MEK1/2抑制剂PD98059对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护机制及对LOX-1表达影响

目的 探讨MEK1/2抑制剂PD98059对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护机制及对低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响.方法 使用ox-LDL诱导HUVEC损伤模型并进行PD98059处理,分阴性对照组、ox-LDL组、阳性对照组和PD98059+OX-LDL组;检测抑制MEK1/2对ox-LDL诱导HUVEC损伤的影响.结果 与阴性对照组比较,ox-LDL组LOX-1、pMEK1/2、RhoA、ROCK1、ROCK2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的释放增多,细胞增殖能力及培养液中一氧化氮(NO)水平降低(P＜0.05);与ox-LDL组比较,阳性对照组和PD98059+ox-LDL组LOX-1、pMEK1/2、RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α和IL-6的释放减少,细胞增殖能力及NO水平增高(P＜0.05).结论 PD98059抑制MEK1/2信号通路可降低HUVEC中LOX-1的表达以减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤.     

氯沙坦保护ox-LDL诱导的内皮细胞损伤与ADMA的关系

目的：探讨氯沙坦对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其与内源性一氧化氮合酶抑制物非对称性二甲基精氨酸（ADMA）的关系。方法：用ox-LDL（100mg／L）孵育人脐静脉内皮细胞株HUVEC12 24h或用10^-8～10^-6mmol／L的氯沙坦预孵育HUVEC12 30min后再与ox-LDL共孵育24h,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、ADMA含量和细胞内二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）活性。结果ox-LDL孵育HUVEC12细胞24h后细胞培养液中LDH活性、TNF-α和ADMA含量明显增加（P〈0．05）,同时NO含量下降和细胞DDAH酶活性受到抑制（P〈0．05）;氯沙坦（10^-8～10^-6mmoL／L）可显著减轻ox-LDL诱导的LDH活性、TNF-α和ADMA含量的增加以及NO含量的降低（P〈0．05）,并呈浓度依赖性的增加DDAH活性（P〈0.05）。结论：氯沙坦对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用,该作用可能与增加DDAH活性,降低ADMA浓度有关。     

甲基乙二醛诱导大鼠海马神经元氧化应激损伤的实验研究

目的:探讨甲基乙二醛对大鼠海马神经元的损伤作用及其可能机制。方法:取新生24 h的SD大鼠分离并培养其海马神经元,第7天予甲基乙二醛(MGO)或(和)N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预24 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MGO或(和)NAC对海马神经元活力的影响,并以氧化敏感的2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)染色,荧光显微镜观察及流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)强度。结果:MTT法检测结果显示,随MGO浓度增加,海马神经元存活率逐渐降低(均P<0.05),而NAC能显著增加海马神经元存活率,且10 mmol.L-1组存活率最高(P<0.01);100μmol.L-1MGO能使细胞内ROS水平明显增加(P<0.01),而同时加入10 mmol.L-1NAC能够抑制MGO导致的细胞内ROS增高。结论:MGO可能部分通过诱导细胞内ROS产生,导致神经元氧化应激损伤,而NAC可能通过降低ROS的水平而对神经元起保护作用。     

枸杞多糖减轻ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的效应及分子机制研究

目的:研究枸杞多糖(LBP)减轻氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞损伤的效应及分子机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并分为对照组(不含药物的DMEM处理)、ox-LDL组(含有150 mg/L ox-LDL的DMEM处理)、LBP组(含有150 mg/L ox-LDL及100 mg/L LBP的DMEM处理)、LBP+LY组(含有150 mg/L ox-LDL、100 mg/L LBP、20μmol/L LY294002的DMEM处理)。检测细胞活力、凋亡率、线粒体凋亡基因及PI3K/AKT通路基因的表达量。结果:ox-LDL组的细胞活力及细胞中Bcl-2、p-PI3K、p-AKT的表达量明显低于对照组,凋亡率及细胞中Bax、Caspase-3的表达量明显高于对照组(P<0.05);LBP组的细胞活力及细胞中Bcl-2、p-PI3K、p-AKT的表达量明显高于ox-LDL组,凋亡率及细胞中Bax、Caspase-3的表达量明显低于ox-LDL组(P<0.05);LBP+LY组的细胞活力及细胞中Bcl-2、p-PI3K、p-AKT的表达量明显低于LBP组,凋亡率及细胞中Bax、Caspase-3的表达量明显高于LBP组(P<0.05)。结论:LBP能够通过激活PI3K/AKT通路减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。     

天麻、法半夏对ox-LDL诱导的HUVECs损伤的影响

摘要 目的：探讨天麻、法半夏对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响。方法：体外培养HUVECs,随机分为对照组、模型组、天麻组（5 mg/mL）、法半夏组（10mg/mL）,流式细胞仪检测HUVECs细胞凋亡率、细胞增殖指数,Western blot法检测血管内皮生长因子（VEGF）和血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）的表达,实时荧光定量PCR法检测半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9 ）RNA的表达。结果：与对照组比较,模型组的细胞凋亡率升高[（4.32±0.11）%比（0.34±0.01）%,P<0.05],细胞增殖指数下降[(43.40±4.04)%比(63.76±2.71)%,P<0.05],VEGF表达下调（0.09±0.03比0.85±0.06,P<0.05）,VEGFR-2表达下调（0.13±0.03比0.81±0.05,P<0.05）,Caspase-3 RNA表达上调（1.67±0.02比0.79±0.01,P<0.05 ）,Caspase-9 RNA表达上调（2.29±0.02比0.71±0.01,P<0.05）;与模型组比较,天麻组、法半夏组的细胞凋亡率下降[（2.51±0.45)% 、(2.12±0.13)%比(4.32±0.11)%,P<0.05],细胞增殖指数升高[（50.83±2.46)%、(51.41±2.86)%比(43.40±4.04)%,P<0.05],VEGF表达上调（0.60±0.04、0.30±0.03比0.09±0.03,P<0.05）,VEGFR-2表达上调（0.55±0.05、0.55±0.03比0.13±0.03,P<0.05）,Caspase-3 RNA表达下调（1.33±0.03、1.16±0.02比1.67±0.02 ,P<0.05）,Caspase-9 RNA表达下调（1.86±0.09、1.82±0.02比2.29±0.02,P<0.05）;与天麻组比较,法半夏组的细胞凋亡率下降[（2.12±0.13)%比(2.51±0.45)%,P<0.05],细胞增殖指数差异无统计学意义[（51.41±2.86)%比(50.83±2.46)%,P>0.05）],VEGF表达下调（0.30±0.03比0.60±0.04,P<0.05）,VEGFR-2表达差异无统计学意义（0.55±0.03比0.55±0.05,P>0.05）,Caspase-3 RNA表达下调（1.16±0.02比1.33±0.03,P<0.05）,Caspase-9 RNA表达差异无统计学意义（1.82±0.02比1.86±0.09,P>0.05）。结论：天麻和法半夏均能抑制ox-LDL诱导的HUVECs损伤,其机制可能与上调VEGF和VEGFR-2的表达、下调Caspase-3 RNA和Caspase-9 RNA的表达有关。     

miR-346缓解心肌缺血再灌注大鼠心肌氧化应激损伤

目的 分析miR-346缓解心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠心脏功能受损和氧化应激的作用。方法 将48只大鼠随机分为对照组、I/R组、I/R+agomiR-NC组和I/R+agomiR-346组,采用结扎左冠状动脉前降支法复制I/R模型,尾静脉注射重组腺相关病毒miR-346进行过表达干预。再灌注120 min后,检测心率(HR)、左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)和左心室壁厚度(LVWT),检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡,Western blot检测心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2基因、Bcl相关蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Cas)-3、Cas-9表达。结果 I/R组大鼠HR、LVEF、FS和LVWT低于对照组,血清CK-MB、LDH、Mb和cTnI水平高于对照组,心肌组织MDA、Bax/Bcl-2、cleaved Cas-3/Cas-3和cleave...     

失笑散不同溶剂提取物对ox-LDL诱导HUVECs损伤的保护作用

目的:观察失笑散各溶剂提取物对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用,探讨失笑散保护血管内皮细胞的有效提取物及其可能作用机制。方法:体外培养HUVECs,并制备失笑散石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取物。采用ox-LDL诱导制备HUVECs损伤模型,并采用失笑散各溶剂提取物干预损伤细胞。采用MTT比色法测定各组细胞增殖情况,试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(superoxide orgotein dismutase,SOD)的活力、谷胱甘肽-过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-px)活力、TBA法测定丙二醛(maleic dialdehyde assay,MDA)含量。结果:25 mg·L~(-1)ox-LDL可抑制血管内皮细胞活性。与模型组比较,失笑散石油醚提取物(25.00 mg·L~(-1),12.50 mg·L~(-1))及甲醇提取物(25.00 mg·L~(-1),12.50 mg·L~(-1))可显著提高细胞活力(P0.01,P0.05),显著降低MDA含量,提高SOD、GSH-px活性(P0.01,P0.05),且失笑散甲醇提取物在25 mg·L~(-1)质量浓度下,与失笑散石油醚提取物比较,在MDA含量、SOD活力的指标上表现出更有效的保护作用(P0.05)。结论:失笑散石油醚及甲醇提取物可显著降低ox-LDL诱导的HUVECs损伤,为失笑散保护血管内皮细胞的有效提取物,其机制可能与其降低MDA含量和提高SOD、GSH-px活性有关,通过调控氧化损伤机制保护血管内皮细胞。     

卡维地洛对ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究卡维地洛（ CAR）对氧化低密度脂蛋白（ ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞（ HAECs）损伤的保护作用。方法：体外培养HAECs,分为对照组、模型组、CAR高剂量组（ CAR H组）和CAR低剂量（ CAR L组）,即对照组（无血清DMEM）、模型组（200 mg/L ox- LDL 100μL）、CAR高剂量组（ CAR H组,200 mg/L ox-LDL及1×10-5 mol/L CAR各100μL）及CAR低剂量组（ CAR L组,200 mg/L ox-LDL及1×10-6 mol/L CAR各100μL）,后两组 CAR预保护1 h后,加入ox-LDL作用24 h;采用MTT法分析细胞存活率,吉姆萨（ Giemsa）染色后观察HAECs形态;酶联免疫吸附法（ ELISA）检测培养液中一氧化氮（ NO）含量及乳酸脱氢酶（ LDH）外漏量。结果：模型组与对照组相比,细胞发生严重的病理形态学改变,细胞存活率及NO含量显著降低,LDH外漏量显著升高（ P﹤0.05）,CAR H组和CAR L组细胞接近对照组,细胞存活率及NO含量较模型组显著提高,LDH外漏量显著降低（ P﹤0.05）。结论：CAR能减少ox-LDL诱导的HAECs损伤,其作用可能与NO系统有关。     

RBP4诱导HUVEC炎症反应作用机制的研究

目的:探讨血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症的作用机制。方法:采用MTT还原法检测细胞活性,通过DCFH-DA检测活性氧的生成,Western blotting分析相关蛋白的表达,凝胶滞留法(EMSA)分析NF-kB的DNA结合活性。结果:RBP4处理后,MTT检测发现人脐静脉内皮细胞存活率显著低于对照组,流式细胞仪的结果表明活性氧的水平也显著升高。结论:RBP4可诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)毒性及炎症反应。     

诱导多能干细胞及其移植治疗脊髓损伤的研究现状

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）通常是指脊髓（包含神经根）的急性创伤。一旦发生就会造成不同程度的运动及感觉功能的丧失。目前认为传统的干细胞移植尚不能完全修复SCI。诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）兼具干细胞的多种优点,因而在细胞替代性治疗及其机制研究、新药筛选方面具有巨大的潜在价值。本文通过介绍iPSCs生物学特性及其技术现状,综述iPSCs移植治疗SCI的研究现状以及面临困境,指出应用于临床尚需解决的问题。     

匹罗卡品诱导大鼠海马神经元损伤与氧化应激机制的研究

目的 探讨癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元损伤与氧化应激的关系.方法 采用匹罗卡品(pilocarpine,PILO)诱导大鼠SE模型,用Nissl染色和TUNEL染色观察海马神经元损伤;用比色法检测海马丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷光甘肽(glutathione,GSH)的水平以及谷光甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)的活力.结果 SE后6 h,大鼠海马可见少量TUNEL标记细胞;SE后48 h,TUNEL阳性细胞明显增多,至SE后72h达到高峰;SE后7 d,TUNEL阳性细胞数量明显减少.大鼠海马MDA含量在SE后6 h迅速升高,并达到高峰;SE后48～72 h,海马MDA含量虽比SE后6 h有所降低,但仍明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.01);SE后7 d,海马MDA含量基本恢复正常.GSH含量和GR活力在SE后6 h迅速降低;SE后48 h降至最低点;SE后72 h～7 d,海马GSH含量虽较SE后48 h有所升高,但仍显著低于对照组(P＜0.01);海马GR活力于SE后72 h开始升高,至SE后7 d基本恢复正常.结论 PILO诱导的海马神经元死亡包括坏死和凋亡两种形式,氧化应激机制参与了PILO诱导的海马神经元损伤.     

m iR-21对氧化应激诱导的心肌细胞损伤的影响

目的：探讨miR‐21对过氧化氢（H2 O2）诱导的 H9c2心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验分为4组,空白对照组、阴性对照组（miR‐21 mimics NC）、H2O2组、H2O2＋miR‐21 mimics组;采用MTT法及AnnexinV‐PI流式双染法检测各组细胞活力和凋亡情况;DCFH‐DA探针负载方法检测各组细胞内活性氧（ROS）水平;分光光度法检测各组丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测程序性细胞死亡因子4（PDCD4）、Bax、Bcl‐2及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白（PTEN）／蛋白激酶（AKT）信号通路激活情况。结果与空白对照组及阴性对照组比较,H2 O2组中细胞活力下降（P＜0．01）,ROS荧光强度及MDA水平增加（P＜0．01）,SOD水平下降（P＜0．01）,细胞凋亡率上升（P＜0．01）,Bcl‐2表达及AKT磷酸水平下调（P＜0．01）,Bax、PDCD4及PTEN表达上调（P＜0．01）。与H2 O2组比较, H2O2＋miR‐21 mimics组中细胞活力提高（P＜0．01）,ROS荧光强度及MDA水平降低（P＜0．01）,SOD水平提高（P＜0．01）,细胞凋亡率降低（P＜0．01）,Bcl‐2表达及AKT磷酸水平上调（P＜0．01）,Bax、PDCD4及PTEN表达下调（P＜0．01）。结论 miR‐21过表达能显著抑制 H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与清除细胞内氧化应激产物及抵抗细胞凋亡有关,可能是通过PTEN／AKT信号通路实现的。     

天麻、法半夏水提物对ox-LDL诱导HUVECs损伤的影响

目的 观察天麻、法半夏水提物对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响.方法 体外培养HUVECs,随机数字表法分为对照组、模型组(80μg/mL ox-LDL)、天麻组(5mg/mL)、法半夏组(10mg/mL),均培养48h.流式细胞仪检测HUVECs细胞凋亡率、细胞增殖指...     

细胞因子Irisin缓解高糖诱导骨髓间充质干细胞凋亡的机制研究

背景 高糖可诱导骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡,而细胞因子Irisin对糖毒性所致的细胞损伤具有保护作用.目的 探讨细胞因子Irisin对高糖环境中BMSCs凋亡的影响及其作用机制.方法 复苏BMSCs并将其分为对照组(Vehicle)、高糖诱导组(high glucose,HG)、Irisin干预组(HG+irisin;Irisin)和抑制剂组(HG+irisin+compound C,CC).各组细胞培养3 d后,流式细胞术检测细胞凋亡率.Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值和磷酸化AMP依赖的蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)、AMPK的表达水平.结果 与Vehicle组相比,HG组BMSCs细胞凋亡率显著升高(P<0.05);Irisin可降低高糖诱导的BMSCs细胞凋亡(P<0.05),提高Bcl-2/Bax的蛋白表达比(P<0.05),同时激活AMPK.当特异性地抑制AMPK后,Irisin缓解高糖诱导BM-SCs凋亡的作用明显减弱.结论 Irisin可通过激活AMPK缓解高糖诱导的BMSCs凋亡.     

胰激肽原酶缓解心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激和纤维化

目的 文章探讨胰激肽原酶对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌损伤、氧化应激和纤维化的影响.方法 SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、模型加药组.检测并记录各组大鼠心率(HR)、左室收缩压(LVSP)和短轴缩短率(FS).HE染色观察心肌病理损伤程度.ELISA检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白I(c...     

mPTP在心肌线粒体氧化应激损伤诱导细胞凋亡的研究进展

自1970年线粒体膜转换特性被发现至今,线粒体在调控细胞凋亡,控制物质进出方面的作用已经获得广泛认可。线粒体通透性转化孔(mPTP)是该特性的载体,当内膜通透性增加时,一些分子量小于1.5×103 Da的小分子可以自由通过。现有研究表明,氧化应激,钙超载,活性氧(ROS)增加等参与了心肌缺血再灌注损伤,但是氧化应激通过线粒体途径诱导心肌细胞凋亡的具体机制,及mPTP的具体分子结构、功能和调控节点尚不清楚。因此本文中主要对现在公认的线粒体mPTP的结构以及氧化应激状态下心肌细胞模型线粒体mPTP的各种病理变化以及可能涉及的损伤机制的研究进展进行综述,论证mPTP的靶向治疗对抑制心肌细胞凋亡的可行性,为治疗心肌缺血再灌注损伤提供一些新的研究思路。     

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对过氧化氢（H2O2）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的改善作用。方法：体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H2O2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H2O2损伤组细胞经H2O2（400 μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H2O2损伤12 h后加入含50 μg/mL AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果：H2O2损伤后HAECs 丙二醛（MDA）含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧（ROS）水平显著增加,超氧化物歧化酶（SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性及线粒体膜电位显著降低;H2O2损伤的HAECs 经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论：AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一