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1.
目的应用分子线性探针(Geno Type MTBDRplus·GTplus)技术检测绵阳地区结核分枝杆菌的耐药性,了解耐多药结核病的状况,为制定地区结核病的预防控制策略提供科学依据。方法应用病例对照研究方法,对绵阳市9个县(市、区)送检的235株结核分枝杆菌同时运用GTplus和国际标准法-比例法检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,分析GTplus诊断耐多药结核病的敏感性和特异性。结果 228株样本的结果有效,GTplus检测绵阳地区结核病耐多药率为14.04%(32/228),与比例法14.47%(33/228)相比,诊断耐多药结核病的结果差异无统计学意义(P0.05),敏感性和特异性分别为81.82%(27/33)和97.44%(190/195);结果报告时间1 d,明显快于比例法的42 d。结论 GTplus诊断耐多药结核菌特异、敏感、快速、方便,对控制结核病的传播具有重要意义。  相似文献   

2.
目的 了解广西百色地区利福平、异烟肼耐药基因的分布情况。评价线性探针杂交技术(LPA)检测耐药结核分枝杆菌的应用价值。方法 利用LPA技术与传统比例药敏试验分别检测496例结核分枝杆菌感染患者痰标本,统计出利福平、异烟肼各个耐药基因的分布情况并与传统比例药敏试验作比较。结果 LPA技术对结核病患者耐多药的检出率和传统比例药敏试验相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。LPA技术检测耐利福平和异烟肼的灵敏度、特异度分别为97.0%、99.1%和77.8%、 99.5%,耐多药结核病的灵敏度和特异度分别为82.8%和99.8%。本地区利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB WT8 占32.4%,其次是ropB MUT3占29.7%;异烟肼耐药基因最常见的突变是 katG WT 占46.8%,其次是katG MUT1 占43.6%。kappa一致性检验评价两种药物耐药性检测方法的kappa值分别为0.965和0.904。结论 广西百色地区结核分枝杆菌利福平的耐药基因以rpoB WT8和ropB MUT3两个位点突变为主,而结核分枝杆菌异烟肼的耐药基因则以katG WT和katG MUT1位点突变多见。LPA技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性,LPA技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性与传统比例药敏试验具有高度的一致性,LPA检测技术可以大大地缩短检测的时限,辅助临床快速诊断出多耐药的结核菌。  相似文献   

3.
目的 评价线性探针技术(Geno-Type?MTBDRplus)检测结核分枝杆菌耐药性的可靠性和及时性.方法 用线性探针技术对240株结核分枝杆菌进行利福平、异烟肼耐药性检测,以比例法药敏试验作为金标准,比较线性探针法与比例法药敏试验耐药结果的符合程度,评价其准确性和应用价值,同时比较二者检测报告时间.结果 与比例法相比较,线性探针技术检测异烟肼敏感性96.8%,特异性95.3%;阳性预测值97.4%,阴性预测值94.3%;检测利福平敏感性95.8%,特异性91.8%;阳性预测值94.4%,阴性预测值93.4%.比例法检出耐多药88例,检出率为36.7%,线性探针法检出耐多药87例,检出率36.3%,一致率为98.9%,检测耐多药的敏感度98.9%,特异性100%;阳性预测值100%,阴性预测值99.3%,两种方法检出率差异无统计学意义(校正x2=0.0000,P=1.0000).结论 线性探针技术检测利福平、异烟肼耐药性与比例法具有高度一致性,有较高的敏感性和特异性,而且操作简便、结果准确,报告时间短,可以作为地市级快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法.  相似文献   

4.
《新乡医学院学报》2017,(10):920-923
目的探讨分子线性探针杂交法在快速检测结核分枝杆菌耐药性中的效果。方法选择新乡医学院第一附属医院住院治疗的结核患者的临床标本750例,其中结核分枝杆菌临床分离株190例,痰涂片阳性标本560例。所有临床标本分别采用传统方法及分子线性探针杂交法进行检测,对2种方法检测的异烟肼(INH)和利福平(RFP)的耐药结果进行比较,采用分子线性探针杂交法对耐药菌株进行基因分型,分析INH及RFP耐药相关突变位点情况。结果传统方法检测中,560例痰涂片阳性标本中共检测出结核分枝杆菌454例,其对INH、RFP耐药率分别为15.0%(68/454)、17.8%(81/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为26.8%(51/190)、18.4%(35/190);传统方法检测的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为18.5%(119/644)、18.0%(116/644)。分子线性探针杂交法检测454例结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为14.1%(64/454)、17.6%(80/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为23.2%(44/190)、16.3%(31/190);分子线性探针杂交法检测的对INH、RFP的总耐药率分别为16.8%(108/644)、17.2%(111/644)。2种方法检出的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率比较差异无统计学意义(INH:χ~2=0.140、0.691、0.650;RFP:χ~2=0.011、0.293、0.131;P>0.05)。分子线性探针杂交法检测中,对INH和RFP的灵敏度、特异度分别为85.7%、98.9%和90.5%、98.9%,其中kat G-S315T1为INH耐药主要突变位点,约占88.9%,rpo B-S531L为RFP耐药主要突变位点,约占81.1%。结论分子线性探针杂交法能够快速检测出结核菌株和痰标本中结核分枝杆菌的耐药性,并能对耐药基因进行分型,减少药物敏感性试验的时间,并能根据药物敏感性结果尽快采取有效的治疗方案。  相似文献   

5.
目的评价线性探针杂交技术(HAIN技术,Geno Type MTBDR plus试剂盒)对结核分枝杆菌耐药的检测效果。方法利用传统药敏试验和HAIN技术同时对邯郸市的297例培阳肺结核病人进行耐多药检测,以传统药敏试验为金标准对HAIN技术耐药检测效能进行评价。收集邯郸市临床肺结核病人痰标本培养物,对比分析传统比例法药敏试验和HAIN技术对异烟肼和利福平的耐药检测效果。结果传统比例法药敏试验检测297份培养物有295份为结核分枝杆菌,其中异烟肼(INH)耐药40例(13.4%)、利福平(RFP)耐药43例(14.5%)、耐多药肺结核18例(6.1%);线性探针技术检测297份标本中295份为结核分枝杆菌,同时检测出异烟肼(INH)耐药41例(13.8%)、利福平(RFP)耐药45例(15.1%)、耐多药肺结核18例(6.1%)。使用分析软件SPSS 13.0进行统计分析,利福平:χ2=0.053,P=0.817,差异无统计学意义(P>0.05)。异烟肼:χ2=0.014,P=0.905,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HA...  相似文献   

6.
目的评价Genotype MTBDR plus快速检测耐多药结核病的临床应用价值。方法对涂阳肺结核患者痰标本和临床分离菌株分别用传统比例法药敏试验和Genotype MTBDR plus进行异烟肼和利福平耐药性检测,以比例法药敏试验为金标准对Genotype MTBDR plus检测结果进行比较分析。结果在368例涂阳痰标本中,比例法药敏试验与Genotype MTBDR plus检测异烟肼、利福平耐药率比较,差异均无统计学意义(P均0.05);两种方法检测异烟肼和利福平的一致率分别为95.38%(351/368)和97.55%(359/368)。在85例临床分离菌株中,比例法药敏试验与Genotype MTB-DR plus检测异烟肼、利福平耐药率比较,差异均无统计学意义(P均0.05)。两种方法检测异烟肼和利福平一致率分别为92.94%(79/85)和96.47%(82/85)。与比例法药敏试验比较,Genotype MTBDR plus检测涂阳痰标本和菌株中异烟肼的灵敏度分别为76.32%(29/38)、78.57%(11/14),特异性分别为97.58%(322/330)、95.77%(68/71));检测利福平的灵敏度分别为93.55%(29/31)、91.67%(11/12),特异性分别为97.92%(330/337)、97.26%(71/73)。结论 Genotype MTBDRplus能快速检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平的耐药性,和传统药敏试验比较具有较高的一致性和特异性,是目前快速诊断耐多药结核病的一种较为理想的检测方法,适宜在有条件的实验室开展。  相似文献   

7.
8.
目的 探讨荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合菌群(MTBC)对利福平、异烟肼耐药性的价值。方法 回顾性分析2018年6月—2021年4月惠州市职业病防治院收治的528例肺结核与耐多药结核病患者的临床资料。所有患者均进行痰液标本采集,采集后进行送检,之后进行分离培养和药敏试验,采用荧光PCR探针熔解曲线法对MTBC对利福平、异烟肼的耐药性进行测定分析,最终获得211份阳性菌株,再经鉴定为MTBC 208份,3份为非结核分枝杆菌。对荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC耐药性的效能进行分析。结果 经比例法进行的药敏试验结果显示,208份MTBC菌种标本中,120份对利福平具有耐药性,146例对异烟肼具有耐药性;经荧光PCR探针熔解曲线法检查后,135份对利福平耐药,敏感73份,其中仅有114份确定对利福平具有耐药性;经荧光PCR探针熔解曲线法检查后,134份对异烟肼耐药,敏感74份,其中有131份确定对异烟肼具有耐药性。荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平、异烟肼耐药性的特异度分别为76.14%,95.16%,对异烟肼耐药性的检测特异度高于利福平,差异具备统计学意义(P&l...  相似文献   

9.
分子线性探针技术分析四川地区结核分枝杆菌耐药情况   总被引:1,自引:0,他引:1  
摘要:目的应用分子线性探针GenoType®MTBDRplus Assay(GTplus)试剂盒检测四川地区耐多药结核分枝杆菌(MTB)
株的基因型特征,并初步了解耐药结核病的流行情况。方法选取结核确诊患者105份临床标本和68株临床分离株,应
用GTplus 试剂盒检测MTB耐利福平和异烟肼相关的rpoB、katG、inhA 基因的突变,推测其对利福平和异烟肼的耐药
性。结果151例样本的GTplus结果有效,总耐药率和耐多药率分别为29.14%(44/151)和17.22%(26/151);耐利福平和
高、低水平耐异烟肼的突变菌株分别为21.85%(33/151)、21.19% (32/151)和3.31%(5/151);突变型以rpoB S531L、katG
S315T1和inhA C-15T为主。痰标本组的耐多药菌株比率明显高于肺外标本组。结论四川地区MTB耐药形势严峻,尤
以耐多药结核病的情况严重,耐药菌株以rpoB S531L和katG S315T1突变型为主,应推广快速分子药敏试剂盒的临床应
用,快速并提高对耐药结核病的诊断。  相似文献   

10.
陈兆云  蒋静  王家路  杨立 《新疆医学》2012,42(11):55-59
目的:应用DNA芯片杂交技术快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对利福平(RifampicinRFP)和异烟肼(isoniazide INH)的3个耐药相关基因rpoB、katG、inhA基因,并评价其临床应用价值。方法:采用基因芯片技术对我院2010年10月~2011年4月门诊或住院患者的体液标本经培养、分离和鉴定得到的34株结核分枝杆菌样本进行耐药相关基因检测,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果:34株样本中,利福平rpoB基因有7株突变,总突变率为20.6%,其中6株为531(C-T)位点突变,1株526(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为88.2%。异烟肼基因突变有10株,总突变率为29.4%,其中7株为KatG 315(G-C)位点突变,1株为katG 315(G-A)位点突变,2株为inhA-15(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为85.3%。利福平的7株耐药株中,基因芯片检测5株为突变型,突变率为71.4%.,在利福平的27株敏感株中,基因芯片检测2株为突变型,突变率为7.4%。在异烟肼的9株耐药株中,基因芯片检测7株为突变型,突变率为77.8%,在异烟肼的25株敏感株中,基因芯片检测3株为突变型,突变率为12%。耐药基因检测灵敏度和特异度分别为利福平71.4%和92.6%,异烟肼77.8%和88%。结论:用基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。  相似文献   

11.
PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌耐药性   总被引:10,自引:0,他引:10  
目的:探讨耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药性的关系以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(poly merase chain reaction-single strand cinfomlation polymorphism,PCR-SSCP)方法的临床应用价值。方法:用PCR-SSCP方法检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG,rpoB,rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比。结果:经常规药敏试验检测,58株结核分枝杆菌临床分离株中共有41株耐药,其中,耐异烟肼(INH)为35株,高耐药株27株;耐利福平(RFP)为31株,高耐药株24株;耐链霉素(SM)有31株,高耐药株26株。同时耐3种药物的有21株(51.2%),耐2种药物的14株(34.1%),单耐药株6株(14.6%).PCR-SSCP方法对58株临床分离株katG,rpoB,rpsL基因突变的检测率为40%(23/58),45%(26/58),38%(22/58),其中检出3个基因同时突变的有13株(32%),2种基因突变的12株(29%),1种基因突变的有10株(23.8%).常规药敏试验与PCR-SSCP法检出结核分枝杆菌同时耐3种药物的符合率为61.9%(13/21),检出耐2种药物的符合率为85.70k,(12/14),检出耐1种药物的符合率为50%(3/6).高耐药株中突变率为80.5%(62/77),低耐药株中突变率为60%(12/20).结论:PCR-SS-CP方法对耐2种以上药物的结核杆菌检出率较高,且耐药基因突变率随着耐药浓度增高而增高。将PCR-SSCP法与药敏试验联合应用可互相弥补,已成为临床指导用药的好方法。  相似文献   

12.
宋华峰  赵静  胥萍 《中国热带医学》2019,19(11):1022-1025
目的 探究和分析荧光定量PCR检测技术在结核分枝杆菌耐药性检测方面的价值。方法 随机选取苏州市第五人民医院门诊或者住院病人的痰培养阳性标本菌株,并提取核酸。应用荧光定量PCR扩增试剂盒对菌株标本的链霉素、利福平、异烟肼、乙胺丁醇、阿米卡星以及莫西沙星的耐药情况进行检测分析,并将检测结果与传统的罗氏药敏比例法进行比对分析。结果 与罗氏药敏比例法相比较,荧光定量PCR检测法对链霉素、利福平、异烟肼、乙胺丁醇、阿米卡星以及莫西沙星的耐药检测符合率分别为90.48%、82.14%、83.33%、88.09%、89.29%、89.28%。Kappa检验结果显示,两种方法对链霉素的检测结果一致性较高,Kappa值为0.815;对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、莫西沙星的检测结果一致性一般,Kappa值分别为0.637、0.631、0.623、0.578;对阿米卡星的检测结果一致性较差,Kappa值为0.279。结论 荧光定量PCR检测技术对于结核分枝杆菌耐药性的快速检测均有很好的应用价值,对于临床上的精准用药具有一定的指导意义。  相似文献   

13.
Background China is one of the high burden countries of Mycobacterium tuberculosis (TB) infection globally, with high incidence and mortality. We studied the molecular characteristics of rifampin (RIF) and isoniazid (INH) resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Beijing, China, in order to find out the genetic marker for rapid detection of specific drug resistance. Methods Forty pansusceptible and 81 resistant strains of Mycobacterium tuberculosis isolated from Beijing, China during 2002-2005 were analyzed. The modified rifampin oligonucleotide (RIFO) assay based on reverse line blot hybridization was used to detect mutations in the 81 bp hot-spot region of rpoB gene, which is associated with RIF resistance. The INH resistance associated genes, regulatory region mab-inhA (-15C/T) and structural gene katG S315T were detected by reverse line blot hybridization and PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) method respectively. All the strains were typed by spoligotying and the Beijing genotype was further subdivided by NTF locus analysis. The distribution of drug resistance associated mutations in the above genes was compared in these groups. Results Sixty-five (91.5%) of 71 RIF resistant and 52 (92.9%) of 56 multidrug-resistant (MDR, i.e. resistant to at least RIF and INH) strains were found to harbor mutations in the rpoB hot-spot region. No mutation was detected in RIF sensitive strains. The specificity and sensitivity of the modified RIFO assay were 100% and 91.5%, respectively, katG315 AGC〉ACC and inhA-15C〉T mutations were found in 40 (60.6%) and 10 (15.2%) of 66 INH resistant strains, respectively; 7.6% of INH-resistant strains had mutations in both of these genes. Therefore, a combined use of both katG315 and inhA-15 identified 68.2% of INH-resistant strains. The Beijing genotype accounted for 91.7% of total strains and was further subdivided into "modern" (76.6%) and "ancestral" (23.4%) group. There is no significant difference between "ancestral" and "modern" group in prevalance of drug resistance-associated gene mutations. Conclusions The hot-spot region of rpoB gene can be used as genetic marker for detection of RIF resistant strains; a combined use of both katG315 and inhA-15 can improve the detection rate of I NH resistant strains; the Beijing genotype is prevalent in Beijing, China; the modified RIFO assay can be a practical tool for rapid detection of RIF resistant and MDR isolates in the routine diagnostic work.  相似文献   

14.
目的利用尿素酶试验的方法对结核分支杆菌的耐药性进行检测。方法采用液体结核分支杆菌的培养基加尿素和酚红指示剂,高压消毒灭菌,将分离纯培养鉴定的500株结核分支杆菌接种其中,再加入不同浓度的抗结核分支杆菌的药物进行培养。同时用传统的绝对浓度法对500株结核分支杆菌进行耐药性测定,观测并比较结果。结果500株尿素酶法与传统的绝对浓度法检测结核分支杆菌耐药性结果比较,差异无统计学意义(Χ^2=2.25,P〉O.10)。结论利用尿素酶试验对结核分支杆菌的耐药性进行检测,方法快速、简便,有临床实际意义。  相似文献   

15.
目的 探讨海南省92例肺结核发生耐药的相关危险因素。方法 收集海南省92例耐药的肺结核患者(耐药组)和120例非耐药的肺结核患者(非耐药组)的临床资料(性别、年龄、居住地、初/复治、治疗过程是否中断、结核病诊断治疗史、第一次是否在结核病定点医疗机构就诊)进行统计学处理,把有统计学意义的因素进行多因素非条件Logisitic回归分析,探讨肺结核发生耐药的相关危险因素。结果 肺结核耐药的发生与患者的性别、年龄无关(P>0.05),与居住地、初/复治、治疗过程是否中断、有结核病诊断治疗史,第一次在非结核医疗定点机构就诊有关(P<0.01);多因素非条件Logisitic回归分析显示,居住地为农村(OR=2.467 95%CI=1.309~4.650)、复治(OR=4.046 95%CI=2.274~7.199)、治疗过程曾经中断(OR=5.195 95%CI=2.877~9.381)、有结核病诊断治疗史(OR= 7.792 95%CI=4.206~14.436)和第一次在非结核医疗定点机构就诊(OR=5.495 95%CI=3.038~9.938)是产生耐多药结核病的危险因素。结论 居住地为农村、复治、曾经中断治疗、有结核病诊断治疗史、第一次在非结核病定点医疗机构就诊的肺结核患者易出现耐药性。  相似文献   

16.
王辰  张亚杰 《吉林医学》2009,30(19):2262-2263
目的:分析了解2003年~2006年结核分枝杆菌的耐药性。方法:对2003年~2006年培养阳性的180例住院肺结核患者的耐药情况按初治、复治分组进行回顾性分析。结果:复治组耐药率明显高于初治组,耐单药率以INH较高,耐多药率以HSR占首位。结论:结果显示结核病的耐药情况相当严重,对结核病的临床治疗和管理应给予足够的重视。  相似文献   

17.
目的研究深圳地区结核分枝杆菌临床分离株的基因突变与利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)耐药之间的关系。方法采用反向斑点杂交技术(RDBHA)对182株结核分枝杆菌临床分离株的rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因突变位点进行检测,并采用L-J比例法检测这些分离株对RFP、INH、SM、EMB的耐药性。结果 182株临床分离株中,总的基因突变率为34.62%(63/182),其中rpoB基因突变率最高,达24.17%(44/182)。多重耐药结核菌(MDR-TB)占17.03%(31/182)。以L-J比例法作为金标准,采用RDBHA技术检测分别与RFP、INH、SM、EMB耐药相关的rpoB、katG/inhA、rpsL、embB基因突变,其灵敏度分别为88.89%、67.50%、81.82%和64.29%,特异度分别为97.08%、94.37%、97.99%和92.86%。结论深圳地区结核分离株ropB基因突变最普遍,S531L位点是其突变率最高的位点。深圳地区结核分枝杆菌对4个一线抗痨药物耐药现象均较严重,反向斑点杂交技术(RDBHA)可快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变,能给临床提供快速用药指导。  相似文献   

18.
目的 了解初治和复治肺结核病人对抗结核化学药物的敏感性.方法 收集2006-01~2008-01痰菌阳性标本,用改良罗氏培养基绝对浓度法试验,最终获取培养阳性标本144份,对全部培养阳性标本进行5种抗结核药物异烟肼(INH),利福平(RFP),链霉素(SM),乙胺丁醇(EMB),对氨基酸钠(PAS)的耐药性测定.结果 总耐药率为42.36%(61/144);初始耐药率为14.29%(9/63),初始耐多药率为9.52%(6/63);获得性耐药率为64.20%(52/81),获得性耐多药率为38.27%(31/81).对抗结核药物的耐受,主要是耐受RFP(36.11%,52/144)和INH(33.33%,48/144).结论 获得性耐药率高于初始耐药率,应进一步加强对结核杆菌药物敏感性监测.  相似文献   

19.
目的探讨噬菌体裂解法在基层结核病防治机构实验中的应用价值。方法应用噬菌体裂解法检测临床108例痰标本中结核分枝杆菌对利福平(R)、异烟肼(H)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)的耐药性,并与比例法比较。结果以比例法检测结果为标准,噬菌体裂解法检测利福平(R)、异烟肼(H)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)耐药性的敏感性、特异性及准确性分别为100.0%、96.0%和96.3%,87.5%、95.7%和94.4%,76.2%、100.0%和95.4%,75.0%、96.0%和94.4%。噬菌体裂解法检测利福平(R)、异烟肼(H)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)药敏结果与比例浓度法检测药敏结果符合率分别为96.3%、94.4%、95.4%、94.4%。结论噬菌体裂解法检测痰标本中结核分枝杆菌对利福平(R)、异烟肼(H)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)的耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,与比例法比较,具有较高的符合率,且简便快速。  相似文献   

20.
目的 对临床分离菌株进行鉴定,分析耐利福平结核分支杆菌是人群中传播。方法 采用一对随机引物(P15′-CCGGGGCGGTTC,P2,5′-CCGCCGACCGAC),对从重庆地区肺结核病人痰标本中分离到的100株耐利福平结核发支杆菌的DNA进行随机PCR扩增,根据扩增产物的DNA电泳指纹进行分型。结果 100株耐利福平结核分枝杆菌的DNA指纹可分为6种类型,以Ⅱ、Ⅰ和Ⅲ型为主,它们分别占40%、31%和25%;这3型菌株有1/4是从初治结核病人的痰标本中分离,而地20-39岁年龄段则有1/3是从初治结核病人的痰标本中分离。结论 随机护增DNA指纹是一种简便、敏感、重复性好的菌株分型方法,可用于耐药性结核病流行监测。重庆地区结核病的流行很可能与耐利福平结核分支杆菌的传播有关。  相似文献   

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