益气活血解毒中药对梗阻性肾病细胞自噬的调控作用

目的:观察益气活血解毒中药对梗阻性肾病中细胞自噬的作用。方法:将48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和中药组,除假手术组外,其余各组结扎大鼠单侧输尿管复制梗阻性肾病的动物模型。缬沙坦组和中药组分别给予10 mg/(kg·d)缬沙坦和14 g/(kg·d)益气活血解毒中药,10天后摘取梗阻侧肾脏。通过Western blot和免疫组化检测血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶(Serum and glucocorticoid induced kinase,SGK-1)、自噬相关基因5 (Autophagy associated gene 5,Atg5)、自噬相关基因Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3 (Microtubular-associated protein 1 light chain 3,LC3)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,P-ERK1/2)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylated target of rapamycin,P-mTOR)的表达。结果:与假手术组比较,模型组自噬蛋白Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、SGK-1与P-ERK1/2表达增强,P-mTOR表达减弱,差异均有统计学意义(P 0.01)。与模型组比较,缬沙坦组和中药组自噬蛋白Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、SGK-1及P-ERK1/2表达降低,P-mTOR表达增强,差异均有统计学意义(P 0.05,P 0.01)。结论:益气活血解毒中药可以通过调控SGK-1、P-ERK1/2和P-mTOR通路,抑制盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptor,MR)的活化,从而纠正梗阻性肾病中细胞自噬的异常。     

基于自噬基因Atg5和Beclin1探讨益气活血方对大鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的探讨益气活血方是否通过调节自噬相关基因Beclin1和Atg5的表达调控发挥对心肌缺血的保护作用。方法将60只健康SD大鼠随机分成空白组、模型组、地奥心血康组、益气活血方高、中、低剂量组,通过腹腔注射异丙肾上腺素制备急性心肌缺血损伤模型。观察心肌梗死面积、心肌细胞超微结构,检测自噬基因Atg5、Beclin1 mRNA和凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。结果益气活血方高、中剂量组各项指标均明显高于模型组,益气活血方各剂量组大鼠心肌组织中Atg5、Beclinl mRNA表达量均升高(P0.01或P0.05),Caspase-3mRNA表达量降低(P0.01或P0.05)。结论益气活血方可以通过上调自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达,增强细胞自噬,下调Caspase-3mRNA表达,从而发挥对心肌缺血的保护作用。     

芪玉三龙汤调节mTOR/Beclin1/LC3信号轴相关分子的表达诱导肺癌A549细胞自噬

目的 从细胞水平探讨芪玉三龙汤干预肺癌A549细胞对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）/微管相关蛋白1轻链3（LC3）信号轴关键分子表达的影响。方法 选择肺癌人A549细胞作为研究对象,采用细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）法检测芪玉三龙汤含药血清对A549细胞活性的影响;原位末端标记法（TUNEL）,透射电镜（TEM）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（WB）分别检测芪玉三龙汤对A549细胞凋亡、自噬体形成及自噬标记分子表达的影响。结果 芪玉三龙汤血清能以浓度依赖性的方式抑制细胞活性;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的凋亡数量显著增多（P<0.01）,自噬体形成增加;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的mTOR mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,Beclin1,自噬相关基因5（Atg5）,自噬相关基因13（Atg13） mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）。结论 芪玉三龙汤能够诱导肺癌A549细胞发生自噬,其具体作用机制可能与其下调mTOR的表达,上调Beclin1,Atg5,Atg13,LC3的表达,促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ有关。     

四妙勇安汤对动脉粥样硬化模型兔自噬相关因子的影响

目的:考察四妙勇安汤对新西兰动脉粥样硬化家兔血脂生化指标及自噬相关因子Atg5、Beclin1、mTOR mRNA表达的影响,初步阐明其抗AS的作用机制。方法:将雄性新西兰兔随机分为正常对照组、模型组、四妙勇安汤小、中、大剂量组和辛伐他汀组,每组6只。除正常对照组外,其他各组均建立AS模型,造模后连续给药6周,检测血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C的含量;HE染色观察主动脉形态学变化;荧光定量PCR法检测主动脉中自噬相关因子Atg5、Beclin1和mTOR的mRNA表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组TG、TC和LDL-C的表达升高,HDL-C表达降低;诱导了Atg5mRNA及Beclin1mRNA表达,抑制了mTOR mRNA的表达。与模型组相比,四妙勇安汤各剂量组和辛伐他汀组降低了TG、TC和LDL-C的表达,升高了HDL-C的表达;进一步诱导了Atg5mRNA及Beclin1mRNA表达,抑制了mTOR mRNA表达。结论:四妙勇安汤能够抑制家兔AS的形成,推测与其诱导自噬相关因子Atg5、Beclin1的表达,抑制mTOR的表达相关,这可能是四妙勇安汤抗AS的作用机制之一。     

黄芪甲苷介导Akt/mTOR/HIF-1α通路调控氧糖剥夺PC12细胞自噬的机制研究

探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)诱导的PC12细胞自噬损伤的保护作用及可能机制。体外建立OGD PC12细胞自噬损伤模型,PC12细胞分为正常组,OGD组,AS-Ⅳ低、中、高剂量组,阳性药右美托咪定(DEX)组。MTT法检测PC12细胞存活率,透射电子显微镜观察自噬小体及自噬溶酶体,MDC荧光染色法观测自噬小体的荧光强度,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α自噬相关蛋白表达情况。与正常组比较,OGD组细胞存活率显著降低(P<0.01),自噬小体显著增多(P<0.01),MDC荧光强度显著增强(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、HIF-1α显著上调(P<0.05或P<0.01),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著下调(P<0.05或P<0.01)。与OGD组比较,AS-Ⅳ低、中剂量组及DEX组细胞存活率显著提高(P<0.01...     

电针通过调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对衰老小鼠肝脏自噬与氧化应激的影响

目的:观察电针对衰老小鼠体力及肝脏AMP活化的蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)、Atg5、Atg7、Atg13和Beclin1表达的影响,探索其通过激活AMPK/mTOR/ULK1通路延缓衰老的机制.方法:将30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、雷帕...     

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化及PI3K/Akt/mTORC1信号通路的影响

目的观察丹红注射液对动脉粥样硬化(AS)小鼠自噬基因Atg13启动子区甲基化及自噬信号通路PI3K/Akt/mTORC1的影响,探讨其可能的作用机制。方法 40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、阳性对照组和丹红注射液低、高剂量组,每组10只,各给药组给予相应药物干预。6周后RT-PCR检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13、Atg3和Atg4a的mRNA表达;Westernblot检测AS小鼠主动脉Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、PI3K、Akt、p-Akt、mTORC1和p-mTORC1的蛋白表达;采用亚硫酸氢盐测序法检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平。结果与模型组比较,丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Beclin1蛋白表达明显升高,丹红注射液低剂量组小鼠主动脉LC3Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Atg13、Atg3和Atg4a mRNA表达显著升高(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平明显降低(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉p-Akt蛋白表达明显降低(P0.01),丹红注射液高剂量组小鼠主动脉p-mTORC1蛋白表达明显降低(P0.01)。结论丹红注射液防治AS的机制可能与降低模型小鼠主动脉Atg13启动子区甲基化水平、抑制PI3K/Akt/mTORC1信号通路和促进细胞自噬有关。     

活血消瘿方含药血清调控AMPK/mTOR通路对脂多糖诱导的甲状腺滤泡上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨活血消瘿方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的甲状腺滤泡上皮细胞(TFECs)自噬和凋亡的影响以及作用机制。方法 光学显微镜观察分离培养的SD大鼠TFECs细胞的形态;免疫荧光染色鉴定TFECs中特异抗原甲状腺球蛋白(Tg)。取对数生长期的TFECs,分为对照组、LPS组、含药血清组、含药血清+compound C(AMPK抑制剂)组、含药血清+MHY1485(mTOR激活剂)组,MTT法检测各组细胞活力;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测各组细胞自噬小体变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡;western blot检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3II、Beclin1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达。结果 光学显微镜观察显示,TFECs形态为梭形、形态均一,且可成簇生长。免疫荧光结果显示,TFECs细胞质中可见较强的Tg荧光染色。与对照组比较,LPS组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著降低,炎性因子IL-6 、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著升高(P< 0.05);与LPS组比较,含药血清组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著升高,炎性因子IL-6 、 TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著降低(P< 0.05);与含药血清组比较,含药血清+compound C组、含药血清+MHY1485组TFECs中相应指标与上述趋势相反。结论 活血消瘿方含药血清对LPS诱导的TFECs自噬的促进作用及细胞凋亡的抑制作用可能与激活AMPK/mTOR通路有关。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠Beclin1/PI3K-AKT-mTor的影响

目的观察佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜中自噬相关基因5、7、12(Atg5,7,12)mRNA、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(m Tor)及血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的表达水平变化及新风胶囊对其的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(来氟米特,5.0 mg/kg)和中药组(新风胶囊,3.0 g/kg),每组12只。干预30天后,观察各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E%)、关节炎指数(AI)及踝关节病理及超微结构变化;检测大鼠滑膜中Atg5、7、12 mRNA表达;检测滑膜LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达;检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量。结果与正常组比较,模型组E%、AI、IL-1β、TNF-α升高,体重、IL-4、IL-10、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达降低(P0.01,P0.05),PI3K、AKT、m Tor蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,两个给药组E%、AI、IL-1β、TNF-α、Atg12 mRNA、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达降低(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达升高(P0.01,P0.05);西药组Atg5降低(P0.01),Atg7 mRNA升高(P0.05)。与西药组比较,中药组体重、IL-4、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、PI3K、m Tor蛋白表达升高(P0.01,P0.05)。结论AA大鼠滑膜细胞自噬水平下降,导致滑膜细胞的过度增生,引起关节肿胀,致炎因子上升,抑炎因子下降,引起关节的炎症反应。中药新风胶囊可以改善关节炎指数、足趾肿胀度,改善滑膜自噬相关基因及蛋白表达。     

健脾祛湿和络方含药血清对足细胞标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及mTOR表达的影响

目的探讨健脾祛湿和络方(Jianpi Qushi Heluo Formula,JQHF)含药血清对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的小鼠足细胞损伤模型标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及mTOR相关自噬因子表达的影响。方法以体外培养小鼠足细胞为研究对象,除空白组外均以PAN(100μ/mL)体外诱导足细胞,根据含药血清细胞培养基的不同分为空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+PAN),JQHF低剂量组(10%低剂量JQHF含药血清+PAN),JQHF中剂量组(10%中剂量JQHF含药血清+PAN),JQHF高剂量组(10%高剂量JQHF含药血清+PAN),替米沙坦(TMST)组(10%TMST含药血清+PAN),醋酸泼尼松(PRE)组(10%PRE含药血清+PAN),雷帕霉素(RAP)组(100μg/L RAP+10%空白组血清+PAN)。CCK-8法检测足细胞损伤模型在各组血清作用后的活性变化;Western blot法检测各组足细胞标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及细胞内mTOR相关自噬蛋白表达水平。结果 (1)与空白组比较,模型组细胞活力显著下降(P0.01),与模型组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组足细胞活力上升(P0.05);(2)与模型组比较,除JQHF低剂量组Podocalyxin表达外,其余各药物干预组Nephrin、Podocalyxin表达均增多(P0.05,P0.01);与JQHF低剂量组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组Nephrin表达增多(P0.05);与JQHF中剂量组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组Nephrin表达增多(P0.05),TMST、PRE、RAP组Podocalyxin表达亦增多(P0.05);与JQHF高剂量组比较,TMST、PRE、RAP组Podocalyxin表达增多(P0.05)。(3)与模型组比较,各药物干预组LC3-Ⅱ表达均增多(P0.05,P0.01),JQHF高剂量组、TMST组、PRE组、RAP组P-mTOR、P-4EBP1表达均减少(P0.05),JQHF高剂量组、TMST组、RAP组P-P70S6K表达减少(P0.01)。结论 JQHF可以改善细胞内自噬水平,修复PAN诱导损伤足细胞,与上调细胞内Nephrin、Podocalyxin及LC3-Ⅱ的表达,减少mTOR及相关因子合成有关。     

温阳化饮、益气活血法对慢性心力衰竭大鼠自噬-凋亡机制的影响

目的:探讨温阳化饮、益气活血法组方强心胶囊对大鼠心肌细胞自噬相关蛋白表达的影响及其与凋亡之间的关系。方法:90只SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、西药组、强心胶囊高、中、低剂量组,各组大鼠成模后给予相应剂量药物灌胃给药,每日1次,连续28 d。超声心动图评价大鼠心脏功能。Western blotting法检测心肌组织自噬相关蛋白5(Atg5)、Bcl-2、Beclin 1、LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ及TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡。结果:与假手术组比较,模型组大鼠左心室收缩末期与舒张末期直径明显增大,左心室射血分数与缩短分数降低,心肌组织中Bcl-2、Beclin 1与Atg5蛋白表达降低,LC3BⅡ/Ⅰ比值降低,细胞凋亡数量增加(P0.05或P0.01)。与模型组比较,各药物干预组大鼠心脏收缩功能均表现为明显改善,心肌组织中Bcl-2、Beclin 1与Atg5蛋白表达增加,LC3B I/LC3B II转换增加,细胞凋亡数量减少(P0.05或P0.01)。与西药组比较,强心胶囊高剂量组心肌组织中Bcl-2、Beclin 1及Atg5蛋白表达增加,LC3B I/LC3B II转换增加,细胞凋亡数量减少更为明显(P0.05或P0.01)。结论:强心胶囊通过上调慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬,抑制细胞凋亡,发挥改善心脏功能的作用。     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...     

当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白LC3，Beclin1，p62表达的影响

目的:研究当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠的防治作用及对自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),p62表达的影响。方法:将6周龄SD雄性大鼠随机分为正常组,风湿热痹模型组,当归拈痛汤低、中、高剂量组(5.67,11.34,22.68 g·kg^-1),甲氨蝶呤(MTX)组(1.35 mg·kg^-1),每组10只,通过对大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,用人工气候箱进行风湿热痹证模型造模16 d,于免疫当天灌胃给药,持续28 d。进行大鼠一般情况观察及足趾肿胀度、关节炎指数(AI)检测,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织病理形态学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化法分别检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的蛋白表达。结果:与正常组比较,风湿热痹模型组大鼠给药16,20,24,28 d时足趾肿胀度显著升高(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),滑膜细胞增生显著,自噬蛋白LC3,Beclin1蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01),p62蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01);与风湿热痹模型组比较,各给药组大鼠足趾肿胀度减轻,滑膜增生情况有不同程度改善,LC3,Beclin1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),且当归拈痛汤中剂量组防治效果最佳。结论:当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠有明显的防治作用,且这种防治作用可能与调控滑膜组织中自噬相关因子LC3,Beclin1,p62的表达,抑制自噬有关。     

芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg~(-1)灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80. 48 g·kg~(-1)灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0. 4 mL;联合组每日按80. 48 g·kg~(-1)灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0. 4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31. 2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P 0. 01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P 0. 01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。     

益气活血法通过miR216b/Beclin1介导萎缩性胃炎癌前病变自噬的机制

目的：通过观察益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变(PLGC)模型小鼠微RNA216b(miR216b)/自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)信号通路的影响,探讨其干预PLGC的自噬作用机制。方法：将75只健康雄性SPF级昆明种小鼠随机分为空白组(12只)及造模组(63只),造模组小鼠每日采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)溶液(150 mg·L^-1)自由饮用及灌胃,同时每日灌胃雷尼替丁溶液(0.03 g·kg^-1),造模12周。按照随机对照表将造模小鼠分为模型组、益气组(黄芪3.5 g·kg^-1)、活血组(三七粉0.7 g·kg^-1)、益气活血组(黄芪3.5 g·kg^-1+三七粉0.7 g·kg^-1)及叶酸组(2 mg·kg^-1)。予相应药物灌胃8周后取材,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胃黏膜病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1...     

基于JNK信号通路调控细胞自噬探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究化浊解毒活血通络方通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路调控神经细胞自噬减轻脑缺再灌注损伤的作用机制。方法：60只SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)组(模型组)、化浊解毒活血通络方(中药)组(25.0 g·kg^-1)、JNK抑制剂SP600125(SP)组(5 mg·kg^-1)、中药+SP组和JNK激动剂Anisomycin(Ani)组(15 mg·kg^-1)6组。造模24 h后中药组和中药+SP组给予中药汤剂灌胃,连续给药3 d,其余各组灌胃等容积蒸馏水。神经功能评分评估神经功能缺损程度,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色确定脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织结构变化;尼氏染色检测神经元损伤;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡;透射电镜观察自噬小体超微结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织中微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因5(Atg5)、自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)、p62、B细胞淋...     

异甘草素对人肾透明细胞癌786-O细胞抗癌作用及分子机制

目的:研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对人肾透明细胞癌786-O细胞的抗癌作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法:通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测ISL(0,10,25,50,75,100μmol·L~(-1))对786-O细胞增殖的作用;细胞划痕和Transwell实验检测ISL对786-O细胞迁移、侵袭能力的影响;吖啶橙染色,Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞自噬状态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白的表达,并分析磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化,探讨其可能的作用机制。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,ISL能够明显抑制786-O细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性(P0.05);划痕和Transwell实验结果表明,与空白组比较,ISL能够抑制785-O细胞的迁移和侵袭(P0.05);吖啶橙染色和Ad-GFP-LC3转染实验表明ISL能够诱导786-O细胞发生自噬。此外,与空白组比较,ISL能够诱导细胞内自噬标志物-Ⅱ(LC3-Ⅱ),自噬相关蛋白Beclin1,Atg5蛋白表达(P0.05),并显著下调p62蛋白表达(P0.05),当加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可逆转上述现象(P0.05);同时ISL能够抑制Akt,m TOR的磷酸化水平(P0.05),加入抑制剂LY294002和雷帕霉素(rapamycin,Rap),LC3-Ⅱ,Beclin1,Atg5蛋白表达明显上调(P0.05),p62蛋白表达明显下调(P0.05)。结论:ISL能够抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路诱导细胞发生自噬。     

“糖脂清”调控自噬改善STZ诱导糖尿病模型小鼠认知功能的机制研究

目的：观察“糖脂清”对糖尿病模型小鼠认知功能的影响以及对海马神经元的保护作用，并探讨其相关作用机制。方法：采用高脂高糖饲料联合链脲佐菌素（STZ）腹腔注射的方法诱导2型糖尿病小鼠模型，随机分为模型组，二甲双胍组和糖脂清高、中、低剂量组，造模成功后给予不同剂量“糖脂清”和二甲双胍干预12周。灌胃给药12周结束后，通过Morris水迷宫实验进行行为学检测；取全脑进行海马区HE染色；采用ELISA法检测各组小鼠血清中的Atg5、Atg12的表达水平；采用Western blot对各组小鼠的海马组织Beclin1、LC3、Atg5、Atg7等自噬相关蛋白的表达；运用Real-time PCR技术检测小鼠海马Atg5、Atg7 mRNA的表达情况。结果：水迷宫结果显示，与空白组比较，模型组小鼠穿越平台次数明显减少（P <0.01）；与模型组相比较，糖脂清中、高剂量组以及二甲双胍组小鼠的穿越平台次数明显增加（P <0.05,P <0.01），糖脂清各剂量组及二甲双胍组的目标象限路程比明显上升（P <0.05,P <0.01），糖脂清低剂量组和高剂量组的目标象限时间比明显升高（P <0.01）。HE染色结果显示：模型组小鼠海马组织的CA1区和CA3区神经元细胞数量明显减少、细胞结构的破坏较多、细胞坏死情况等程度较深，糖脂清各剂量组及二甲双胍组小鼠的海马神经元破坏较模型组减少。ELISA结果显示：与空白组相比，模型组Atg5、Atg12含量明显减少（P <0.01），而糖脂清低剂量组血清中Atg5、Atg12的含量虽较空白组减少（P <0.05,P <0.01），但较模型组增加（P <0.01）；与模型组相比较，各给药组的Atg5含量均明显升高（P <0.01）；糖脂清低剂量组、高剂量组以及二甲双胍组的Atg12含量明显上升（P <0.01）。Western blot结果显示：与空白组比较，模型组的Beclin1、Atg5、Atg7、LC3蛋白表达水平均明显降低（P <0.01）；与模型组比较，糖脂清高剂量组及二甲双胍组的Beclin1、LC3、Atg5、Atg7蛋白表达水平出现了不同程度的升高（P <0.05,P <0.01）。Real-time PCR结果显示：与空白组比较，模型组Atg5、Atg7 mRNA表达呈下降趋势，但结果分析后提示无统计学意义（P> 0.05）；与模型组相比较，糖脂清高剂量组Atg5 mRNA表达量明显升高（P <0.01）。结论“：糖脂清”可改善糖尿病模型小鼠的认知功能障碍，具体机制可能与调节Beclin1、LC3、Atg5、Atg7、Atg12等自噬相关蛋白的表达，促进自噬有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的三七总皂苷调控自噬抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)能否通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬从而减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制。方法将H9c2细胞分为正常组、缺氧/复氧(A/R)组、A/R+PNS组、A/R+PNS+雷帕霉素(Rapa)组、A/R+Rapa组、A/R+羟氯喹(HCQ)组、A/R+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。通过缺氧6 h、复氧2 h建立H9c2细胞A/R模型。CCK-8法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞损伤,Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、m TOR的表达,荧光法观察细胞自噬流。结果与正常组比较,A/R组H9c2细胞存活率明显下降,细胞损伤率明显升高(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增加,自噬流显著增强(P0.05);与A/R组比较,用PNS预处理后,H9c2细胞存活率明显上升,细胞损伤率明显降低(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P0.05),p62蛋白表达明显升高,与自噬抑制剂HCQ、3-MA作用相似,荧光结果显示,PNS对自噬流有明显抑制作用(P0.05);PNS预处理后p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 PNS能有效减轻H9c2细胞A/R损伤,其机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬流相关。     

芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝脏细胞自噬的影响

目的 观察芪术颗粒对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导大鼠肝纤维化模型自噬的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组、芪术颗粒组,除正常对照组外其余各组均腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,按照组别对应处理。4周后取肝组织,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及自噬相关基因3（autophagy-related gene 3,Atg3）、自噬相关基因Beclin1介导的蛋白表达,Real-time PCR检测Atg3、Beclin1基因表达,电镜下观察自噬情况。结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝α-SMA蛋白显著增多（P<0.01）;与模型对照组比较,复方鳖甲软肝片组、芪术颗粒组肝α-SMA蛋白显著减少（P<0.05）;与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝Atg3蛋白表达显著增加（P<0.01）,Atg3基因表达增加,Beclin1蛋白及基因表达增加,自噬溶酶体和自噬体数量增多;与模型对照组比较,芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片...