凝溶胶蛋白抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭的作用

目的研究凝溶胶蛋白（gelsolin,GSN）对雌激素受体α（ERα）阳性、人表皮生长因子受体2（Her2）过表达乳腺癌细胞MCF7／Her2生长的作用。方法构建GSN的真核表达载体,并稳定转染MCF7／Her2细胞,以RT-PCR及WesternBlot鉴定得到稳定过表达GSN的乳腺癌细胞系McF7／Her2／GsN。以空载体转染的稳定表达细胞MCF7／Her2／V作对照,比较其细胞形态、增殖和迁移能力的改变;WesternBlot及RT-PCR检测Her2、组织金属蛋白酶抑制剂-3（TIMP3）表达和细胞外调节蛋白激酶（ERK）的活化,探索深层次的作用机制。结果MCF7／Her2稳定过表达GSN后,细胞形态改变且增殖及迁移、侵袭能力明显低于对照细胞;发现Her2表达下降,TIMP3的表达上调,而雌激素导致的MCF7／Her2细胞ERK活化增强被逆转。结论凝溶胶蛋白能降低Her2的表达,并通过下调ERK的活化及上调TIMP3的表达,抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭作用。     

RNAi抑制MCF7细胞Lon基因后的生物学效应

目的 通过构建Lon基因表达下调的哺乳动物细胞模型,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计针对Lon蛋白酶基因的小干扰RNA(siRNA),构建pSilencer U6 2.1-Lon真核表达载体,并用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7.RT-PCR法检测Lon基因下调的水平,通过采用高温、紫外线照射、顺铂处理,观察Lon基因下调后细胞敏感性的变化(MTT法);流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡的作用.结果 RT-PCR显示重组质粒pSilencer U62.1-Lon转染MCF7细胞后,Lon基因明显下调,RT-PCR未见扩增目的条带,细胞培养结果显示细胞增殖能力明显减弱.MTT结果显示,pSilencer U6 2.1-Lon转染的MCF7细胞经紫外线照射和顺铂处理后,增殖能力明显下降,与空载体转染组和未转染组相比有显著差异(P＜0.05).加热应激实验显示,41℃处理后,RNA干扰转染组(pSilencer U6 2.1-Lon)与空载体转染组(pSilencer U6 2.1)、未转染组相比有显著性差异(P＜0.05).而在43℃和45℃时,3组之间均无显著性差异(P＞0.05).流式细胞术检测pSilencer U6 2.1-Lon质粒组细胞凋亡率为(22.47±3.15)%,相对于空载体转染组的(2.3±0.9)%和无质粒转染组的(1.14±0.79)%有明显提高,而空载体转染组和无质粒转染组相比无明显差异.结论 RNAi能有效下调Lon蛋白的表达.Lon基因的下调可抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖,诱导细胞凋亡,并可增加MCF7细胞对紫外线和顺铂的敏感性.     

BM11对依托泊苷抑制乳腺癌细胞MCF7增殖的影响

目的 观察BMI1对依托泊苷（ETOP）抑制体外培养的乳腺癌细胞增殖的影响及机制。方法 选择对数生长的乳腺癌细胞MCF7,分为空白对照组、实验组（加ETOP）。采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术（FCM）测定各组MCF7肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测MCF7 BMI1蛋白和ATM蛋白表达的变化。结果 与对照组相比,实验组对乳腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用（P＜0.01）。细胞周期分析显示,实验组使乳腺癌细胞的S期细胞比例减小（P=0.018）,G1期细胞比例增大（P=0.021）。ETOP能够降低BMI1蛋白表达（P=0.008）,增加ATM蛋白的表达（P＜0.01）。结论 ETOP能明显抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞及其下调BMI1蛋白和增加ATM蛋白的表达而诱导细胞凋亡有关。     

BMI1对依托泊苷抑制乳腺癌细胞MCF7增殖的影响

目的观察BMI1对依托泊苷(ETOP)抑制体外培养的乳腺癌细胞增殖的影响及机制。方法选择对数生长的乳腺癌细胞MCF7,分为空白对照组、实验组(加ETOP)。采用MTT法检测细胞活性,流式细胞术(FCM)测定各组MCF7肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测MCF7 BMI1蛋白和ATM蛋白表达的变化。结果与对照组相比,实验组对乳腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P0.01)。细胞周期分析显示,实验组使乳腺癌细胞的S期细胞比例减小(P=0.018),G1期细胞比例增大(P=0.021)。ETOP能够降低BMI1蛋白表达(P=0.008),增加ATM蛋白的表达(P0.01)。结论 ETOP能明显抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞及其下调BMI1蛋白和增加ATM蛋白的表达而诱导细胞凋亡有关。     

Heregulin-β1诱导的糖酵解对乳腺癌细胞MCF7迁移的影响

目的 探讨heregulin-β1（HRG-β1）对糖酵解的诱导作用及其诱导的糖酵解在乳腺癌细胞MCF7迁移中的作用。 方法 用PBS （对照组）或HRG-β1处理MCF7细胞12、24和48 h,或HRG-β1+草氨酸盐（oxamate, OX）联用处理MCF7细胞24 h,收集培养基测定葡萄糖消耗量和乳酸生成量,收集细胞用Western blot检测乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A, LDHA）蛋白的表达。用PBS（对照组）、HRG-β1或HRG-β1+OX联用处理MCF7细胞48 h,划痕实验检测伤口愈合率以反映细胞的迁移能力。结果 HRG-β1处理MCF7 细胞12、24和48 h 组的葡萄糖消耗量、乳酸生成量和LDHA蛋白水平增加均在24 h达最大值,与对照组比较差异有统计学意义（ P<0.05）;与HRG-β1诱导组比较,HRG-β1+OX联用组的葡萄糖消耗量差异无统计学意义（ P>0.05）,乳酸生成量降低（ P<0.01）, LDHA蛋白表达量减少（ P<0.05）;MCF7细胞划痕48 h后,对照组和HRG-β1+OX联用组的伤口愈合率相当（ P>0.05）,均低于HRG-β1诱导组,差异有统计学意义（ P<0.001）。结论 HRG-β1通过上调LDHA诱导糖酵解从而促进乳腺癌细胞MCF7的迁移。     

miR let-7b抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移及其机制

目的： 观察miR let-7b对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法： 合成miR let-7b并转染乳腺癌MCF-7细胞,以miR-control作参照。通过划痕实验观察转染前后细胞迁移能力的变化,运用 PCR和蛋白质印迹法检测转染miR let-7b前后MCF-7细胞内IL-6表达水平的变化。最后通过信息生物学软件及双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合。结果： 与对照组比较,转染miR let-7b的MCF-7细胞迁移能力明显降低,而anti-miR let-7b明显促进细胞迁移。转染miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞中IL-6的表达水平较对照组明显降低,而转染anti-miR let-7b的细胞内IL-6的表达水平明显提高。信息生物学软件和双荧光酶素报告基因证实miR let-7b与IL-6结合。结论： miR let-7b在转录水平抑制乳腺癌MCF-7细胞IL-6的表达从而抑制MCF-7细胞的迁移。     

miR-19影响人乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨miR—19对人乳腺痛MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF7细胞,分别转染pre—miR—19和miR—19抑制物,然后应川俞盼蓝法检测MCF7细胞活性和增殖情况．应用transwell小审法测定MCF7细胞迁移和侵袭能力改变。结果pre—miR—19转染组的MCF7细胞生长抑制率下降,细胞活性和增殖能力增强,细胞迁移侵袭能力增强;miR-19抑制物转染组的MCF7细胞生长抑制率增高,细胞活性和增殖能力F降,细胞迁移侵袭能力减弱。结论仵乳腺癌的发牛发展过程中,miR-19发扦原癌基因作用,促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

野鸢尾黄素对人乳腺癌细胞MCF7增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨野鸢尾黄素对人乳腺癌细胞MCF7增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的作用机制。方法 将MCF7细胞分为低剂量组、高剂量组和对照组。低、高剂量组分别加入40μmol/L和80μmol/L野鸢尾黄素,对照组不加任何药物。用CCK-8实验检测细胞增殖能力,用细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,用Tranwell小室实验检测细胞的侵袭能力,用蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白及p-GSK-3β-ser9的表达水平。结果 干预48 h后,对照组和低、高剂量组的细胞增殖率分别为(100±4.00)%、(62.9±2.60)%、(32.2±6.25)%,迁移的距离分别为(392±7.32)μm、(272±17.45)μm和(92±5.36)μm,侵袭细胞数量分别为(130±3.33)个、(96±3.33)个和(66±2.66)个,β-catenin相对GAPDH的相对表达量分别为0.567±0.06、0.312±0.06和0.243±0.05,p-GSK-3β-ser9相对GAPDH的相对表达量分别为0.501±0.06、0.236±0.04和0.166±0.03。低、高剂量组的上述指标分别与...     

沉默microRNA-20a对乳腺癌MCF7细胞表达NK细胞活化性受体配体MICA的研究

目的 采用寡核苷酸抑制剂特异性沉默乳腺癌MCF7细胞microRNA-20a的表达,检测MCF7细胞表面MICA分子的变化以及对于自然杀伤细胞（NK细胞）介导的杀伤活性的影响。方法 在脂质体介导下用 microRNA- 20a 抑制剂瞬时转染MCF7细胞,采用RT-PCR检测microRNA- 20a的表达量以明确抑制效果;采用免疫印迹法检测转染后MCF7细胞表达MICA分子的变化以及采用结晶紫实验检测MCF7细胞经过转染后以及在加入MICA封闭抗体前后对NK细胞介导的杀伤活性的变化。结果 与转染无关序列组等比较,经过microRNA-20a 抑制剂转染后MCF7细胞表达microRNA-20a下调,同时表达MICA蛋白分子上调;结晶紫法检测NK细胞对MCF7的杀伤活性,显示经过microRNA-20a 抑制剂转染后MCF7细胞的死亡率显著增加（P〈0.01）,同时MICA分子的封闭性抗体能够逆转MCF7细胞升高的死亡率。结论 沉默microRNA-20a能上调MCF7细胞表达NK细胞活化性杀伤受体的配体MICA分子,并导致MCF7细胞在NK细胞介导的杀伤实验中死亡率显著上升。以microRNA- 20a为靶点的RNA干扰有望为增强肿瘤细胞的免疫原性从而上调NK细胞对其发挥杀伤作用提供新的靶点。     

PRMT7抑制前列腺癌细胞体外迁移和侵袭的研究

目的研究PRMT7对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制探究。方法使用R软件从TCGA和GTEx数据库中获得正常前列腺和前列腺癌组织中PRMT7的转录组数据。Western印迹法检测细胞中PRMT7的蛋白水平。通过细胞划痕实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验评估细胞的迁移和侵袭。使用转录组测序分析和无标记定量蛋白质测序分析评估转录物和蛋白质水平。使用siRNA技术敲低KISS1R的表达。结果TCGA和GTEx数据库显示PRMT7在前列腺癌组织的表达低于正常前列腺组织。PRMT7在前列腺癌细胞系中表达低于正常前列腺上皮细胞。细胞划痕实验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验结果表明,PRMT7抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭。全基因组转录组、蛋白质组测序分析以及Western印迹法结果显示,转移抑制基因KISS1R在转录和翻译水平均被PRMT7上调,敲除KISS1R可拯救肿瘤抑制表型。结论本研究揭示了PRMT7在前列腺癌细胞中的抗肿瘤作用,进一步证明了KISS1R是PRMT7调控肿瘤细胞迁移和侵袭的下游效应分子,PRMT7可能是临床治疗前列腺癌的有效靶点。     

基于荧光素酶报告基因的MCF7细胞雌激素样物质检测方法的建立

目的:建立基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素样物质检测方法,并研究2,2-双(对氯苯基)-1,1,1-三氯乙烷(2,4-DDT)和甲氧氯(METH)的雌激素样作用.方法:合成人雌激素反应元件(ERE)核心片段并将其插入pGL3-promoter载体的多克隆位点,构建成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERE-Luc,用脂质体转染法将pERE-Luc及内对照质粒phRL-SV40瞬时转染MCF7细胞,用17β-雌二醇(E2)及受体拮抗剂三苯氧胺(TAM)等处理后检测报告基因荧光素酶的表达,并用雌激素样物质2,4-DDT和METH对方法的有效性进行验证.结果:构建了ERE调控的报告质粒pERE-Luc,转染pERE-Luc的MCF7细胞报告基因的表达与E2呈明显的剂量反应关系,1×10-11mol/L E2可引起报告基因表达,至1×10-9mol/L可达到最大表达值,而未转染pERE-Luc时与E2无明显反应,TAM可以显著抑制E2引起的报告基因的表达.验证结果表明,2,4-DDT浓度>1×10-7mol/L及METH浓度>1×10-6mol/L时可产生雌激素样活性,2,4-DDT的雌激素样活性强于METH.结论:建立的基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠,以此方法检测2,4-DDT和METH显示有明显的雌激素样活性作用.     

p16基因抑制乳腺癌细胞MCF—7增殖的体外和体内实验研究

目的：探讨ｐ１６基因对乳腺癌的治疗作用,为乳腺癌ｐ１６的基因治疗提供实验依据。方法：构建ｐ１６的逆转录病毒载体ｐＬＭＳＮ,包装成病毒后,体外转导ｐ１６基因纯全性缺失的乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明该基因在转导后的ＭＣＦ－７细胞中有表达,用活细胞计数、流式细胞仪、形态观察等方法来检测ｐ１６表达在体外对ＭＣＦ－７细胞生物学行为的影响。进行ＳＣＩＤ鼠体内成瘤实验和逆转录病毒直接注射     

成纤维生长因子2对人乳腺癌细胞MCF7骨涎蛋白表达的影响

【目的】研究成纤维生长因子2（FGF2）对人乳腺癌细胞MCF7骨涎蛋白（BSP）表达的影响。【方法】将MCF7细胞随机分为5组：空白对照组、FGF2（10 ng/ml）刺激3、6、12和24 h组,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测BSP mRNA和蛋白表达水平。【结果】各实验组均有BSP的mRNA表达,其表达水平在FGF2刺激后呈时间依赖性增加,6 h增强最为明显。BSP蛋白表达量也呈时间依赖性增加,12 h增强最为明显。【结论】乳腺癌细胞MCF7组成性表达BSP,在FGF2作用下BSP表达水平呈时间依赖性增强。     

抑制hIAP-2在MCF7乳腺癌细胞中的表达增强抗肿瘤药物的抑癌作用

目的 探讨抑制hIAP-2在MCF7乳腺癌细胞中的表达增强对肿瘤化疗药物抑癌作用的影响。方法 采用MTT法检测mU6/hIAP-2质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果 比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6/hIAP-2与化疗药物顺铂、环磷酰胺或5-氟尿嘧啶合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异有显著性（p<0.01）,但与秋水仙碱合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率明显降低,差异有显著性（p<0.01）;对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用（二者合用效应Q值均≥1）,但对靶向微管的药物秋水仙碱具有拮抗作用（Q值<1）。结论 在敲除乳腺癌细胞中人凋亡抑制蛋白-2功能的基础上进行药物化疗,可能是乳腺癌治疗的一个新的可行方向。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与细胞迁移

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)是一类存在于大多数真核细胞内,转导胞外信号引起细胞反应的丝/苏氨酸蛋白激酶,是细胞内一重要信号系统.其中,p38MAPK信号通路是MAPKs家族的重要组成部分,它经外界刺激应激而激活,故又称为MAPK应急信号通路,其在全身炎性反应、细胞分化及凋亡等方面具有十分重要的作用,近年研究发现p38MAPK信号通路也参与细胞迁移的调控.现就p38MAPK及其在细胞迁移中的作用的研究进展进行综述.     

高乌甲素通过抑制小胶质细胞活化抑制炎症性疼痛

目的 探讨高乌甲素对炎症性疼痛的缓解作用及机制研究。方法 采用完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠验证疼痛模型,并测定其机械性刺激缩爪域值和热痛觉过敏阈值,评估高乌甲素预处理及后处理的疼痛缓解效果;利用免疫光、荧光定量PCR、Western blot法测定脊髓腰膨大L_4-5段GFAP及OX-42的表达情况,并进行统计学分析。结果 ①高乌甲素预处理组比后处理组有更好的疼痛缓解效果。②与正常组比较,溶剂组中GFAP及OX-42表达量显著升高(P＜0.05)。③高乌甲素处理组能降低脊髓腰膨大L_4-5段OX-42的表达(P＜0.05),然而对GFAP的表达没有显著差异(P＞0.05)。结论 高乌甲素能抑制小胶质细胞的活化,进而缓解炎症性疼痛。     

siRNA干扰相互作用蛋白1表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移

目的探讨小干扰RNA（siRNA）干扰降低PC4和SFRS1相互作用蛋白1（PSIP1）的表达对人胶质瘤U87细胞侵袭和迁移 的影响并初步探讨其机制。方法采用化学合成靶向PSIP1的siRNA,脂质体法转染U87细胞,用Real-time PCR检测RNA干 扰效率;Transwell侵袭实验测细胞侵袭能力;划痕实验检测其迁移能力;干扰PSIP1表达后,Western blot 检测间质细胞来源的 N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达。结果PSIP1-siRNA 转染胶质瘤U87细胞后,PSIP1的mRNA水平及蛋白 水平明显下降（P<0.001）,U87 细胞侵袭和迁移能力下降,与阴性转染组及未转染组相比差异有统计学意义（P<0.001,P< 0.001）,Western blot 显示,间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin 蛋白表达量降低,同时与上皮间质转化（EMT）相关的转录因 子Slug 的表达降低。结论在胶质瘤中,抑制PSIP1 的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,N-cadherin、β-catenin 蛋白和转录 因子Slug的表达量降低,提示PSIP1 可通过调控经典Wnt/β-catenin 信号通路来调节Slug 的表达,进而调控EMT,从而参与胶 质瘤U87 细胞的侵袭及迁移。