检测支原体污染的一种敏感的微量定量试验:IL-2依赖性细胞株的增殖抑制试验

检测细胞培养中支原体污染的方法很多,但多数方法复杂,价格昂贵或不可靠,不适作细胞培养室的常规筛选方法.因此,作者建立了一种简便、快速而敏感的IL-2依赖性细胞株的增殖抑制试验.其原理:IL-2依赖性小鼠细胞毒性T淋巴细胞株(CTLL)在IL-2饱和浓度下,对外源性胸腺嘧啶核苷利用率非常高,掺入的~3H Tdr高达100,000～200,000cpm,因此增殖迅速.然而在被支原体污染的上清液中,由于支原体在消耗丝氨酸时产生了特异性核苷磷酸化酶,它能把外源性胸腺嘧啶核苷裂解成胸腺嘧啶,从而使培养的细胞在合     

一种高度敏感的检测细胞培养中污染支原体的方法

一种高度敏感的检测细胞培养中污染支原体的方法黄传书，金伯泉，汪美先，张建平，孙凯（第四军医大学免疫学教研室，西安７１００３２）陈常庆，顾文琴，喻缨（中国科学院上海生物工程中心，上海２００２３３）支原体个体微小（φ０．３０～８／μｍ），能透过０．４５μ...     

miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2增殖

目的检测miR-129对鼻咽癌细胞系CNE2细胞生物学功能的影响。方法人工合成miR-129模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),转染至鼻咽癌CNE2细胞中,RT-qPCR检测细胞miR-129表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果与对照组相比,转染miR-129 mimics组的miR-129表达水平明显升高(P0.05);转染miR-129 inhibitor组的miR-129表达水平均明显降低(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 mimics组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著下降(P0.05),凋亡显著增多(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 inhibitor组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著升高(P0.05),凋亡显著下降(P0.05)。结论 miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。     

一种敏感的检测人IL-8酶联免疫吸附试验(文摘)

IL-8是人T细胞、嗜碱性粒细胞及中性粒细胞的一种趋化因子,可使中性粒细胞释放出胞内酶并调节其粘附,也可使嗜碱性粒细胞释放组织胺。炎症局部产生的IL-8在炎症过程中起着重要作用,而且各种体液中IL-8的水平可因炎症的发展而变化。因此,检测体液中IL-8的水平有助于阐明伴有白细胞增多和/或白细胞浸润的炎症疾病     

黄芩提取物抑制IL-22诱导的人角质形成细胞系HaCaT过度增殖

目的 探究黄芩提取物通过miR-369-3p对白介素-22(IL-22)诱导的人角质形成细胞系HaCaT增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 将HaCaT细胞分为对照组、IL-22组(细胞模型,100 ng/mL的IL-22培养细胞)、低、中和高剂量组(黄芩提取物50、100、150μg/mL)、anti-miR-NC干预组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-369-3p干预组(转染anti-miR-369-3p)、miR-NC+高剂量组(转染miR-NC,高剂量黄芩提取物培养细胞)、miR-369-3p+高剂量组(转染miR-369-3p,高剂量黄芩提取物培养细胞)。MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6含量;RT-qPCR检测miR-369-3p表达。结果 与对照组相比,IL-22组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达的差异无统计学意义;与IL-22...     

熊果酸联合HDAC2抑制剂抑制人肝癌细胞系HepG2的增殖

目的 探讨熊果酸(UA)联合HDAC2抑制剂(SA)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及潜在作用机制.方法通过CCK-8法、光学显微镜观察、细胞克隆形成实验及流式细胞术检测UA和SA单用和联合作用于HepG2细胞后对细胞增殖的抑制作用,Western blot检测细胞内HDAC2、AC-α-tubulin、CDK2、CD...     

用敏感的ELISA法检测脑脊液IL-2

检测IL-2对中枢神经系统感染和炎症的研究有重要意义.但通常脑脊液(CSF)中的IL-2水平很低,不易测出,且测得的CSF IL-2水平可能代表了体循环经血一脑屏障来的渗出液.文章报道的ELISA法可检测脑膜自身合成的IL-2.用含单克隆抗人IL-2抗体的1%明胶PBS液包被聚氯乙烯微孔板,20u/100μl/孔,37℃1小后4℃过夜.以0.05%吐温-PBS洗板4次后,每孔加150μl 2%明胶PBS,室温1小时,洗板同前(可于孔内加     

下调去甲基化酶FTO抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的 探究去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(FTO)抑制对人肝癌细胞系HepG2增殖的作用机制。方法 将肝癌细胞系HepG2分为对照组(转染空质粒)、FTO组(转染FTO过表达质粒)、si-FTO组(转染si-FTO)、si-FTO+si-FoxO1组(同时转染si-FTO和si-FoxO1)。RT-qPCR检测细胞中FTO相对表达量;用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Dot blot检测m⁶A甲基化水平;蛋白质印迹检测细胞中FoxO1蛋白表达。结果 通过人类癌基因库(TCGA)分析肝癌患者总体生存期发现FTO高表达提示更短的生存期(P<0.05)。和正常肝细胞系HL7702相比,HepG2细胞中FTO表达明显升高(P<0.05)。和对照组相比,si-FTO组细胞中FTO相对表达量明显降低,FTO组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05);和si-FTO组相比,si-FTO+si-FoxO1组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05)。si-FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m^6...     

华蟾素抑制人鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1增殖

目的 评估华蟾素(Cin)对人鼻咽癌(NPC)细胞系(CNE2和HONE1)的生物学作用以及发挥功效的机制.方法 用不同浓度梯度(0、5、15和45 mg/L)Cin分别处理CNE2和HONE1细胞24、48和72 h后,用CCK-8法检测细胞活性.48 h后,用相差显微镜观察细胞形态;TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡...     

桃叶珊瑚苷抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的 探讨桃叶珊瑚苷(AU)对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和细胞周期的影响及其作用机制。方法 体外培养HepG2细胞,CCK-8法筛选AU的最佳给药浓度。随机将HepG2细胞分为对照组、AU 12.5 mg/L组(AU L组)、AU 62.5 mg/L组(AU H组)和AU H+Akt通路激动剂(SC79)组(AU H+SC79组),观察各组细胞增殖状态。5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EDU)法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、p-MDM2、MDM2、p-p53、p53蛋白表达水平。结果 选择浓度为12.5、62.5 mg/L的AU进行后续实验。与0 mg/L AU比较,AU L组、AU H组细胞增殖显著降低(P<0.05);与对照组比较,AU L、AU H组悬浮和脱落细胞逐渐增多,细胞皱缩变圆,G0/G1期细胞占比、EDU阳性染色细胞比例以及p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2蛋白表达水平下降,S和G2/M期细胞占比、细胞凋亡率以及p-p53/p53蛋白表达水平升高(P<0...     

丙泊酚抑制人子宫内膜癌细胞系RL95-2增殖

目的探究丙泊酚对子宫内膜癌细胞系RL95-2增殖和凋亡的影响,以及对mTOR/S6K1信号通路的作用。方法将RL95-2细胞分为对照组和丙泊酚组(加入不同浓度的丙泊酚)。CCK-8法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞测量术检测细胞凋亡;比色法测定细胞caspase-3和caspase-9活性;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)磷酸化水平。结果与对照组相比,丙泊酚各组RL95-2细胞增值率和细胞克隆形成能力均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率以及细胞caspase-3和caspase-9活性均显著升高(P<0.05),细胞p-Akt、p-mTOR和p-S6K1蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论丙泊酚可能通过调控mTOR/S6K1通路,抑制子宫内膜癌细胞系的增殖、促进癌细胞凋亡。     

抗原斑点试验:一种检测抗体的高度敏感试验

作者用重氮苯甲氧基甲基纸(diazob-enzyloxy methyl,DBM)和硝基纤维素纸吸附ng量的抗原,用来检查相应的抗体,其敏感性与RIA或ELISA接近。同一纸片上可吸附多种抗原用于检出不同抗体。作者试用了多种抗原,即卵清蛋白,伴清蛋白,牛血清白蛋白(BSA),鲸肌红蛋白,     

一种特异、敏感、快速的ELISA检测微量IgG水平

IgG是人血清中一种主要且含量最多的免疫球蛋白,占血清免疫球蛋白总量的75%。正常人血清中IgG的平均含量约为10mg/ml。因此,在测定方法上不需要非常敏感的方法,一般用环状免疫单扩散法即可测出。但在某些情况或某些分泌液中的IgG含量很少,例如脑脊液中的IgG仅为血清中的1/500,又如支气管灌洗液、眼泪等分泌液中,IgG的含量也很少。此外,在科研中有时也需要检测极微量的IgG水平。为此,本文介绍一种特异、敏感、快速、简便、价廉、安全的酶联免疫吸附试验     

牛磺酸联合SN50协同抑制人肝癌细胞系HepG2的增殖

目的探讨牛磺酸联合NF-κB信号通路抑制剂SN50对肝癌细胞系HepG2增殖的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为对照组、牛磺酸组(给予150 mmol/L牛磺酸处理24 h)、抑制剂组(给予36μmol/L SN50处理24 h)和牛磺酸+抑制剂组;用MTT法、克隆形成实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡;Western blot和RT-qPCR检测细胞中cyclin D1、Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况。结果与对照组相比,经150 mmol/L牛磺酸或36μmol/L SN50处理24 h后,HepG2细胞的生存率和集落形成率均明显降低,凋亡率明显升高,细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白和mRNA表达均明显受到抑制(P<0. 05)。同时,SN50增强了牛磺酸对HepG2细胞的增殖和cyclin D1、Bcl-2表达的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用。结论牛磺酸联合NF-κB信号通路抑制剂协同抑制肝癌细胞系HepG2的增殖。     

应用单克隆抗体检查淋巴母细胞系的支原体污染

免疫学研究中应用的淋巴母细胞系存在着严重的支原体污染问题.这些支原体耗竭HAT选择培养基中的胸腺嘧啶核苷.对杂交细胞产生毒性,从而严重阻碍了细胞融合的成功.本文作者在用人B淋巴母细胞(Swei)作免疫原制备抗人Ia抗原的单克隆抗体时,意外地获得了两株针对支原体的杂交瘤细胞     

一个简单敏感的检测IL-2活性的生物学方法

本文介绍了一种简单一次定量的检测IL-2生物活性的方法。它以培养纯CD3~+T细胞为基础,CD3~+T 细胞是从血液的单个核细胞中,用微球(M450)结合CD3McAb 筛选的。培养时,经抗CD3活化的T 细胞将表达IL-2受体而不产生IL-2。加入IL-2后,可引起增殖反应,IL-2浓度在0.01～20U/ml时,可以得到一个线性剂量-反应曲线。细胞对IL-1、IL-4、TNF-α、IFN-α、INF-γ、PHA、ConA 不反应。IL-2的反应性可为TNF-α增强,被IFN-α抑制。试验用的促分裂素不影响增殖反应。抗IL-2和抗IL-2受体的抗体可以抑制IL-2反应,并有一定的剂量依赖关系。本法既简单又特异,不用长期培养实验用的细胞。     

微球分析法:一种检测内皮细胞增殖与抑制的新方法

我们研制了一种能检测可溶性内皮细胞增殖与抑制因子的新方法。将含磁性的微球（直径为４·ＳＩＪｎ。）与血管内皮细胞共孵育时,微球被内皮细胞经吞噬作用而被内在化。微球一经细胞摄入,将停留于细胞内不被排出。带有一定数目微球的细胞（１０～朽个／细胞）对生长刺激信号仍有应答反应。在细胞增殖时,微球将被带人子代细胞。这样,通过对细胞做球平均数的计数就可判断内皮细胞的增殖或抑制状态。应用ｄｙｎａｌ微球的依据有：①微球的大小一致;②光镜下易检测;③微球不被细胞降解;④用磁体易分离带球细胞。分离、培养牛毛细胞血管内…     

IL-4抑制人T细胞的IL 2受体表达及IL-2依赖的增殖

IL-4曾被称为B细胞生长因子, 现认为是可作用于多种细胞系的多效淋巴因子。此外,它还可与其它淋巴因子相互调节。据报导,IL-2依赖的人LAK 细胞的产生和IL-2诱导的B 细胞或B 细胞系的增生分化均可被IL-4抑制。与此相反,IL-4可与IL-2协同促进丝裂原激活的人T 细胞的生长。本文旨在探查在人静息T 细胞对生理活性刺激物应答中IL-4     

下调脂滴包被蛋白2抑制人胃癌细胞系NCI-N87增殖

目的 研究脂滴包被蛋白2(perilipin2)在胃癌中的表达及对癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制.方法 采用人正常胃黏膜细胞系GES-1和人胃癌细胞系NCI-N87,将NCI-N87细胞分为对照组(不作任何处理)、NC-shRNA组(转染10μg NC-shRNA重组慢病毒质粒)、perilipin2-shRNA...