基于核蛋白的麻疹病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

目的 以原核系统表达的麻疹病毒核蛋白作为包被抗原,初步建立检测麻疹病毒抗体的间接ELISA方法,并将其应用于人群抗体水平的评估。方法 对各项实验条件进行筛选和优化,确定间接ELISA法的操作流程,并检测了157份健康儿童和新生儿母亲血清中的抗麻疹病毒IgG抗体,与商品化麻疹病毒ELISA IgG抗体检测试剂盒进行比较。结果 本研究建立的间接ELISA方法批内和批间的重复性试验变异系数均小于10%,与试剂盒检测结果相比,血清标本的总符合率为95.5%,灵敏度和特异度分别可达94.8%和98.3%。其中,两种方法检测的85份0～15岁健康儿童血清麻疹病毒IgG抗体阳性率,无论是<8月龄组或8月龄～15岁组,结果差异均无统计学意义(χ2＝0.313,P>0.05;χ2＝0.000,P>0.05),且通过本研究所建立的ELISA方法检测的麻疹病毒抗体水平表现出与试剂盒检测结果在不同年龄组一致的增减趋势,两种方法定量结果的相关系数r为0.893(P<0.001),显示出该方法具备的定量潜力。结论 本研究建立的ELISA方法具有良好的稳定性,且灵敏度高、特异度强,与商品化试...     

FQ—PCR测定HBV DNA与ELISA检测HBV—M相关性分析

目的探讨HBV DNA含量与HBsAgS／CO值之间的相关性。方法分别用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测100例乙肝患者的HBV DNA含量和乙肝两对半．并记录HBsAg S／CO值。结果100例乙肝患者HBV DNA含量对数值为（4．28±1．89），HBsAg S／CO值为（15．09±6．64），两指标间作相关性分析，r=-0．0156，P〉0．05，无相关性。结论HBV DNA是判断乙肝病毒复制的较准确、较直接的抗乙肝病毒疗效观察指标，而HBsAg S／CO值的高低与疾病的严重程度及疗效无关。     

精氨酸酶1在食管癌患者外周血的表达及其临床意义

目的检测精氨酸酶1(arginase1,Arg1)在食管癌中的表达,分析其与髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressorcells,MDSCs)消长的关系,探讨癌症患者机体免疫抑制状态的可能机制。方法应用流式细胞术检测30例食管癌患者PBMC中的MDSCs比例;实时荧光定量PCR检测PBMC中Arg1、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆Arg1,IL-6和TNF-α含量。结果食管癌患者外周血PBMC中MDSCs比例及Arg1的mRNA水平均明显高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-α的mRNA水平均低于健康对照组(P<0.05)。食管癌患者血浆Arg1含量高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-a含量与健康对照组相比无明显差异(P>0.05)。此外,食管癌患者Arg1 mRNA水平和蛋白水平均与MDSC含量呈正相关(P<0.01)。结论 Arg1在食管癌患者外周血中的高表达与MDSCs水平和食管癌的发生、发展有着密切的关系,其检测将有助于临床食管癌的辅助诊断和预后判断。     

性传播疾病实验检测综述

本文对性传播疾病主要的实验检测方法作以简单综述,使广大患者和医务工作者认识和了解这些实验检测方法的临床应用价值,为性传播疾病的早期筛查、早期诊断和早期治疗提供一定的理论根据,为广泛开展婚前体检、优生咨询、产前保健、新生儿疾病筛查等工作奠定基础.     

应用荧光定量PCR及ELISA法检测弓形虫感染分析

目的 :为了准确检测产前优生咨询妇女弓形虫感染及掌握不同时期弓形虫的量值变化情况。方法 :本室采用荧光定量PCR技术并结合ELISA法同时对 16 98例产前妇女进行联合检查。并将其结果进行对照分析。结果 :发现ELISA不同抗体阳性率和荧光定量PCR阳性率在检测结果上有一定的差异。在ELISA抗体仅一项阳性的患者中 ,IgG抗体阳性其荧光定量PCR检测值也为阳性的百分率最高 ,达 88.9% ,(P >0 .0 5 ,无差异 )。其次为IgM抗体阳性 ,符合率达 6 2 .5 % (P <0 .0 5 ,有差异 )。Cag循环抗原阳性最低 ,仅 31.8% (P <0 .0 1,有显著差异 )。在二项抗体同为阳性的患者中 ,IgG和IgM双阳其荧光定量PCR检测也为阳性的百分率最高 ,达 98.5 %。IgG与Cag双阳、IgM与Cag双阳的分别为 86 .8%、85 .4%。对 3项抗体全为阳性的 3名患者来说 ,两种方法结果一致。另外在 12 14名ELISA阴性的患者中 ,用荧光定量PCR法仍检测 5例阳性 ,阳性率为 0 .41%。结论 :由于荧光定量PCR技术增加了探针杂交 ,它的特异性及准确性都大大提高 ,可靠程度优于ELISA ,具有重要的临床参考价值。但在人体感染的某些时期 (Igm ,Cag单项阳性时 )荧光定量PCR法也会存在漏诊的情况。由此可见 ,这两种方法都各有其优缺点 ,只有将两种方法有机结合起来 ,才能对弓     

ELISA法与RFFIT法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体的比较

目的比较狂犬病疫苗免疫后血清抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）与快速免疫荧光灶抑制试验（RFFIT）两种检测方法。方法对93名研究对象采用0、3、7、14和28d程序进行暴露后免疫，分别采用ELISA法与WHO认可的金标法RFFIT法检测免疫DO、D3、D7、D14、D45d的血清抗体。结果免疫DO、D3、D7、D14、D45dELISA法检测抗体阳性率分别为8．6％、11．8％、22．6％、49．6％、86％，RFFIT法检测抗体阳性率分别为0％、0％、22．58％、100％、100％，ELISA法与RFFIT法阳性符合率分别为0％、0％、34.8％、100％、100％；阴性符合率分别为100％、100％、81．4％、0％、0％。结论ELISA法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体，免疫早期DO、D3、D7假阳性率较高，免疫D14、D45则假阴性率较高。建议采用WHO认可的方法做检测。     

检测IL-8的ELISA间接夹心法的建立

利用抗IL-8的单克隆抗体4C3(包被抗体)和免抗IL-8多克隆抗体(第二抗体)建立了检测IL-8的间接夹心法ELISA,当包被抗体浓度为0.5μg/ml、第二抗体浓度为2μg/ml时,其检测下限可达1ng/ml。初步应用此法在部分感染病人血清中检测到明显高于正常人水平的IL-8。     

ELISA法检测江门地区性病门诊患者生殖支原体抗原

目的应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测性病门诊患者泌尿生殖道生殖支原体（Mg）抗原，探讨江门地区性传播疾病（STD）门诊患者Mg感染状况。方法采用Mg多克隆抗体，标记酶结合物，建立检测Mg抗原的双抗体夹心ELISA法，对性病门诊患者泌尿生殖道分泌物进行MIg抗原检测。结果双抗体夹心ELISA法可检测到5μg／ml蛋白浓度，除肺炎支原体外与其他泌尿生殖道常见支原体和细菌无交叉反应；共检测了174例标本，Mg抗原阳性33例，阳性率为18．97％，其中男性和女性阳性率分别为19．88％和7．69％；男性患者中，非淋菌性尿道炎（NGU）、淋病、前列腺炎患者的Mg抗原阳性率分别为13．43％、62．5％和4．84％。结论STD门诊患者存在Mg感染，应用双抗体夹心ELISA法检测Mg抗原具有一定的灵敏度，且具有快速、简便的特点，适合临床筛查Mg抗原。     

乙肝标志物ELISA检测不同方法的比较研究

目的 探讨全自动ELISA系统检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb(HBV-M)是否在重复性、准确度等方面优于手工法和半自动法,为其更好地在临床实验室开展工作提供进一步的数据和基础.方法 用以上各项指标的弱阳性质控品,分别做手工法、半自动法和全自动法的批内和批间重复性试验.另用三种方法分别检测临床血清标本,每项810人份.定性结果不完全一致的标本,HBsAg用中和法做确证试验,其余四项用化学发光法作为参考方法进行验证.结果 批内与批间重复性比较,全自动法的CV小于手工法和半自动法.三种方法检测临床标本,定性结果两两比较,均显示一致性非常好(k＞0.8,P＜0.05);进行卡方检验,除HBcAb的半自动法阳性率显著高于全自动法(P＜0.0125)外,其余项目三种方法两两比较,均无显著性差异(P ＞0.0125).经过确证/参考试验验证,全自动法、半自动法、及手工法不完全一致的标本,HBsAg17份,符合个数分别为15、9和4;HBsAb 24份,符合个数分别为17、13、7;HBeAg 9份,符合个数分别为7、2、5;HBeAb 34份,符合个数分别为19、16、19;HBcAb 36份,符合个数分别为28、15、19.结论 ①全自动法比半自动法和手工法具有更好的重复性.②三种方法有非常好的一致性,均能较好的诊断乙型肝炎.③全自动法ELISA检测HBV-M比半自动法和手工法准确度更高,可进一步提高这些项目的检验质量.     

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的效果评价

目的 观察应用实时荧光PCR检验法检测乙肝病毒DNA的效果,为临床提高诊断乙型肝炎病毒的准确性提供思路。方法 选取2015年11月~2018年7月于本院就诊的458例乙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均经标准的abbot药盒检测确诊,其中大三阳患者241例,小三阳患者217例。患者入院后均采集空腹静脉血,制样本后采用酶联免疫吸附检验法和实时荧光PCR检验,比较两种检验方法对患者乙肝类型的阳性检出率。结果 实时荧光PCR检验法对大三阳的阳性检出率为95.43%,小三阳的阳性检出率为69.58%,均高于酶联免疫吸附检验法的85.06%、55.76%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 实时荧光PCR检验法可直观的反映乙型肝炎病情状况,具有较高的诊断效果,临床医师可在实际工作中根据患者经济、病情等综合因素进行选用。     

Studies by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) of Antiplatelet Antibody and Transient Neonatal Thrombocytopenic Purpura*

ABSTRACT: Autoimmune thrombocytopenic purpura (ATP) is an antibody-mediated autoimmune disease of platelets. Transplacental passage of the antibody during pregnancy can result in transient neonatal thrombocytopenia, but it is not known why some infants of antibody-positive, thrombocytopenic mothers are not affected. We have developed a competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to measure circulating antiplatelet antibody and have used this technique to investigate the influence of maternal titers on the occurrence of neonatal thrombocytopenia. The assay is sensitive over a range of 12.5 to 800 ng of immunoglobulin G (IgG) per microtiter well and closely correlates with the complement lysis inhibition assay (CLIA) for antiplatelet antibody (correlation coefficient = 0.726). In many instances, the level of circulating antiplatelet antibody in maternal and cord bloods reflected the degree of maternal and neonatal thrombocytopenia, but several important exceptions were observed. We suggest that levels of antiplatelet antibody in the maternal blood and cord blood are not always predictive of the degree of neonatal thrombocytopenia.     

Comparison of a chemiluminescence immunoassay and an enzyme immunoassay for detection of IgM antibodies against measles,mumps, rubella,cytomegalovirus (CMV), Epstein Barr virus (EBV), and human herpes virus (HHV) -1 and -2 infections

PurposeOutbreaks of vaccine-preventable viral diseases have been increasingly reported globally over the past few years. The burden of congenital viral infections, their impact on physical and mental development and the resulting economic loss to the family and the community are also well known. IgM antibody detection has been convenient in the diagnosis of acute viral infections, particularly in settings with limited resources where molecular tests are not feasible.MethodsThis is a comparative study between a chemiluminescence immunoassay (Liaison, DiaSorin, Saluggia, Italy) and an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) (Euroimmun, Lubeck, Germany) for the detection of IgM antibody against measles, mumps, rubella, CMV, EBV and HHV-1 and -2 viruses using a total of 345 samples. Results are expressed as agreement using kappa statistics.ResultsIn this study, CLIA is perfectly comparable to ELISA for the detection of IgM antibodies against measles (0.86) and mumps (0.92) with a moderate agreement for rubella (0.52), CMV (0.57), EBV (0.50), and HHV-1 and -2 (0.47) assays. However, a PABAK (prevalence-adjusted bias-adjusted kappa) showed improved agreement for rubella (0.64), CMV (0.65), EBV (0.60), and HHV-1 and -2 (0.88) assays.ConclusionsIgM antibody assays (CLIA and ELISA) against measles and mumps virus can be comparably used depending on the laboratory setup, throughput and expertise.     

Development of a High-specificity Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) System for the Quantification and Validation of Intact Rat Osteocalcin

Osteocalcin (OC) exhibits hard tissue-specific expression and binding activity to hydroxyapatite. Therefore, measurement of secreted OC is a very useful index for evaluating osteoblastic differentiation in regenerative bone. In the present study, we established a high-specificity sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system for the quantification of intact rat OC, which could be useful for validating tissue-engineered bone samples nondestructively and continuously. The range of detection with the sandwich ELISA system was 0.1–100 ng OC/mL of cell culture media or rat sera. No cross-reactivities were detected with OCs from other species, including human, bovine and mouse OCs, and other mammalian sera, which would contain the corresponding endogenous OCs. The intra- and inter-assay coefficients of variation were ≤4.9% and ≤5.9%, respectively. Recovery tests only showed variation between 89.4% and 103.7%. Using the newly developed direct sandwich ELISA system, we found that the secreted OC levels from rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells during osteogenic differentiation with dexamethasone were significantly higher than those from cells undergoing non-osteogenic or adipogenic differentiation. It was established that this ELISA system would be suitable for quantitative assessment of bone formation by cultured cells with or without scaffolds in rat experimental models.     

Monoclonal Antibodies Against Human Angiotensinogen,Their Characterization and Use in an Angiotensinogen Enzyme Linked Immunosorbent Assay

Abstract

Monoclonal antibodies were produced against human angiotensinogen.

An enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using a high affinity monoclonal antibody as catching antibody and a polyclonal rabbit anti human agiotensinogen antibody as detecting antibody in a “sandwich” ELISA.     

7832例孕妇HCMV-IgM的检测分析

目的为了解孕妇人巨细胞病毒（HCMV）近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对7832例孕妇的静脉血标本进行了HCMV-IgM检测。结果在7832例孕妇中检测出HCMV-IgM阳性标本67例,阳性率为0.86%。结论在孕妇中巨细胞病毒有一定的近期感染率。     

化学发光法和酶联免疫法在乙型肝炎病毒血清学检验中的效果比较

目的 比较化学发光法和酶联免疫法在乙型肝炎病毒血清学检验中的效果。方法 选取2017年2月~2019年5月我院收治的疑似乙型肝炎患者63例作为研究对象,均予以酶联免疫法、化学发光法进行血清学检验,以荧光定量PCR为金标准,比较两种检验方式准确性、血清学指标检出率。结果 共63例疑似乙肝患者,荧光定量PCR检验阳性38例、阴性25例;酶联免疫法和化学发光法中准确度、灵敏度、特异度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。38例乙肝阳性患者中,酶联免疫法HBsAb、HBcAb阳性检出率与化学发光法比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;酶联免疫法HBeAb、HBeAg、HBsAg阳性检出率低于化学发光法,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 乙型肝炎病毒血清学检验中,采用酶联免疫法、化学发光法均具良好诊断效果,但在血清标志物检验中,化学发光法检出效果更佳,有利于保证临床诊断准确性。     

9382例孕妇风疹病毒近期感染的检测分析

目的为了解孕妇风疹病毒(RV)近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对9382名孕妇和 125名孕前检查的健康妇女静脉血标本进行了RV-IgM检测。结果在9382名上述孕妇中检测出RV-IgM阳性标本50例, 阳性率为0．53％,在125例健康妇女中未检测到RV-IgM阳性标本。结论在孕妇中风疹病毒有一定的近期感染率。     

免疫酶法与ELISA法检测EB病毒VCA-IgA的比较

为探讨免疫酶法与ELISA在鼻咽癌诊断中的临床价值,检测鼻咽癌组患者与健康对照组血清EB病毒壳抗原抗体,并对两种检测方法的结果进行分析。结果表明：177例鼻咽癌患者中,免疫酶法检测EB-VCA-IgA阳性率高92．1％（163／177）,而国产试剂和进口试剂ELISA法检测结果阳性率都较低,分别为65．0％（115／177）和67．2％（119／177）,有显著性差异（P〈0．005）;在90名对照组血清EB-VCA-IgA,免疫酶法的阴性率为100％（90／90）,ELISA法中的国产和进口试剂的阴性率分别为：98．9％（89／90）和95．6％（86／90）,无显著性差异（P〉0．05）。为此免疫酶法检测EB-VCA-IgA的灵敏度较高,更适合用于鼻咽癌的普查、协助诊断等,具有实际临床意义。     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增,扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交,通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中,HCV RNA的检出率为57．9％（88／152）,其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示,HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异,为半定量指标,可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。