斯氏肺吸虫尿素可溶性抗源在ELISA中的应用

<正> 陶义训等用高浓度尿素从血吸虫卵水溶性抗原(SEA)的废弃物中提取出尿素可溶性抗原(JEU),并证实其抗原活性和特异性均优于水溶性抗原。我们参照陶义训等黎世涛等方法加以改进。用高 度尿素提取出肺吸虫可溶性抗原(PSAWU),用于皮内试验和ELISA检测肺吸虫病人抗体,同时作平行对照试验。现报道于后。     

一种新的敏感的血吸虫皮试抗原的制备研究

<正> Tsang、陶义训证明用高浓度尿素提取的血吸虫卵水不溶物是一种高敏感性和特异性的抗原。对血吸虫成虫的水不溶性蛋白成分的提取尚未见报道。作者等采用一种不需特殊设备从废弃的虫渣中提取尿素溶解性抗原的简易方法,获得分子量较为均一的另一类大分子抗原(urea soluble schistosomajaponicum adult worm antigen,简称 JWU),并用于血吸虫病皮内反应试验,取得较满意的结果。现报道如下。     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

日本血吸虫微粒体抗原的研究 Ⅲ.成虫微粒体抗原在ELISA中的应用

<正> 1982年我们用差速离心法从日本血吸虫成虫中分离得到的微粒体粗抗原(JAMAC)用于ELISA表明其抗原活力远比成虫可溶性抗原(JSAA)为高。根据中美医药卫生科技合作协议,同年10月美国疾病控制中心曾凯(V.Tsang)来我所共同对JAMAC做进一步提取和分离,得到了尿素溶解部分(JMC)和提纯的微粒体抗原(JAMA)。用ELISA对血吸虫抗体进行检测时,JAMAC、JMC和JAMA三种抗原均呈现高的敏感性和特异性。由于JAMAC的制备方法较简便,无需柱层分离步骤,我们采用这一抗原对     

反向间接血凝检测血吸虫病循环抗原(CSA)的研究——Ⅰ.抗原提纯、抗体制备及抗原抗体的鉴定

从血吸虫成虫体外培养与重感染家兔血清中(感染后30天)提取循环抗原;将成虫经冻干、脱脂、反复冻融处理,20,000 rpm离心提取的成虫抗原;分别经人工免疫家兔获得相应抗体,纯化后致敏醛化血球,检测血吸虫病的感染与考核疗效。初步证明日本血吸虫循环抗原为耐热、耐酸、耐硷、分子量大于45,000,沉降系数S=2.27的多糖体。抗体为IgG成分。     

体外介导白细胞杀伤日本血吸虫童虫的单克隆抗体

本文报道了一种在体外具有介导白细胞杀伤日本血吸虫童虫的单克隆抗体(AD_(12)F_6),经成虫冰冻切片免疫荧光试验(IFA)法证明,其靶抗原在成虫表皮。与日本血吸虫尾蚴、虫卵冰冻切片及丝虫冰冻切片、食蟹猴疟原虫血片及利什曼鞭与体玻片的IFA 试验均呈阴性反应。与培养3小时的血吸虫童虫共同温育,并进行IFA 试验,童虫表膜出现亮绿的特异荧光,其内容物则呈红色阴性反应,酶联免疫印渍试验表明,此单克隆抗体能识别ASE抗原中分子量为23K的部份,体外细胞杀伤试验证明,在有补体参与下,AD_(12)F_6对3小时童虫的杀伤率为 64％,对照血清为20％。     

肝门型童虫免疫血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

近年来 ,血吸虫疫苗研究进展迅速 ,国内外学者克隆表达了一系列血吸虫抗原基因 ,但至今它们在动物宿主体内诱导的保护性免疫未达到降低虫荷4 0 %或更多预期的研究目的〔1〕。因此继续筛选新的血吸虫疫苗候选分子成为当前血吸虫病研究的热点之一。我们用日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,以期发现特异的具有保护作用的日本血吸虫抗原基因 ,为血吸虫疫苗的研究提供新的候选分子。材料和方法主要试剂 :日本血吸虫成虫cDNA文库由澳大利亚昆士兰医学研究所惠赠。快速剪切试剂盒购自美国Strategene…     

日本血吸虫病感染小鼠的T细胞辅助活力变动的初步观察

体外测定T细胞辅助活力是近年来发展起来的一种细胞免疫观察方法。Ramalho-Pinto等(1979)在曼氏血吸虫感染小鼠上首先研究了这种感染早期的应答——对童虫的辅助T细胞应答。本文对Ramalho-Pinto等法改进后,在正常小鼠建立了T细胞辅助活力测定方法,并用此观察小鼠感染日本血吸虫和以日本血吸虫抗原免疫后,对半抗原-载体免疫应答的影响。结果表明:①小鼠感染日本血吸虫后早期存在对童虫的辅助T细胞应答;3周后应答水平渐降,反映小鼠感染后,辅助T细胞功能部分地受到抑制;②小鼠用日本血吸虫卵可溶性抗原(SEA)免疫后,T细胞辅助应答的规律和日本血吸虫感染小鼠者相似,但其应答水平比感染小鼠者低。用新鲜虫卵、冰冻干燥虫卵、成虫抗原免疫小鼠,亦能诱导出对童虫的辅助T细胞应答,初步表明来自日本血吸虫生活史不同发育阶段的抗原物质(如虫卵、成虫)和血吸虫童虫表面可能含有共同的抗原决定簇成份。     

一种新的血吸虫病诊断用皮试抗原的研究

<正> 对血吸虫成虫提取水溶性抗原(AWA)后的虫渣,用 BM 尿素为蛋白质裂解剂,进一步分离具有抗原性的结合蛋白成分(JWU),抗原得量可增加1.25倍。应用 JWU 制备皮内反应诊断用抗原,试验用浓度为1μg/ml,对1,395例血吸虫病人和健康人进行检测,同时用 AWA 作平行对照。对240例血吸虫病人检出率为97.5%,对680例健康人群的特异性为98.5%,经统计处理与 AWA 无显著差异。但 JWU 皮丘直径均值1.43cm 较 AWA 皮丘均值1.33cm 大。对58例肝吸虫病人未发现交叉反应,对36例肺吸虫病人的交叉反应为5.56%,低于 AWA 的8.33%。提取 JWU 并将其用于皮内反应试验,国内外尚未见报道。目前这种皮试抗原已批量生产,供应流行区现场用于普查血吸虫病过筛试验。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67)对血吸虫病的诊断价值。本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔。进行常规ELISA检测。结果对急,慢性血吸虫病患血清的检出率分别为100%和95%,与正常人血清,肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的变叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.7%,75.0%和90.09%。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

抗日本血吸虫31/32KD单特异抗体的制备及鉴定

本文首次采用含于聚丙烯酰胺凝胶内的组分抗原免疫家兔,成功制备了抗日本血吸虫成虫31/32KD抗原的单特异抗血清。采用成虫全虫粗抗原作EITB证明此抗血清只识别31/32KD一条区带,而用成虫切片免疫酶染色法定位证明此抗原与血吸虫成虫肠道相关。此与Rupple等人报道的利用单克隆抗体定位的结果一致。本工作采用常规免疫方法获得单特异抗体,为今后开发分子诊断抗原制剂,鉴定保护性抗原、分析抗原特性等研究,提供了较为简便的途径。     

日本血吸虫感染宿主的免疫抑制现象

本文报告用巨噬细胞移动抑制试验,溶血空斑试验及T细胞辅助活力测定观察小鼠感染日本血吸虫后对植物血凝素、血吸虫成虫抗原、羊红细胞及半抗原-载体(TNP-童虫)免疫应答的抑制现象。MMIT的结果表明:对PHA的应答于感染后28天出现抑制;对血吸虫成虫抗原的应答于感染后2周内正常,第3周开始出现抑制,14周后又基本恢复正常。溶血空斑试验结果表明,感染后头3周对SRBC的应答水平递增,第3周达最高水平,第4周开始应答逐渐下降。不同H-2的纯系小鼠感染日本血吸虫后对SRBC的应答规律基本相似,但于感染后同一时间内不同H-2的小鼠应答水平随小鼠品系的不同而不同。T细胞辅助活力测定的结果表明:小鼠感染后3周内对TNP-童虫的应答逐渐增加,第3周最高,之后逐渐下降。上述结果提示感染宿主存在免疫应答的抑制现象。这种抑制现象不仅表现在T细胞对促有丝分裂因子PHA和血吸虫成虫抗原的应答上;也表现在B细胞对胸腺依赖抗原SRBC的应答上,以及在T-B细胞协作产生抗半抗原抗体时,T细胞辅助应答也受到抑制的影响。     

日本血吸虫成虫及肝卵石蜡切片间接荧光抗体试验诊断血吸虫病

<正> 用血吸虫成虫冰冻切片为抗原,以血吸虫病人血清为抗体作间接免疫荧光实验(IFAT),诊断血吸虫病和循环抗原定位,显示出敏感性特异性均高。为适应血吸虫病流行疫区普遍推广使用,作者用福尔马林固定石蜡包埋血吸虫成虫和血吸虫病兔肝脏切片为抗原,以血吸虫患者血清为抗体作IFAT,获得较满意结果,现报道如下。     

应用单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的初步研究

检测感染宿主体内的循环抗原和循环免疫复合物可以确诊寄生虫感染和考核疗效。国内已有多篇检测血吸虫循环抗原方法的报道,但应用单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究尚未见诸国内文献。作者应用抗日本血吸虫排泄分泌抗原(S·ESA)单克隆抗体进行斑点酶联免疫吸附试验 (Dot-ELISA)检测感染宿主血清循环抗原,结果表明:本法具有较高的敏感性和特异性。 材 料 和 方 法     

日本血吸虫24-26KD和90KD蛋白质“靶抗原”的抗原性

作者从日本血吸虫成虫抽提出两种国际公认在诱导保护性免疫力中起重要作用的24-26KD和90KD蛋白质“靶抗原”,用以免疫小鼠.结果表明上述两种“靶抗原”具有明显的抗原性.表现在(1)上述“靶抗原”免疫后可刺激宿主血清IgM升高,特别是IgG中的IgG1明显升高;(2)免疫鼠血清中的抗体能在成虫的表皮和实质层定位;(3)以ELISA和IFA检测免疫血清中的抗体水平时,均表现特异性抗体滴度明显增高(ELISA:90KD 1:5/20,24-26KD/:640;IFA:90KD1:80～1:2560,24-26KD1:40～1:160);(4)免疫血清中均存在着针对上述两种“靶抗原”的特异性抗体,免疫印渍试验结果进一步表明上述“靶抗原”免疫鼠血清中抗体均能特异地分别识别日本血吸虫抗原中分子量90KD和24-26KD的抗原决定簇。     

日本血吸虫完整成虫盐水浸液抗原的化学及免疫学特性

本文报告日本血吸虫完整成虫盐水浸液抗原(ASE)的化学、免疫化学及免疫学性质。实验结果表明ASE中含有蛋白质、糖和类似核酸的物质。它与成虫抗原有相同的抗原成分与虫卵抗原也有共同的决定簇。PAGE结果显示ASE与新鲜成虫经Triton处理后的可溶性部份比较类似.以抗ASE与成虫冰冻切片进行IFA试验的结果证明ASE主要定位于虫的表膜,可以认为ASE主要含有成虫的表膜抗原。本实验中无论用ASE免疫家兔或用抗ASE-γ-G被动免疫小鼠都未能诱导动物产生对攻击感染的抵抗力;但抗ASE在有补体的参与下可在体外促使白细胞粘附在童虫的表面,产生对童虫的攻击作用。     

整体虫间接免疫荧光法检测抗血吸虫抗体

本文介绍一种检测抗血吸虫抗体的免疫荧光技术。用氯化钙溶液处理日本血吸虫成虫,使其皮层脱落。暴露出的血吸虫皮层下体表抗原即可与抗血吸虫抗体发生反应,用间接免疫荧光法显示。用本法测定血吸虫病人、病兔的血清可见到脱皮血吸虫体表出现特异的荧光,正常人和正常兔血清的试验均为阴性。本文还报道了血吸虫脱皮前后的电子显微镜扫描图象。     

高效天然分子疫苗免疫猪血清筛选尾蚴抗原的结果分析

采用日本血吸虫天然分子(Schistosoma japonicum immature egg ws-vaccine,SjiEw)免疫猪血清识别日本血吸虫可溶性尾蚴抗原(Soluble cercariae antigen,SCA),以筛选新的具有保护性免疫潜在价值的抗原分子。按常规方法制备日本血吸虫尾蚴抗原。家猪随机分组并分次免疫日本血吸虫天然分子疫苗,制备SjiEw疫苗免疫猪血清,通过蛋白免疫印迹技术分析其与SCA的免疫反应性。结果显示SDS-PAGE中SCA有16条主带。SjiEw疫苗免疫猪血清共筛选6种具免疫学活性的抗原分子,分子量分别为:50、56、66、68、70、85kDa。这些抗原分子的获得为以后的天然分子编码基因工程疫苗的制备奠定基础。     

日本血吸虫肾病动物实验的研究

本文报道了急性感染日本血吸虫家兔肾病的免疫病理研究。用酶标抗体间接法在10只感染兔中5只的肾脏切片上显示出血吸虫抗原定位,并用 IHA、ELISA 测到肾匀浆中的特异性抗原和抗体,与肾脏大体标本及光镜下所见病理改变相一致,提示日本血吸虫肾病可能由免疫复合物致病。进一步用肾脏中特异性抗原组分作酶标定位分析,表明有虫卵抗原、成虫表膜相关抗原、肠相关抗原,以及特异性 IgG 参与肾脏内免疫复合物形成。     

rSj26-Sj32融合蛋白用于慢性日本血吸虫病的诊断研究

目的:探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于慢性日本血吸虫病的诊断价值.方法:用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和dipstick三种方法检测慢性日本血吸虫病患者血清特异性IgG抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病和囊型棘球蚴病患者以及健康人血清作为对照.结果:rSj26-Sj32融合蛋白通过三种方法检测慢性日本血吸虫病的敏感性分别为95.00%、92.50%和92.50%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%.结论:rSj26-Sj32融合蛋白可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断.