槲皮素对5-FU诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬调控机制研究

目的:探讨槲皮素(Que)调控5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬的作用及机制。方法:采用浓度递增诱导法建立5-FU耐药细胞株SW480/5-FU,MTT法设置Que高、中、低剂量组(10、20、40 μmol/L)和对照组。MTT法检测各组细胞的5-FU耐药性,TUNEL染色法检测细胞凋亡,免疫荧光检测细胞自噬活性,Western blot检测细胞p糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体(ABCG2)、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR蛋白表达。结果:5-FU抑制SW480/5-FU细胞的半抑制浓度(IC₅₀)明显高于SW480细胞(P<0.05),耐药指数(RI)=13.74。与对照组相比,Que中、高剂量组5-FU抑制SW480/5-FU细胞的IC₅₀明显下降(P<0.05),耐药逆转倍数分别为2.27和4.03。与对照组相比,Que中、高剂量组细胞抑制率、凋亡率和自噬活性明显升高(均P<0.05),蛋白的表达均明显升高(均P<0.05),P-gp、MRP1、ABCG2、p62、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论:Que可以以剂量依赖性的方式逆转SW480/5-FU细胞的5-FU耐药性,诱导细胞自噬,其作用机制可能与抑制AKT/mTOR的磷酸化有关。     

蜘蛛香提取物对人结肠癌SW480细胞增殖抑制及抗转移作用

目的:观察蜘蛛香提取物对体外培养人结肠癌SW480细胞增殖抑制及抗转移作用。方法:观察蜘蛛香提取物(400μg/m L)及80μg/m L的5-FU(阳性对照组)对SW480细胞的影响;通过MTT法、细胞脱落实验、病理观察、流式细胞仪检测观察蜘蛛香提取物对结肠癌SW480细胞的增殖抑制、促进凋亡等作用;通过划痕和同质性黏附实验观察其抗结肠癌SW480细胞转移作用。结果:MTT法检测显示蜘蛛香提取物及5-FU均能对SW480细胞产生明显的抑制作用;病理观察发现,经蜘蛛香提取物及5-FU作用后的SW480细胞,呈明显的凋亡状态;流式细胞仪检测发现,蜘蛛香提取物能使S期和G2/M期细胞百分比增加;细胞脱落实验进一步表明,与空白对照组相比,各药物组均能增强细胞的脱落率,抑制细胞的增殖,具有极显著性差异(P<0.01);划痕和同质性黏附实验表明,蜘蛛香提取物能显著降低结肠癌SW480细胞的移动能力(P<0.05)。结论:蜘蛛香提取物对人结肠癌SW480细胞有明显的增殖抑制和抗转移作用。     

银杏叶提取物通过Akt/mTOR通路抑制难治性癫痫大鼠海马组织细胞凋亡研究

目的:探讨银杏叶提取物抑制难治性癫痫大鼠海马组织细胞凋亡的作用机制。方法:将SD大鼠分为对照组、模型组及给药组。除对照组外,其余2组制备难治性癫痫模型。模型制备成功后,给药组按60 mg/(kg·d)的剂量灌胃银杏叶提取物,对照组和模型组给予等体积生理盐水,持续4周。观察各组大鼠行为,记录癫痫发作次数和总时间,并根据Racin标准对大鼠癫痫发作进行分级;采用蛋白质印迹法检测各组大鼠海马组织剪切型半胱氨酸蛋白酶3 (Cleaved-Caspase 3)、半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase 3)、剪切型半胱氨酸蛋白酶9 (Cleaved-Caspase 9)、半胱氨酸蛋白酶9 (Caspase 9)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)、翻译起始因子4E结合蛋白1 (4EBP1)、磷酸化翻译起始因子4E结合蛋白1 (p-4EBP1)、磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-S6K)、核糖体蛋白S6激酶(S6K)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠癫痫发作总次数、发作总时间、发作级别均升高(P0.05);与模型组比较,给药组癲痫发作总次数、发作总时间、发作级别均降低(P0.05)。与对照组比较,模型组Caspase 9、Caspase 3、p-Akt/Akt、p-4EBP1/4EBP1、p-S6K/S6K蛋白表达均降低(P0.05),Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3蛋白表达均升高(P0.05);与模型组比较,给药组Caspase 9、Caspase 3、p-Akt/Akt、p-4EBP1/4EBP1、p-S6K/S6K蛋白表达均升高(P0.05),Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3蛋白表达均降低(P0.05)。结论:银杏叶提取物能明显抑制难治性癫痫大鼠癫痫发作,减轻海马组织细胞凋亡,其机制可能与银杏叶提取物能明显激活Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路表达有关。     

复方苦参注射液对结直肠癌多药耐药性逆转作用的机制研究

目的本研究旨在探讨复方苦参注射液对大肠癌5-FU、L-OHP耐药细胞株5-FU/SW480、L-OHP/SW480耐药的逆转作用,并初步研究其机制。方法采用浓度梯度实验筛选无毒剂量复方苦参注射液的浓度,无毒剂量的复方苦参注射液作用于5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞48 h后,检测5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞对5-FU、L-OHP耐药的变化。同时,观察细胞凋亡、周期变化情况,采用RT-PCR、Western blot检测P-gp、P-170和MRP的mRNA及蛋白的表达水平。结果复方苦参注射液作用48 h后对5-FU/SW480、L-OHP/SW480的5%抑制率浓度分别为0.85和0.92μg/mL,以此作为无毒剂量。5-FU、L-OHP分别对5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞IC_(50)为(5.5±0.2)、(6.2±0.3)g/mL,分别加入无毒剂量的复方苦参注射液后,5-FU、L-OHP分别对5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞的IC_(50)值分别为(2.8±0.2)、(3.2±0.1)μg/mL,IC_(50)值均显著下降(P值均0.05),其逆转耐药倍数分别为1.96及1.91。流式细胞术检测发现,复方苦参注射液处理后G1期细胞减少,S期细胞增加(P0.05)。细胞凋亡率略有上升,但无统计学意义(P0.05)。RT-PCR、Western blot检测发现,加入无毒剂量的复方苦参注射液与未加入复方苦参注射液的细胞株5-FU/SW480、L-OHP/SW480比较,P-gp、P-170、MRP mRNA及蛋白表达明显升高;具有统计学差异(P0.05)。结论复方苦参注射液能逆转5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞株对5-FU、L-OHP的耐药,复方苦参注射液逆转机制可能通过降低P-gp、P-170和MRP等蛋白表达,为结直肠癌临床耐药研究奠定基础。     

龙葵碱体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡及其对相关因子的影响

  目的：观察龙葵碱对人结肠癌SW480细胞凋亡及ERK/MEK、PI3K/AKT信号通路中相关因子的影响。  方法：SW480结肠癌细胞培养后共设5组,分别为空白对照组、培养液对照组及龙葵碱不同剂量(4、8、16 mmol/L)组,各组进行相应干预。采用MTT法检测龙葵碱对结肠癌细胞株的增殖作用,流式细胞法检测龙葵碱对结肠癌细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blotting法检测龙葵碱处理的SW480细胞中ERK/MEK和PI3K/AKT的表达水平。  结果：MTT生长曲线显示,龙葵碱能抑制结肠癌SW480细胞株增殖。流式细胞仪检测显示,龙葵碱能够促进SW480的凋亡。RT-PCR结果显示,龙葵碱可以抑制ERK1/2 mRNA的表达。Western blotting结果表明,龙葵碱可以降低MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。  结论：龙葵碱可以抑制结肠癌细胞增殖,其对肿瘤的诱导凋亡作用可能是通过MEK/ERK和PI3K/AKT信号途径实现的。     

藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响

目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化。结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P<0.01)。结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关。     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

解毒散结方水提物对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度解毒散结方水提取物对人结直肠癌SW480细胞凋亡的影响,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法:体外培养结直肠癌SW480细胞株,给予不同浓度解毒散结方水提取物,通过流式细胞分析及Hoechst染色分析SW480细胞的凋亡情况;采用ELISA法检测不同时间段SW480细胞培养上清中IL-2、IL-6、IL-10的浓度变化;利用Western-blot检测SW480细胞株中STAT3蛋白表达水平。结果:给予解毒散结方水提取物培养的SW480细胞株能检测到明显的细胞凋亡和形态学改变,在培养48 h后,其凋亡率显著高于对照组(P0.05);在SW480细胞培养液中加入解毒散结方水提取物培养后,其上清中IL-2、IL-6、IL-10浓度显著降低(P0.05);Western-blot结果显示,给予解毒散结方水提取物处理后的细胞系,其细胞中STAT3蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:解毒散结方水提取物能诱导结直肠癌SW480细胞株发生凋亡,其机制可能是通过抑制JAK/STAT3信号通路中STAT3蛋白的表达,下调细胞炎症相关因子如IL-2、IL-6、IL-10的表达来实现的。     

萝卜硫素通过调节Bax表达降低结肠癌细胞株对5-氟尿嘧啶的耐药性

目的:研究Bax在萝卜硫素(SFN)逆转结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗耐药中的作用及其机制。方法:体外培养结肠癌SW-480细胞,CCK8法分析了SFN对5-FU抑制SW-480细胞增殖的影响;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法分析了SFN对5-FU作用下的SW-480细胞凋亡水平的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测了SW-480细胞中凋亡相关基因Bax、Suvivin、Bcl-2、p53及caspase-3表达量;Western Blot分析SW-480细胞中Bax蛋白表达,采用pcDFNA-WEE1质粒沉默技术对SW-480细胞中Bax蛋白进行低表达。结果:SFN能明显增强5-FU对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制效应;凋亡实验结果提示,在SW-480细胞中,单药5-FU组中的细胞凋亡率为(36.76±4.29)%、SFN+5-FU联合组为(51.10±6.34)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05);RT-PCR实验提示,Bax可能介导SFN促使SW-480细胞凋亡;Western Blot结果显示,SFN+5-FU联合组Bax的表达量显著高于单药5-FU组,差异有统计学意义(P0.05);pcDFNA-Bax质粒转染能明显下调SW-480细胞中Bax蛋白表达,并且显著降低了SFN联合5-FU对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制效应。结论:SFN通过上调Bax表达增强5-FU对结肠癌细胞化疗耐受的能力,并促使结肠癌细胞凋亡。     

姜黄素联合5-氟尿嘧啶对结肠癌SW620细胞体外抑制的影响

目的探索姜黄素与5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用。方法应用MTT法检测5-FU和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响;Compu Syn软件分析姜黄素增敏效果;流式细胞仪检测药物作用对SW620细胞凋亡的影响;Western blot法检测联合用药对SW620细胞caspase家族蛋白表达的影响。结果 5-FU对SW620细胞抑制作用较弱,处理48 h,IC50为(367. 20±16. 80)μmol/L,姜黄素预处理与5-FU联用协同增强对SW620细胞株的杀伤作用。姜黄素预处理与5-FU联用诱导SW620细胞凋亡,促进SW620细胞内凋亡相关蛋白(cleaved-PARP、cleaved-caspase3、cleaved-caspase6、cleaved-caspase9)的表达(P<0. 05,P<0. 01)。结论姜黄素预处理与5-FU联合应用可协同抑制结肠癌细胞的增殖,诱导凋亡,并上调SW620细胞内caspase家族的表达。     

洋葱提取物对人结肠癌细胞凋亡及周期的影响

目的研究洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡及细胞周期的影响。方法采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量。体外培养结肠癌细胞株(LoVo cells、SW480 cells、HT-29 cells、HCT-8 cells),采用含黄酮类化合物浓度40 mg/L和60 mg/L的提取物对其进行干预,流式细胞仪检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡影响,检测含黄酮类化合物浓度为40 mg/L的水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞周期的影响。结果洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的凋亡具有剂量依赖性,其中水提取物引起SW480、HCT-8细胞株凋亡率较乙醇提取物高。而乙醇提取物引起HT-29细胞株凋亡率较水提取物高。洋葱提取物能将结肠癌细胞株的细胞周期阻滞在G1期,阻碍其向S期转换,以抑制细胞增殖。结论洋葱水提取物和乙醇提取物能够诱导结肠癌细胞株的凋亡,并能够对结肠癌细胞周期产生影响,其具体机制需进一步探讨。     

苦参碱抑制结肠癌细胞生长和迁移侵袭的作用研究

目的:观察苦参碱对人结肠癌SW480和SW480/M5细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭及AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测AKT、GSK3β和β-catenin及各自磷酸化蛋白水平。结果:苦参碱呈浓度及时间依赖性抑制SW480和SW480/M5细胞的增殖,在24、48、72 h对SW480细胞的半数抑制浓度依次为1 919、832.8、318.1μg/mL,对SW480/M5细胞的半数抑制浓度依次为2 417、947、581μg/mL。苦参碱呈浓度依赖性降低SW480和SW480/M5细胞的克隆形成率,苦参碱可抑制SW480和SW480/M5细胞的迁移和侵袭能力,800μg/mL苦参碱能抑制SW480和SW480/M5细胞内AKT和GSK3β蛋白磷酸化,诱导β-catenin的磷酸化降解。结论:苦参碱可抑制结肠癌SW480和SW480/M5细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力,其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路有关。     

鼠尾草酸对人结肠癌细胞增殖抑制作用及增强其对5-氟脲嘧啶敏感性的研究

目的 研究鼠尾草酸（carnosic acid,CA）抑制人结肠癌细胞SW480增殖和增强化疗药物5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracil,5-FU）敏感性的作用及机制。方法 结晶紫染色法检测CA对SW480增殖的抑制作用,流式细胞技术分析和MTT法检测CA和5-FU联合使用对人结肠癌细胞SW480凋亡和细胞活力的影响。采用β-catenin荧光素酶报告基因（TOP-Flash）检测CA作用后SW480细胞内β-catenin活性改变。不同浓度CA处理SW480后,Western blot检测β-catenin蛋白质表达水平变化,RT-PCR法检测其下游基因Cyclin D1和P-gp（P-glycoprotein）的mRNA表达水平变化。结果 CA对人结肠癌SW480细胞增殖有抑制作用,且CA能够增强5-FU对结肠癌细胞凋亡和细胞活力的影响。CA处理后细胞内β-catenin转录活性明显降低,Western blot法和RT-PCR法结果显示CA下调了β-catenin的蛋白水平及下游基因Cyclin D1和P-gp mRNA表达。结论 CA能够抑制人结肠癌SW480细胞增殖和增强5-FU的抗肿瘤效果,其机制可能与抑制β-catenin活性并下调其下游基因Cyclin D1和P-gp表达有关。     

峨参内酯与5-FU联用对SW480多细胞球模型的影响及机制研究

目的:探讨峨参内酯与5-FU联用对人结肠癌SW480三维立体多细胞球模型的作用及其机制。方法:采用CCK8法检测峨参内酯及峨参内酯与5-FU联用对SW480三维立体多细胞球模型的抑制作用;采用流式细胞仪观察分析峨参内酯与5-FU联用对SW480三维立体多细胞球模型细胞周期和细胞凋亡的影响;采用蛋白质印迹(Western blot)技术检测分析峨参内酯与5-FU联用对SW480三维立体多细胞球模型细胞中FAK、COX2蛋白表达的影响。结论:峨参内酯对人结肠癌SW480三维立体多细胞球模型有明显的抑制作用,呈现出一定的药物剂量依赖性,其半数致死量分别为26.82μg/m L;峨参内酯与5-FU联用时,细胞活力显著降低,且随着峨参内酯浓度的加大而逐渐降低;5-FU可使SW480细胞周期停止在S期,峨参内酯可使SW480细胞周期停止在S期、G2/M期,两种药物配合使用,可使SW480细胞周期停止在S期、GA/M期并最终诱导细胞凋亡,并且能够明显抑制细胞中FAK、COX2两种蛋白的表达。     

白花败酱草提取物对人结直肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响

目的探讨白花败酱草提取物通过抑制Notch信号通路影响人结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡机制的研究。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同质量浓度的白花败酱草对人结直肠癌SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测白花败酱草对SW480细胞凋亡的影响,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其对凋亡相关蛋白剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测其对SW480细胞中Notch信号通路中Notch1及下游靶基因Hes-1 mRNA表达的影响。结果白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,呈质量浓度和时间依赖效应,差异具有统计学意义(P0.05);流式细胞检测显示白花败酱草提取物干预SW480细胞后凋亡率升高,呈质量浓度依赖性(P0.05);白花败酱草提取物可促进SW480细胞中cleaved caspase-3和Bax的表达,抑制Notch1和Hes-1的表达,具有质量浓度依赖性(P0.05)。结论白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,诱导SW480细胞凋亡,作用机制与其抑制Notch信号通路的激活有关。     

基于ERK/MAPK信号通路探讨青藤碱对SW480结肠癌细胞活性抑制作用的研究

目的:探讨青藤碱对SW480结肠癌细胞活性抑制作用及对细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响。方法:选用SW480人结肠癌细胞株,设对照组、空白组及青藤碱不同剂量组,分别采用相应药物进行处理。采用CCK-8法检测青藤碱对SW480细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析青藤碱对SW480细胞凋亡的影响,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组SW480细胞B淋巴细胞瘤2(B lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteine-containing aspartic acid proteolytic enzymes-3,Caspase-3)、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:干预24、48、72 h后,与对照组比较,青藤碱4、8、16、20 mmol/L组SW480细胞增殖抑制率较高,且青藤碱4 mmol/L组8 mmol/L组16 mmol/L组及20 mmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,青藤碱4、8、16 mmol/L组SW4800细胞凋亡率较高,Bax、Caspase-3蛋白表达水平较高,且青藤碱4 mmol/L组8 mmol/L组16 mmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,青藤碱4、8、16 mmol/L组Bc L-2、p-ERK1/2蛋白表达水平较低,且青藤碱4 mmol/L组8 mmol/L组16 mmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:青藤碱能剂量依赖性抑制SW480结肠癌细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其作用可能与抑制ERK/MAPK信号通路活性,调节Bc L-2、Bax、Caspase-3等相关凋亡蛋白表达有关。     

萝卜硫素通过调节Bax表达降低结肠癌细胞株

目的：研究Bax在萝卜硫素（SFN）逆转结肠癌细胞5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗耐药中的作用及其机制。方法：体外培养结肠癌SW-480细胞,CCK8法分析了SFN对5-FU抑制SW-480细胞增殖的影响;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法分析了SFN对5-FU作用下的SW-480细胞凋亡水平的影响;实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测了SW-480细胞中凋亡相关基因Bax、Suvivin、Bcl-2、p53及caspase-3表达量;Western Blot分析SW-480细胞中Bax蛋白表达,采用pcDFNA-WEE1质粒沉默技术对SW-480细胞中Bax蛋白进行低表达。结果：SFN能明显增强5-FU对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制效应;凋亡实验结果提示,在SW-480细胞中,单药5-FU组中的细胞凋亡率为（36.76±4.29）%、SFN+5-FU联合组为（51.10±6.34）%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;RT-PCR实验提示,Bax可能介导SFN促使SW-480细胞凋亡;Western Blot结果显示,SFN+5-FU联合组Bax的表达量显著高于单药5-FU组,差异有统计学意义（P<0.05）;pcDFNA-Bax质粒转染能明显下调SW-480细胞中Bax蛋白表达,并且显著降低了SFN联合5-FU对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制效应。结论：SFN通过上调Bax表达增强5-FU对结肠癌细胞化疗耐受的能力,并促使结肠癌细胞凋亡。     

化瘀解毒方提取物抑制作用胃癌细胞增殖和黏附及对PI3K/Akt通路影响的实验研究

目的:研究化瘀解毒方提取物抗胃癌细胞增殖和黏附方面的作用及机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)分析化瘀解毒方提取物稳定性,化瘀解毒方提取物作用于人胃癌SGC-7901细胞株,利用MTT分析细胞增殖抑制实验,检测红细胞毒性实验,MTT快速测定法测定活性峰与Matrigel的黏附作用的影响。Western blot法检测人胃癌SGC-7901细胞中PI3K,PDK1和Akt总蛋白及其磷酸化水平的影响。结果:化瘀解毒方提取物可浓度依赖性抑制体外人胃癌SGC-7901细胞增殖、黏附,免疫印迹结果显示,化瘀解毒方提取物抑制Akt蛋白磷酸化,然而对于上游蛋白PDK1和PI3K的磷酸化无作用。结论:化瘀解毒方提取物抑制其增殖和黏附,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路有关。     

透骨草提取物对人结肠癌SWⅢ-C细胞增殖及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察透骨草提取物对人结肠癌SWⅢ-C细胞增殖的影响,探讨透骨草提取物对SWⅢ-C细胞增殖影响的分子机制。方法:MTT法检测透骨草提取物对SWⅢ-C细胞增殖的影响,荧光显微镜观察透骨草提取物对SWⅢ-C细胞形态的影响,免疫组化方法检测SWⅢ-C细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:6.25~100μg/mL透骨草提取物处理的SWⅢ-C细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加(P0.05),而且随透骨草浓度的增加,抑制率逐渐增加。透骨草提取物对SWⅢ-C细胞的半数抑制浓度(IC50)为38.36μg/mL。荧光显微镜下可见,38.36μg/mL透骨草提取物处理的SWⅢ-C细胞,体积缩小,细胞核固缩、呈新月状且边集。38.36μg/mL透骨草提取物处理的SWⅢ-C细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P0.05),而Bax蛋白表达明显高于对照组(P0.05)。结论:透骨草提取物可以抑制人结肠癌SWⅢ-C细胞增殖,诱导SWⅢ-C细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

藏药柳茶水提物对胃癌耐药细胞BGC823/5-FU增殖及药物敏感性的影响

研究藏药柳茶水提物(Liu Tea extracts,LTE)对人胃癌氟尿嘧啶耐药细胞株BGC823/5-FU的增殖和药物敏感性的影响。将LTE作用于人胃癌耐药细胞BGC823/5-FU,采用MTT检测其对细胞增殖、化疗药物敏感性的影响以及与5-氟尿嘧啶(5-FU)的联用效应,应用CompuSyn软件计算联合用药指数(combination index,CI);流式细胞术(FCM)检测LTE对BGC823/5-FU细胞凋亡的作用;Western blot检测不同质量浓度(100,200,400 mg·L-1)LTE对5-FU作用下胃癌耐药细胞中P-gp,Bcl-2,Bax及Caspase-3(17KD)蛋白表达的影响。结果显示,LTE能够有效的抑制胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU的生长,抑制率与药物浓度及作用时间呈正相关;LTE能够促进细胞发生凋亡,800 mg·L-1的LTE作用细胞24 h后凋亡率可高达46.2%(P0.01)。LTE与5-FU联用后CI1,说明两药具有较好的协同抑制耐药细胞增殖的作用。非细胞毒性剂量LTE可显著降低化疗药物5-FU,CDDP,PTX,ADM对BGC823/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC50,P0.05),一定程度上逆转耐药细胞对化疗药物的耐药性,逆转倍数分别为2.35,1.68,1.96,0.52。蛋白检测结果显示,随着柳茶水提物浓度的增加,耐药细胞内Bcl-2表达逐渐下降,Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.01)。但耐药蛋白P-gp的表达在实验组和对照组细胞中无显著变化。LTE能有效抑制胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU的生长,并在一定程度上逆转其化疗耐药。抑制抗凋亡蛋白的表达、激活促凋亡蛋白、诱导耐药细胞发生凋亡可能是其作用的主要机制。