CXCR7沉默对HeLa细胞侵袭和迁移能力的影响及其在宫颈癌中的表达

【摘 要】 目的：探讨趋化因子受体7（CXCR7）沉默对HeLa细胞侵袭及迁移能力的影响及其在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达情况。方法：靶向CXCR7的短发夹RNA（shRNA）质粒（CXCR7-shRNA）或对照质粒（Ctrl-shRNA）转染HeLa细胞后,通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力变化。利用免疫组织化学方法检测CXCR7在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达情况。结果：CXCR7蛋白在20例宫颈癌组织中有16例呈阳性表达。5例正常宫颈组织中CXCR7蛋白表达均呈阴性。Transwell侵袭实验和迁移实验表明,CXCR7-shRNA转染组迁移穿过膜的数量明显低于Ctrl-shRNA转染组和未转染组。结论：宫颈癌组织中特异性高表达CXCR7,抑制宫颈癌细胞CXCR7的表达可显著抑制其侵袭及迁移,因此,CXCR7有望成为宫颈癌治疗的重要靶点。 【关键词】     

川芎嗪联合顺铂对小细胞肺癌细胞的影响分析

目的：进一步研究顺铂、川穹嗪对于小细胞肺癌细胞的治疗作用以及影响分析。方法：在含小牛血清10％的培养液R．PM11640,进行细胞株NCI—H446的培养。结果：相比于对照组,顺铂纽、川穹嗪组、顺铂川穹嗪组的P16表达水平升高,顺铂川穹嗪组的P16表达水平又高于顺铂组、川穹嗪组。顺铂组、川穹嗪组、顺铂川穹嗪组的CyclinD1表达水平下降。顺铂川穹嗪组的CyclinD1表达水平又高于顺铂组、川穹嗪组。结论：顺铂、川穹嗪都可以对NCL—H446细胞增殖起到抑制作用,两种药物的联合使用效果更加明显。与此同时,还可以降低小细胞肺癌的CyclinD1水平,提高P16表达水平。     

大蒜油单独及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞生长影响的研究

目的 :探讨大蒜油对人宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用 ,以及大蒜油增加Hela细胞对顺铂的敏感性 ,以期对药物治疗宫颈癌以及其他肿瘤寻找更加完善的途径。方法 :体外培养人宫颈癌Hela细胞 ,分别用大蒜油、顺铂、大蒜油加顺铂处理 4 8小时 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测大蒜油和顺铂及两者联合应用对Hela细胞的生长抑制作用。结果 :大蒜油在浓度为 12 5mg/L、2 5mg/L、5 0mg/L、10 0mg/L时对Hela细胞的抑制率分别为 2 3 82 %、37 2 1%、5 2 2 5 %、6 7 6 9% ,与对照组 (加入等量培养液 )比较 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1)。顺铂在浓度为 0 5mg/L、1 0mg/L、2 0mg/L时对Hela细胞的抑制率为 38 13%、4 6 16 %、6 0 38%。两者合用可大大提高对Hela细胞的抑制作用 ,抑制率分别为 4 2 5 0 %、5 5 38%、6 6 98%、78 31% ,与单纯应用大蒜油或顺铂比较差异有非常显著性 (P <0 0 1)。结论 :大蒜油能抑制Hela细胞的生长 ,同时能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性。     

蛋白酶体抑制剂MG132逆转子宫颈癌细胞HCE1多细胞球体对顺铂耐药的研究

目的 构建宫颈鳞癌细胞系HCE1的多细胞球体模型,研究蛋白酶体抑制剂MG132对其顺铂天然耐药的影响,探讨MG132是否可以逆转HCE1多细胞球体的天然耐药及其可能的机制.方法 (1)采用液体重叠法和旋转法建立HCE1多细胞球体模型;(2)用MG132、顺铂分别干预HCE1单层细胞及多细胞球体,分为MG132组、顺铂组、MG132+顺铂组、对照组,锥虫蓝拒染法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率;(3)用蛋白印迹法和免疫组化方法分别检测HCE1单层细胞及药物干预前后多细胞球体中核因子kB(NF-kB)和B细胞淋巴瘤/白血病2蛋白(bcl-2)的表达.结果 (1)成功建立了HCE1多细胞球体模型.(2)HCE1单层细胞和多细胞球体的细胞抑制率:MG132组分别为(11.67±2.34)%和(10.78±1.17)%,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);MG132+顺铂组分别为(92.67±2.52)%和(91.33±2.18)%,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);顺铂组分别为(45.01±7.44)%和(9.45±5.98)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)HCE1单层细胞和多细胞球体的凋亡率:MG132组两者凋亡率分别为8.14%和5.97%,MG132+顺铂组两者凋亡率分别为99.01%和95.22%;顺铂组两者凋亡率分别为33.61%和0.88%.(4)NF-kB的相对表达量和bcl-2的高表达率:HCE1多细胞球体对照组分别为0.67、60%,顺铂组分别为0.85、83%,MG132组分别为0.39、20%,MG132+顺铂组分别为0.47、33%.结论 (1)HCE1多细胞球体模型对顺铂可产生天然耐药,是体外研究宫颈癌对顺铂耐药的良好模型.(2)MG132对HCE1多细胞球体有抑制增殖、诱导凋亡的作用,可部分逆转HCE1多细胞球体对顺铂的天然耐药性,其机制可能与NF-kB、bcl-2表达下调有关.     

RNA干扰技术阻抑survivin基因表达对子宫颈癌细胞放射和化疗敏感性的影响

目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术阻抑survivin基因的表达,对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性和化疗敏感性的影响。方法通过脂质体介导,将含survivin基因小分子干扰RNA的重组真核表达质粒pSilencer2．1-s2、阴性对照质粒pSilencer2．1-NC和空载质粒pSilencer2．1-U6 neo转染宫颈癌细胞系HeLa,获得HeLa-s2、HeLa-NC和HeLa-U6 neo细胞,同时设未转染的HeLa细胞为阴性对照。RT-PCR技术、蛋白印迹法分别检测survivin mRNA和蛋白的表达水平,并计算survivin mRNA和蛋白表达抑制率;激酶活性检测法测定波长在405 nm处的吸光度(A405)值,表示半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;平板克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活率并计算顺铂的50％抑制浓度(IC50)。结果与HeLa-NC、HeLa-U6 neo及未转染的HeLa细胞比较,HeLa-s2细胞survivin mRNA和蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA和蛋白表达抑制率分别为(62．8±0．3)％和(60．1±0．5)％。HeLa-s2细胞的A405值为1．261±0．043,未转染的HeLa细胞的A405值为0．314±0．012,两者比较,差异有统计学意义(P<0．05)。HeLa-s2与未转染的HeLa细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P<0．05),分别为(29．23±1．41)％和(2．74±0．32)％。不同照射剂量下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞分别比较,克隆形成率均明显降低(P<0．05)。在同一顺铂浓度下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞比较,细胞存活率显著降低(P<0．05),HeLa-s2细胞对顺铂的IC50值较未转染的HeLa细胞下降显著(P< 0．05),分别为(0．873±0．021)和(9．212±0．033)μg／ml。结论利用RNAi技术可阻抑HeLa细胞中survivin基因的表达,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,显著提高细胞的放射敏感性和对顺铂的化疗敏感性。     

槲皮素对子宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制

的凋亡.     

外源性FHIT基因表达对顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因表达与顺铂(cisplatin,DDP)是否可协同促进宫颈癌SiHa细胞的凋亡。方法:重组质粒PRcC-MV-FHIT(A组)及空质粒PRcCMV(B组)分别转染无内源性FHIT蛋白表达的SiHa细胞(未转染SiHa细胞为C组),Western Blot检测外源性FHIT蛋白的表达,使用不同浓度的顺铂分别处理各组细胞,通过AO-EB染色、流式细胞术检测顺铂处理后各组细胞的凋亡。结果:顺铂处理48h后进行流式细胞仪检测,重组质粒+DDP2.0μg/ml、未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组凋亡率分别为51.03%、20.58%、22.07%,重组质粒+DDP组细胞凋亡更明显(重组质粒+DDP2.0μg/ml组与未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组相比P<0.01),AO-EB染色亦见顺铂处理的重组质粒组凋亡细胞明显增多。结论:外源性FHIT基因表达与顺铂协同促进SiHa细胞凋亡,为基因治疗与化疗联合治疗宫颈癌提供理论基础。     

大蒜素与顺铂单独及联合应用对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，是引起妇女癌症相关死亡的重要原因。顺铂作为治疗肿瘤的首选化疗药物之一对于宫颈癌的疗效是肯定的。肿瘤化疗失败的主要原因是严重的副作用及肿瘤对化疗药物产生耐药反应。理想的化疗应是最大限度地杀伤肿瘤细胞，同时对正常细胞的毒性最低。大蒜素具有多种生物活性，实验研究证实其中的活性物质具有抗癌作用，本研究的前期实验已证实大蒜素能抑制宫颈腺癌HeLa细胞的生长，同时能够增加其对顺铂的敏感性J。本研究旨在探讨大蒜素与顺铂单独及联合应用对HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响，以期寻求更有效的对宫颈腺癌的药物治疗方法。     

小剂量顺铂增强放疗诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的 :实验研究小剂量顺铂增强放疗诱导HeLa细胞凋亡的作用。方法 :将细胞分为单纯放疗组、单纯化疗组、放疗加化疗组和空白对照组 4组 ,采用TUNEL法分别检测各组细胞的凋亡率。结果 :单纯放疗、化疗都可诱导HeLa细胞凋亡 ,顺铂 (化疗 )可以明显增强放疗诱导的细胞凋亡。结论 :小剂量顺铂可明显增加放疗诱导的HeLa细胞凋亡 ,为临床应用小剂量顺铂使放疗增效提供了理论依据     

不同剂量紫杉醇联合顺铂新辅助化疗在宫颈癌的应用

目的:探讨不同剂量紫杉醇联合顺铂新辅助化疗对ⅠB2～ⅡB期宫颈癌的近期疗效及毒副反应.方法:58例宫颈癌患者随机分配为TP1组和TP2组,TP1组紫杉醇用量60mg/m2、TP2组135mg/m2,顺铂均为60mg/m2,采用1～3个疗程化疗,化疗间隔TP1组为10天,TP2组为21天,化疗结束后行宫颈癌根治术,比较其近期疗效及毒副反应.结果:IP1组有效率76.7%(23/30),TP2组82.1%(23/28),两组疗效相近,P＞0.05;白细胞减少TP2组(32.1%,9/28)多于TP1组(10.0%,3/30),P＜0.05;余毒副反应差异无显著性,P＞0.05.结论:小剂量紫杉醇60mg/m2联合顺铂60mg/m2化疗方案在宫颈癌新辅助化疗中值得推荐.     

α1β3、ICAM-1、E-cadherin、P-选择素对宫颈癌局部浸润作用的研究

目的探讨细胞黏附分子在宫颈癌局部浸润中的作用。方法应用组织芯片技术和免疫组织化学方法对比检测子宫颈鳞状细胞原位癌30例、微小浸润癌34例、浸润癌36例中α1β3、ICAM-1、E-cadherin和P-选择素的表达。结果α1β3在原位癌中的表达率明显低于微小浸润癌和浸润癌(P<0.05),微小浸润癌与浸润癌的表达率无显著差别(P>0.05);P-选择素的表达率在原位癌、微小浸润癌和浸润癌中无显著差别(P>0.05);ICAM-1、E-cadherin在原位癌中的阳性表达率均显著高于微小浸润癌(P<0.05),微小浸润癌中的阳性表达率均显著高于浸润癌(P<0.05)。ICAM-1、E-cadherin在微小浸润癌、浸润癌中的表达水平密切相关(P<0.01),ICAM-1、E-cadherin的阳性表达与子宫颈癌的浸润呈显著负相关(r=-0.8726,P<0.01和r=-0.7968,P<0.01)。结论α1β3、ICAM-1、E-cadherin与宫颈癌的局部浸润有关,其中ICAM-1、E-cadherin在宫颈癌局部浸润过程中可能起着重要作用。     

微小RNA-199a对子宫内膜间质细胞黏附、迁移和侵袭能力的调控作用

目的 探讨微小RNA-199a (miR-199a)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞黏附、迁移和侵袭能力的调控作用.方法 利用脂质体lipofectamine 2000将成熟miR-199a模拟物(转染组)和阴性对照物(对照组)转染人子宫内膜间质细胞.采用黏附试验检测转染后细胞的体外黏附能力,划痕试验和迁移实验检测转染后细胞的迁移能力,重组细胞基底膜侵袭实验检测细胞的侵袭能力.运用荧光素酶报告基因试验验证核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)是miR-199a的靶基因.应用蛋白印迹法检测IKKβ、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)、磷酸化IκB-α( p-IκB-α)和NF-κB蛋白的表达.结果 (1)细胞黏附能力:转染组细胞的黏附抑制率为(14±4)％,明显高于对照组细胞(0),差异有统计学意义(P＜0.01).(2)细胞迁移和侵袭能力:划痕试验显示,转染组细胞48 h后,划痕愈合程度低于对照组;迁移试验显示,转染组和对照组穿膜细胞数分别为(130 ±31)、(247±36)个/高倍视野(×200),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭试验显示,两组穿透基底膜细胞数分别为(63±15)、(133±17)个/高倍镜,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)荧光素酶的表达水平:荧光素酶报告基因试验显示,转染组和对照组细胞的荧光素酶表达水平分别为0.160±0.006和0.383±0.083.两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)蛋白表达水平:与对照组细胞蛋白表达水平(设定为1.000)比较,转染组细胞中IKKβ、p-IκB-α、IκB-α和NF-κB蛋白的表达水平分别为0.350±0.195、0.443±0.076、1.970±0.486和0.454±0.147,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 miR-199a能抑制人子宫内膜间质细胞的黏附、迁移和侵袭能力;IKKβ为miR-199a的靶基因;miR-199a抑制内膜间质细胞侵袭能力的机制之一可能是通过调控靶基因IKKβ,抑制NF-κB通路的活化水平.     

METTL14在卵巢上皮性癌组织中的表达及对A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究甲基转移酶样蛋白14（METTL14）在卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中的表达及其临床意义,探讨上调和下调METTL14表达对卵巢癌细胞系A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:（1）组织标本检测：选取2019年12月—2020年11月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的20例卵巢癌患者的新鲜癌...     

Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞功能的影响

目的:研究Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:利用蛋白质印迹法检测Netrin-1在HeLa细胞的表达,并通过MTT、侵袭实验和流式细胞仪分别检测10,50和100ng/mlNetrin-1对HeLa细胞增殖能力、侵袭能力和凋亡的影响。结果:(1)Netrin-1在HeLa细胞有表达,其相对表达量为0.389±0.026;(2)MTT实验结果显示,Netrin-1可以促进HeLa细胞增值,表现为时间和剂量依赖性,与对照组有显著差异(P<0.05或P≤0.01);(3)Netrin-1处理组细胞迁移数分别为314±16,487±15和553±19,均明显多于对照组180±10(P均<0.05);(4)在Netrin-1干预下,HeLa细胞凋亡率呈递减趋势,与对照组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:HeLa细胞表达的Netrin-1与宫颈癌的侵袭转移有关,Netrin-1促进HeLa细胞增殖和侵袭能力,并抑制HeLa细胞凋亡,可能为未来宫颈癌的治疗提供依据。     

沉默DNA甲基转移酶1基因对子宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 利用RNA干扰技术沉默宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基转移酶(DNMT)1基因的表达,探讨沉默DNMT1基因后对HeLa细胞增殖及凋亡的影响.方法 针对DNMT1基因构建短发夹状RNA(shRNA)重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用RT-PCR技术筛选出其中RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞(转染组),以空载体组(转染空载体pSilencer3.1-H1质粒)和未转染组(未作任何处理)为对照.采用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测转染前后HeLa细胞中DNMT1 mRNA和蛋白表达的变化,活细胞计数(CCK-8)法和双染法流式细胞术分别检测转染前后HeLa细胞增殖和凋亡的变化.结果 (1)酶切鉴定和测序分析证实,靶向DNMTI的3个shRNA重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒构建成功.RT-PCR技术筛选显示,重组载体pshRNA-DNMT1-B质粒的干扰效果最佳.(2)RT-PCR技术检测显示,转染组转染24、48及72 h时HeLa细胞中DNMT1 mRNA的相对表达水平分别为0.406±0.057、0.191±0.036、0.104±0.015,明显低于空载体组和未转染组(分别为0.520±0.020、0.537±0.041,P＜0.05).蛋白印迹法检测显示,转染组转染24、48及72 h时细胞中DNMT1蛋白的相对表达水平分别为0.197±0.024、0.075±0.015、0.040±0.013,明显低于卒载体组和未转染组(分别为0.273±0.010、0.283±0.016,P＜0.05).(3)CCK-8法检测显示,转染组转染24、48、72、96、120 h时HeLa细胞存活率分别为70.8%、64.8%、51.6%、45.3%、38.0%,分别与空载体组和未转染组各时间点比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).双染法流式细胞术检测显示,转染组转染24、48及72 h时的细胞凋亡率分别为(17.7±1.3)%、(35.3±1.3)%、(47.6±1.6)%,明显高于空载体组及未转染组[分别为(4.9±0.5)%、(5.1±0.7)%,P＜0.05].结论 RNA干扰技术能成功沉默宫颈癌HeLa细胞中DNMT1基因的表达,通过下调DNMT1基因的表达可抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡.     

丙基戊酸钠对宫颈癌细胞HeLa增殖的影响机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)丙基戊酸钠(sodium valproate,VPA)影响宫颈癌细胞HeLa增殖的机制。方法:用MTT法检测不同浓度VPA对HeLa细胞增殖的影响;倒置相差显微镜观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对HeLa细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot观察不同浓度VPA处理后caspase-3、bcl-2蛋白的表达变化。结果:VPA能明显抑制HeLa细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖关系;经4mmol/L VPA处理48h后,HeLa细胞缩小变形成长梭状、胞膜皱缩、贴壁不良;VPA诱导HeLa凋亡、阻滞细胞于G2/M期,同时抑制细胞增殖;随浓度增加,VPA能明显增加caspase-3蛋白表达,并可见到蛋白裂解产物,表明VPA可以促进caspase-3活化,但下调bcl-2蛋白的表达。结论:VPA有抗宫颈癌作用,其重要作用机制之一是诱导HeLa细胞凋亡、直接抑制细胞增殖,有望成为新的抗宫颈癌药物。     

MTT比色法测定药物对HeLa细胞作用的实验研究

目的 :观察顺铂、5-FU、甲氨蝶呤在体外对人宫颈肿瘤细胞的作用。方法 :用MTT测定法观察以上 3种化疗药物单用及合用对HeLa细胞的影响 ,用流式细胞仪观察凋亡及细胞周期的变化。结果 :顺铂和 5-FU单独应用及合用时 ,随着药物剂量增加抑制效应增加。结论 :顺铂和 5-FU能有效抑制HeLa细胞的生长 ,甲氨蝶呤在本实验条件下无此作用。