蓝氏贾第鞭毛虫中国株组蛋白H2A基因的克隆与重组表达

目的 获取蓝氏贾第鞭毛虫中国株GlH2A基因及重组蛋白.方法 PCR扩增获取G1H2A基因,连接至pMD-19T并进行测序分析.连接至pET28a构建表达载体,并转化宿主菌E.coli BL21 (DE3),然后进行异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达.表达产物进行亲和层析纯化,再用Western blotting...     

蓝氏贾第鞭毛虫的细胞核

蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia.简称贾第虫)是一种具有2个细胞核多鞭毛寄生原虫,可寄生于人和多种脊椎动物肠道内,继而引起以腹泻为主要症状的贾第虫病(Giardiasis).     

蓝氏贾第鞭毛虫感染的调查报告

<正> 近年来,愈来愈多的临床病例和流行病学资料已证实蓝氏贾第鞭毛虫病是人类的重要致病寄生虫之一。据国外报道,在欧美不少国家曾多次发生蓝氏贾第鞭毛虫病流行。而我国的流行情况尚未清楚,据各地资料统计,蓝氏贾第鞭毛虫感染比较悬殊,在O.16～30.O％之间。我地区以往无报告。为此,我们于1988年lO月～1989年5月组织专业人员对田阳和凌云两县部分农村和小学生进行随机整群抽样调查,现将调查结果报告如下:     

重组人甲硫氨酸硫氧化物还原酶的原核表达、纯化及鉴定

目的：表达、纯化并鉴定人甲硫氨酸硫氧化物还原酶(hMsrA)。方法：将含有hMsrA基因的重组质粒转化大肠杆菌，经诱导表达，表达蛋白主要存在于上清中，经破菌、Ni-NTA Agarose亲和层析分离纯化目的蛋白。结果：SDS-PAGE显示纯化的蛋白相对分子质量为26000的单一条带；Western-blot鉴定该纯蛋白有免疫活性；酶活性测定表明，该纯化蛋白具有还原甲硫氨酸硫氧化物的能力。结论：hMsrA能在原核体系中良好表达，经纯化后具有催化活性，为大量制备并进一步研究抗氧化剂在动脉粥样硬化中的作用提供了科学途径。     

蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫简称贾第虫，是一种多鞭毛的单细胞真核生物，是引起全球性腹泻最常见的寄生性原虫。贾第虫地理分布广泛，有多种动物宿主，因此可通过粪便、被污染的水源、食物及身体接触进行传播。以往国内对其危害性及其在生物进化上的地位未能引起足够的重视，实验研究起步较晚，在20世纪70年代以前一直处于空白状态，至20世纪80年代始开展了具有实质性的研究。随着国内学者对其认识的不断深入，研究也不断丰富了起来。本文对蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白研究进展做一综述。     

蓝氏贾第鞭毛虫染色体的制备

目的:探讨蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)在分裂过程中是否形成典型的凝集染色体以及染色体的数目.方法:用改良的TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体.分别在不同浓度的秋水仙素(0、0.05、0.10、0.20、0.40和0.80 mg/L)、低渗处理不同时间(30、50、55、65和80 min)和不同固定液[V(甲醇):V(冰醋酸)为3:1和2:1]等条件下制备贾第虫染色体.结果和结论:在制备贾第虫染色体时,秋水仙素的最佳作用浓度为0.20 mg/L,最佳低渗处理时间为55 min,固定液推荐V(甲醇):V(冰醋酸)为3:1.贾第虫在分裂过程中形成典型的凝集染色体,染色体数目为2n=10.     

感染蓝氏贾第鞭毛虫家兔实验模型的建立

目的建立家兔实验感染蓝氏贾第鞭毛虫的动物模型,观察其病变、滋养体分布和排囊规律。方法采用6.3×105个包囊灌胃1次和连续灌胃4次(每次6.3×105个包囊,间隔48h)等两种方法实验感染家兔各5只,定期粪检,第30天解剖检查,取小肠组织切片染色。结果灌胃1次的5只实验兔仅1只被感染,连续灌胃4次的方法使5只实验兔全都被感染。6只被感染的家兔从接种至解剖的30d中,1只持续排囊,1只间歇排囊,4只不排囊。第30天解剖发现阳性兔小肠的0.3～1.8m段有滋养体分布,以0.6m位点密度最高。全部阳性兔胆囊中无滋养体寄生。阳性兔小肠肠腔中有丰富的炎性渗出液,内含大量滋养体和脱落的肠粘膜细胞。病理切片观察到肠粘膜固有层内有炎性细胞浸润,淋巴小结显著增生,绒毛上皮脱落,粘膜破损。结论成功地建立了蓝氏贾第鞭毛虫实验感染家兔的方法,为深入研究贾第虫病提供了新的动物模型。     

血吸虫病患者伴蓝氏贾第鞭毛虫感染1例

患者，男，14岁，农村青年。因发热9d，颜面浮肿6d，尿血2d入院。入院前9d感冒后出现发热，体温波动于38．5℃～40．2℃，热型无规律。入当地医院诊治，考虑上呼吸道感染，予以青霉素抗感染治疗，体温仍居高不下。约6d前出现颜面浮肿，尿量无减少，近2d出现血尿，为洗肉水样，精神食欲欠佳。查体：体温36．5℃，     

蓝氏贾第鞭毛虫承德株分子生物学研究

目的：探讨蓝氏贾第鞭毛虫大、小型包囊存在的原因。方法：用分子生物学技术对３株贾第虫（ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）进行ｔｉｍ基因扩增和序列测定。结果：经与ＧｅｎＢａｎｋ登记虫株比较和用ＤＮＡｓｔａｒ软件处理的结果表明,此３株贾第虫的基因型属２型（ＪＨ型）。结论：大、小型包裹在形态学上经过统计学处理显示有显著差异,但与基因型无关。     

人源性蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因的克隆及序列分析

目的克隆蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法根据蓝氏贾第鞭毛虫Elp3已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增获得Elp3的核苷酸序列,连接到pET28a载体并测定序列。应用生物信息学方法分析Elp3基因的序列同源性与结构特征。结果扩增片段长度为1767bp,测序结果与蓝氏贾第鞭毛虫WB株(GL50830)同源性100%。可构建生物进化树,进行同源结构建模发现,71-362aa具有一个保守的S-腺甙基蛋氨酸区域,458-584aa具有组蛋白乙酰基转移酶区域。结论成功克隆了蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,生物信息学分析发现,其在进化上与其它物种不属同一起源,具有SAM和HAT的结构和功能,这些发现为进一步研究其生物学功能提供了依据和线索。     

实时荧光PCR检测蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫方法的建立

目的 建立贾第鞭毛虫和隐孢子虫的基因检测方法.方法 根据GenBank中贾第鞭毛虫和隐孢子虫相对保守序列,设计引物及其相应的Taqman探针.通过对引物和探针浓度、Taq酶以及反应条件等优化筛选后,建立检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫的荧光PCR方法.结果 贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测结果为阳性,对其它DNA样本如日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫的检测均为阴性.本法的敏感性高,可检测到10～102copies/μl的DNA浓度.结论 建立的基因检测方法,对贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于饮用水和临床样本等的快速检测.     

His标记小鼠SRG-S基因的克隆和表达纯化

目的构建His标记的小鼠精子发生相关基因SRG-S的原核表达载体并实现其表达及纯化。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,克隆入pGEM-T-easy载体,经测序正确后,定向亚克隆入pET-30a( )表达载体,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白,并利用抗His单克隆抗体进行Western blot检测。结果RT-PCR扩增得到大小约591 bp的目的基因片段,DNA序列分析结果与GenBank公布的序列一致,SDS-PAGE电泳显示经IPTG诱导有约32 kD的重组蛋白表达,纯化后的蛋白纯度达90%以上,且Western blot印迹表明该融合蛋白具有特异的抗His抗体特性。结论采用基因克隆技术成功构建了带His标签的小鼠SRG-S原核表达载体,并获得了高纯度的重组蛋白,有利于后期抗体的制备,为进一步从蛋白质水平研究该基因的功能奠定了基础。     

人内皮抑素基因的克隆、表达、纯化及活性测定

目的 获得有生物学活性的人内皮抑素蛋白。方法 用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到人内皮抑素编码区基因,连接PGEM-T载体,测序确认,定向克隆入pBV220表达载体,转化大肠杆菌DH5α进行表达、纯化及活性测定。结果 经测序分析证实,所获得的552bp基因片段序列属于人内皮抑素基因,构建表达载体在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,并具有生物学活性。结论 人内皮抑素基因在大肠杆菌中获得非融合表达,表达蛋白能够抑制人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)的增殖,为应用内皮抑素进行抗血管生成治疗奠定了基础。     

饮用水中隐孢子虫与贾第氏鞭毛虫的检测

目的 对宝安区3个水厂的出厂水与水源水进行检测，以了解深圳市宝安区饮用水中隐孢子虫和贾第氏鞭毛虫的污染。方法参考美国EPA1623标准方法检测。结果出厂水未发现病原虫，水源水中检出病原虫。结论以该方法检测宝安区饮用水源水中存在隐孢子虫和贾第氐鞭毛虫的污染，应引起相关部门的关注。     

污水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的结果分析

目的调查深圳市污水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫污染情况。方法采用免疫磁分离姬姆萨染色法，对深圳市内3家污水处理厂处理后排出的污水，进行对病原虫的离心沉淀、淘洗、磁分离及染色鉴定。检测污水中的隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫包囊的含量。结果3家污水处理厂中有2家在处理后的污水中检出隐孢子虫和贾第鞭毛虫。结论目前污水处理厂处理后的水仍可检出致病原虫，表明地面水存在水污染的危险性。     

体外诱导蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的成囊和脱囊

目的 在体外诱导蓝氏贾第鞭毛虫C2株完成其生活周期。方法 通过提高改良TY-S-33培养基中的胆汁浓度至10mg／ml、pH至7．8来诱导成囊；体外诱导的包囊先经酸刺激，再用胰蛋白酶处理而诱导其脱囊。结果 体外成功诱导了蓝氏贾第鞭毛虫的成囊和脱囊。体外诱导的包囊呈椭圆形，光镜下观察有折光性，经诱导后，部分脱囊或完全脱囊成滋养体，形成的滋养体接近于梨形。结论 通过诱导，蓝贾第鞭毛虫C2株可在体外完成其生活史。     

蓝氏贾第鞭毛虫抗原快速检测与多重PCR检测的比较

目的比较蓝氏贾第鞭毛虫抗原快速检测法与多重PCR检测法检测结果间的相关性,为蓝氏贾第鞭毛虫快速筛查提供依据。方法采用抗原快速检测法与多重PCR检测法同时测定102例具有相关症状体征病人的粪便标本,确定病人蓝氏贾第鞭毛虫感染状况。结果共检测腹泻患者粪便标本102例,抗原快速检测法检测阳性81例,阴性21例,多重PCR检测阳性标本83例,阴性19例。抗原快速检测阳性而多重PCR检测确认阴性的标本0例;抗原快速检测阴性而多重PCR检测阳性的标本2例。抗原快速检测对蓝氏贾第鞭毛虫的阳性预示值为100.0%,阴性预示值为90.5%,诊断灵敏度是97.6%,诊断特异性是100.0%。结论采用抗原快速检测法检测蓝氏贾第鞭毛虫抗原,15 min内可筛查标本中的病原体,利于疾病的早期预防、诊断和治疗,防止社区/区域流行。