miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用

目的:探讨微小RNA-375(miR-375)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用。方法:人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为miR-375 inhibitor组、miR-375 inhibitor NC组、miR-375 mimic组、miR-375 mimic NC组、blank组,采用脂质体细胞转染法进行转染。利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测过表达或抑制表达miR-375对Ishikawa细胞增殖及凋亡等生物学行为的影响;利用Western Blot技术检测Ishikawa细胞转染后下游靶基因IGF-1表达水平。结果:转染后48小时与96小时,mimic组比mimic NC组细胞的增殖能力下降,inhibitor组比inhibitor NC组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义(P0.05)。转染48小时后,mimic组、miR-375 NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、空白组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,差异有统计学意义(P 0.05)。转染48小时后,IGF-1蛋白在mimic组、miR-375 NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、空白组中的相对表达水平分别为0.45±0.22、1.45±0.14、3.89±0.11、1.66±0.33、1.74±0.32,差异有统计学意义(P0.05)。结论:过表达miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现。     

LINC00337调控miR-145抑制宫颈癌细胞增殖的机制研究

目的 探究LINC00337和miR-145在调节宫颈癌细胞增殖方面的作用及机制.方法 将人宫颈癌HeLa细胞分为si-337组、si-337 NC组和空白对照组,通过RT-PCR检测人宫颈癌细胞HeLa、正常宫颈细胞Ectl/E6E7中LINC00337、miR-145的表达情况.通过MTS法检测各个转染组细胞的增殖...     

miR-335调控ROCK1对宫颈癌细胞作用的研究

目的探讨miR-335调控Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响。方法选取人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7、宫颈癌细胞系SiHa,分别转染miR-335 mimic、miR-335inhibitor、control mimic及control inhibitor,采用RT-PCR检测miR-335表达,Western blot检测ROCK1蛋白表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。结果与Ect1/E6E7细胞相比较,在SiHa中miR-335表达显著降低,ROCK1蛋白表达显著增高(P0.05)。转染miR-335mimic后SiHa细胞中miR-335表达显著增高,ROCK1蛋白表达显著降低(P0.05);转染miR-335 inhibitor后SiHa细胞中miR-335表达显著降低,ROCK1蛋白表达显著增高(P0.05)。转染miR-335mimic后SiHa细胞侵袭、迁移能力显著降低,而转染miR-335 inhibitor后则显著增高(P0.05)。与转染control mimic相比,共转染miR-335 mimic与野生型ROCK1-WT可使SiHa荧光素酶活性及ROCK1 mRNA明显降低(P0.05)。结论 miR-335可抑制宫颈癌细胞侵袭及迁移,可能通过调控ROCK1发挥作用。     

miR-515对凝集素-2的调控作用以及宫内膜间质细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-515(micro RNA-515, miR-515)对凝集素2(Intelectin 2, ITLN2)的调控作用以及对子宫内膜间质细胞（endometrial stroma cells, ESCs）生物学行为的影响。方法 分离ESCs细胞并进行传代培养,分为对照组（转染NC）、过表达组（转染miR-155 mimics）、抑制组（转染miR-515inhibitor）和逆转组（转染miR-515mimics+pcDNA-ITLN2）,检测各组ESCs增殖、凋亡、侵袭和转移情况,以及RNA和蛋白的表达。结果 过表达组细胞增殖、迁移细胞个数和侵袭细胞个数显著升高、凋亡率显著下降（P <0.05）;抑制组细胞增殖、迁移细胞个数和侵袭细胞个数值显著下降,凋亡率显著上升（P <0.05）。过表达组miR-515表达显著升高,ITLN2 mRNA和ITLN2蛋白表达显著下降（P <0.05）;抑制组miR-515表达显著下降,ITLN2mRNA和ITLN2蛋白表达显著上升（P <0.05）;逆转组介于过表达组和抑制组之间（P <0.05）。野生...     

miR-200c过表达对OVCAR-3卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨miR-200c过表达对上皮性卵巢癌细胞OVCAR-3增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：构建逆转录病毒表达质粒pMSCVpuro-miR-200c,转染OVCAR-3卵巢癌细胞株,分别用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK8）和Transwell小室法检测过表达miR-200c的OVCAR-3细胞的增殖、迁移以及侵袭力改变,同时采用基因芯片检测转染前后OVCAR-3细胞的差异基因表达情况。结果：与未转染细胞相比,pMSCVpuro-miR-200c-OVCAR-3细胞的增殖、迁移及侵袭力下降（均P＜0.01）。通过基因芯片的检测,miR-200c过表达可引起OVCAR-3细胞中上调表达的基因有190个,下调表达的基因有166个。结论：miR-200c作为抑癌基因参与抑制上皮卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭力。     

TGF-β1调节miR-99家族对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的:探讨TGF-β1通过调节miR-99家族各miRNA对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭行为的影响。方法:TGF-β1、miR-99家族各miRNA模拟物、miR-99家族各miRNA抑制物分别刺激或转染卵巢癌细胞系A2780及SKOV3。实时荧光定量PCR检测miR-99家族各miRNA表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell检测细胞侵袭及迁移能力。结果:与空白对照组比较,TGF-β1处理组卵巢癌细胞中miR-99家族各miRNA表达上调(P0.01),卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力明显增强(P0.05);miR-99家族各miRNA模拟物转染组细胞增殖减弱(P0.05),迁移及侵袭能力增强(P0.05);miR-99家族各miRNA抑制物转染组细胞增殖增强(P0.05),迁移及侵袭能力减弱(P0.05)。结论:TGF-β1可通过调节miR-99家族表达水平促进卵巢癌细胞系A2780及SKOV3的增殖、迁移及侵袭能力,TGF-β1及miR-99家族表达水平可能作为卵巢癌恶性程度预测及预后判断的参考指标。     

MicroRNA-155通过调控Wnt/β-catenin通路对滋养细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-155是否通过调控Wnt/β-catenin通路影响滋养细胞的生物学行为,参与子痫前期(PE)的发生。方法:收集20例PE孕妇(PE组)及20例正常孕妇(Normal组)的胎盘组织,qRT-PCR检测组织中miR-155表达,qRT-PCR及Western blot检测β-catenin表达。HTR-8/SVneo细胞分别转染miR-155 mimic、miR-155 inhibitor及miR-155 NC,qRT-PCR检测其转染效率及β-catenin mRNA表达,Western blot检测β-catenin及Wnt3a蛋白表达,CCK-8、Transwell、流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及凋亡。转染miR-155 inhibitor后,用β-catenin抑制剂处理细胞,检测相关蛋白表达及细胞的增殖、迁移和凋亡。结果:PE组胎盘组织中miR-155表达较Normal组升高(P<0.001),β-catenin表达降低(P<0.01)。过表达miR-155后,β-catenin及Wnt3a表达、细胞增殖、迁移能力均下降(P<0.01)...     

miR-155-5p在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响北大核心CSCD

目的探讨miR-155-5p在宫颈癌组织中的表达,以及其对宫颈癌细胞侵袭和迁移的影响。方法检测正常宫颈组织中miR-155-5p和宫颈癌组织的表达水平,采用荧光实时定量PCR方法检测;通过向宫颈癌细胞Hela细胞系中转染miR-155-5p mimic和inhibitor干扰内源miR-155-5p的表达,采用CCK-8法检测各组宫颈癌细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室实验检测各组Hela细胞体外侵袭能力的差异,以及划痕实验对Hela细胞迁移能力进行评估。结果相比于正常组宫颈组织,宫颈癌组织中miR-155-5p的表达显著升高,相比于正常组差异有统计学意义(P <0.05);Hela细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源miR-155-5p的表达,细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力会被抑制,而提高内源miR-155-5p的表达,细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力会显著提高,相比于对照组差异有统计学意义(P <0.05)。结论 miR-155-5p在宫颈癌组织中高表达,其可能通过提高宫颈癌细胞的增殖活性、侵袭与迁移能力在宫颈癌的发生发展过程中起着重要的生理功能。     

miR-217靶向调控TLR4对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-217靶向调控TLR4对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用双荧光素酶试验验证TLR4为miR-217的下游靶基因,在卵巢癌细胞中转染NC mimics和miR-217 mimics,并设立mock对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测TLR4 mRNA的表达量、Western blotting检测TLR4蛋白的表达量。然后通过CCK8、划痕和Transwell小室法检测卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 miR-217靶向调控TLR4的3'-UTR,降低了荧光素酶的表达活性。与NC mimics组比,miR-217 mimics组TLR4 mRNA和蛋白表达水平明显降低,且miR-217 mimics组细胞的增殖、迁移、侵袭能力也均降低。结论 miR-217通过靶向调控TLR4抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-155-5p在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

目的探讨miR-155-5p在宫颈癌组织中的表达,以及其对宫颈癌细胞侵袭和迁移的影响。方法检测正常宫颈组织中miR-155-5p和宫颈癌组织的表达水平,采用荧光实时定量PCR方法检测;通过向宫颈癌细胞Hela细胞系中转染miR-155-5p mimic和inhibitor干扰内源miR-155-5p的表达,采用CCK-8法检测各组宫颈癌细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室实验检测各组Hela细胞体外侵袭能力的差异,以及划痕实验对Hela细胞迁移能力进行评估。结果相比于正常组宫颈组织,宫颈癌组织中miR-155-5p的表达显著升高,相比于正常组差异有统计学意义(P 0.05);Hela细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源miR-155-5p的表达,细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力会被抑制,而提高内源miR-155-5p的表达,细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力会显著提高,相比于对照组差异有统计学意义(P 0.05)。结论 miR-155-5p在宫颈癌组织中高表达,其可能通过提高宫颈癌细胞的增殖活性、侵袭与迁移能力在宫颈癌的发生发展过程中起着重要的生理功能。     

miR-617在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-617在宫颈癌组织中的表达及其过表达对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、迁移等细胞生物学行为的影响。方法:采用实时定量PCR法检测宫颈鳞癌组织及正常宫颈组织中miR-617表达。宫颈癌SiHa细胞中转染miR-617模拟物使其过表达,采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,平板克隆实验检测细胞克隆形成率,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测靶基因C-末端结合蛋白1(Ct BP1)蛋白表达水平。结果:miR-617在宫颈鳞癌组织中表达下调,过表达miR-617可抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,促进SiHa细胞凋亡,抑制SiHa细胞的克隆形成能力,抑制细胞的迁移,过表达miR-617可降低CtBP1蛋白表达。结论:miR-617在宫颈鳞癌中表达下调,可抑制SiHa细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制克隆形成和迁移,其作用机制可能与CtBP1蛋白下调有关。     

Hsa-miR-127-3p在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:研究hsa-mi R-127-3p(mi R-127)在宫颈癌组织中的表达水平及其与临床病理特征之间的相关性,探讨mi R-127对宫颈癌细胞株Hela及Siha迁移和侵袭的影响。方法:Real-time PCR法检测50对宫颈癌及癌旁组织中mi R-127表达水平,分析mi R-127表达与临床病理特征的相关性。细胞转染mi R-127 mimics及mimics negative control,采用划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:mi R-127在宫颈癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.05)。mi R-127表达与淋巴脉管间隙浸润相关(P=0.048),而与年龄、FIGO分期、病理类型、分化程度、病灶大小、浸润深度、有无淋巴结转移无关(P0.05)。过表达mi R-127可抑制Hela及Siha细胞的迁移和侵袭能力。结论:mi R127在宫颈癌组织中低表达,并且抑制宫颈癌细胞株Hela及Siha的迁移和侵袭,可能与宫颈癌的发生发展密切相关。     

下调microRNA-205表达对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和侵袭的作用

目的:探讨下调microRNA-205(miR-205)表达对人子宫内膜样腺癌细胞系Ishika-wa增殖和侵袭的作用及可能的机制。方法:将miR-205抑制剂(miR-205 inhibitor)瞬时转染Ishikawa细胞,下调miR-205的表达;应用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测miR-205的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力。qRT-PCR和Western blot分别检测miR-205的预测靶基因ESRRG mRNA和蛋白表达水平。应用双荧光素酶分析方法鉴定miR-205和ESRRG 3'UTR的表达调节关系。结果:miR-205在Ishikawa细胞中呈高表达;转染miR-205 inhibitor的Ishikawa细胞中,miR-205表达降低了86.9%,细胞增殖和侵袭能力下降,同时细胞ESRRG mRNA和蛋白表达升高;miR-205通过直接与ESRRG mR-NA 3'UTR结合负调节其表达。结论:下调miR-205表达可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭能力;miR-205的生物效应可能与调节潜在抑癌基因ESRRG有关。     

沉默MMP-2对人宫颈鳞癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)对人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠成瘤能力的影响。方法:分别用MMP-2沉默慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞(MMP-2-LV组)、空载慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞为阴性对照组(NC-LV组)。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)观测MMP-2 mRNA的表达,蛋白质印迹(Western blotting)检测MMP-2蛋白的表达,流式细胞技术、Transwell侵袭、迁移和CCK-8细胞增殖实验观测MMP-2对细胞凋亡、侵袭、迁移和细胞增殖的影响,在裸鼠上构建移植瘤模型观测MMP-2对小鼠皮下成瘤能力。结果:转染后,与NC-LV组比较,MMP-2-LV组细胞MMP-2 mRNA和蛋白的表达量较低(P<0.05),增殖能力降低(P<0.01),侵袭、迁移能力降低(P<0.05),而细胞凋亡率升高(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,接种MMP-2-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积小于接种NC-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积(P<0.01)。结论:沉默MMP-2可抑制SiHa细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进其凋亡,MMP-2可能是宫颈鳞癌的潜在诊疗靶点。     

lncRNA XIST/miR-153/SNAI1在宫颈癌迁移、侵袭和上皮间质转化中的表达及意义#br#

Objective?To investigate the role of lncRNAXIST/miR-153/SNAI1 signal axis in the migration, invasion and epithelial-mesenchymal transformation of cervical cancer. Methods?The samples of 42 patients with cervical cancer were collected and cultured in vitro. The effects of lncRNAXIST and miR-153 on the proliferation, invasion, migration and epithelial-mesenchymal transformation (EMT) of cervical cancer cells were detected. Results?The expression of lncRNAXIST was increased in cervical cancer. Silencing lncRNAXIST and adding miR-153 simulator significantly reduced the invasion, migration and proliferation of cervical cancer cells, inhibited the expression of proliferation protein CDK4, CyclinD1 and invasive protein MMP-9, MMP-2, reduced the expression of EMT-related gene SNAI1 and related protein N-cadherin, Vimentin, IL-6, SNAI1, and promoted the increase of E-cadherin. Conclusion?Silencing lncRNAXIST targets could up-regulate of miR-153 and inhibit the migration, invasion and EMT of cervical cancer cells, which may be related to the inhibition of downstream signal pathway IL-6/SNAI1.     

过表达miR-198通过靶向调控Wnt2 B表达抑制滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭

目的:研究过表达miR-198对人滋养细胞株HTR-8/SVneo增殖、转移和侵袭能力的影响,并探讨其可能作用机制.方法:qRT-PCR检测子痫前期(PE)患者及正常产妇胎盘组织中miR-198表达水平.培养人滋养细胞株HTR-8/SVneo,采用脂质体法将miR-198 mimics及其阴性对照mimics NC转染...     

自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用

目的：研究自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用,以及自噬基因Beclin 1对Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法：不同浓度顺铂作用Hela细胞后,丹磺酰戊二胺（MDC）法观察细胞中自噬体的形成,蛋白质印迹法（Western blot）检测自噬基因Beclin 1和LC3蛋白的表达;将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1（＋）-Beclin1转染Hela细胞,Western blot检测Beclin 1在Hela细胞中的蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测顺铂对Hela半数抑制浓度（IC50）的变化,流式细胞仪检测自噬细胞与凋亡细胞的百分率.结果：顺铂作用Hela细胞后,细胞内自噬体形成增加,自噬蛋白Beclin 1和LC3表达增加,且均呈现浓度依赖性（P＜0.05）;pcDNA3.1（＋）-Beclin 1转染Hela细胞后,Beclin 1蛋白表达增加（P＜0.05）,MTT检测IC50由转染前的1.0 mg/L下降到0.5 mg/L,凋亡细胞百分率和自噬细胞百分率均升高,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：自噬参与了顺铂对宫颈癌Hela细胞的细胞毒性作用,自噬基因Beclin 1过表达能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性.     

环状RNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义分析

Objective?To investigate the role and mechanism of lncRNA HCG22 in proliferation, migration and invasion of cervical cancer. Methods?The expressions of HCG22 and miR-629-5p in cervical tissues and cells were detected by RT-qPCR. HeLa cell were allocated into pcDNA3.1 group, pcDNA3.1-HCG22 group, and pcDNA3.1-HCG22+miR-629-5p mimics group. The HeLa cell growth, migration and invasion were assessed by MTT, wound-healing and Transwell assays, respectively. The interaction relationship between HCG22/miR-629-5p and miR-629-5p/FOXO3 were analyzed by luciferase reporter. Results?HCG22 was significantly decreased in cervical cancer tissues and cell lines compared with paired paracancerous tissues or END1/E6E7 cell (P<0.01). The upregulation of HCG22 significantly inhibited tumor cell proliferation (P<0.01), migration (P<0.01), and invasion (P<0.01) compared with pcDNA3.1 group. miR-629-5p expression was increased in cervical cancer tissues and cell lines compared with paired paracancerous tissues or END1/E6E7 cell (P<0.01). There was a negative correlation between HCG22 and miR-629-5p (r=-0.7661, P<0.01). The addition of miR-629-5p mimics reversed the suppressive effects of pcDNA3.1-HCG22 on cell proliferation, migration, and invasion (P<0.01). Both HCG22 and FOXO3 bound to miR-629-5p. pcDNA3.1-HCG22 inhibited miR-629-5p (P<0.01), while promoted mRNA expression of FOXO3 (P<0.01). Conclusions?HCG22 was downregulated in cervical cancer, while miR-629-5p was upregulated. HCG22 gave function as a tumor suppressor in proliferation, migration and invasion of cervical cancer by targeting miR-629-5p/FOXO3 axis.     

Downregulation of miR-599 predicts poor outcome in cervical cancer patients and promotes the progression of cervical cancer

ObjectiveCervical cancer remains a leading cause of gynecological cancer-related death. In this study, we aimed to investigate the expression pattern of miR-599 and its prognostic significance in cervical cancer.Materials and methodsThe RT-qPCR analysis was used to detect the expression levels of miR-599 in cervical cancer tissues and cell lines. The association between miR-599 expression and clinical characteristics of cervical cancer patients was analyzed using the χ² test. The Kaplan–Meier analysis and multivariate Cox proportional hazards model were used to explore the prognostic significance of miR-599. Then, CCK-8 assays, transwell migration, and invasion assays were used to assess the effects of miR-599 on tumor cell proliferation, migration, and invasion of cervical cancer cells, respectively.ResultsmiR-599 expression was significantly downregulated in cervical cancer tissues and cells compared with non-cancerous tissues and HaCaT cells, respectively. Statistical analysis revealed that miR-599 expression was associated with lymph node metastasis and FIGO stage. The miR-599 expression was an independent prognostic factor for overall survival. Functionally, overexpression of miR-599 suppressed cell proliferation, migration, and invasion of cervical cancer cells, while downregulation of miR-599 had opposite effects.ConclusionmiR-599 acts as a tumor suppressor in cervical cancer that inhibiting cell proliferation, migration, and invasion of cervical cancer cells, suggesting that miR-599 may be a potential prognostic biomarker and novel targeted strategy for cervical cancer.