波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌随机扩增DNA多态性分析

目的 了解波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌的基因学特征,研究DNA分型与菌种来源的关系.方法 采用随机扩增多态性DNA分析(RAPD)方法.结果 3种引物可将来自5个国家的13株波氏假阿利什菌和18株尖端赛多孢子菌分为31个基因型.多引物聚类分析所得树状图显示,除来自哥伦比亚土壤的3株波氏假阿利什菌外,其他受试菌株无地域性群集分布特点.但受试菌株中的多数波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌株分别聚集成一群.结论 波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌存在较大株间差异,致病菌没有明显的地域性分布趋势,RAPD分型聚类分析结果与形态学分类之间具有一定一致性.     

波氏假霉样真菌和假霉样真菌病

波氏假霉样真菌广泛存在于土壤、污水和腐物上,并已成为重要的条件致病真菌之一。它可侵犯人体多种器官而引起假霉样真菌病,甚至可引起致死性的播散感染。鉴于波氏假霉样真菌在医学上的重要性和特殊性。现就波氏假霉样真菌的真菌学特点及假霉样真菌病的临床特点作一综述。     

波氏假霉样真菌和假霉样真菌病

波氏假霉样真菌广泛存土壤，污水和腐物上，并已成为重要的条件致病真菌之一，它可侵犯人体多种器官而引起假霉样真菌病，甚至可引起致死性的播散感染。鉴于波氏假霉样真菌在医重要性和特殊性，现就波氏霉波样真菌的真菌学特点及假霉样真菌病的临床特点作了一综述。     

系统性尖端赛多孢子菌感染小鼠白细胞介素10表达的研究

目的:了解白细胞介素10(IL-10)在系统性尖端赛多孢子菌感染中的表达情况。方法:建立小鼠系统性尖端赛多孢子菌感染模型,包括致死量感染组(健康鼠5×106孢子尾静脉接种)、亚致死量感染组(健康鼠5×105孢子尾静脉接种)及免疫抑制组(地塞米松诱导免疫抑制鼠给予5×105孢子尾静脉接种),用逆转录—聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测脾内白细胞介素10(IL-10)mRNA水平,用平皿系列稀释法检测肾内菌落形成单位(CFU),并记录平均生存时间(MST)。结果:致死量组中小鼠脾内IL-10表达明显上升(3 d,P<0.01;7 d,P<0.01),小鼠肾内大量菌生长,且7 d高于3 d(P<0.01),小鼠平均13.6 d均死亡;亚致死量感染组中,IL-10表达基本正常,肾内菌量少,且7 d低于3 d(P<0.01),小鼠生存时间均超过45d;与正常对照组相比,免疫抑制组小鼠脾内IL-10表达明显上升(3 d,P<0.01;7 d,P<0.01),小鼠肾内大量菌生长,且7 d高于3 d(P<0.01),小鼠平均14.2 d死亡,此外,免疫抑制组小鼠脾内IL-10及肾内菌量均高于相应时间亚致死量组(3 dP<0.01,7 dP<0.01:CFUs:3 dP<0.01,7 dP<0.01)。结论:IL-10在小鼠系统性尖端赛多孢子菌感染中表达增高,可能起着促进疾病发展的作用。     

系统性尖端赛多孢子菌感染小鼠IL-12表达的研究

建立小鼠系统性尖端赛多孢子菌感染模型,用酶联免疫吸附试验(ELISA)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测脾内IL-12蛋白质及mRNA水平,用平皿系列稀释法检测肾内菌落形成单位(CFU),并记录平均生存时间(MST)。结果,脾内IL-12蛋白质含量:致死量组均低于正常组;亚致死量组均高于正常组,且第7天显著高于第3天;地塞米松免疫抑制组均高于正常组。此外,免疫抑制组均低于相应时间亚致死量组。脾中IL-12mRNA表达水平与蛋白质水平基本一致。致死量组及免疫抑制组肾内均有大量菌生长,亚致死量组肾内菌量少。致死量感染组平均生存时间为13.6天,免疫抑制组为14.2天,对照组和亚致死量组均超过45天。结果示健康鼠大量菌感染及免疫抑制鼠小量菌感染均可引起致死性感染,而IL-12在小鼠系统性尖端赛多孢子菌感染中可能具有保护作用。     

波氏假性霉样真菌的光镜、电镜观察

应用马铃薯等三种低或无葡萄糖培养基培养波氏假性霉样真菌易诱生子囊果,辅以扫描、透射电镜术,清晰地显示子囊果形成和形态,有助于本菌的诊断和鉴别诊断。透射电镜下,成熟的子囊果壳由退行性变菌丝组成,不成熟者营养性菌丝层层环绕产囊丝,其多具双核,细胞器丰富,特别富含多聚核糖体、β糖原、蜂窝状小体、柱状膜片和分泌性小泡。它们与细胞分化、胞壁形成、质膜和核膜的构建密切相关。在子囊形成时,这种特殊结构逐渐减少和消失,并见大量球形颗粒和空泡,后者可能与子囊胞质胞裂、孢子形成有关。     

E-test法检测申克氏孢子丝菌对抗真菌药物敏感性的研究

为探讨申克氏孢子丝菌的体外抗真菌药敏试验方法的重复性及准确性,观察申克氏孢子丝菌对两种抗真菌药的敏感性,我们采用美国临床实验室标准委员会（NCCLS）颁布的M27-P方案中的E-test法检测申克氏孢子丝菌分别在菌丝相和酵母相时对伊曲康唑、氟康唑的MIC值。结果：25℃菌丝相时氟康唑、伊曲康唑的MIC值范围分别为：2～256μg/mL、0.012～8.0μg/mL。37℃酵母相时氟康唑、伊曲康唑的MIC值范围分别为：4～256μg/mL、0.125～32μg/mL。申克氏孢子丝菌菌丝相的MIC值较低,酵母相的MIC值较高。申克氏孢子丝菌25℃菌丝相和37℃酵母相时对伊曲康唑、氟康唑的敏感性存在差异。对伊曲康唑的敏感性高于氟康唑。     

四对孢子丝菌引物的特异性和敏感性评价

目的 筛选对孢子丝菌特异且敏感的引物。方法 以50株不同地区来源的孢子丝菌临床分离株及标准株的基因组DNA作为研究样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌临床分离菌株基因组DNA作为对照,通过特异引物PCR扩增的方法筛选国内外文献中报道的4对孢子丝菌引物。所有受试孢子丝菌菌株均出现同一扩增产物,而对照菌株未出现者记为特异性引物,随后将基因组DNA模板倍比稀释后依次行PCR扩增,记录各引物出现阳性扩增结果时的最小模板浓度,检测敏感性。结果 在相同PCR条件下,引物S2-R2、SSHF31-SSHR97及ITS3-SSP具有较好特异性,而引物SS3-SS4对孢子丝菌及念珠菌菌株均可扩增出同样大小的PCR产物。引物S2-R2的敏感性最好,基因组DNA模板浓度为5 pg/μL时即可被检出。结论 针对几丁质合成酶1基因的引物S2-R2为孢子丝菌特异且敏感的引物。     

Ras1、Rac1、Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异

目的 研究Ras1、Rac1和Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异,探讨其在菌丝生长过程中的作用.方法 分别培养阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相,提取两组的总RNA,采用荧光定量PCR方法测定两组中Ras1、Rac1和Rho1 mRNA的相对表达量.结果 酵母相菌丝生成率(0.40％±0.53％)显著低于菌丝相(99.33％ ± 0.57％,t=13.93,P＜0.05).实时荧光定量PCR显示,以酵母相为对照组,将其Ras1、Rac1、Rho1基因表达量均设为1,则菌丝相的Ras1、Rac1、Rho1基因mRNA相对表达量分别为25.17±10.99、16.81±7.80、42.61±18.50,与酵母相比较,差异有统计学意义(t值分别为3.81、3.51、3.90,均P＜0.05).结论 Ras1、Rac1、Rho1基因可能参与了阿萨希毛孢子菌菌丝的生长过程.     

E-test法和Rosco纸片法检测申克孢子丝菌对伊曲康唑和氟康唑的敏感性试验

目的探讨申克孢子丝菌的体外抗真菌药敏试验E-test法和Rosco纸片法的可比性,观察申克孢子丝菌对伊曲康唑和氟康唑的敏感性。方法采用临床实验室标准化协会(CLSI)颁布的M27-P方案中的E-test法检测和Rosco纸片法检测申克孢子丝菌在菌丝相时对伊曲康唑、氟康唑的MIC值。结果采用E-test法和Rosco纸片法检测20株临床分离株25℃菌丝相时,伊曲康唑的MIC值范围分别为:0.012～2.0μg/mL,14～29mm,氟康唑的MIC值范围分别为:256μg/mL,0mm。结论体外抗真菌药敏试验E-test法和Rosco纸片法有较好的一致性和重复性。申克孢子丝菌25℃菌丝相时对伊曲康唑、氟康唑的敏感性存在差异,对伊曲康唑的敏感性高于氟康唑。     

抗真菌药对角膜真菌感染病原菌的体外药敏试验研究

目的：探讨角膜真菌感染的常见病原菌对现有抗真菌药的敏感性。方法：应用美国临床实验标准化委员会制定的M38-P方案进行体外药敏试验，氟康唑（F）,布替萘芬（B）和那他霉素（N）在单独用药和联合用药时，分别读取80％．100%的生长抑制为最低抑菌浓度（MIC），药物间的相互作用解释为FIC〈1有协同作用，2〉FIC≥1有相加作用，FIC≥2有拮抗作用。结果：单用氟康唑组对酵母菌的MIC值远低于其他菌种，差异有统计学意义（P〈0．001）。布替萘芬组各菌属的MIC值比较，顺序为甄氏外瓶霉组〈曲霉组〈枝孢霉组〈枝顶孢霉组，各组间差异均有显著性（P〈0．001）。那他霉素组的MIC值，链格孢霉为最低，曲霉菌与甄氏外菌为最高，差异有显著性（P〈0．001）、利用Fisher氏精确概论计算，F＋B联合用药及N＋B联合用药，差异均无显著性（P〉0．05）。通过对数线性模型分析，进行F＋B与N＋B两组比较（P〈0．001）有统汁学意义。结论：单独用药时酵母菌对氟康唑最敏感，对布替萘芬最敏感的为甄氏外瓶菌，对那他霉素最敏感的菌种为链格孢霉，而曲霉蔺与甄氏外瓶菌对其最不敏感。在F＋B和N＋B联合使用时，对各组内的各株菌的抑菌作用无差异，但利用对数线性模型进行分析，F＋B的抑菌作用优于N＋B。     

In vitro susceptibility of Mycobacterium marinum to dihydromycoplanecin A and ten other antimicrobial agents

The in vitro susceptibilities of 16 Mycobacterium marinum strains to 11 antimicrobial agents were determined by the Dubos Tween albumin liquid dilution technique. The results (MICs) were: 0.19-0.39 microgram/ml for dihydromycoplanecin A; 0.78-1.56 micrograms/ml for amikacin; 1.56-3.13 micrograms/ml for ofloxacin, norfloxacin and enoxacin; 1.56-6.25 micrograms/ml for minocycline; 1.56-25 micrograms/ml for sulfamethoxazole and sulfamethoxazole-trimethoprim; 3.13-12.5 micrograms/ml for oxytetracycline; 25-200 micrograms/ml for trimethoprim; and 50-200 micrograms/ml for pipemidic acid. The most active drugs were dihydromycoplanecine A and amikacin. Also active were minocycline, oxytetracycline, sulfamethoxazole and sulfamethoxazole-trimethoprim. Ofloxacin, norfloxacin and enoxacin demonstrated activity only at concentrations at or greater than those usually attained in serum. Pipemidic acid and trimethoprim were inactive.     

几种抗真菌药物对马尔尼菲青霉的体外药敏试验

目的 观察马尔尼菲青霉（PM）广西野生银星竹鼠寄生株与临床人分离株对伏立康唑和几种常用抗真菌药物的敏感性。方法 采用美国临床实验室标准委员会（CLSI）M27-A2和M38-A方案中的微量稀释法,测定伏立康唑、伊曲康唑、特比萘芬、两性霉素B 及氟康唑对14株广西野生银星竹鼠PM寄生株与25株临床人PM分离株25 ℃菌丝相及37 ℃酵母相的最小抑菌浓度（MIC）。用两样本均数比较t检验比较PM寄生株与临床人PM分离株MIC的差异性,用配对t检验比较同一株菌在两种不同温度相下的MIC差异性。结果 伏立康唑、伊曲康唑、特比萘芬、两性霉素B、氟康唑对PM寄生株菌丝相的MIC分别为：0.0313 ～ 0.1250、0.1250 ～ 1.0000、0.0313 ～ 0.5000、0.2500 ～ 4.0000、2.0000 ～ 8.0000 mg/L;对PM寄生株酵母相的MIC分别为：0.0078 ～ 0.2500、0.0313 ～ 0.5000、0.0313 ～ 1.0000、0.2500 ～ 2.0000、1.0000 ～ 8.0000 mg/L;对PM临床人分离株菌丝相的MIC分别为：0.0313 ～ 0.2500、0.0625 ～ 1.0000、0.0313 ～ 1.0000、0.2500 ～ 4.0000、2.0000 ～ 32.0000 mg/L;对PM临床人分离株酵母相的MIC分别为：0.0039 ～ 0.2500、0.0313 ～ 0.5000、0.0313 ～ 2.0000、0.1250 ～ 2.0000、2.0000 ～ 16.0000 mg/L。5种抗真菌药物对广西野生银星竹鼠PM寄生株与临床人PM分离株菌丝相和酵母相均敏感。同一温度下伏立康唑对两种不同来源PM的MIC最低,其他药物的MIC依次为伊曲康唑、特比萘芬 < 两性霉素B < 氟康唑。同一药物在同一温度下对广西野生银星竹鼠PM寄生株与PM临床分离株的MIC无明显差异;伊曲康唑、两性霉素B、特比萘芬对同一菌株在菌丝相和酵母相下的MIC存在差异。结论 PM对伏立康唑的敏感性最高;来自于广西野生银星竹鼠的PM寄生株与临床人PM分离株对伏立康唑、伊曲康唑、特比萘芬、两性霉素B及氟康唑的MIC类似;菌相的改变可影响PM对伊曲康唑、两性霉素B、特比萘芬的敏感性。     

复发性外阴阴道假丝酵母菌病FUNGUS-7药敏研究

目的明确复发性外阴阴道假丝酵母菌病(Recurrent Vulvovaginal candidiasis,RVVC)致病白假丝酵母菌对7种常用抗真菌药物的敏感性差异。方法以FUNGUS-7真菌药敏试剂盒对已确定的213株白假丝酵母菌致病菌株进行2种多烯类药物、4种唑类药物和5-氟胞嘧啶共七种抗真菌药的体外药物敏感试验;结果 RVVC组致病白假丝酵母菌对7种抗真菌药物的敏感性依次为:制霉菌素两性霉素B5-氟胞嘧啶益康唑咪康唑氟康唑伊曲康唑;VVC组致病白假丝酵母菌对7种抗真菌药物的敏感性依次为:两性霉素B制霉菌素5-氟胞嘧啶咪康唑益康唑氟康唑伊曲康唑;RVVC组对制霉菌素和咪康唑的敏感性显著高于VVC组(P0.05);结论 RVVC和VVC致病白假丝酵母菌对抗真菌药的敏感性大体一致,RVVC治疗首选制霉菌素,VVC治疗首选制霉菌素或两性霉素B。     

皮炎外瓶霉临床和环境分离株对6种常用抗真菌药物的敏感性测定

目的 探讨临床分离的皮炎外瓶霉对6种常用抗真菌药物的敏感性。方法 参考美国临床实验室标准化研究所M27-A2方案测定特比萘芬（TRB）、伊曲康唑（ITC）、两性霉素B（AMB）、氟康唑（FLC）、伏立康唑（VRC）及卡泊芬净（CAS） 对16株皮炎外瓶霉的最低抑菌浓度（MIC）,同时以E-test法测定VRC、ITC和AMB对16株皮炎外瓶霉的MIC,并进一步测定每种药物的最低杀菌浓度（MFC）。在此基础上,观察TRB与ITC及VRC联合应用时对皮炎外瓶霉的抗菌作用。结果 微量液基稀释法测得TRB、VRC、ITC、AMB、FLC和CAS 对皮炎外瓶霉MIC范围分别为：0.125 ~ 0.25、0.25 ~ 0.5、2.0、2.0、16 ~ 32和16 ~ 64mg/L;TRB、VRC、ITC、AMB和FLC的MFC范围分别为：0.125 ~ 0.5、0.25 ~ 0.5、2.0 ~ 4.0、2.0 ~ 4.0和16 ~ 64 mg/L。E-test法测定VRC、ITC和AMB的MIC范围为：0.032 ~ 0.094、0.047 ~ 0.5和0.125 ~ 3.0 mg/L。TRB与ITC及VRC在体外联合应用对皮炎外瓶霉无协同效应。结论 皮炎外瓶霉在体外对TRB、ITC、AMB、VRC敏感,对FLC和CAS不敏感。     

沙眼衣原体临床分离株的抗菌药物敏感性及基因分型研究

目的 探讨广州地区沙眼衣原体临床株对6种抗菌药物的敏感性和基因型分布,以及两者之间的关系。 方法 细胞培养法分离衣原体临床株,测定6种抗菌药物对沙眼衣原体的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。巢式PCR扩增沙眼衣原体主要外膜蛋白基因（omp1）的VS1-2片段,核酸测序分型。结果 346例患者的泌尿生殖道标本接种后,获得76株沙眼衣原体临床分离株,其中40株传代后达到药敏试验所需菌量。药敏试验结果显示克拉霉素、阿奇霉素、罗红霉素、多西环素、四环素和氧氟沙星的MIC50/MIC90（μg/ml）分别为0.008/0.032、0.08/0.16、0.125/0.5、0.032/0.064、0.25/0.5、0.5/1.0。40株共检出7种基因型,其中E型有14株（35％）,其次为J型10株（25％）和F型6株（15％）。7种基因型衣原体菌株对阿奇霉素的MIC50完全相同,而罗红霉素、克拉霉素和氧氟沙星的MIC50在不同型别菌株间有1 ~ 4倍的差异。结论 克拉霉素、多西环素和阿奇霉素显示较强的抗衣原体活性,7种基因型衣原体对阿奇霉素显示一致的敏感性。     

In vitro susceptibility testing of Pityrosporum ovale against antifungal, antiseborrheic and antipsoriatic agents

Objective The in vitro antimicrobial susceptibility of Pityrosporum ovale strains isolated from patients with seborrheic dermatitis was determined. Method Minimum inhibitory concentrations of a total of 11 agents - including true antifungal, antiseborrheic, and antipsoriatic drugs - were measured. Results Ketoconazole was the most effective of the tested antifungal agents against Pityrosporum ovale in vitro (minimum inhibitory concentration 0.1 μg/ml). The antiseborrheic agents zinc pyrithione and selenium disulfide showed a good in vitro efficacy against Pityrosporum with similar minimum inhibitory concentrations. Liquor carbonis detergens and dithranol were also able to inhibit growth of Pityrosporum ovale in vitro, but much higher concentrations were necessary. Conclusion The tested agents commonly used against seborrheic dermatitis might exert their efficacy, at least in part, due to inhibition of Pityrosporum ovale.     

念珠地丝菌对五种抗真菌药的体外敏感性及电镜观察

目的 探讨5种临床常见抗真菌药对念珠地丝菌的体外抑制作用,并观察用药后念珠地丝菌的形态学变化。方法 5种临床常见抗真菌药为特比萘芬、两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑。参照美国国家临床试验标准委员会修订的M27?A2方案及相关文献,测定各药物对念珠地丝菌的MIC值。应用扫描电镜观察特比萘芬作用后念珠地丝菌的形态学变化。结果 5种药物对念珠地丝菌的MIC值依次为：特比萘芬0.01 μg/ml、两性霉素B 0.4 μg/ml、氟胞嘧啶2 μg/ml、氟康唑2.69 μg/ml、伊曲康唑 0.25 μg/ml。念珠地丝菌对特比萘芬、两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑均敏感,对伊曲康唑为剂量依赖性敏感。扫描电镜可见,经特比萘芬作用后念珠地丝菌菌体表面出现粗糙、皱缩、不规则缺损及孔洞,甚至呈碎片状。结论 特比萘芬对念珠地丝菌的抗菌活性最显著,在一定范围内,特比萘芬浓度越高,念珠地丝菌被破坏的程度越严重。     

外阴阴道念珠菌病患者阴道念珠菌对抗真菌药物的敏感性测量

了解外阴阴道念珠菌病病原菌对抗真菌药物的敏感性,采用API法对分离自临床外阴阴道念珠菌病患者的120株念珠菌进行菌种鉴定;参照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)M-27A方案(1997),采用微量法检测120株临床试验菌株、5株参考株及1株质量控制株对6种常用抗真菌药物的敏感性。结果显示:120株分离自外阴阴道念珠菌病患者的念珠菌中,白念珠菌105株(87.5%),非白念珠菌15株(12.5%);氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B、酮康唑、特比萘芬及5-氟胞嘧啶对120株临床菌株的最小抑菌浓度(MIC)均数(μg/mL)分别为:9.474±2.329,0.305±0.062,0.599±0.062,0.855±0.377,9.970±3.324和14.819±5.180。提示氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B和酮康唑对念珠菌显示一定的敏感性。外阴阴道念珠菌的主要菌种为白念珠菌。     

对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株耐药机制的初步探讨

目的 研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株的耐药机制。方法 自1例侵袭性曲霉病患者体内分离得到1株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、泊沙康唑和卡泊芬净对该烟曲霉的最低抑菌浓度（MIC）/最低有效浓度（MEC）;并对该菌株中唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析。结果 微量液基稀释法显示,该菌株伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B的MIC分别为≥16、8、1 mg/L,卡泊芬净的MEC为0.5 mg/L。E-test法显示,伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和泊沙康唑的MIC分别为≥32、≥32、12和≥32 mg/L,卡泊芬净的MIC为0.047 mg/L。对cyp51A基因进行测序并分析后发现,该菌株的cyp51A序列中存在启动子区-288到-322位间34 bp的串联序列的插入,以及该基因编码区364位碱基的点突变（T364A）,导致了编码区98位亮氨酸的置换（L98H）;该菌株的cyp51A基因编码区还存在137位碱基（A137T）、585位碱基（G585A）、814位碱基（C814A）、836位碱基（G836C）、991位碱基（T991C）、1350位碱基（A1350G）的突变,并分别导致编码区相应氨基酸的置换。结论 分离到对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床株,该菌株的cyp51A基因存在启动子区34 bp的串联序列插入和编码区364位的突变（T364A）,这种变化参与了其对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑交叉耐药;该菌株cyp51A基因编码区还存在一些其他的点突变,并可导致相应部位的氨基酸置换。