耐多药结核分支杆菌突变基因检测

目的：研究耐多药结核分支杆菌耐药分子机制,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法,方法：通过16S rRNA聚合酶链反应单链的构象多态性（polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)方法对30株耐多药分离株和20株药物敏感株进行初步分子菌种鉴定。通过PCR－SSCP分析30株耐多药结核病临床分离株的rpoB,katG,rpsL基因。结果：经16S rRNA PCR-SSCP菌种鉴定,所分析菌株均为结核分支杆菌;30株耐多药分离株经SSCP分析,56．7％存在rpoB基因突变,43．3％有katG基因突变,91．3％有rpsL基因突变,结论：rpoB,rpsL,katG基因突变分别是结核分支杆菌耐利福平,链霉素,异烟肼的分子机制,耐多药结核病是药物靶基因突变所致。通过PCR－SSCP可简便,快速地检测大部分耐多药结核病的耐药基因。     

结核分支杆菌耐多药株katG突变SSCP技术检测的研究

目的 建立并评价ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌耐药性基因突变的方法。方法 根据ｋａｔＧ基因易变区设计一对引物,ＰＣＲ扩增,产物经沸点断裂成单链,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,比较电泳的位置。结果 ＰＣＲ检测结核菌ＤＮＡ的灵敏度达到１００个细菌／ｍｌ,与其它细菌和其他分支杆菌无交叉反应。３０株敏感株和Ｈ３７Ｒｖ的ＰＣＲ产物经ＳＳＣＰ检测正常,２０株耐异烟肼结核菌中,１９株的ＰＣＲ产物ＳＳＣＰ检测游异常电泳带     

中药在耐多药结核分支杆菌感染中的应用前景

目的耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)感染是造成结核病重新流行的重要原因之一。中药在难治性结核病的治疗中有独到的优势,从天然药物中选择和研究抗结核新药具有重要意义。本文对近年来关于中药单方和复方抗结核机制的研究做了简单回顾,并对其在MDR-TB感染中的应用前景进行了评估。     

耐多药结核分支杆菌耐药分子机制的研究

目的　研究耐多药结核病 (MDR TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值及鉴定是否含有质粒。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术分析了 4 6株同时耐异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素 (SM)的多耐药临床分离株和 6 2株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。同时对 78株结核分支杆菌临床分离株按碱性溶菌法抽提分离并鉴定是否含有质粒。结果　以结核分支杆菌H37RV为对照 ,6 2株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常 ,其特异性为 10 0 %。KatG基因有 2株图谱异常 ,特异性为 96 8%。rPOB、KatG、rpsL基因突变率分别为 91 3%、6 0 9%、71 7%。结核分支杆菌 30株药物敏感株和 37株同时INH、RFP、SM的多耐药临床分离株均未提取分离与鉴定含有质粒。结论　结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。未发现结核分支杆菌含有质粒及由质粒介导的耐药机制。     

耐多药结核病及结核分枝杆菌耐多药分子机制的研究进展

卡介苗和有效的抗结核病药物使人们曾乐观地预测控制结核病指日可待，但20世纪80年代，结核病疫情的第3次迅猛回升使该预言成为历史。耐药结核病尤其耐多药结核病（multi-drug resistance tuberculosis，MDR—TB）的发生和流行是当前结核病疫情回升的主要原因之一，成为结核病控制的重要障碍。MDR-TB已被认为是第3种流行病（第1种是AIDS，第2种是结核病）成为亟待解决的世界性的严重公共卫生问题，     

浙东地区耐多药结核分枝杆菌耐药特性及分子机制研究

目的 对浙东地区耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）耐药性及分子机制进行研究,为治疗耐多药结核病提供理论依据。方法 收集2018 年1 月～2019 年12 月浙江东部9 家结核病定点医院临床分离的结核分枝杆菌。采用比例法检测异烟肼（INH）、利福平（RIF）、氧氟沙星（OFL）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）、阿米卡星（AK）、对氨基水杨酸（PAS）、卷曲霉素（CM）和丙硫异烟胺（TH）对MDR-TB 的耐药性。通过基因芯片方法检测耐多药结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA 突变位点,PCR 扩增OFL 耐药的MDR-TB 的gyr 耐药基因并测序。结果 耐多药结核分枝杆菌对OFL、SM、EMB、AK、PSA、CM、TH、INH 和RIF 耐药率分别为38.1%、54.8%、28.6%、11.9%、8.3%、9.5%、13.1%、100.0%和100.0%。耐多药结核分枝杆菌的突变位点为rpoB 511（9 例）、rpoB 513（3 例）、rpoB 516（3 例）、rpoB 526（25 例）、rpoB 531（38 例）、rpoB 533（2 例）,KatG 315（71 例）,inhA-15(4 例),KatG 315 与inhA-15 同时突变（9 例）。检测到26 株gyrA 基因和2 株gyrB 基因发生突变,突变类型为Thr478Asn、Asn477Thr、Ala90Val、Ser91Pro、Asp94Ala、Asp94His、Asp94Asn 和Asp94Gly。结论 耐多药结核分枝杆菌利福平耐药以rpoB 基因531位点突变为主;异烟肼耐药以KatG 基因315 位点突变为主;MDR-TB 对喹诺酮类药物的耐药机制以gyrA 基因Ala90Val、Ser91Pro、Asp94Gly 突变类型为主。     

结核分支杆菌临床分离株多耐药特点研究

目的 测定武汉和海口结核分支杆菌分离株对５种抗结核药的ＭＩＣ并分析其耐药特征。方法 ＢＡＣＴＥＣ技术和改良罗氏培养用于ＭＩＣ的测定。结果 ６６株结核菌对ＩＨＮ,ＳＭ,ＰＡＳ,ＥＭＢ和ＥＦＰ的耐药率分别是３９．４％,２４．２％,１６．７％,２４．２％和３７．９％。武汉和海口分离株的耐药率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。总耐药率为５７．６％。多耐药率为４２．２％。多耐药株占总耐药株的７３．７％。多耐药菌     

结核分支杆菌耐利福平基因rpoB变异机理及其检测的研究

目的 研究耐利福平株结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因变异及其ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测方法。方法 ＰＣＲ法扩增ｒｐｏＢ基因,纯化克隆,大量质粒制备,经ＡＢＩ３７７系统直接测序。结果 １７例多耐药结核菌,１４侏检测出ｒｐｏＢ基因变异。４９６（Ａｒｇ）,５０７（Ｇｌｙ→Ａｓｐ）,５７９（Ａｌａ→Ｇｌｙ）和５８３（Ｐｒｏ→Ｌｅｕ）密码子变异未风报道。全部为点突变,主要是错义突变。在５１１－５３３密码子区域变异只占６６     

耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变位点的分析

目的 研究上海地区耐利福平结核分支杆菌ropB基因的突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法 对58株结核分支杆菌rpoB基因片段（约213bp)进行PCR扩增,其中包括核心突变区的69个碱基,并对PCR产物进行DNA测序。其中耐药株36株,敏感株22株。结果 所有58例中,36株耐药株均存在rpoB基因突变,氨基酸突变率531位为47．2％,526位为25．0％,22株敏感株均无突变。结论 rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

耐多药肺结核患者结核分支杆菌耐药基因检测及治疗观察

目的：检测肺结核患者痰标本的耐药基因，并观察其抗结核疗效。方法：用PCR－SSCP方法对43例初治和26例复治耐多药临床肺结核患者痰标本进行耐药基因检测，并观察化疗结果。结果：43例初治痰标本检测，4例rpoB基因突变，无KatG,rpsL基因突变；26例复治痰标本rpoB，KatG,rpsL检出分别为26／26（100％），13／26（50％），12／26（46％）；复发肺结核患者3个月及6个月痰阴转率为76．9％，76．9％，X线好转率为76．9％和84．6％，结论：PCR－SSCP法对耐多药临床肺结核患者痰标本进行rpoB，KatG,rpsL检测，可为临床肺结结核患者耐药情况辅助诊断，指导治疗。     

结核分支杆菌耐药分子机制及快速检测的研究

目的：研究结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药的分子机制，探索快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性的分子生物学方法。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药株与katG基因、rpoB基因突变。结果：46例株结核分支杆菌临床分离株均未发现katG基因序列的缺失，17株检测到katG基因突变，耐药株中katG基因的突变率为57％；87株结核分支杆菌利福平耐药临床分离株的PCR－SSCP结果显示，所有39株利福平敏感菌无突变检出，48株利福平耐药菌中，36株高度利福平耐药菌和7株低度利福平耐药菌检测到rpoB基因突变；另5株低度利福平耐药菌未检测到rpoB基因突变，利福平耐药株中rpoB基因的突变检出率为89．6％。结论：证实katG和rpoB基因突变分别是结核分支杆菌异烟肼和利福平耐药的主要分子机制。应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）可快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性，使应用传统耐药测定方法需时1－2个月缩短到2天内即可完成，使非生长依赖性分子生物学手段应用于快速检测结核分支杆菌耐药性成为可能。     

结核分支杆菌耐药分子机制的检测技术的研究

目的：探讨结核分支杆菌对异烟肼、利福平耐药的分子机制，建立快速检测耐药分支杆菌基因型的分子生物学方法。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)同时检测结核分支杆菌敏感株和耐异烟肼、利福平耐药株的KayG基因、rpoB基因突变。结果：78株结核分支杆菌临床分离株均未发现KatG、rpoB基因缺失。以结核分支杆菌H37RV为对照，36株药物敏感株的KarG、rpoB基因SSCP图谱均正常。42株同时耐异烟肼和利福平的多耐药株中，KatG和rpoB基因突变率分别为66．7％(28／42)，90．5％(38／42)。结论：结核分支杆菌耐异烟肼、利福平耐药性的产生是由于KatG基因和rpoB基因突变所致。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性。     

等位特异PCR检测结核分支杆菌耐异烟肼基因katG突变研究

目的 建立等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐异烟肼基因katG 突变的快速敏感检测方法。方法 利用在PCR时，3′端的碱基如果与模板DNA不配对，PCR扩增阴性的原理，根据我们对katG基因突变特点的研究结果，建立了AS－PCR检测katG基因突变的方法。结果 AS－PCR检测结核菌耐异烟肼相关基因katG的敏感性为85％，特异性达90％。15株经测序证实有katG突变的菌株，AS－PCR检测均为阳性。二者的符合率为100％。与PCR－SSCP检测的总符合率为88％，阳性符合率81．0％，阴性结果的符合率为93．1％。检测试验可在数小时内完成。结论 AS－PCR方法是检测结核菌耐异烟肼基因突变的敏感方法，可为临床医师提供判断结核菌对异烟肼是否敏感的依据。     

结核分支杆菌利福平耐药基因检测

利福平是结核病治疗的一线药物，但在临床上也常出现结核分支杆菌对利福平的耐药。目前检测耐药的方法较多的是采用改良的罗氏培养法加药敏试验，但由于培养基不同。检测方法不同，判定标准不一，国内目前尚缺乏有说服力的统一标准，由于药敏试验是建立在细菌培养基础上的，因此结核杆菌培养阴性的结核病患者无法做药敏试验，近年来，国内外学者不断报道较传统PCR更为灵敏、     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的为了解新疆地区结核分支杆菌耐异烟肼（INH）分离株KatG基因突变情况，探讨其在INH耐药性中的可能作用。方法采用PCR和PCR—SSCP方法对60株结核分支杆菌临床分离株KatG基因突变进行检测。结果以结核分支杆菌H37RV为对照，28株药物敏感株的KatG基因PCR扩增产物273bp片段28例SSCP图谱正常。32例耐INH分离株中KatG基因扩增均阳性，其中11株SSCP图谱异常，其敏感性为34．37％。结论新疆地区结核分支杆菌INH耐药株存在KatG基因突变，其突变对INH耐药性的影响有待于进一步研究。     

结核分支杆菌的耐药性分析

目前,全世界已有近20亿人口受到结核分支杆菌的感染,结核患者约2000万人,每年新发患者约800～1000万人[1].近年来,由于人口流动普遍增加、人类免疫缺陷病毒(HIV)与结核分支杆菌伴发感染以及耐药菌株的出现等原因,使结核杆菌感染和结核病发生率有上升趋势,给全球结核病防治提出了新的挑战.及时诊断并检测分离株的耐药性对治疗结核非常重要.但结核分支杆菌生长十分缓慢,传统的检测方法往往需要7～10d后才能确定其耐药性.近年来,核酸检测技术被广泛应用于结核杆菌耐药性的分析,综述如下.     

耐多药结核病的研究进展

结核病被发现已经超过100年,人们曾乐观地预言20世纪末将消灭结核病。然而不合理的联合用药、管理不善、药物供应不足、质量不佳以及间断用药等,使结核分支杆菌不能及时被杀死,产生耐药性。1992年美国发生了多起耐多药结核病（multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB）暴发流行,不仅耐药菌传播快,而且患者病情进展迅速,从诊断到死亡平均4～6周,死亡率高（37％）.     

2327株结核分支杆菌耐多药情况分析

目的：了解当前结核病对一线及二线抗结核药物的耐药性及耐多药情况,为结核病防治提供依据。方法：采用WHO推荐的药敏测试法对2327株临床分离的结核分支杆菌进行药物敏感性试验。结果：总耐药率53.07%,耐多药率22.47%;近2年初始耐药占32.62%,获得性耐药占67.37%;并在102例耐多药结核病患者中发现9例严重耐多药结核病。结论：本地结核菌耐药率高于全国平均水平,耐药病例中初始耐药率较高,并已发现严重耐药结核病患者,建议积极开展耐药菌监测指导临床选择治疗方案。     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因检测研究

目的评价应用DNA序列分析方法和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值.方法采用DNA序列分析法和PCR-SSCP法对80株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株32株,耐RFP或含耐RFP耐多药株48株)rpoB基因核心区域的突变情况进行检测.结果以结核分支杆菌H37RV为对照,所有32株药物敏感株的rPOB基因均无突变.用DNA序列分析方法检测48株耐药株中44株发生突变,敏感性为91.7%(44/48),其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸.PCR-SSCP检测48株耐RFP分离株中,45株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为93.1%(45/48).结论DNA序列分析可指导临床用药,PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性.     

318例耐多药结核病的耐药情况分析

目的探讨耐多药结核病(MDR-TB)的耐药状况及分析耐药原因。方法收集该院2009年1月至2010年12月门诊及住院耐多药结核病患者318例,回顾性分析其耐药状况及耐药形成的原因。结果 318例MDR-TB患者中初始耐多药占23.6%,获得性耐多药占76.4%;中青年患者197例(61.9%);有80例(25.2%)为早期广泛耐药结核病(XDR-TB)患者,18例(5.65%)为XDR-TB患者。耐多药中耐链霉素占68.8%,耐乙胺丁醇占43.1%。耐药原因中药物不合理使用及患者的依从性差,是造成MDR-TB的主要原因,达到69.3%。结论 318例MDR-TB以中青年患者为主,获得性耐药率高,药物的不规范使用是发生新的耐多药结核的重要原因,应重视和加强结核病宣教管理和规范化合理用药。