Kindlin-2通过mTOR和Hippo信号通路调节小鼠子宫内膜发育

目的：探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制。方法：利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2^flox/flox小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响。在子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中分别进行高表达和敲低Kindlin-2的实验,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路的激活变化,并且提取特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(实验组,基因型为Cdh16-Cre; Kindlin-2^flox/flox)和未特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(对照组,基因型为Kindlin-2^flox/flox)子宫蛋白,每组包含6～8只小鼠,重复3次独立实验,检测mTOR信号通路和Hippo信号通路关键分子的蛋白水平。结果：成功构建了子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,通过鼠尾聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PC...     

Ghrelin 对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响

目的：探讨Ghrelin对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。方法实验将子宫基质细胞分为3组,每组6孔：（1）对照组（只加培养基）;（2）Ghrelin组（细胞培养液中加入100 ng／mL重组Ghrelin细胞因子）;（3）Gh－relin抗体组（细胞培养液中加入30μg／mL Ghrelin抗体）。通过RT－PCR和免疫组织化学技术,观察Ghrelin及其受体在妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化过程中的表达变化;通过子宫基质细胞的分离、培养及宫角注射技术,观察Ghre－lin在离体及在体状态下对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。结果（1）RT－PCR显示：随着妊娠期和蜕膜化的进展,Ghrelin mRNA表达水平明显升高,至妊娠第8天,其表达水平达到最高。（2）在妊娠第5天,GHS－R蛋白主要表达于腔上皮、腺上皮及胚胎植入位点的蜕膜。至妊娠第6天,其表达水平进一步升高,主要表达于胚胎周围的蜕膜。至妊娠第8天,蜕膜中GHS－R蛋白的表达水平渐进下降。（3）与对照组相比,Ghrelin组子宫基质细胞HoxA10蛋白的表达水平明显升高（P＜0．01）,而Ghrelin抗体组子宫基质细胞HoxA10蛋白的表达水平明显下降（P＜0．01）。（4）与对照组相比,重组Ghrelin对胚胎植入位点没有明显的影响（P＞0．05）,却明显增加的子宫重量（P＜0．05）;对于Ghrelin抗体组,能明显抑制胚胎植入位点,且妊娠子宫重量的明显下降（P＜0．01）。结论Ghrelin具有明显促进妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的作用。     

高脂饮食诱导的肥胖早孕小鼠子宫内膜蜕膜反应受损

目的： 探讨高脂饮食诱导的肥胖对小鼠子宫内膜蜕膜反应的影响。 方法： 将12只4周龄健康C57BL/6J雌性小鼠随机分为高脂组和对照组（每组6只）,分别饲喂高脂 （22?kJ/g）、 正常 （16?kJ/g） 饲料12周。每周测量小鼠体重,喂养12周后测量小鼠体长、体宽并检测空腹血清三酰甘油和总胆固醇水平。将雌鼠与健康C57BL/6J雄鼠合笼交配,收集妊娠第7天子宫组织,采用苏木精-伊红染色观察子宫内膜细胞形态,Masson染色观察子宫内膜胶原纤维;采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测子宫内膜蜕膜反应相关蛋白表达。分离原代小鼠子宫内膜基质细胞,油酸、棕榈酸模拟高脂环境进行干预,雌二醇、孕酮诱导细胞发生蜕膜反应后,油 红O、 Bodipy染色观察脂滴累积情况,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测蜕膜反应相关标志物的基因和蛋白表达。 结果 ：饲养12周后,高脂组体重明显高于对照组（ P <0.01）,两组体长无明显差异（ P >0.05）,但高脂组体宽显著大于对照组（ P <0.01）,血清三酰甘油和总胆固醇水平均显著高于对照组（均 P <0.05）。高脂组胚胎着床数显著少于对照组（ P <0.01）,高脂组子宫内膜基质细胞向蜕膜细胞转换缓慢且形态异常,蜕膜反应标志物骨形成蛋白（BMP）2、同源异形框A10（HOXA10）表达水平均低于对照组,其中两组HOXA10表达水平差异有统计学意义（ P <0.01）。油红O、Bodipy染色结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞经高脂处理后,脂滴堆积明显增多,鬼笔环肽染色发现其细胞骨架形态异常,蜕膜反应相关基因 dtprp 、 HOXA10 以及蛋白BMP2、HOXA10、环氧合酶2的表达水平均明显低于对照组（均 P <0.05）。 结论 ：高脂饮食诱导的肥胖会损伤小鼠子宫内膜的蜕膜反应。     

加味四君子汤通过mTOR信号通路延缓小鼠脾脏组织衰老

目的 研究加味四君子汤通过mTOR信号通路延缓小鼠脾脏组织衰老作用及其可能机制。方法 将40只8周龄小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,除对照组外,其余三组小鼠分别予以腹腔注射D-半乳糖形成衰老模型,对照组和模型组予以生理盐水灌胃,同时低剂量组和高剂量组予以加味四君子汤灌胃给药,喂养42天称重后处死小鼠,计算小鼠的脾脏指数;观察血清免疫球蛋白(IgG)水平;观察脾脏组织病理变化;同时采取分子生物学方法检测mTOR信号通路负反馈因子PI3K和下游效应蛋白p70S6K和4E-BP1表达水平,并对其进行统计学分析。结果 与模型组相比,高剂量组脾脏的组织形态衰老程度较模型组低,且脾脏指数、血清IgG显著升高(P<0.05),低剂量组无明显差别（P＞0.05）,且高、低剂量组脾脏组织中PI3K、p70S6K表达水平均下降(P<0.05),而4E-BP1的表达水平无差别（P＞0.05）。结论 加味四君子汤能改善衰老小鼠脾脏组织形态,提高IgG水平,通过增强机体的免疫力来延缓衰老,其机制可能为减少PI3K的活化抑制mTOR 信号通路,减少p70S6K的表达水平。     

mTOR信号通路在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路蛋白在卵巢型子宫内膜异位组织中的表达及其临床意义。方法：利用RT—PCR、蛋白质免疫印迹法、免疫组织化学法检测2011年1月～2013年6月就诊我院的卵巢型子宫内膜异位症患者40例和正常增生期子宫内膜40例组织中mTOR及下游分子p70S6激酶（p70S6K）和4E—BP1的表达。结果：mTOR及下游分子p70S6K和4E—BP1在卵巢型子宫内膜异位组织中mRNA及蛋白的表达均低于正常子宫内膜组织。mTOR蛋白在卵巢型子宫内膜异位组织中为阳性表达,高于正常子宫内膜组织,且与痛经、月经异常、不孕无明显相关性,而与囊肿大小、异位内膜浸润深度及盆腔浸润情况关系显著。结论：mTOR信号通路与卵巢型子宫内膜异位症的发生、发展关系密切,mTOR蛋白失活可能是卵巢子宫内膜异位的显著标志,检测mTOR蛋白表达对卵巢子宫内膜异位的诊断具有一定意义。     

子宫内膜蜕膜化的分子细胞学机制

蜕膜对胎盘功能、胎儿生长和孕体变化起调节作用,为妊娠提供了物质基础。子宫内膜蜕膜化包括子宫腺的内分泌改变、基质细胞的分化、子宫自然杀伤细胞的积聚和血管再生。人类蜕膜化发生在月经周期的各个阶段,并受多种激素的调节,雌激素使子宫内膜增生,孕酮诱导子宫内膜基质细胞分化为蜕膜细胞。此时表现为细胞增大,并呈柱状,螺旋小动脉发育,最终分布于整个子宫内膜,受精卵着床,蜕膜覆盖整个子宫内膜,形成妊娠蜕膜。蜕膜基质细胞具有调节滋养层的功能,阻止受精卵被氧化,减少局部的免疫反应,     

子宫内膜蜕膜化的模型及其应用研究进展

子宫内膜蜕膜化是子宫内膜一种特殊的分化过程,与月经、妊娠有着密切的联系。子宫内膜蜕膜化异常将导致各种内膜疾病的发生,如子宫内膜异位症、不孕不育、复发性流产等。内膜蜕膜化模型在生殖疾病中的研究应用,长期以来一直是生殖医学工作者研究的热点。着重介绍蜕膜的种类、蜕膜化的研究模型、蜕膜化的标志分子、蜕膜化模型的应用研究进展。     

Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：检测Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律,为阐明其在胚胎着床中的作用打下基础。方法：利用实时荧光定量PCR、免疫组化和Westernblot分别检测未孕、假孕及孕d1~d7小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质的表达。结果：在小鼠着床窗期及着床后（d4～d7）,小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质表达均明显升高,d5达到高峰（PmRNA=0.000,P蛋白=0.000）;且Dicer表达主要定位于子宫内膜基质细胞。结论：Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达存在时间与空间差异,这种规律性表达所调控的细胞生长、增殖和分化可能是胚胎正常着床的分子机制之一。     

HOXa-10在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用。方法:分别应用FQ-PCR和免疫组化方法检测未孕及早孕第1、2、3、4、5、7天小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达。结果:FQ-PCR测得随着小鼠妊娠天数的增加,子宫内膜HOXa-10基因表达量也逐渐增高,在孕4天达到峰值免疫组化分析显示HOXa-10蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:在小鼠胚胎着床过程中,HOXa-10在子宫内膜中高表达,可能对子宫内膜容受性变化有重要的调节作用。     

细胞周期调控因子调控子宫内膜蜕膜化的研究进展

1 子宫内膜蜕膜化的基本过程 胚胎的植入和生长要求子宫各种组织高度的重构.基质细胞快速增生和分化,腔上皮细胞逐渐凋亡,继之发生胚胎着床.胚泡滋养层与容受性子宫内膜接触后,基质细胞分化成蜕膜细胞,这一反应称为蜕膜化[1-2].人类蜕膜化一般发生于每个月经周期的第23天,受孕后持续至妊娠结束.小鼠的月经周期较短且不规则,只有接受到胚胎植入信号才会发生蜕膜化.     

血管内皮生长因子在正常月经周期子宫内膜及早孕蜕膜中的表达

目的　观察血管内皮生长因子 (VEGF)在正常人子宫内膜增殖期、分泌期和早孕蜕膜组织的表达及其定位。方法　应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 -过氧化酶连接法 (SP法 )检测 7例正常增殖期、12例分泌期、11例早孕蜕膜VEGF的表达。VEGF阳性计数分级为 :阳性细胞数≤2 0 %为Ⅰ级、2 0 %～ 4 0 %为Ⅱ级、>4 0 %～ 6 0 %为Ⅲ级、>6 0 %为Ⅳ级。在统计学处理时将Ⅰ级作为阴性 ,Ⅱ～Ⅳ级作为阳性。通过检测比较 3组VEGF表达有无差别。结果　 3组年龄 (岁 )差别无统计学意义 ,分别是 2 6 0 0± 4 12、2 8 6 9± 3 0 0、2 8 73± 6 5 9(P >0 0 5 )。VEGF在 7例增殖期子宫内膜中 2例表达阳性 (2 8 6 % ) ,12例分泌期子宫内膜全部表达阳性 (10 0 % ) ,11例早孕蜕膜 10例阳性 (90 9% ) ,三者率的差异有统计学意义 (P <0 0 1)。增殖期与分泌期VEGF阳性率比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;分泌期与蜕膜期VEGF阳性率比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。VEGF表达主要位于内膜腺上皮细胞 ,棕染颗粒定位于细胞浆内。结论　VEGF在人月经周期子宫内膜变化及胚胎着床中可能起一定作用。VEGF在子宫内膜主要表达于腺体细胞 ,染色定位于细胞浆。     

妊娠期卵巢子宫内膜异位囊肿蜕膜化诊断研究

目的探讨妊娠期卵巢子宫内膜异位囊肿（卵巢内异囊肿）“蜕膜化”改变的超声诊断价值。方法收集2017年5月1日至2020年4月30日在杭州市妇产科医院临床诊断为妊娠期卵巢内异囊肿“蜕膜化”患者11例,分析其临床资料及影像学表现。结果所有患者超声检查均提示妊娠期伴卵巢囊肿,囊内液透声差,囊壁呈现乳头状突起,彩色多普勒血流显像示乳头内可见血流信号。其中3例行手术切除治疗,术后病理诊断为卵巢内异囊肿。另8例于超声随诊过程中乳头消失,其中3例后经手术证实为卵巢内异囊肿,另5例妊娠后超声复诊发现囊肿形态学改变,结合临床资料,诊断为卵巢内异囊肿“蜕膜化”。结论“蜕膜化”在卵巢内异囊肿中很少发生,需在例行常规孕前检查的基础上,结合特征性临床表现、检验指标以及其超声图像变化情况予以诊断。     

温经止痛方对子宫内膜异位症模型大鼠AKT/mTOR信号通路的影响

目的探讨温经止痛方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)模型大鼠AKT/mTOR通路相关分子表达的影响。方法将建模成功的75只雌性成熟Wistar大鼠随机分为5组,加假手术组共6组,各15只,分别给予温经止痛方中药高、中、低剂量、内美通(孕三烯酮)胶囊、生理盐水灌胃给药。Real-time PCR、免疫组化法测异位、在位内膜上AKT、mTOR mRNA和蛋白表达。ELISA法检测血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量。结果子宫内膜异位症模型大鼠在位、异位内膜上AKT及mTOR mRNA及其蛋白含量显著高于正常对照组(P 0. 01),中药高剂量组、西药(孕三烯酮)组在位、异位内膜AKT、mTOR mRNA表达含量明显低于造模组(P0. 05),EMS模型组血清VEGF水平均高于正常对照组(P0. 01)。温阳化瘀法中药高、低剂量组、西药组血清VEGF水平明显低于模型组(P 0. 01);中药中剂量组亦低于模型组(P 0. 05)。结论子宫内膜异位症发生与AKT/mTOR信号通路、以及VEGF表达水平有关。温经止痛方可有效抑制AKT/mTOR信号通路,降低血清VEGF的表达,从而抑制异位内膜的粘附、侵袭、血管生成。     

GRB7基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：研究生长因子结合受体7（growthfactorreceptorbound7,GRB7）在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法：分别应用实时荧光定量PCR、免疫组化和Westernblot方法检测未妊娠及妊娠早期d1～7小鼠子宫内膜GRB7基因及蛋白的表达;孕3d下午8点子宫角注射GRB7反义寡核苷酸,孕7d观察胚泡着床数较正常组有无变化。结果：实时荧光定量PCR测得未妊娠（d0）和妊娠早期（d1～7）小鼠子宫内膜组织均有GRB7mRNA表达,并在孕5d达到峰值;免疫组化及Westernblot分析显示GRB7蛋白在子宫内膜的表达规律与实时荧光定量PCR基本一致,孕1d到孕4d,GRB7蛋白主要表达部位为腔上皮、腺上皮,基质细胞少量表达,孕5d、孕6d,GRB7蛋白表达较之前增强,并且在基质细胞开始明显表达,孕5d最强;孕6d着床点GRB7蛋白高表达于初级蜕膜区,着床旁GRB7蛋白高表达于基质细胞;子宫角注射GRB7反义寡核苷酸后胚泡着床数较正常组明显减少。结论：GRB7在早孕小鼠子宫内膜中呈动态表达,提示它参与了胚胎着床的发育过程。     

定坤丹对子宫内膜异位症大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的 探索定坤丹对子宫内膜异位症(EMs)大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法 通过异位移植子宫内膜组织,构建EMs大鼠模型,随机分为5组：模型组(M组)、定坤丹低(1.13 g/kg)剂量组(DKP-L组)、定坤丹中(2.26 g/kg)剂量组(DKP-M组)、定坤丹高(4.52 g/kg)剂量组(DKP-H组)、孕三烯酮(60 mg/kg)组(GES组),每组12只,另取12只正常SD大鼠只开腹不异位移植子宫内膜组织,设为假手术组(Sham组),以药物分组干预后处死大鼠,测定各组大鼠异位子宫内膜质量与体积,免疫组织化学染色检测大鼠异位子宫内膜微血管密度(CD31阳性率)与VEGF、MMP-9表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9、iNOS、TNF-α水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠异位子宫内膜PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。结果 与Sham组相比,M组大鼠异位子宫内膜微血管密度、VEGF与MMP-9表达、血清VEGF、MMP-9、iNOS及TNF-α水平、异位子宫内膜织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/...     

二甲双胍通过mTOR信号通路调节自噬减轻心肌梗死小鼠心肌损伤

目的 通过在体实验探究二甲双胍(Met)通过mTOR信号通路调节自噬减轻小鼠心肌梗死(MI)损伤中的作用.方法 将80只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、单纯二甲双胍[300 mg/(kg·d)]处理组(Met组)、MI组和二甲双胍[300 mg/(kg·d)]干预MI组(MI+Met组).采用冠...     

HBx通过Notch信号通路在正常免疫小鼠体内导致肝癌的作用机制

目的 构建长期携带乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)的正常免疫小鼠模型,以探讨HBx在体内导致肝癌发生的机制.方法 将转染HBx的肝前体细胞经肝门静脉注射入昆明小鼠体内构建动物模型,分别于术后30、90、180、360 d收取肝脏组织,Western blot和RT-qPCR检测HBx的表...