pH对心脏κ-阿片受体调节Ca2+瞬变作用的影响

目的研究pH对κ-阿片受体调节心肌细胞内钙瞬变作用的影响. 方法用光谱荧光法,以Fura-2为Ca2+指示剂测定大鼠单个心肌细胞电刺激引起的钙瞬变,观察激动κ-阿片受体对钙瞬变的影响及在不同pH值时该作用的变化特点. 结果当细胞外液pH为7.4时,U50, 488H (κ-阿片受体选择性激动剂)在10 μmol*L-1～30 μmol*L-1浓度范围内剂量依赖性地降低心肌细胞的钙瞬变, 该作用具有时间依赖性. 当细胞外液的pH为6.8时,U50, 488H的作用曲线明显右移,表明其作用减弱. 当细胞外液的pH为8.0时,U50, 488H的作用曲线明显左移,而且其最大效应提前发生,表明U50, 488H的作用被加快和加强. 结论 pH对κ-受体介导的钙反应具有调节作用;临床酸化血液可能对阿片中毒者具有抗毒效应,而碱化血液可能会加重阿片类药物的毒性作用.     

U50,488H对大鼠血压的影响及机制

目的：观察κ-阿片受体激动剂U50，488H对大鼠血压的影响，并探讨其作用机制。方法：在正常大鼠急性分离的心肌细胞中，采用细胞动缘检测系统记录心肌细胞收缩，光谱荧光法检测心肌细胞内钙，膜片钳技术记录L型钙电流；分离正常大鼠腹主动脉，以血管环方法检测血管舒张功能。结果：在整体水平，静脉注射U50，488H可显著降低大鼠平均动脉压，降低心率及心脏的收缩、舒张功能；在细胞水平，U50，488H抑制单个心肌细胞收缩呈剂量依赖性，抑制心肌细胞L型钙电流，降低细胞内钙瞬变；在离体水平，U50，488H对血管收缩产生显著的剂量依赖性舒张效应。以上效应均可被选择性κ-阿片受体阻断剂nor-BNI所阻断。结论：U50，488H通过激动κ-阿片受体引起降血压效应，抑制心肌细胞收缩力和舒张血管是其降压的主要机制。     

心先安对大鼠肥厚心肌的作用

应用测定心肌细胞钙瞬变的方法研究心先安外源性cAMP对正常及肥厚心室肌钙瞬变的作用 ,结果发现 :①正常与肥厚大鼠心肌细胞的钙瞬变无显著差异 (2 0 2 .37± 2 0 .87vs 188.74± 2 2 .0 6 ,P >0 .5 ) ;②心先安 (5 0 μmol·L-1)可使正常及肥厚大鼠心肌细胞钙瞬变均明显增加 (P <0 .0 0 1) ,且对正常大鼠的作用更强 (P <0 .0 5 ) ;③尼卡地平 (1μmol·L-1)可使正常及肥厚大鼠心肌细胞的钙瞬变明显减小 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。提示心先安对肥厚大鼠也具有正性变力作用     

U50,488H对正常及缺氧心肌细胞钾电流的作用

目的观察U50,488H(κ阿片受体选择性激动剂)对正常及缺氧心肌细胞钾电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,记录了急性分离的正常及缺氧大鼠心室肌细胞的钾电流。结果U50,488H(1～500μmol/L)可以剂量依赖性地抑制正常心肌细胞的钾电流,该作用可被κ阿片受体特异性阻断剂Nor-BNI(100μmol/L)所阻断。而细胞缺氧后,钾电流虽有所下降,但与正常对照差异无显著性。U50,488H(1～500μmol/L)可以剂量依赖性地抑制低氧心肌细胞的钾电流,并且U50,488H对心肌细胞钾通道电流的抑制作用不受缺氧的影响。结论心脏阿片受体参与了对心脏钾离子通道功能的调节,这可能是阿片类物质抗心律失常的原因之一。     

雌激素对大鼠心肌细胞钙的调控作用研究

目的　观察雌激素对大鼠心肌细胞钙转运的调控作用 .方法　应用膜片钳全细胞记录方法观察 L型钙通道电流 (ICa.L) ,共聚焦显微镜系统分析细胞内钙浓度 ([Ca2 +]i)的变化 .结果　应用 10 μmol· L- 1和 30 μmol· L- 1的 17β- Estradiol,分别使 ICa.L抑制到正常的 (4 8.1± 4.5 ) %和 (2 9.3± 5 .2 ) % (n=5 ,P<0 .0 1) . 10μmol· L- 1 的 17β- Estradiol可升高静息的培养心肌细胞[Ca2 +]i,荧光强度 (FI)值由 5 4.2± 13.6增加到 86 .5± 15 .3(n=6 ,P<0 .0 1) ;而对具有自发收缩的心肌细胞钙瞬变幅度有明显的抑制作用 ,由给…     

κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用

目的 通过观察κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的作用,研究κ阿片受体激动剂对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用.方法 以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用血管紧张素Ⅱ1 μM诱导心肌肥大,观察U50488H1 μM对它的作用,并和洛沙坦(los)1 μM组做对比观察κ阿片受体的激活对心肌肥大的作用.用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;用[3H]-leueine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成.结果 AngⅡ1 μM使心肌细胞总蛋白含量,蛋白表迭及细胞体积明显增加;U50488H1 μM能够降低由AngⅡ引起的心肌细胞蛋白含量,蛋白表达,以及体积的增加,从而抑制心肌肥大,并且抑制程度与los1 μM相似.结论 κ阿片受体激动剂U50488H能够抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.     

κ-阿片受体介导缺血后处理的心肌保护作用及其受体后机制

目的:探讨κ-阿片受体是否参与缺血后处理的对抗心肌缺血/复灌(I/R)损伤和心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法:采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,全心停灌30 m in、复灌120 m in复制I/R模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌组织form azan含量。酶解分离的心肌细胞采用缺氧60 m in、复氧60m in复制H/R模型,测定心肌细胞存活率。结果:在离体心脏模型上,与I/R组相比,缺血后处理组心肌组织的form azan含量明显增高,复灌期间冠脉流出液中LDH含量明显降低,同时缺血后处理明显改善心室力学指标,缓解冠脉流量的减少;在分离心肌细胞模型上,缺氧后处理明显提高心肌细胞存活率。κ-阿片受体阻断剂nor-b inaltorph im ine(nor-BN I)和线粒体ATP敏感性钾通道(m itoKATP)阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)在离体大鼠心脏模型和分离心肌细胞模型上均能明显减弱缺血后处理的作用。同时在心肌细胞模型上,与H/R组相比,κ-阿片受体激动剂U 50488H明显提高心肌细胞存活率,其作用可被m itoKATP阻断剂5-HD所阻断。结论:缺血后处理具有抗心肌缺血/复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其激活κ-阿片受体和m itoKATP有关。     

磷脂酶C在血管紧张素II诱导心肌细胞血小板衍生 生长因子受体表达中的作用

目的　探讨磷脂酶C在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以 10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ,以 10 -5mol·L-1U73 12 2 (一种特异性磷脂酶C抑制剂 )预孵育 3 0min为U73 12 2组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ,免疫印迹法测定培养 6h时心肌细胞PDGF- β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 6h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,U73 12 2可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。 结论　磷脂酶C参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

к阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的影响

目的 :研究选择性к阿片受体激动剂U5 0 4 88H对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的影响 .方法 :将实验大鼠按随机原则分为 4组 ,即对照组 (Control)、缺血再灌注组 (Ⅰ /R)、U5 0 4 88H组和U5 0 4 88H +Ⅰ /R组 ,监测大鼠心率 (HR)、动脉压 (ABP)、左心室内压 (LVP)及收缩 (+dp/dtmax)和舒张功能 (-dp/dtmax)等血流动力学指标 ,并观察室性心律失常的发生情况 .结果 :①U5 0 4 88H可显著降低大鼠HR ,ABP ,LVP及±dp/dtmax;②在心肌缺血前预先给予U5 0 4 88H ,可明显降低大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的发生率以及室性心律失常评分 ,该作用可被选择性к阿片受体阻断剂Nor BNI阻断 .结论 :U5 0 4 88H可改变心脏节律 ,并通过激动心脏к阿片受体减少大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的发生 .     

1-(2, 6-二甲基苯氧基)-2-(3, 4-二甲氧基苯乙氨基) 丙烷盐酸盐对培养的乳鼠心肌细胞[Ca2+]i的影响

采用 Fura- 2 / AM显微荧光测钙技术 ,检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对不同刺激〔去氧肾上腺素 ,高 K ,血管紧张素 (Ang II)〕所致心肌细胞钙超载的影响。结果表明 :1在含钙、无钙标准台氏液 ,DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对去氧肾上腺素(Phe) 10 - 4 mol· L- 1 所致钙增高有显著抑制作用。 2 DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对高 K 5 0 m mol· L- 1 引起的 [Ca2 ]i增高有一定抑制作用 ,对 Ang 10 - 4 mol· L- 1 引起的 [Ca2 ]i增高有部分拮抗作用。提示 :DDPH可拮抗 α1 受体调控的 Ca2 通道 ,对钙库钙释放也有抑制作用 ,对电压依赖性钙通道有一定调控作用     

k—阿片受全的负性肌力作用及其对β—肾上腺素受体的调节

目的　研究 U 5 0 ,488H (选择性κ-阿片受体激动剂 )对心脏的负性肌力作用特点及对β-肾上腺素受体 (β- AR)的调节作用 .方法　 1整体动物实验 ,观察 U5 0 ,488H对家兔心率 (HR)、动脉压 (ABP)、左心室内压 (L VP)及其微分 (±dp/ dtmax)的影响 ;2利用 L angerdoff装置离体灌流大鼠心脏 ,观察 U 5 0 ,488H对 HR,L VP和± dp/ dtmax及β- AR正性肌力作用的影响 .结果　 1U5 0 ,488H可显著降低家兔的 HR,ABP,L VP及± dp/ dtmax;2 U5 0 ,488H对离体大鼠心脏的HR,ABP,L VP及± dp/ dtmax有降低作用 ;3在 U 5 0 ,488H存在的情况下 ,激动 β- AR所引起的 L VP的升高可被显著抑制 .结论　 1U5 0 ,488H对心脏具有负性肌力作用 ;2 U5 0 ,488H可抑制β- AR的正性肌力作用 ,提示κ-阿片受体对β-AR具有负性调节作用 .     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)拮抗大鼠心肌细胞缺氧 /复氧(hypoxia/reoxygenation ,H/R)损伤的机制。 方法 :H/R处理的大鼠心肌细胞的孵育液中 ,对照组不加任何处理因素 ,其它各组分别加bFGF(10 μg·L-1)、bFGF与丝裂素活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)、蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)抑制剂H7(40 μmol·L-1)、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (NG nitro L argininemethylester,L NAME ,5 0 μmol·L-1)。孵育完毕 ,测定细胞活力、ATP含量及孵育液中乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenase,LDH)含量。 结果 :H/R组心肌细胞活力较对照组降低 32 % (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量减少 5 8% (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性增加 5 .8倍 (P <0 .0 1) ;bFGF组心肌细胞活力较H/R组增高 17% (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量增加 45 % (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性降低 31% (P <0 .0 1) ,细胞PKC、MAPK活性分别增加 32 % (P <0 .0 1)和 10 % (P <0 .0 5 )。PD980 5 9、H7、PD980 5 9+H7及L NAME各组心肌细胞活力较bFGF组分别降低 13%、17%、2 4%和 2 7% (均P <0 .0 1) ,细胞ATP含量分别减少 2     

κ阿片受体对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：采用选择性κ阿片受体激动剂U50488H激活κ阿片受体，研究大鼠发生心肌缺血-再灌注损伤时κ阿片受体介导的心脏保护作用。方法：建立心肌缺血-再灌注损伤动物模型，将实验大鼠按随机原则分组，监测大鼠心率（HR）、动脉压（ABP）、左心室内压（LVP）及收缩（＋dp／dtmax）和舒张功能（-dp／dtmax）等血流动力学指标，观察κ阿片受体激活后对心肌缺血-再灌注损伤大鼠心肌超微结构、心肌梗死面积、心律失常以及心肌酶谱等方面的影响。结果：①U50488H可显著降低大鼠HR、ABP、LVP及．4-dp／dtmax。②在心肌缺血前预先给予U50488H具有心脏保护作用，具体表现在可以减轻缺血-再灌注大鼠心肌超微结构的损伤、缩小心肌梗死面积、降低缺血-再灌注性心律失常的发生以及减少心肌酶的漏出。结论：U50488H具有负性肌力作用，可通过激活心脏κ阿片受体发挥心脏保护作用。上述作用可被选择性κ阿片受体阻断剂Nor—BNI阻断。     

5-羟色胺对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的　观察 5 -羟色胺 (5 - HT)对新生大鼠心肌细胞内游离 Ca2 + 浓度的影响 ,并探讨其作用机制 .方法　培养 SD大鼠 (1～ 3d)心肌细胞 ,应用特异性 Ca2 +荧光指示剂 Fluo- 3/AM负载细胞 ,激光共聚焦显微镜检测游离 Ca2 + 浓度 .结果　 5 - HT在 10 - 6 ,10 - 5,10 - 4 m ol· L- 1 时均可升高心肌游离Ca2 + 浓度 ,且随剂量增加而加强 ;二氢吡啶类钙通道阻断剂lacidipine可部分拮抗 5 - HT的作用 ;心肌肌浆网内钙释放通道 ryanodine受体调节剂 ryanodine,在 10 - 5mol· L- 1 时也可部分拮抗 5 - HT的作用 ;用 EGTA络合细胞外液中游离Ca2 + ,5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 作用明显减弱 ;此外 ,5 - HT二型受体 (5 - HT2 R)阻断剂赛庚定具有显著抑制 5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 的作用 .结论　 5 - HT具有升高心肌游离 Ca2 + 的作用 ,其机制可能与细胞外 Ca2 +经 5 - HT2 R或二氢吡啶类钙通道进入细胞以及肌浆网内钙释放有关     

原钒酸钠的细胞毒理学实验研究

目的　探讨原钒酸钠 (SOV)对心肌细胞的毒性作用及其机制。方法　采用循环灌流的方法急性分离成年豚鼠心肌细胞 ,使其在原钒酸钠浓度为 1,10 ,10 ,10 0 μmol·L- 1 ,1mmol·L- 1 作用后 ,分别检测 30 ,6 0 ,12 0 ,180min 4个时相心肌细胞保存液中LDH、CK含量以及心肌细胞蛋白量和Na+ ,K+ ATP酶活性 ,检测心肌细胞凋亡率和细胞活力 ;电镜下观察死亡和凋亡细胞的细胞器和细胞核形态学变化。结果　在原钒酸钠 10 0 μmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 两个组的各时相保存液中LDH、CK以及心肌细胞中蛋白含量增加 ;心肌细胞中Na+ ,K+ ATP酶活性和细胞活力降低 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。流式细胞仪显示 :在180min时 10 0 μmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 两组的细胞凋亡率与对照组相比增加 (P <0 .0 5 )。结论　在原钒酸钠浓度高于 10 0 μmol·L- 1 且作用时间在 30min以上时 ,心肌细胞出现不可逆性损害。     

丝裂素活化蛋白激酶参与AngII诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ;以 10 -5mol·L-1PD980 5 9(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂 )预孵育 30min10 -7后再用AngII刺激为PD980 5 9组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ;免疫印迹法测定培养 2 4h时心肌细胞PDGF - β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 2 4h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,PD980 5 9可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。结论　丝裂素活化蛋白激酶参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响

目的　观察卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响 .方法　采用培养的第 2代心肌细胞 ,随机分成 4组 :1正常对照组 :仅用 DMEM培养 ;2羟自由基组 :OH-终浓度为 10 - 4 m ol· L- 1 ;3卡托普利组 :卡托普利终浓度为 10 - 5mol· L- 1 ;4卡托普利 +羟自由基组 :卡托普利10 - 5mol· L- 1 +10 - 4 mol· L- 1 OH- .观察心肌细胞存活率和形态学 ,流式细胞仪双标法检测细胞凋亡率 .结果　 1羟自由基组心肌细胞存活率降低 ,和对照组比较有显著性差异(P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组细胞存活率较羟自由基组高 (P<0 .0 5 ) . 2 Annexin V+/PI- 细胞即凋亡细胞在羟自由基组有较高的发生率 ,明显高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组的细胞凋亡率显著低于羟自由基组 (P <0 .0 5 ) . 3羟自由基组凋亡心肌细胞呈特征性超微结构 .结论　卡托普利能减轻外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡     

U50488H对缺血再灌注大鼠血流动力学和心肌超微结构的影响

目的 :研究选择性к阿片受体激动剂U5 0 4 88H对缺血再灌注大鼠血流动力学及心肌超微结构的影响 .方法 :实验大鼠随机分为 4组 ,即对照组 (Control) ,缺血再灌注组 (I/R) ,U5 0 4 88H组和U5 0 4 88H +I/R组 ,监测大鼠心率 (HR)、动脉压 (ABP)、左心室内压 (LVP)及收缩 (dp/dtmax)和舒张功能(-dp/dtmax)等血流动力学指标的变化 ,并观察各组大鼠的心肌超微结构 .结果 :①U5 0 4 88H可显著降低大鼠HR ,ABP ,LVP和 (±dp/dtmax) ;②缺血再灌注前预先给予U5 0 4 88H ,可明显减轻心肌缺血 /再灌注对大鼠心肌超微结构的损伤 .结论 :①U5 0 4 88H的降压作用可能与其负性肌力作用有关 ;②预先给予U5 0 4 88H具有心脏保护作用 ,可明显减轻心肌缺血 /再灌注对大鼠心肌超微结构的损伤     

5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响

目的　研究 5 - HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制 .方法　采用 Ca2 +指示剂 Fluo- 3/ AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞 ,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化 .结果　基础状态下 SFSMC[Ca2 + ]i 荧光强度 (FI)为 2 6 4± 15 ,5 - HT 10μmol· L- 1 使荧光强度的变化 ΔFI为 16 .5± 2 .6 ;细胞外无钙时 ,5 - HT升高[Ca2 + ]作用被减弱 ,但除去细胞外钙 ,并使用内罗啶 (ryan-odine)孵育后 ,5 - HT 不再引起荧光强度的变化 ;10μmol· L- 1 米安舍林 (mianserin)可部分拮抗 5 - HT升高[Ca2 + ]i 的作用 ,赛更定 (cyprohetadine)不能抑制 5 - HT升高的胞内钙 ;Mn92 0 2和拉西地平 (lacidipine)均能完全抑制 5 -HT升高 [Ca2 + ]i 的作用 .结论　 5 - HT可通过促进外钙内流及钙池 (SR)释放使 [Ca2 + ]i 升高 ;在胃底平滑肌 5 - HT升高胞内钙部分通过 5 - HT2 受体 ,而不是通过 5 - HT1 C受体 ;5 -羟色胺通过 L型钙通道促外钙内流 ;二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞 L 型钙通道 ,而完全抑制 5 - HT促胞内钙升高的作用     

κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注损伤的直接保护作用

目的：探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注（I/R）损伤冠状微循环和心肌超微结构的影响,明确其对I/R心肌是否具有直接保护作用.方法：将32只大鼠随机分为4组,即假手术组,I/R组,U50488H＋I/R组和Nor-BNI（特异性阿片受体阻断剂）＋U50488H＋I/R组,每组8只.实验组通过开胸结扎冠脉前降支制备大鼠I/R模型,观察各组大鼠心肌超微结构和冠状微循环的改变.结果：①U50488H＋I/R组与I/R组和Nor-BNI＋U50488H＋I/R组比较,微血管显著扩张（P〈0.05）,毛细血管腔内血细胞明显减少,心肌间质中偶见红细胞.②U50488H＋I/R组与I/R组和Nor-BNI＋U50488H＋I/R组比较,心肌超微结构损伤明显减轻.结论：U50488H可通过激活心脏κ-阿片受体,明显改善大鼠I/R心肌的微循环,减轻心肌超微结构的损伤,从而发挥对心脏的直接保护作用,该作用可被选择性的κ-阿片受体阻断剂Nor-BNI所拮抗.