(P0.0001),瘤胃球菌属和粘放线菌属增加(P0.05,P0.01),Paraprevotella属呈下降趋势(P0.05)。与C组比较,S组空肠Claudin-1 mRNA和蛋白表达下降(P0.05,P0.01),Occludin mRNA和蛋白表达降低(P0.01),ZO-1 mRNA和蛋白表达呈降低趋势(P0.05);与S组比较,Z组Claudin-1 mRNA和蛋白水平升高(P0.01),Occludin mRNA和蛋白表达增加(P0.05),ZO-1 mRNA和蛋白水平呈上升趋势。S组空肠IFN-γ和IL-17含量较C组增加(P0.001),sIgA、TGF-β、IL-4与IL-10水平下降(P0.01,P0.001);Z组较S组IFN-γ、IL-17含量减少(P0.001,P0.01),sIgA、TGF-β、IL-4与IL-10含量升高(P0.01,P0.001)。结论滋补脾阴方药能够调节肠道菌群中厚壁菌门、拟杆菌门、瘤胃球菌属、乳酸杆菌属与粘放线菌属比例,增加Claudin-1、Occludin mRNA和蛋白表达,并调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞分泌的细胞因子水平,改善脾阴虚大鼠肠黏膜生物屏障、机械屏障及免疫屏障的异常变化。     

穴位埋线对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接的影响

目的:观察穴位埋线对"虚、瘀"状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜上皮紧密连接的影响,并探讨其作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为对照组(12只)和造模组(48只),采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃制备大鼠"虚、瘀"状态,然后用5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS,100 mg/kg)加0.25 mL 50%乙醇灌肠诱导大鼠UC模型。选取造模成功的30只大鼠随机分为模型组、药物组和埋线组,每组10只。埋线组取双侧"足三里""天枢""膈俞""脾俞""肾俞""大肠俞"穴进行埋线治疗,每14天1次,共3次;药物组采用柳氮磺吡啶肠溶片灌胃治疗,每日1次;对照组、模型组和埋线组同时予等量0.9%氯化钠溶液,均干预42 d。观察各组大鼠的一般情况及体质量变化,采用肉眼及HE染色观察大鼠结肠组织外观及形态学变化,ELISA法检测各组大鼠血清中钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的含量,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织肠黏膜上皮紧密连接蛋白occludin、claudin1、claudin2、ZO-1 mRNA水平,Western blot法检测各组大鼠结肠组织肠黏膜上皮紧密连接蛋白occludin、claudin1、claudin2、ZO-1及CaM KⅡ、MLCK的蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量下降(P0.01),结肠组织明显肿胀,出血,大量炎性细胞浸润,结肠组织学损伤指数评分升高(P0.01),血清CaM KⅡ和MLCK含量升高(P0.01),结肠组织occludin、claudin1和ZO-1 mRNA和蛋白水平降低(P0.01),claudin2 mRNA和蛋白水平升高(P0.01),CaMKⅡ和MLCK蛋白水平升高(P0.01)。与模型组比较,药物组和埋线组大鼠体质量增加(P0.01),结肠病变明显减轻,组织学损伤指数评分降低(P0.01),血清CaMKⅡ和MLCK含量降低(P0.01),结肠组织内occludin、claudin1和ZO-1 mRNA和蛋白水平增高(P0.01,P0.05),claudin2 mRNA和蛋白水平降低(P0.01),CaMKⅡ和MLCK蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。埋线组和药物组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:穴位埋线能修复肠黏膜上皮紧密连接,降低肠黏膜上皮通透性,其机制可能与降低CaMKⅡ、MLCK等蛋白激酶的表达有关。     

针刺对去卵巢大鼠骨密度及肠黏膜跨膜钙转运相关受体表达的影响

目的:观察针刺对去卵巢大鼠骨密度及钙离子转运相关受体的影响,探讨针灸防治骨质疏松症的机制。方法:3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和电针组,每组8只。模型组和电针组大鼠行双侧卵巢摘除术。电针组交替给予"关元"+"三阴交"(双)和"肾俞"+"后三里"(双)电针干预,每次电针20 min,每日1次,每周连续干预5 d,共12周。12周后用骨密度仪统一测定右侧胫骨、股骨骨密度;采用荧光定量PCR及Western blot法检测肠黏膜内瞬时感受器电位香草酸受体5(TRPV5)、瞬时感受器电位香草酸受体6(TRPV6)、钠钙交换体1(NCX1)和细胞膜钙离子三磷酸腺苷水解酶(PMCA1b)及与钙离子细胞旁转运相关的紧密连接蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白occludin和claudin mRNA和蛋白的表达水平。结果:与空白组、假手术组比较,模型组大鼠骨密度明显降低(P0.05);与模型组比较,电针组骨密度明显提高(P0.05)。与空白组、假手术组比较,模型组肠黏膜内TRPV6、NCX1 mRNA表达上调(P0.01),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin的mRNA表达明显下调(P0.01);与模型组比较,电针组肠黏膜TRPV6、 NCX1 mRNA的表达明显下调(P0.01,P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1和occludin的mRNA表达水平均上调(P0.01,P0.05)。与空白组、假手术组比较,模型组TRPV6、NCX1蛋白表达量升高(P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表达量显著降低(P0.05);与模型组比较,电针组TRPV6和NCX1的表达量降低(P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论:电针能提高去卵巢大鼠的骨密度,增强参与钙离子吸收跨细胞途径的TRPV5、 PMCA1b的mRNA和蛋白表达以及细胞旁途径ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达,这可能是针灸防治骨质疏松症的机制之一。     

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠CD40表达的影响

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠CD40分子蛋白和基因表达的影响。方法:SD大鼠60只,随机分为空白组,模型组,健脾益肠散高、中、低剂量组和西药组(柳氮磺吡啶组);采用TNBS/乙醇法制备UC大鼠模型;灌胃相应药物21 d后,免疫组化、Western blot和RT-PCR法分别检测各组大鼠结肠组织中CD40的蛋白和mRNA表达。结果:模型组大鼠结肠组织CD40的蛋白和mRNA表达较空白组显著升高(P 0. 01)。各给药组均可不同程度地降低结肠CD40蛋白和mRNA的表达(P 0. 05或P 0. 01),且以健脾益肠散高剂量最为明显,而健脾益肠散中剂量与柳氮磺吡啶比较差异不显著(P 0. 05)。结论:健脾益肠散对UC肠黏膜的免疫保护可能与降低CD40的表达有关。     

芍药汤对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织TLR2、PIK3CA、AKT信号通路表达的影响

目的：观察芍药汤对溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织PIK3CA、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）、Toll样受体2（TLR2）基因表达的影响,探讨其作用机制。方法：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺胺吡啶（SASP）组和芍药汤低、中、高剂量组,除空白组外,其余各组大鼠采用食物诱导联合2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）结合乙醇复合法复制湿热蕴结型UC大鼠模型。从造模后第2天开始各组分别灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续21d。末次给药24h后取结肠组织,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测PIK3CA、AKT、TLR2的mRNA和蛋白表达。结果：模型组大鼠结肠组织PIK3CA、AKT、TLR2的mRNA和蛋白表达均明显高于空白组（P<0.01）;与模型组比较,SASP组PIK3CA、AKT、TLR2 mRNA和蛋白表达均显著下调（P<0.01）,芍药汤各剂量组上述指标也有不同程度的降低,尤以高剂量组最为明显（P<0.01）,表现出一定的剂量依赖性;芍药汤高剂量组大鼠结肠组织PIK3CA、AKT、TLR2的mRNA和蛋白表达与SASP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：芍药汤对TNBS诱导的UC模型大鼠的治疗机制可能与其抑制TLR2、PIK3CA、AKT基因表达有关。     

补阳还五汤对大鼠脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用

目的:建立体外血脑屏障模型,研究补阳还五汤对氧糖剥夺再灌注损伤状态下血脑屏障功能及紧密连接相关蛋白表达的影响。方法:分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外血脑屏障氧糖剥夺再灌注损伤模型,将细胞分为空白组、模型组、补阳还五汤提取液处理组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活性;采用转移小室(Transwell)检测牛血清白蛋白(BSA)的透过量;蛋白质印迹(Western blot)实验检测紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)和紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)的表达;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测紧密连接蛋白Occludin,ZO-1 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞活力降低,BSA的透过率明显升高,Occludin,ZO-1蛋白及其mRNA的表达量明显降低(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤预处理后细胞存活性明显升高,BSA的透过率降低,Occludin,ZO-1蛋白及其mRNA的表达量明显升高(P0.05)。结论:补阳还五汤能够降低氧糖剥夺再灌注处理对体外血脑屏障模型的损伤,上调紧密连接蛋白ZO-1,Occludin蛋白及其mRNA的表达量。     

芍药汤调节湿热型溃疡性结肠炎大鼠JAK2/STAT3和SOCS3的分子机制

目的:观察芍药汤通过治疗湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型,对结肠组织JAK2/STAT3和SOCS3的影响,从分子水平上探讨芍药汤治疗湿热型UC的机制。方法:Wistar大鼠雌雄各60只,分为空白组、模型组、芍药汤高、中、低(24,12,6 g·kg~(-1))剂量组、阳性药组(柳氮磺砒啶组,1 g·kg~(-1)),通过高脂高糖辛辣食物加免疫复合法,2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)结合乙醇复合法复制湿热型UC大鼠模型,芍药汤高、中、低剂量灌服,柳氮磺砒啶组予柳氮磺砒啶研磨成粉灌服,空白组及模型组予等体积生理盐水灌胃,连续21 d。采集结肠组织,运用苏木素-伊红(HE)染色观察病理切片、实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测基因含量、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白含量。结果:模型组产生炎症反应,镜下出现黏膜损伤、溃疡,提示造模成功。与空白组比较,模型组JAK2,STAT3蛋白及基因表达明显升高(P0.05),SOCS3明显下降(P0.05);与模型组比较,各治疗组JAK2,STAT3蛋白及基因表达明显下降,其中芍药汤高剂量组最为显著(P0.01),SOCS3明显升高,芍药汤高剂量组最为显著(P0.05)。结论:芍药汤能够改善湿热型UC大鼠结肠黏膜组织的病变程度,有效减轻炎症反应,与SOCS3抑制JAK2/STAT3信号通路,产生负反馈调节,降低其活化有关。     

参苓白术颗粒对功能性腹泻大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达的作用

目的:观察参苓白术颗粒对功能性腹泻模型大鼠肠黏膜紧密连接蛋白的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高乳糖+小平台站立法建立功能性腹泻脾虚证大鼠模型,将90只大鼠随机分为正常组,模型组(高乳糖+小平板),匹维溴铵组,参苓白术颗粒高、中、低剂量组,每组15只,参苓白术颗粒高、中、低剂量分别为3.212,1.606,0.803 g·kg~(~(-1)),匹维溴铵给药剂量为0.012 5 g·kg~(~(-1));正常组与模型组灌服生理盐水,每天灌胃3次,共14 d。观察大鼠一般情况,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中二胺氧化酶(DAO)水平、结肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测紧密连接蛋白~(~(-1))(zonula occludens~(~(-1)),ZO~(~(-1))),封闭蛋白~(~(-1))(Claudin~(~(-1))),咬合蛋白(Occludin)mRNA表达,免疫组化法检测ZO~(~(-1)),Occludin蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组血清中DAO水平、结肠黏膜TNF-α含量明显升高(P0.01),ZO~(~(-1)),Claudin~(~(-1)),Occludin mRNA表达明显降低(P0.01),ZO~(~(-1)),Occludin蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,参苓白术颗粒能够降低血清中DAO水平、结肠黏膜TNF-α含量(P0.01),上调功能性腹泻模型大鼠结肠黏膜ZO~(~(-1)),Claudin~(~(-1)),Occludin mRNA表达(P0.01),上调ZO~(~(-1)),Occludin蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:参苓白术颗粒能够调节功能性腹泻大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达,调节肠黏膜机械屏障,这可能是从脾论治功能性腹泻的机制之一。     

温中健脾、清热燥湿法对TNBS/无水乙醇诱导的溃疡性结肠炎(寒热错杂证)模型大鼠Occludin蛋白的影响

目的观察温中健脾、清热燥湿法对TNBS/无水乙醇诱导的寒热错杂证溃疡性结肠炎(UC)大鼠及Occludin蛋白的作用影响并探讨其作用机制。方法70只雄性SD大鼠随机分为7组,除空白组外,其余均用5%TNBS/无水乙醇保留灌肠3 d复制寒热错杂证UC大鼠模型,造模后分别用蒸馏水,清肠温中浸膏高、中、低剂量,美沙拉秦缓释颗粒和乌梅丸颗粒剂灌胃干预10 d,记录大鼠疾病活动指数、结肠黏膜损伤指数(CMDI),观察结肠组织病理改变,免疫组化染色观察Occludin蛋白表达。结果与空白组比较:模型组大鼠体质量明显减轻(P0.01);便潜血、便质、CMDI、结肠组织病理评分明显升高(P0.01);结肠Occludin蛋白表达明显减少(P0.01)。与模型组比较:中药中剂量、乌梅丸和美沙拉秦组体质量均增加((P0.05或P0.01);中药中剂量和美沙拉秦组便潜血和便质评分下降(P0.05),病理组织评分明显降低(P0.01),Occludin蛋白表达明显增加(P0.01);美沙拉秦组CMDI评分降低(P0.05),中药组评分下降但差异尚无统计学意义(P0.05)。结论温中健脾、清热燥湿法可以减轻TNBS/无水乙醇诱导的寒热错杂证UC大鼠疾病程度,改善体质量、便潜血和便质,减轻结肠黏膜损伤,修复结肠黏膜组织病变并增加Occludin蛋白表达,提高肠上皮细胞间紧密连接完整性,从而起到治疗UC的效果。     

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织HSP70表达的影响

目的:探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织热休克蛋白70(HSP70)蛋白和mRNA表达的影响。方法:将健康SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为2组,正常组和造模组;造模组采用二硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型;待复制模型成功后将造模组随机分为5组,分别为模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg~(-1))以及健脾益肠散高、中、低剂量组(204,136,68 g·kg~(-1)),每组10只;灌胃相应药物21 d后,观察各组大鼠的一般状态和结肠黏膜组织损伤情况,免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分别检测大鼠结肠组织中HSP70的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜损伤评分显著升高(P0.01),HSP70蛋白和mRNA表达均显著降低(P0.01)。与模型组比较,各给药组结肠黏膜损伤评分均显著降低(P0.01),各给药组均可增加结肠组织HSP70的蛋白和mRNA表达(P0.05,P0.01),其中以健脾益肠散高剂量组最为明显(P0.05,P0.01)。结论:健脾益肠散可能通过促进HSP70的表达而达到对UC大鼠结肠黏膜的免疫保护,从而发挥治疗作用。