过氧化物酶体增殖因子激活受体γ介导5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

Objective To investigate induction of apoptosis of human ovarian cancer CoC1 cells by 5-allyl-7-gen-difluoromethylenechrysin(ADFMChR)in vitro,and its molecular mechanism. Methods The proliferative and growth inhibition of CoC1 cells treated with ADFMChR was respectively measured using(3,4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MTT)colorimetric assay and clone-formation in soft agar assay. The apoptosis of CoC1 cells induced by ADFMChR was determined by DNA agarose gel electrophoresis assay. Effect of ADFMChR on PPAR-γ, Bcl-2. Bax protein expression level of CoC1 cells was detected by western blotting. Results The proliferation of CoC1 cells could be significantly inhibited by ADFMChR in a dose-dependent manner. The IC50 was 7. 76 μmol/L The ladder-shaped band could be shown in DNA agarose gel electrophoresis after treatment with ADFMChR at 30. 0 μmol/L for 48 h and the ladder-shape band disappeared with GW9662. Western blot analysis showed that expression of PPAR-γ and Bax proteins were up-regulated and protein levels of Bcl-2 were depressed after treatment with ADFMChR in a concentration-dependent fashion. However,the effects of ADFMChR on Bcl-2 and Bax proteins were blocked or diminished in the presence of GW9662. Conclusions The effect of ADFMChR on induction of apoptosis in CoC1 cells may be mediated by activation of PPAR-γ, sequentially accompanied by reducing of protein levels of Bcl-2 and increasing of Bax expression.     

过氧化物酶体增殖因子激活受体γ介导5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

Objective To investigate induction of apoptosis of human ovarian cancer CoC1 cells by 5-allyl-7-gen-difluoromethylenechrysin(ADFMChR)in vitro,and its molecular mechanism. Methods The proliferative and growth inhibition of CoC1 cells treated with ADFMChR was respectively measured using(3,4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MTT)colorimetric assay and clone-formation in soft agar assay. The apoptosis of CoC1 cells induced by ADFMChR was determined by DNA agarose gel electrophoresis assay. Effect of ADFMChR on PPAR-γ, Bcl-2. Bax protein expression level of CoC1 cells was detected by western blotting. Results The proliferation of CoC1 cells could be significantly inhibited by ADFMChR in a dose-dependent manner. The IC50 was 7. 76 μmol/L The ladder-shaped band could be shown in DNA agarose gel electrophoresis after treatment with ADFMChR at 30. 0 μmol/L for 48 h and the ladder-shape band disappeared with GW9662. Western blot analysis showed that expression of PPAR-γ and Bax proteins were up-regulated and protein levels of Bcl-2 were depressed after treatment with ADFMChR in a concentration-dependent fashion. However,the effects of ADFMChR on Bcl-2 and Bax proteins were blocked or diminished in the presence of GW9662. Conclusions The effect of ADFMChR on induction of apoptosis in CoC1 cells may be mediated by activation of PPAR-γ, sequentially accompanied by reducing of protein levels of Bcl-2 and increasing of Bax expression.     

辣椒素对人结肠癌SW-480生长及Bcl-2/Bax表达的影响

目的 探讨辣椒素对人结肠癌SW-480细胞的作用及机制。方法 用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法检测SW-480细胞生长情况;透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析细胞凋亡;蛋白印迹法（Western blot）检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达。结果辣椒素对SW-480细胞有明显生长抑制及诱导凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性;光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带,随着作用时间延长,细胞内Bax蛋白表达逐渐增高、Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论辣椒素能明显抑制人结肠癌SW-480细胞生长,诱导细胞凋亡可能是其主要作用机制,调节Bcl-2、Bax蛋白表达是其诱导细胞凋亡的作用机制之一。     

茶多酚抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖及其机制的研究

目的 探讨茶多酚(Tea Polyphenols,TP)对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其机制.方法 MTT比色法检测TP对HeLa细胞增殖的影响;荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测TP对HeLa细胞凋亡的影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、P53蛋白表达.结果 TP处理HeLa细胞48 h后,细胞生长明显抑制,荧光染色可见明显的核固缩、碎裂现象;DNA凝胶电泳图谱观察到“梯子状”改变;随着药物浓度的增加,Bcl-2蛋白表达量下降,Bax、P53蛋白表达量增加.结论 TP抑制HeLa细胞的生长,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过上调P53蛋白,直接激活Bax基因表达,同时抑制Bcl-2蛋白表达来诱导细胞凋亡.     

γ-干扰素对MGC-803胃癌细胞株诱导凋亡作用及其机制研究

目的　研究干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)对MGC-803胃癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用,并 探讨其诱导凋亡作用的机制。方法　应用MTT法检测IFN对MGC-803胃癌细胞株的抗增殖作用的影响及细 胞毒活性;通过MTT染色法、HE染色、扫描电镜观察凋亡细胞的形态学改变;应用(TdT-mediateddUTPnick endlabeling)TUNEL法定量检测IFN γ诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定P53、P16、C-myc、Bcl-2、Bax 的阳性表达率。结果　IFN-γ在1250～10000u/ml范围内对MGC-803胃癌细胞均有抑制作用(P<0.05), MTT染色法观察:正常肿瘤细胞着色均匀,凋亡细胞缩小成深蓝色,死亡细胞空泡样,不着色。扫描电镜及 TUNEL法均观察到实验组细胞体积变小,可见凋亡小体突出于肿瘤细胞表面。凋亡率随作用时间和浓度增加而 升高,实验组P53、P16、C-myc蛋白表达没有明显变化(P>0.05),Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,与对 照组相比均有显著性差异(P<0.01)。结论　IFN-γ可抑制MGC-803胃癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。其 作用机制可能是与通过上调肿瘤细胞Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达有关。     

靶向β-catenin的siRNA对宫颈癌细胞恶性表型的影响

目的探讨靶向β-链蛋白（β-eatenin）的小干扰RNA（siRNA）对宫颈癌细胞Hela细胞功能的影响以及相关作用机制。方法脂质体介导转染β-catenin小干扰RNA（β-cateninsiRNA）敲低Hela细胞β-catenln的表达。MTT法检测转染后细胞增殖水平,流式法评价转染后细胞周期分布及凋亡变化,并结合Western印迹研究β-catenin在Hela细胞中的作用机制。结果体外转染β-catenin小干扰RNA能明显抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,并且能够明显下调Bcl-2及CyclinD1蛋白水平表达,上调Bax蛋白表达水平。结论β-cateninsiRNA能明品柳制Hela绅晌毕长．β-catPnin可作为宫颈癌基因治疗的靶点。     

尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制影响的研究

为了研究尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制的影响，采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带，用细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果表明，实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带。Bcl-2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降，而Bax蛋白的表达则逐渐增加，Bcl-2／Bax比值逐渐下降，8小时就与对照组出现差异（P〈0.05）。结论：尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL-60细胞凋亡，诱导其凋亡的机制与下调bcl-2及上调bax基因的蛋白表达有关。尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL-60细胞凋亡，其机制与协同下调bcl-2的表达有关。     

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

辣椒素诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:探讨辣椒素诱导人胃癌MKN-45细胞的凋亡作用及其分子机制。方法:用MTT法检测MKN-45细胞生长情况。荧光光镜、透射电镜、DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot蛋白印迹法检测细胞内Bcl-2、Bax和C-myc蛋白表达。结果:辣椒素对MKN-45细胞有明显的生长抑制及诱导凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性。光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞。DNA凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带。蛋白印迹法表明辣椒素可使Bax表达升高,Bcl-2和C-myc表达下降。结论:辣椒素能明显抑制人胃癌MKN-45细胞生长,诱导细胞凋亡,并主要通过调节Bax、Bcl-2和C-myc等蛋白的表达来实现。     

甲基乙二醛对胰腺癌鼢LNC-1细胞增殖及凋亡蛋白表达的影响

目的：探讨甲基乙二醛（MGO）对胰腺癌 PANC-1细胞增殖影响及其作用机制。方法培养PANC-1细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测MGO对PANC-1细胞增殖的影响;Hoechst33258染色细胞后显微镜下观察MGO处理后PANC-1细胞形态变化,Western blot检测凋亡家族蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测发现MGO对人胰腺癌PANC-1有明显的抑制作用,且在一定程度上呈剂量时间依赖性;MGO处理48 h后的PANC-1细胞在Hoechst33258染色后荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞核固缩表现;Western blot检测表明MGO能显著降低Bcl-2蛋白表达量而提高Bax和Caspase-3蛋白表达量。结论 MGO能够有效抑制人胰腺癌PANC-1细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过作用凋亡信号通路调控凋亡家族蛋白Bcl-2,Bax 和Caspase-3表达进而诱导PANC-1细胞凋亡。     

罗格列酮对人腹膜间皮细胞和脐静脉内皮细胞水孔蛋白-1的影响

目的探讨体外条件下核受体Peroxisome proliferator-activated receptor gamma（PPAR-gamma）激动剂罗格列酮（RosiglitazoneRGZ）对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells HPMCs）、人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVECs）水孔蛋白-1（aquaporin 1 AQP1）增殖以及基因水平的影响。方法以HPMCs和HUVECs为研究对象,将实验分成四组：对照组、RGZ组（10uMRGZ）、GW9662组（peroxisome proliferator-activated receptor gamma antagonist 20uMGW9662）以及GW9662＋R组（20uMGW9662提前作用1H后加入10uMRGZ）。应用比色法（CCK-8）观察RGZ等对HPMCs和HUVECs增殖的影响。应用Realtime-PCR方法检测罗格列酮等对水孔蛋白-1基因水平表达的影响。结果①GW9662＋R组与对照组相比,可以明显抑制HPMCs增殖（P〈0.01）,其他组对HPMCs增殖没有明显影响（P〉0.05）。而对HUVECs,RGZ组、GW9662组以及GW9662＋R组都可以促进其增殖（P〈0.01）;②罗格列酮上调这两种细胞AQP1基因水平的表达。结论在体外,罗格列酮可影响HPMCs和HUVECs水孔蛋白质1基因水平的表达。其作用机制可能是通过激活PPAR-gamma从而影响上述两种细胞的AQP1的表达。     

阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制研究

为了研究阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制，采用Giemsa染色、光学显微镜下观察HL60细胞的形态学变化，琼脂糖凝胶电泳检测DNA凋亡带，细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果显示：实验组自培养8小时起，细胞开始变形，Giemsa染色可见核膜裂解，染色质呈紫红色或蓝紫色，出现典型的凋亡小体；DNA凝胶电泳见典型的梯形条带；在细胞凋亡的同时伴有Bcl-2蛋白表达明显下降，而Bax蛋白表达明显升高，Bcl-2／Bax比值下降。结论：阿糖胞苷可明显地诱导HL60细胞凋亡，同时伴有Bcl乏蛋白表达降低、Bax蛋白升高。Bcl-2／Bax比值下降可能是阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的主要机制之一。     

酸性肽对神经元凋亡的抑制

背景:高浓度的一氧化氮能引起神经细胞的凋亡。因此抑制一氧化氮引起的细胞凋亡就能达到预防和治疗老年痴呆病的目的。目的:观察酸性肽能否抑制一氧化氮引起的神经元凋亡。设计:对照观察细胞和分子实验。材料:实验于2003-05/2005-05在郑州大学生物活性肽研究所第二实验室和郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室细胞培养室完成。新生的24h内SD雄性大鼠,由河南省动物中心提供(410117)。方法:对新生的SD大鼠海马神经元进行原代培养。取培养至第11天的神经细胞,用不同剂量的酸性肽预处理6h,再加入终浓度为50μmmol/L的亚硝基铁氰化钠,继续培养24h,收集细胞进行实验。每次实验均分为以下5组:正常对照组、亚硝基铁氰化钠处理组、亚硝基铁氰化钠 0.0375mg/mL酸性肽组、亚硝基铁氰化钠 0.075mg/mL酸性肽组,亚硝基铁氰化钠 0.15mg/mL酸性肽组。用噻唑蓝法测定细胞的存活率,用免疫组织化学法对神经丝蛋白进行染色,再用吖啶橙荧光染色法显示细胞凋亡的形态。用琼脂糖凝胶电泳法分析凋亡细胞的DNA梯带。用WesternBlot和吸光度扫描分析Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达水平。主要观察指标:①噻唑蓝法比色法检测细胞存活率的实验结果。②细胞凋亡的核型观察结果。③细胞凋亡的DNA电泳分析。④Bcl-2和Bax蛋白的WesternBlot分析结果。结果:①亚硝基铁氰化钠处理组的神经元存活率为58.9%,亚硝基铁氰化钠 0.037mg/mL酸性肽处理组为70.0%,亚硝基铁氰化钠 0.075mg/mL酸性肽处理组为72.8%,亚硝基铁氰化钠 0.15mg/mL酸性肽处理组为75.3%。②细胞凋亡的核型观察结果:亚硝基铁氰化钠处理组呈现细胞凋亡的明显特征。不同浓度的酸性肽 亚硝基铁氰化钠共同处理组海马神经元的细胞核接近正常对照组的细胞核形态。③细胞凋亡的DNA电泳分析结果表明,仅亚硝基铁氰化钠处理组的神经元DNA在琼脂糖凝胶电泳上显示出清晰的细胞凋亡的特征性DNA梯带。④Bcl-2和Bax蛋白的Western Blot和吸光度扫描分析结果显示,亚硝基铁氰化钠处理组Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平升高。而不同浓度的酸性肽 亚硝基铁氰化钠共同处理组的Bcl-2蛋白水平随酸性肽浓度逐渐增加,Bax蛋白的表达水平逐渐下降。结论:酸性肽能够抑制神经元的凋亡,增加神经元Bcl-2蛋白的表达水平,抑制神经元Bax蛋白的表达水平。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

MODS大鼠外周血单个核细胞内核因子-κB和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ的表达

目的探讨多器官功能障碍综合征（MODS）大鼠外周血单个核细胞（PBMC）内核因子-κB（NF—κB）和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPARγ）的表达及相互关系。方法健康雄性SD大鼠40只，随机分为四组（每组10只），正常对照组，脂多糖（LPS）刺激组，罗格列酮（ROSI）预处理组，选择性拮抗剂2-氯-5-硝基苯胺（GW9662）预处理组。免疫细胞化学法检测PBMC内PPARγ、NF—κB p65的表达活性，并进行图像分析。结果（1）在正常组大鼠PBMC内NF-κB p65、PPARγ表达均较少。LPS刺激组NF—κB p65表达与正常组比较显著增加（P〈0．01）；PPARγ表达稍有增高，与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。ROSI组NF-κB p65表达与LPS刺激组比较显著降低（P〈0．01）；PPARγ表达与LPS刺激组比较显著增加（P〈0．01）。GW9662组NF—κB p65表达与LPS刺激组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；PPARγ表达显著降低，与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）相关分析结果表明，PBMC内NF-κB和PPARγ活性变化在LPS刺激组、ROSI组、GW9662组呈显著负相关（LPS刺激组：r=-0．916，P〈0．01；ROSI组：r=-0．605，P〈0．05；GW9662组：r=-0．961，P〈0．01）。在正常对照组无明显相关性（r=0．185，P〉0．05）。结论PPA脚可能是通过抑制NF—κB的活性而对MODS大鼠起保护作用。     

表皮生长因子受体在黑色素瘤紫杉醇耐药性中的机制研究

目的探究紫杉醇对黑色素瘤的作用机制及表皮生长因子受体（EGFR）信号通路在调节黑色素瘤侵袭与转移中的作用,揭示该信号通路与紫杉醇耐药的关系及相关机制。 方法以EGFR高表达的恶性黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用流式细胞术、细胞迁移实验、MTT法和蛋白质印迹法,研究紫杉醇及表皮生长因子（EGF）通过EGFR信号通路对A375细胞凋亡、增殖和迁移的影响。 结果（1）细胞凋亡：紫杉醇诱导的A375细胞凋亡随浓度升高而增强（P＜0.001）,同时紫杉醇（0.1 μmol/L）抑制Bcl-2并增加了Bax的表达（P＜0.01）;EGFR抑制剂AG1478可明显增加A375细胞凋亡并增强紫杉醇的诱导效果及对Bcl-2和Bax的影响（P＜0.001）;EGF单独处理对A375细胞凋亡无明显影响,但其可抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡（P＜0.05）及对Bcl-2和Bax的影响（P＜0.001）。（2）细胞增殖：紫杉醇（0.1 μmol/L）可显著抑制A375细胞增殖（P＜0.001）且该作用可被AG1478进一步增强但被EGF减弱（P＜0.001）。（3）细胞迁移：紫杉醇（0.1 μmol/L）可显著抑制A375细胞的迁移（P＜0.001）,该抑制作用可被AG1478进一步增强但被EGF减弱（P＜0.001）。 结论紫杉醇能够降低Bcl-2并增加Bax表达,从而诱导黑色素瘤A375细胞的凋亡并抑制其增殖和迁移,而这些抑制作用可被EGF激活的EGFR通路减弱。     

熊果酸诱导脑胶质瘤U251细胞株凋亡及其机制

目的：探讨熊果酸(Ursolic acid, UA)诱导脑胶质瘤U251细胞株凋亡的作用及机制。方法：培养脑胶质瘤细胞株(U251)，应用流式细胞仪观察UA对细胞周期的影响；琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化；Western-blot测定COX-2及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)。结果：流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳均显示UA诱导U251细胞凋亡，细胞核DNA 呈梯状降解。同时COX-2蛋白表达及其催化生成产物PGE2浓度下降，凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少，而Bax无明显变化。结论：熊果酸能明显诱导U251细胞凋亡，其机制可能与阻滞细胞周期、抑制COX-2表达、减少PGE2生成及下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达有关。