调胃承气汤对肠源性脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用

【目的】探讨调胃承气汤对肠源性脓毒症(GOS)大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用及机制。【方法】将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,乌司他丁组,中药高、低剂量组,每组8只。除假手术组外,其余大鼠均采用盲肠结扎穿刺法(CLP)复制GOS大鼠模型。造模结束后2、10、24 h,中药高、低剂量组大鼠分别给予调胃承气汤(剂量分别为9.45、4.73 g/kg)灌胃,乌司他丁组大鼠给予腹腔注射乌司他丁(剂量为30 000 U/kg),假手术组与模型组给予等体积生理盐水灌胃。最后一次给药0.5 h后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中白细胞介素6(IL-6)、内毒素(LPS)和肠型脂肪酸结合蛋白(iFABP)的含量。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察小肠组织病理结构变化,免疫组化法检测小肠组织occludin蛋白的表达。【结果】与假手术组比较,模型组血清IL-6、LPS、iFABP水平显著提高(P 0.01),小肠组织occludin蛋白表达显著降低(P 0.01)。与模型组比较,乌司他丁组、中药高剂量组和中药低剂量组血清IL-6、LPS、iFABP水平显著降低(P 0.05或P 0.01),小肠组织occludin蛋白表达显著升高(P 0.01)。病理学观察发现,模型组小肠绒毛、黏膜间隙、固有层等结构产生严重异常,乌司他丁组、中药不同剂量组绒毛结构、黏膜间隙、固有层等结构相对完整。【结论】调胃承气汤可能通过上调小肠组织紧密连接蛋白occludin的表达,从而抑制细菌与内毒素引起炎性反应造成肠黏膜组织结构的损伤,进而对GOS大鼠肠黏膜屏障功能起到一定的保护作用。     

清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin表达的影响

目的：观察清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin表达的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、易善复组和清肝化痰活血方组（简称清肝组）。采用高脂饲料复制NASH模型大鼠;清肝组和易善复组在进食高脂饲料的同时分别予清肝化痰活血方药液和易善复混悬液进行灌胃;第12周时处死所有大鼠,留取血清和肠组织标本。采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）;双抗体夹心ABC—ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的含量;经HE染色光镜下观察肠黏膜组织的病理学变化;RT-PCR法检测肠组织中紧密连接蛋白occludin的mRNA表达。结果：模型组大鼠血清AST、ALT、TNF-α的含量与正常组比较明显升高（P〈0．01）,肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin mRNA的表达与正常组相比明显下降（P〈0．01）;清肝组大鼠血清AST、ALT、TNF—α的含量较模型组降低（P〈0．05,P〈0．01）,肠组织中的occludin mRNA的表达较模型组明显增加（P〈0．01）。结论：清肝化痰活血方具有改善和修复NASH大鼠肠黏膜损伤的作用。     

食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织(P<0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用。     

肠愈宁对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织claudin-1、ZO-1、occludin蛋白表达的影响

目的 探讨肠愈宁对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织紧密连接(TJ)关键蛋白咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白-1(claudin-1)、带状闭合蛋白-1(ZO-1)表达的影响.方法 将60只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、肠愈宁组、美沙拉嗪组,每组各15只.采用2,4,6-三硝基苯磺...     

缓激肽对脑胶质瘤大鼠occludin和ZO-1 mRNA的调节和机制

目的 研究缓激肽(BK)时血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白occludin和zonula occluden-1(ZO-J)mRNA表达的影响,以及转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达水平的变化,探讨CREB在缓激肽调节occludin和ZO-1转录中的作用.方法 雌性Wistar大鼠112只,随机分为7组,即假手术组、模型组、BK 5 min组、BK 10 min组、BK 15min组、BK 30 min组、BK 60 min组.每组16只.建立大鼠C6胶质瘤模型,颈动脉灌注BK,应用RT-PCR法检测肿瘤微血管上紧密连接相关蛋白ocdudin和ZO-1 mRNA表达水平的变化;应用Western blot法检测肿瘤微血管中CREB和p-CREB蛋白表达水平的变化.结果 与假手术组和模型组相比,BK显著降低了紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 mRNA的表达水平,BK作用15 min时降低最明显(P<0.01);同时发现BK作用后CREB的表达水平明显降低,BK作用15 min时降低最显著(P<0.01);p-CREB的表达水平显著升高,在BK作用15 min时达到峰值(P<0.01).结论 缓激肽可在转录水平上调节紧密连接相关蛋白occhdin和ZO-1的表达;激活CREB可能是缓激肽调节occludin和ZO-1转录的机制之一.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤ZO-1和occludin的动态变化研究

目的 探讨紧密连接蛋白ZO-1和occludin在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的变化及意义.方法 36只新生7日龄SD大鼠,随机分为假手术对照组、HIBD3、6、24、48及72 h纽.每组大鼠6只建立HIBD模型.观察处死时每只新生大鼠脑组织的大体形态变化,同时采用Real-time O-PCR方法测定大鼠脑组织ZO-1 mRNA和occludin mRNA表达.结果 ①对照组大鼠ZO-1mR.NA表达较高.在HIBD 3 h组,其表达开始降低,24 h表达达到最低点,此后逐渐升高,72 h仍维持较低水平.与对照组相比,各组均有统计学意义(P＜0.05);对照组大鼠occludin mRNA表达较高.在HIBD 3 h组,其表达开始降低,24 h表达下降到最低点.此后逐渐升高,72 h仍维持在较低水平.与对照组相比各组均有统计学意义(P＜0.05);②新生大鼠HIBD后24～48 h脑水肿明显.结论 脑缺氧缺血时发生脑水肿,可能与ZO-1和occludin的表达减少有关.     

紧密连接蛋白occludin和ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达

目的:研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达.方法:成年健康杂色豚鼠,耳廓反射灵敏,分别取耳蜗、脑、肺三组组织,免疫组织化学法及Western Blot研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在耳蜗外侧壁血管纹中的表达,以脑组、肺组为阳性对照.结果:光镜下可见豚鼠耳蜗外侧壁血管纹毛细血管内皮细胞等边缘细胞中均强阳性颗粒表达,脑组、肺组毛细血管内皮细胞内壁也均有明显阳性表达;Western Blot下occludin, ZO-1在耳蜗组中高表达,并且明显高于脑组与肺组.结论:occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹紧密连接中的高浓度表达,与维持血迷路屏障结构、功能密切相关.     

ZO-1和occludin表达水平与慢性肾小球肾炎患者肾功能的关系

目的 探究闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)表达水平与慢性肾小球肾炎患者肾功能的关系.方法 选取2017年6月-2019年9月于中国医科大学附属盛京医院就诊的经皮肾脏穿刺手术的慢性肾小球肾炎患者102例为研究组,根据患者肾小球滤过率(eGFR)水平将其分为早期肾功能损害组50例,中期肾功能损害组3...     

EMAP-Ⅱ对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1相互作用的调节和机制

  目的 研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）对血肿瘤屏障（BTB）紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C（PKC）活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用。方法 提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ 0.5 h组、EMAP-Ⅱ 1 h组、EMAP-Ⅱ 2 h组、EMAP-Ⅱ 3 h组、EMAP-Ⅱ 6 h组和EMAP-Ⅱ 12 h组。应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性。结果 与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的跨内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1 在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用 1 h时效果最显著（P<0.01）;同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用 1 h时达峰值（P<0.01）。结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一。     

紧密连接蛋白occludin和claudin-1在大鼠溃疡性结肠炎的表达

[目的]观察溃疡性结肠炎模型大鼠紧密连接蛋白occludin、claudin-1表达情况及其与结肠病变的关系.[方法]采用三硝基苯磺酸(TNBS)复制大鼠溃疡性结肠炎模型,于实验周期的第10、20、30天分3组(即模型1、2、3组)处死大鼠,另设正常对照组,以大鼠结肠occludin、claudin-1表达(免疫荧光法)、结肠大体和病理评分为主要检测指标.[结果]随着实验周期延长,模型组结肠大体和病理平均评分逐渐降低,occludin表达平均评分先降低后回升,但均低于正常组;occludin表达与其结肠大体和病理评分均呈负相关(P＜0.05).claudin-1表达平均评分呈降低→上升→再降低,但均与正常组比较接近;claudin-1表达与其大体和病理均无显著相关性(P＞0.05).[结论]溃疡性结肠炎大鼠occludin表达降低,且与其结肠病变呈负相关;occludin表达改变比claudin-1更显著.     

烧伤大鼠血清对肠上皮细胞E-钙粘附蛋白表达的影响

目的　探讨烧伤血清对肠上皮细胞 E-钙粘附蛋白 (ECD)表达的影响及其意义。方法　培养大鼠肠上皮细胞株 IEC- 6 ;采用激光共聚焦及流式细胞术定量分析等技术 ,动态观察烧伤血清刺激培养的 IEC- 6细胞ECD的变化。结果　肠上皮细胞经烧伤血清作用后早期 ECD表达呈进行性下降 ,细胞通透性增加。结论　烧伤后肠上皮细胞细胞 ECD表达降低 ,细胞粘附连接损伤     

紧密连接蛋白Occludin与 ZO-1在COPD大鼠肺部的表达

目的 探索慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)肺泡上皮结构改变的潜在机制.方法 建立大鼠COPD模型,于建模第28天,42 d分批处死大鼠,采用免疫组化观察大鼠肺泡上皮紧密连接中闭锁蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的分布和表达.结果 COPD时,42 d实验组肺泡上皮细胞Occludin 和Zo-1表达明显下降(P＜0.05);28 d实验组肺泡上皮细胞Occludin 和Zo-1 表达有所降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);42 d实验组和28 d实验组相比肺泡上皮细胞Occludin表达明显降低,P＜0.05,ZO-1表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 COPD时,紧密连接蛋白表达减少,并随时间的延长,Occludin表达进一步降低,由此证明,Occludin 和Zo-1 表达与肺泡上皮屏障的破坏密切相关.     

烧伤大鼠血清对肠上皮细胞E—钙粘附蛋白表达的影响

目的：探讨烧伤血清对肠上皮细胞E－钙粘附蛋白（ECD）表达的影响及其意义。方法：培养大鼠肠上皮细胞株IEC－6；采用激光共聚焦及流式细胞术定量分析等技术，动态观察烧伤血清刺激培养的IEC－6细胞ECD的变化。结果：肠上皮细胞经烧伤血清作用后早期ECD表达呈进行性下降，细胞通透性增加。结论：烧伤后肠上皮细胞细胞ECD表达降低，细胞粘附连接损伤。     

加味桃核承气汤对肝纤维化大鼠TGF-β1蛋白表达的影响

[目的]观察加味桃核承气汤对四氯化碳肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。[方法]用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,研究分组为正常对照组、模型对照组、加味桃核承气汤高、中、低剂量治疗组和秋水仙碱对照组;灌胃给药,疗程8周;用免疫组化技术检测肝组织TGF-β1的蛋白表达;检测血清ALT、AST水平;用苦味酸-天狼红胶原染色方法进行半定量肝纤维化计分(SSS)。[结果]高、中、低剂量组及秋水仙碱组的TGF-β1的表达水平均低于模型对照组;经加味桃核承气汤治疗后血清ALT、AST水平及肝纤维化SSS计分显著下降。[结论]加味桃核承气汤可抑制肝纤维化大鼠TGF-β1的表达,达到抗肝纤维化作用。     

消痰和胃方对胃癌前病变大鼠IL-1β蛋白及mRNA表达的影响

目的观察消痰和胃方对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织中IL-1β蛋白及基因表达的影响。方法 Wistar大鼠50只随机分为正常组、模型组、验证组、维酶素组、中药组5组,每组10只。除正常组外其他4组采用高剂量N-甲基-N'硝基-N-亚硝基胍(MNNG)综合造模法干预32周建立大鼠胃癌前病变(PLGC)模型。验证组处死后取胃,验证造模成功,其余4组按照各自给药方法干预12周。Western Blot法检测4组大鼠胃黏膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达含量;RTPCR法检测4组大鼠胃黏膜组织中IL-1βmRNA表达含量。结果模型组、维酶素组IL-1β蛋白及IL-1βmRNA表达较正常组显著升高(P0.05,P0.01)。中药组IL-1β蛋白表达较模型组、维酶素组下降(P0.05),与正常组相比差异无统计学意义(P0.05);中药组IL-1βmRNA平均相对表达量较模型组显著降低(P0.01)。结论消痰和胃方可下调胃癌前病变大鼠IL-1β蛋白及基因表达。     

黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的 观察黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）表达的影响。方法 通过常规煎煮获得黄连水煎液,经高速离心得黄连水煎液微粒及去微粒水煎液。采用大鼠肠循环灌注模型,分别用空白Kreb-Ringers（K-R）液、黄连水煎液、微粒重悬液和去微粒水煎液对大鼠空肠段进行循环灌注。2 h后取下肠段,以透射电子显微镜观察细胞紧密连接结构的变化,采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中ZO-1的表达水平。结果 空白K-R液组与去微粒水煎液组小肠上皮细胞间连接紧密无明显间隙,ZO-1蛋白呈蜂窝或点状聚集于上皮细胞周围;黄连水煎液组与微粒重悬液组小肠上皮细胞间隙增大,且ZO-1表达水平显著降低（P<0.05）。结论 黄连汤剂中活性成分肠吸收与黄连水煎液微粒体系调节小肠紧密连接结构和ZO-1表达水平有关。     

游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞PBP1B蛋白表达的影响

目的 研究游离脂肪酸大鼠肝脏和骨骼肌细胞酪氨酸磷酸酶蛋白量的影响,以探讨游离脂肪酸在肥胖诱发的胰岛素抵抗中的作用机理。方法 分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏和骨骼肌细胞,分别与软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）共同孵育６￣２４小时,应用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测ＳＨ－ＰＴＰ２和ＰＴＰ１Ｂ的蛋白水平。结果 肝脏和骨骼肌细胞的ＰＴＰ１Ｂ蛋白量显著增高（Ｐ〈０．０５）,以２４小时     

加味调味承气汤对脓毒症模型大鼠DAO、PCT表达影响的研究

目的:探讨加味调味承气汤对脓毒症大鼠肠粘膜二胺氧化酶(DAO)、降钙素原(PCT)表达的影响。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、加味调味承气汤治疗组和西药对照组,每组各10只,除空白对照组外,其余各组构建为脓毒血症模型。加味调味承气汤治疗组每日灌服加味调味承气汤水煎液,西药对照组注射地塞米松每日注射0.5mg/kg,每日1次,空白组和模型灌服生理盐水。在实验后24h、48h、72h分别采取腹主动脉血通过双抗体夹心酶标免疫分析法检测血清DAO、双抗体免疫层析法检测血清PCT。结果:模型组DAO、PCT在24h、48h、72h表达明显高于空白组,治疗组血清DAO、PCT值在治疗后24h、48h、72h较西药对照组低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:加味调味承气汤可降低脓毒症大鼠的炎症反应,提高肠粘膜的免疫功能。     

大承气汤保留灌肠对脓毒症患者血清免疫学指标的影响

目的观察大承气汤保留灌肠对脓毒症患者血清免疫学指标的影响。方法 30例脓毒症患者随机分为对照组和治疗组,均行西医常规治疗,同时治疗组给予大承气汤保留灌肠,疗程为7d,并进行疗效判定、中医证候积分、APACHEⅡ评分比较,检测血清免疫学指标免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、补体C3、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与对照组比较,治疗组疗效显著,治疗后中医证候积分和APACHEⅡ评分均明显下降(P<0.05,P<0.01),血清IgA、CRP、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。结论大承气汤保留灌肠能提高脓毒症的疗效,并可显著降低血清免疫学指标水平。     

游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞PTP1B蛋白表达的影响

目的研究游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞酪氨酸磷酸酶蛋白量的影响，以探讨游离脂肪酸在肥胖诱发的胰岛素抵抗中的作用机理。方法分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏和骨骼肌细胞，分别与软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）共同孵育６～２４小时，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测ＳＨＰＴＰ２和ＰＴＰ１Ｂ的蛋白水平。结果肝脏和骨骼肌细胞的ＰＴＰ１Ｂ蛋白量显著增高（Ｐ＜００５），以２４小时为著；ＳＨＰＴＰ２蛋白量无改变（Ｐ＞００５）。结论游离脂肪酸促进大鼠肝脏和骨骼肌细胞ＰＴＰ１Ｂ表达，提示游离脂肪酸可能通过增高ＰＴＰ１Ｂ蛋白量抑制胰岛素信号传导诱发胰岛素抵抗