三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞作用的体外观察

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0及5.0 μmol/L)组,通过透射电镜、DNA电泳、原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,Western印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化.结果 随三氧化二砷浓度的增加能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关,观察第7天、浓度为5.0μmol/L时细胞生存数为[(4.41±0.10)×105/ml,正常对照组(30.11±0.93)×105/ml差异有统计学意义,P<0.05],透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由(16.0±3.1)%增至(38.7±2.7)%(P<0.05),三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,抑制其过度增殖.     

支架植入对兔血管平滑肌细胞PCNA和Cyclin E表达及细胞凋亡的影响

【目的】观察支架植入后对血管中膜平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,探讨支架植入后再狭窄的发生机制。【方法】将雄性新西兰兔50只随机分为球囊组和支架组,设正常对照。分别于术后第3、7、14、28、56天取材研究①用免疫组化检测血管中膜平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期蛋白E（CyclinE）的表达;②用TUNEL染色法测定血管中膜平滑肌细胞的凋亡。【结果】与对照组比较,支架组和球囊组PCNA、CyclinE表达及细胞凋亡均有显著增加。支架组与球囊组比较,①PCNA和CyclinE表达明显增加,术后第7天,支架组和球囊组PCNA阳性率为24.36%±0.55%vs18.74%±1.09%(P<0.01),CyclinE阳性率为22.65%±1.00%vs17.68%±1.10%(P<0.01);②支架组血管中膜平滑肌细胞的凋亡也较球囊组显著增加,最大凋亡率在术后第7天,12.46%±1.13%vs5.54±0.53%(P<0.01);③PCNA和CyclinE的阳性率与平滑肌细胞凋亡阳性率的比值,球囊组大于支架组。【结论】支架组较球囊组导致明显的平滑肌细胞增殖,同时也导致更显著的平滑肌细胞凋亡,使支架植入后再狭窄的程度减轻。     

血管内放射对猪受损髂动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 :观察血管内放射照射对猪髂动脉球囊损伤后血管新生内膜平滑肌细胞(SMC)增殖与凋亡的影响。方法 :2 7头小型猪分为 3组 ,所有猪行髂动脉球囊过大扩张 ,通过后装装置将 1 0Gy和 2 0Gy的192 Ir放射源分别置于 9只猪受损髂动脉部位 ,其他 9只猪的受损髂动脉作为对照。每组的 9头猪分别术后 3天、1 0天和 2 8天分 3次处死。用增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法 (TUNEL)法检测内膜SMC增殖和凋亡情况。结果 :代表血管内膜增殖的PCNA指数在 1 0天和 2 8天宰杀的猪中 ,放射治疗组明显低于对照组。术后 1 0天内膜SMC凋亡在对照组和 1 0Gy、2 0Gy组的值分别为 :(1 85± 0 49) %比 (2 2 7± 0 49) %(P >0 0 5)和 (1 85± 0 49) %比 (2 53± 0 45) %(P <0 0 5) ;术后 2 8天上述值分别为(1 61± 0 3 5) %比 (3 1 1± 0 51 ) %(P <0 0 5)和 (1 61± 0 3 5) %比 (7 0 5± 1 82 ) %(P <0 0 5) ;2 8天时 2 0Gy组的内膜SMC凋亡明显高于 1 0Gy组 (7 0 5± 1 82 ) %比 (3 1 1± 0 51 ) %(P <0 0 5)。相同的放射剂量时 ,2 8天宰杀猪的髂动脉SMC凋亡高于 1 0天宰杀猪的量。结论 :血管内γ射线照射能抑制小型猪球囊损伤髂动脉内膜SMC增殖和刺激SMC凋     

氧化型胆固醇诱导兔血管平滑肌细胞凋亡

目的：研究氧化型胆固醇(Triol与25-OH)对兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡的诱导,并观察其时效与量效关系。方法：原代培养兔VSMC,利用光镜、电镜、DNA电泳及TUNEL法作为凋亡检测法。结果：光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,电泳示“DNA ladder”,TUNEL法示正常兔VSMC凋亡率为3.62％,用Triol和25-OH不同质量浓度(5、10、15、20 mg*L－1)分别处理细胞24 h后,凋亡率明显升高;用Triol和25-OH（15 mg*L－1）分别处理细胞0、12、24、36 h后,凋亡率随时间延长而增加。结论：氧化型胆固醇(Triol与25-OH)可以诱导血管平滑肌细胞发生凋亡,且呈时间和剂量依赖性。     

重组水蛭素局部治疗兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄

目的　探讨重组水蛭素经多孔球囊导管局部治疗对兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄的影响 .方法　 2 4只纯种日本大耳白兔随机分成对照组 (n=12 )和重组水蛭素局部治疗组 (n=12 ) ,采用兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄动物模型 ,治疗组经多孔球囊导管于球囊扩张局部在 2个大气压下给予重组水蛭素 (13.8× 10 6抗凝血酶单位· g- 1 ) 1mg· kg- 1 ,对照组给予生理盐水 .术后 2 wk和4wk复查血管造影 ,术后 4wk取髂总动脉标本行 HE染色、Masson三色染色、平滑肌肌动蛋白 (α- actin)免疫组织化学染色和增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组织化学染色 ,并进行计算机图像分析 .结果　治疗组术后 2 wk和 4wk平均髂总动脉直径均较对照组显著扩大 [2 wk (86± 5 ) % vs(5 6±10 ) % ,P <0 .0 1;4wk (77± 13) % vs (5 6± 10 ) % ,P <0 .0 1],术后 2 wk和 4wk平均髂总动脉面积亦显著增加 .术后 4wk治疗组球囊扩张血管管腔面积较对照组显著增加[(37± 5 ) % vs (16± 5 ) % ,P <0 .0 1],管壁面积显著减少[(6 3± 5 ) % vs(84± 5 ) % ,P<0 .0 1],其中主要是内膜面积的减少 [(7± 1) % vs (38± 10 ) % ,P<0 .0 1].术后 4wk治疗组球囊扩张血管壁 α- actin和 PCNA免疫组化染色阳性细胞均较对照组明显减     

三氧化二砷对兔晶体上皮细胞增殖的影响及其机制的实验研究

目的:观察不同浓度的三氧化二砷作用不同时间对兔晶体上皮细胞影响及其作用机理。方法:应用不同浓度的三氧化二砷作用于兔晶体上皮细胞后,观察三氧化二砷对兔晶体上皮细胞生长状态的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法、透射电镜技术观察其对兔晶体上皮细胞增殖的影响;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞技术检测三氧化二砷对兔晶体上皮细胞凋亡的诱导作用。结果:不同浓度的三氧化二砷作用于兔晶体上皮细胞有明显的时间和剂量依赖性。三氧化二砷作用后细胞生长明显受抑制,并出现明显的凋亡特征性改变;8μmol/L三氧化二砷作用24小时、48小时及72小时后TUNEL法可检测到细胞凋亡水平显著性升高,流式细胞仪分析显示,兔晶体上皮细胞在G1峰前出现明显的凋亡峰。结论:三氧化二砷可明显抑制兔晶体上皮细胞的生长,其机理主要是诱导兔晶体上皮细胞凋亡。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对球囊损伤内膜修复的影响

目的建立兔髂动脉球囊损伤模型,观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)对损伤内膜修复的影响。方法健康雄性新西兰大白兔24只随机分为GM CSF组和对照组。GM CSF组皮下注射GM CSF10μg·kg1·d1,对照组皮下注射同等量生理盐水。7d后球囊扩张损伤髂动脉。4周后提取损伤动脉标本,观察内皮修复、内膜增生情况并测定病理形态学参数。结果术后4周病理组织学见GM CSF组内膜增生程度明显轻于对照组,新生内膜中血管平滑肌细胞和纤维组织明显少于对照组,内皮较完整、光滑,管腔狭窄程度较轻。形态学参数见GM CSF组的管腔面积明显大于对照组(1.27mm2±0.31mm2vs0.92mm2±0.24mm2),新生内膜面积与内膜增生百分比明显小于对照组(0.85mm2±0.34mm2vs1.18mm2±0.38mm2;40%±7%vs55%±6%)。结论GM CSF能促进损伤内膜修复,减少内膜增生,降低再狭窄率。     

兔髂动脉内膜受损后增生和c—myc基因的表达

研究兔髂动脉内皮剥脱时血管壁细胞的反应特点和ｃ－ｍｙｃ基因的表达规律。用标准血管成形导管髂动脉球囊损伤１３只家兔的右髂总动脉后,分别于３、７、４０ｄ处死动物,用透射电镜观察术后３ｄ平滑肌细胞（ＳＭＣ）超微结构的变化,光镜观察术后血管壁细胞的反应特点和ｃ－ｍｙｃ蛋白表达规律,同时对术后４０ｄ动物行血管造影。结果发现：术后３ｄ兔髂总动脉中层ＳＭＣ由收缩型转变为分泌型,并向内膜下迁移,可见管腔内有血栓形     

早期酒精性股骨头缺血坏死骨细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在早期酒精性股骨头缺血坏死中的意义。方法 :采用灌胃法 ,给予实验组家兔含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8mL(kg·d) 1～ 6月 ,对照组给予等量生理盐水 ;观察股骨组织学变化 ,用末端原位标识 (TUNEL)法检测骨细胞凋亡。结果 :2个月时实验组凋亡细胞数 (10 7.6 0‰± 2 5 .87‰ )明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,并随着时间推移 ,凋亡细胞逐渐增多 ;与对照组 (10 .6 9%± 3.11% ,11.2 4 %± 2 .6 4 % )相比 ,3、6个月时实验组空骨陷窝百分比 (16 .6 1%± 3.6 0 % ,2 7.93%± 3.0 6 % )明显增加 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。透射电镜发现部分胃细胞核膜完整、染色质浓集、电子密度增加的凋亡特征。结论 :细胞凋亡在早期酒精性股骨头缺血坏死中起重要作用。     

β淀粉样蛋白1-40对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用

目的　观察 Aβ1 - 40 对大鼠皮层神经元的毒性作用。　方法　原代培养大鼠皮层神经元 ,分别采用AO- EB染色、TU NEL染色和 DNA凝胶电泳 ,观察不同终浓度的 Aβ1 - 40 对培养的神经元凋亡的诱导作用。　结果　在荧光显微镜下可见 ,经 AO- EB染色后凋亡的神经元胞核染色质着绿色荧光呈固缩状、圆珠状或新月状 ,Aβ1 - 40 三个浓度 (2 0 ,4 0和 80μg/ml)作用不同时间的凋亡率依次为 :2 4 h 2 0 .17%± 0 .76 % ,2 5 .17%± 3.82 % ,2 8.33±2 .84 % ;4 8h 2 2 .33%± 1.4 4 % ,38.83%± 1.2 6 % ,36 .6 7%± 1.0 4 % ;72 h 17.5 0 %± 1.80 % ,2 6 .5 0 %± 1.32 % ,30 .6 7%± 1.2 6 %。 TUNEL染色结果显示胞核内散在分布断裂的 DNA片段 ;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。　结论　 Aβ1 - 40 可诱导大鼠皮层神经元凋亡 ,以 4 0μg/ml作用 4 8h的诱导效果最为明显     

三氧化二砷诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的机制。方法建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖模型。通过透射电镜、流式细胞仪观察As2O3作用后细胞凋亡形态学和细胞胞浆游离钙离子(Ca^2 )浓度的变化。结果经As2O3处理的VSMCs电镜下呈现凋亡的特征性改变,形态学上表现为细胞胞膜完整、染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示,VSMCs在As2O3作用后出现凋亡峰,而As2O3能通过促进细胞外Ca^2 内流和细胞内Ca^2 池的释放提高胞浆游离Ca^2 浓度。结论As2O3可诱导VSMCs凋亡,并可能与胞浆游离Ca^2 浓度升高有关。     

三氧化二砷对哮喘患者及正常人外周血T细胞凋亡的影响

目的 研究三氧化二砷对哮喘患者及正常人外周血T细胞凋亡的影响.方法 收集哮喘患者和健康对照者外周血,分离T细胞,每位受试者T细胞分别加入或不加三氧化二砷和地塞米松进行体外培养,24h后收集细胞,用荧光显微镜、流式细胞术和细胞色素c ELISA试剂盒检测细胞凋亡.结果 与健康对照者比较,哮喘患者T细胞自发凋亡减慢.加入地塞米松一起培养,哮喘患者和健康对照者T细胞凋亡均显著增加,两者增加幅度无明显差异;加人三氧化二砷一起培养,哮喘患者T细胞凋亡显著增加,但健康对照者T细胞只受轻微影响.结论 哮喘患者T细胞自发凋亡减慢.对三氧化二砷诱导的T细胞凋亡,哮喘患者的敏感性明显高于正常人;对地塞米松诱导的T细胞凋亡,哮喘患者和正常人敏感性一样.     

兔髂动脉再狭窄模型的建立

目的建立兔骼动物再狭窄模型。方法通过Fogarty导管经隐动脉入路髂动脉内皮一次损伤和经股动脉入路球囊扩张二次损伤建立兔髂动脉再狭窄模型。应用下肢动脉造影、电镜学和病理学检查研究术后即刻至84 d共9个时段病变动脉狭窄情况。结果手术成功的28条肢体右髂动脉狭窄率>50%-80%,6条肢体右髂动脉狭窄率<50%。新生内膜和中膜以血管平滑肌细胞(VSMCs)为主,随术后时间延长,VSMCs减少而泡沫细胞增多;细胞成分减少,胶原成分增多;新生内膜比例增大,中膜比例减小。结论改进的兔髂动脉再狭窄模型稳定可靠,手术方法简便可行。     

三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）调亡的作用。方法：建立大鼠ＶＳＭＣｓ增生模型。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（ＭＴＴ法）、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法观察Ａｓ２Ｏ３诱导ＶＳＭＣｓ凋亡的作用。结果：经Ａｓ２Ｏ３作用后ＶＳＭＣｓ出现典型的凋亡变化,透射电镜下可风细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。ＤＡ琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形电泳条带。汉式细胞术检     

三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究

目的 在体外观察三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞系HT-29的抑制作用,并探讨其作用机制,为其是否能作为结肠肿瘤的化疗药物提供理论基础.方法 将不同浓度As2O3作用于HT-29细胞不同时间后,用MTT检测细胞抑制率,光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,通过流式细胞仪及共聚焦显微镜分析凋亡及自噬.结果 4.0μmol/L As2O3作用72h可明显抑制HT-29细胞增殖及诱发其凋亡,且抑制率与药物作用时间及浓度成正比.在凋亡早期细胞形态学变化在光镜下可见细胞缩小变圆,在电镜上可见细胞质浓缩、核固缩及自噬溶酶体.4.0μmol/L As2O3作用72h后HT-29细胞凋亡率为25%.结论 As2O3能明显抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖,其作用机制与引起凋亡及自噬密切相关.     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的 探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制.方法 采用光镜、电镜,PCRELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达.结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降.结论 端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一.     

砷剂诱导人胃癌细胞株凋亡及对C-myc基因作用的研究

目的研究砷剂（As2O3）对人胃癌细胞的诱导凋亡作用及对C-myc基因表达的影响。方法选用人胃癌BGC-823细胞株,运用体外细胞培养法、MTT法、流式细胞术检测As2O3对人胃癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测C-mycmRNA的表达。结果As2O3对人胃癌BGC-823细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1．0μmol／L、3．0μmol／L的As2O3可下调C-myc的表达。结论As203具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现。其机制与下调C-myc表达有密切关系。     

32P球囊内放射治疗预防动脉损伤后新生内膜过度增生

目的：选用家兔颈动脉球囊损伤模型观察放射性^32P液体球囊血管内放射治疗对损伤后新生内膜过度增生的抑制作用。方法：健康家兔40只制作颈动脉球囊损伤模型，随机分成4组：10、20和40GY放射剂量治疗组和对照组。分别于术后3、7、14、28和56天处死动物，取颈动脉标本HE染色、原位标记凋亡细胞（TUNEL）和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色，应用光学显微镜和计算机图像分析系统对切片进行图像分析．计算动脉中膜血管平滑肌细胞凋亡率、PCNA阳性率、内膜和中膜厚度及面积、残余管腔面积。结果：球囊损伤后动脉中膜平滑肌细胞开始增殖．并向内膜下迁移，其凋亡率和PCNA细胞阳性率均在伤后7天达到高峰。各治疗组各时间段血管平滑肌细胞凋亡率高于对照组（P〈0．01）．PCNA细胞阳性率低于对照组（P〈0．01），20GY和40GY组相似，但都优于10GY组（P〈0．01）；伤后28天始血管内膜和中膜增厚．面积增加，残余管腔面积缩小，各治疗组伤后28天始血管内膜、中膜增厚面积增加和残余管腔面积缩小明显改善（P〈0．01），20GY和40GY组相似，但都优于10GY组（P〈0．01）。结论：放射性^32P液体球囊血管内放射治疗可以明显抑制球囊损伤后动脉血管壁平滑肌细胞的增殖和迁移．减少新生内膜过度增生．预防管腔狭窄。