膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa形态的影响

膜联蛋白(ANXA)是一个Ca2+依赖的磷脂结合蛋白家族,结构上,它们都有C端保守的核心区域,N端序列中有磷脂酶A2(PLA2)和蛋白激酶C(PKC)的结合位点.功能上,在Ca2+存在的条件下,它们可与细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(PS)可逆性地结合.PKC是胞外细胞信号转导通路的重要成分,若过度激活会造成细胞增殖失调,佛波脂(PMC)是PKC的激动剂,可持续激活PKC而引起肿瘤的发生.     

人膜联蛋白A5重组质粒的构建及其在宫颈癌细胞系SiHa细胞中的转染与表达

目的：构建膜联蛋A5（ANXA5）的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞并检测其表达。方法：自行设计引物,引入BamHI和XhoI的酶切位点,PCR法从pJLA503-ANXA5中获得ANXA5基因;将pcDNA3．1质粒用BamHI和XhoI双酶切后,用T4连接酶将其与ANXA5基因连接,并经测序证实基因序列正确后,用磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,并用Western blot方法检测细胞中ANXA5蛋白的过表达。结果：重组质粒中ANXA5基因序列正确,转染重组质粒后的SiHa细胞过表达ANXA5蛋白。结论：成功构建了pcDNA3．1-ANXA5重组质粒,转染肿瘤细胞后可过表达ANXA5蛋白,为研究ANXA5在肿瘤细胞中的作用奠定了基础。     

膜联蛋白A5 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:克隆人膜联蛋白A5 cDNA并在大肠杆菌系统内作表达.方法:利用RT-PCR技术从人胎盘组织的总RNA扩增膜联蛋白A5的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T,在tac 启动子控制下,IPTG诱导表达GST融合蛋白.以亲合层析法纯化表达的融合蛋白,用KPTT法验证抗凝血活性.结果:凝胶电泳显示PCR扩增产物的长度为978 bp,重组质粒测序结果表明,插入片段与人膜联蛋白A5的序列完全一致.在IPTG诱导下,K802重组菌高效表达出相对分子质量为58 000的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26%.纯化蛋白具有很强的抗凝血活性.结论:成功克隆人膜联蛋白A5基因并在大肠杆菌中高效表达.     

膜联蛋白A5真核表达质粒的构建

目的:构建在哺乳动物细胞中表达的膜联蛋白A5(anxA5)的重组质粒.方法:Trizol法从人胎盘中抽提细胞总RNA,RT-PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板,扩增膜联蛋白A5的基因序列,引入酶切位点XhoI和BamHI.将真核表达载体pEGFP-N1和anxA5的PCR产物分别双酶切后用T4连接酶连接,转化大肠杆菌后抽质粒,测序鉴定.结果:重组质粒测序后,与genebank中anxA5的mRNA进行比对,证明anxA5基因序列正确,质粒构建成功.结论:成功构建了pEGFP-anxA5重组质粒,为研究膜联蛋白A5的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础.     

膜联蛋白 A5水平检测在妊娠中期胎儿宫内生长受限诊断中的应用

目的：探讨妊娠中期羊水中膜联蛋白A5水平检测在胎儿宫内生长受限诊断中的应用价值。方法以137例孕15～24周孕妇为研究对象,行羊膜腔穿刺获取羊水标本,行ELISA检测确定膜联蛋白A5的水平。将最终出现胎儿宫内生长受限的资料（27例）与其余资料（110例）进行比较分析;同时以20 ng／L作为膜联蛋白A5水平分界线,比较水平内（92例）和水平外（45例）孕妇出现胎儿宫内生长受限的比例。结果胎儿宫内生长受限孕妇膜联蛋白A5水平为（26.54±2.77） ng／L,而其余孕妇为（19.42±2.21） ng／L;膜联蛋白A5水平超过20 ng／L的孕妇其胎儿宫内生长受限发生率为26.1％（24／92）,低于20 ng／L者其发生率为6.7％（3／45）。上述差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论膜联蛋白A5水平与妊娠中期胎儿宫内生长受限存在一定的相关性,对于该蛋白水平超过20 ng／L的孕妇,需要重点预防胎儿宫内生长受限问题。     

膜联蛋白A5的结构与功能研究进展

膜联蛋白(Annexin,ANX)是一个Ca2+依赖的磷脂结合蛋白家族,在脊椎动物,ANX家族目前已发现有12个成员(ANXA1-A12,A13).它们不同于其它的Ca2+结合蛋白,如EF-hand家族等.ANX具有可锚定到细胞膜上的独特结构,且这种锚定是可逆的.     

膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达及意义

目的：探讨膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达变化和意义。方法：分别采用SP免疫组织化学染色法和Western Blotting法检测膜联蛋白A7在55例胃癌组织和25例癌旁正常胃组织中的表达情况。结果：胃癌组织膜联蛋白A7的表达水平明显高于癌旁正常胃组织,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：膜联蛋白A7高〈br〉 表达可能参与了胃癌的发生发展。     

膜联蛋白5在大鼠消化器官中的细胞定位

目的:观察膜联蛋白5(Annexin 5)在大鼠部分消化器官中的细胞定位,为探讨Annexin 5在消化器官内可能发挥的生理学作用奠定基础.方法:选取健康SD大鼠,经Bouin's液固定其消化器官(胃、小肠、肝脏、胰腺)后,应用特异的兔抗Annexin 5抗血清,采用免疫组织化学方法和免疫荧光化学方法,观察Annexin 5在大鼠消化器官中的细胞定位.结果:Annexin 5在大鼠的消化器官中呈细胞特异性分布.Annexin 5在胃上皮细胞、胃底腺部分细胞、小肠绒毛杯状细胞、胆管内皮细胞和血管内皮细胞中分布较多,同时在胃和肠的黏膜层和肌层的部分细胞、小肠固有层中某些细胞、肝内皮细胞、胰腺血管内皮细胞中也有分布.结论:Annexin 5存在于大鼠消化器官执行特殊功能的一些细胞内,提示Annexin 5可能在这些细胞发挥生理功能的过程中具有特定的作用.     

膜联蛋白A2在肝癌患者外周血中的表达研究

目的:探讨膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)在肝细胞肝癌患者外周血中的表达及其与临床病理特征之间的联系。方法:把142例病人分为肝癌组和肝硬化组,其中肝癌组64例,肝硬化组78例,收集两组病人的血清,同时从血库收集40份正常人血清作为对照组,用ELISA法检测3组病人外周血中ANXA2的含量,并分析外周血中ANXA2的表达与肝癌的临床病理关系。结果:肝癌组患者血清中ANXA2的平均浓度为(36.21±13.50)ng/ml,肝硬化病人中ANXA2的平均浓度为(25.68±11.54)ng/ml,正常对照组ANXA2平均浓度为(21.09±6.86)ng/ml,肝癌组与肝硬化组、正常对照组比较,ANXA2平均浓度明显增高(P<0.01),同样,肝硬化组ANXA2平均浓度高于正常对照组(P<0.05)。同时,AFP值较高、分化程度较低、肿瘤直径较大、发生复发转移以及感染HBV的肝癌病人,ANXA2在血清中的含量显著升高(P<0.05),而不同性别、年龄段的肝癌病人血清中ANXA2的表达水平相比无明显差异(P>0.05);但患者血清中ANXA2的浓度与AFP浓度之间无明显相关关系(r=0.077,P=0.546)。结论:ANXA2的高表达可能与肝癌的发生发展密切相关,检测血清中ANXA2的含量有可能作为肝癌的诊断及预测复发转移趋势的一个指标,ANXA2有可能成为潜在的肝癌分子标志物及治疗靶点。     

膜联蛋白A2在妇产科疾病中的研究进展

膜联蛋白A2是一种钙离子介导的磷脂结合特性的蛋白质,属于膜联蛋白家族成员,广泛分布于胞核、胞质及细胞质膜外表面。它主要在人体内皮细胞、单核/巨噬细胞、骨髓细胞和某些肿瘤细胞中表达。膜联蛋白在细胞内参与膜形成、膜转运、胞吞、胞吐、细胞增殖、信号转导、分化及凋亡等一系列重要的生命过程。膜联蛋白A2在多种恶性肿瘤中表达异常,如在乳腺癌、胰腺癌、肝癌、结直肠癌等,在妇科肿瘤如宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌中同样表达上调。现着重就膜联蛋白A2与妇产科疾病的相关性进行综述。     

下调miR-886—5p的表达对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响

目的探讨下调miR-886—5p的表达对SiHa细胞增殖的影响。方法应用脂质体转染法分别将miR-886—5p表达抑制质粒及其对照质粒转染siHa细胞,经Blasticidin抗生素筛选,得到稳定抑制miR-886—5p表达的SiHa细胞（SiHamiR-886—5pinhibitor）和稳定转染对照质粒的细胞;RT—PCR进行验证;采用MTT测增殖及克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果获得了稳定抑制miR一886—5p表达的宫颈癌siHa细胞系;MTT测增殖实验发现,SiHamiR-886—5pinhibitor体外增殖能力比si—HamiR-886—5pNC及未转染质粒组细胞均明显减弱（P〈0．05）;克隆形成实验发现,SiHamiR-886—5pinhibitor体外克隆形成能力比SiHamiR-886—5pNC及未转染质粒组细胞均明显减弱（P〈0．01）。结论下调miR-886—5p可显著抑制siHa细胞的增殖,提示靶向抑制miR-886—5p为宫颈癌的治疗提供了新思路。     

宫颈癌HeLa细胞摄取ACM-LDL及游离ACM的比较研究

目的比较宫颈癌HeLa细胞对阿克拉霉素-低密度脂蛋白复合物(ACM-LDI)及游离ACM的摄取量及ACM-LDL对HeLa细胞DNA及RNA合成的抑制作用.方法采用保温交换法制备ACM-LDL复合物,观察在相同的作用时间下,HeLa细胞对ACM-LDL及游离ACM的摄取量,应用流式细胞仪测定HeLa细胞内DNA、RNA的含量.结果①相同时间内,宫颈癌HeLa细胞摄取ACM-LDL复合物数量显著高于ACM;②细胞对复合物的摄取量可因天然LDL的竞争抑制而减少;③细胞对复合物的摄取受LDL受体(LDLR)饱和度的限制;④复合物对HeLa细胞DNA、RNA的合成具有较强的抑制作用.结论LDI与ACM结合,对LDL和ACM的结构、理化性质及代谢特征均无影响,以LDI为化疗药物载体,可提高宫颈癌细胞内的药物含量,增加药物的抑癌效果.     

siRNA转染浓度和时间对HeLa细胞ANXA5表达的抑制作用

目的：优化靶向ANXA5的siRNA转染HeLa细胞的条件,为进一步研究ANXA5低表达对宫颈癌细胞生物功能的影响奠定基础。方法：将靶向ANXA5的siRNA转染HeLa细胞,设置不同的siRNA与脂质体的比值和转染时间,Western Blot检测ANXA5蛋白的表达。结果：siRNA与脂质体的比值为0.4：1时,转染入HeLa细胞72h后,HeLa细胞ANXA5蛋白的表达水平最低,即抑制作用最强。结论：siRNA与脂质体的比值和转染时间可影响HeLa细胞ANXA5的表达,存在最佳比值和转染时间。     

食管鳞癌组织中ERK5的表达及临床意义

目的在人食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常黏膜组织中检测细胞外信号调节激酶5（ERK5）蛋白和mRNA表达情况,对照临床病理参数,探讨ERIC5表达的临床意义。方法选取食管鳞癌组织（食管鳞癌组）和癌旁正常组织（正常组）各115例,采用免疫组化法检测两组ERK5蛋白表达,RT—PCR法检测ERK5mRNA相对表达量,并分析ERK5蛋白、mRNA表达与食管鳞癌临床病理参数的关系。结果食管鳞癌组及正常组ERK5蛋白表达阳性率分别为90．4％和68．6％,两组ERK5蛋白表达有显著差异（P〈0．05）;食管鳞癌组及正常组ERK5mRNA的相对表达量分别为O．82±0．07、0．61±0．02,两组ERK5mRNA表达有显著差异（P〈0．05）。不同的病理分级分期的食管鳞癌ERK5蛋白、mRNA表达有显著差异（P〈0．05）。而不同的性别、年龄的食管鳞癌ERK5蛋白、mRNA表达无显著差异（P〉0．05）。ERK5蛋白和mRNA表达呈正相关。结论ERK5蛋白和mRNA表达在癌组织中较癌旁正常组织高;分期越高分化程度越低及发生淋巴结转移的食管鳞癌组织中ERK5蛋白和mRNA的表达水平越高。提示高表达的ERK5和食管癌的恶性程度和转移密切相关。     

COX-2与ANXA1在乳腺癌患者血清中的表达及其意义

目的：探讨乳腺癌患者血清COX-2与ANXA1的表达及其意义。方法：采用ELISA法检测乳腺癌组49例,乳腺良性病变组23例,健康对照组20例血清中COX-2与ANXA1的水平。结果：①乳腺癌血清组COX-2水平高于乳腺良性病变组及健康对照组,而ANXA1则低于乳腺良性病变组及健康对照组,二者在3组间比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;②二者联合检测对乳腺癌诊断灵敏度为95.9%,特异度为48.8%;③COX-2的表达与TNM分期、腋淋巴结转移程度有关;ANXA1的表达与肿瘤直径、TNM分期、腋淋巴结转移程度有关。结论：血清COX-2与ANXA1的水平在一定程度上反映了乳腺癌的生物学特性;二者联合检测可提高乳腺癌诊断的灵敏度,对乳腺癌的早期诊断可能有重要意义。     

宫颈癌组织中树突状细胞和ICAM-1的表达

目的探讨宫颈癌组织中树突状细胞(DC)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达及其临床意义。方法收集1993～1998年间手术切除的宫颈癌组织存档蜡块标本66例,同期正常宫颈组织标本20例和宫颈炎组织标本30例。采用免疫组化S-P法检测宫颈癌组织中DC和ICAM-1的表达,并与正常宫颈组织和良性病变组织相对照。结果20例正常宫颈组织DC皆为阴性表达,30例宫颈炎标本有3例为弱阳性表达;正常宫颈组织20例ICAM-1皆为低度表达,30例宫颈炎组织中2例高度表达。DC和ICAM-1的表达水平与宫颈癌组织学类型无关;随FIGO手术分期的增加,DC阳性表达率降低,ICAM-1高度表达率增加(χ2=9.899、13.074,P<0.01)。有淋巴结转移的宫颈癌组织中,DC阳性表达率低于无淋巴结转移组织,ICAM-1高度表达率高于无淋巴结转移组织,差异有显著性(χ2=8.963、21.512,P<0.01)。DC阳性病人3年及5年生存率明显高于DC阴性病人,ICAM-1高度表达病人3年及5年生存率明显高于低度表达组,差异有显著性。结论检测DC和ICAM-1在宫颈癌组织中的表达,对指导宫颈癌临床治疗和估计病人预后有着重要意义。     

P16、P15在子宫颈癌中的表达及临床病理意义研究

目的 :研究P16、P15在子宫颈癌中的表达特点 ,并探讨其与临床分期、病理分级、淋巴结转移及预后的关系和意义。方法 :应用超敏S -P免疫组化方法检测 4 3例宫颈鳞癌及 10例正常宫颈组织、10例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)中的P16、P15的表达情况 ,并结合临床分期、病理分级、淋巴结转移及预后情况进行分析。结果 :(1)在 4 3例宫颈癌中P16阳性细胞主要为胞浆染成棕黄色 ,少数标本中胞核也染成棕黄色 ;P15阳性细胞胞核、胞浆均为棕黄染色 ,但胞核染色比胞浆深。 (2 )P16和P15蛋白表达结果相比较无统计学意义 ,但二者在宫颈癌组织的表达明显低于在对照组正常宫颈中和CIN中的表达率。统计学分析有系统性线性趋势。 (3)P16和P15蛋白表达在I、II、III级中的差异均无显著性。 (4)P16、P15在宫颈癌I～IV期中的表达虽有下降趋势 ,但差异均无显著性。 (5 )P16 ,P15在淋巴结转移组中的阳性表达率明显低于在无淋巴结转移组的阳性表达率 ,(6 )子宫颈癌患者术后生存期≥ 5年者 ,P16和P15蛋白的表达阳性率显著高于生存期 <5年者。结论 :抑癌基因P16、P15的表达缺失在子宫颈癌中同时存在 ,二者的表达缺失积极参与了宫颈癌的发生、发展和转移 ,二者的联合表达缺失预示患者预后差。P16、P15蛋白的检测对评估子宫颈癌淋巴结转移     

BCG对体外培养人癌细胞直接作用的扫描电镜观察

用不同浓度卡介苗与人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞作用不同时间，用扫描电镜进行细胞表面超微结构的观察。结果发现ＢＣＧ对靶细胞有直接损伤的作用。     

肝细胞癌中卵圆细胞表面标记的表达及意义

目的探讨卵圆细胞部分表面标记在肝细胞癌中的表达状况和意义。方法应用免疫组织化学SABC法检测20例肝细胞癌中CK7、CK19、CK18、CD34、e—kit抗原的表达。结果14例肝细胞癌CK7表达呈阳性，其阳性表达率为70％（14／20）；9例c—kit的阳性表达率为45％（9／20）；在20例肝细胞癌癌组织中的CK18全部呈阳性表达，CK19和CD34全部呈阴性表达。CK7、C—kit表达与患者年龄、性别无关，与肿瘤大小、是否合并肝硬化以及组织学分级也不相关（P〉0．05）。结论肝细胞癌癌组织中存在表达卵圆细胞表面标记的细胞，其表达CK7、C—kit，不表达造血干细胞标记物CD34。其进一步提示，肝细胞癌可能不是起源于肝干细胞而是来源于过渡性的前体细胞／祖细胞，如来源于Hering管的卵圆细胞。