紫杉醇对骨肉瘤细胞放射增敏作用的研究

目的观察体外环境下紫杉醇对骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞的放射增敏效果及其与药物作用时间的关系。方法以MG-63细胞为实验对象,采用MTT法检测不同浓度紫杉醇（6、0.6、0.06、0.006和0.000 6μg/mL）对MG-63细胞的抑制作用,确定IC10作为后续实验的药物浓度;采用克隆形成分析法分别测定MG-63细胞在紫杉醇作用24h后照射以及单纯照射的存活分数（SF）,拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比,分析紫杉醇对MG-63细胞的放射增敏作用;采用克隆形成分析法测定紫杉醇作用于MG-63细胞12、24和36h后细胞生存率的变化,确定最佳照射时间。组间比较采用单因素方差分析。结果 MTT实验结果显示,当紫杉醇浓度分别为0.000 6、0.006、0.06、0.6和6μg/mL时,其细胞抑制率分别为（3.25±2.58）%、（9.98±3.83）%、（20.35±3.91）%、（21.55±3.70）%和（55.36±4.67）%。提示,紫杉醇对MG-63细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性,F=83.70,P〈0.01,IC10为0.01μg/mL;IC10浓度紫杉醇増敏比分别为1.14（D0比）、1.20（Dq比）和1.08（SF2比）;MG-63细胞α/β值为2.23,IC10浓度紫杉醇作用后α/β值为2.32。紫杉醇作用于MG-63细胞12、24和36h后再进行照射,细胞存活分数分别为（9.21±0.81）%、（5.39±0.75）%和（0.38±0.13）%,显著低于对照组的（12.86±1.07）%,差异有统计学意义,F=144.11,P〈0.01。结论紫杉醇对MG-63细胞有放射增敏作用,增敏作用呈时间依赖性,有一定的临床应用前景。     

放射增敏剂的增敏机制

放射线入射生物体后，直接损伤生物大分子DNA，或通过其产生的自由基的间接作用，导致DNA损伤或细胞死亡等生物效应。这种应用放射效应治疗肿瘤的方法，就是放射治疗（放疗）。目前放疗已成为肿瘤治疗的主要手段之一．每年接受放疗的癌症患者约为60％～70％，恶性肿瘤放疗的5年生存率逐步提高，90年代已达45％，立体定向及三维适形放疗调强放疗的广泛应用，明显提高了治疗的精度及治疗剂量，保护了肿瘤周围的正常组织，但大多数恶性肿瘤患者的长期生存率却没有明显的提高。     

多西紫杉醇放射增敏治疗非小细胞肺癌研究进展

多西紫杉醇对多种肿瘤细胞系有毒性作用，可以直接诱导肿瘤细胞凋亡，临床上治疗非小细胞肺癌（NSCLC）有较好效果。目前研究表明该药还具有放射增敏作用。文章对多西紫杉醇放射增敏机制和放射增敏治疗晚期NSCLC的临床Ⅰ期、Ⅱ期试验结果及多西紫杉醇放射增敏的优势进行综述。     

肿瘤放射增敏剂及增敏机制研究进展

放射增敏剂是指能增强射线对肿瘤内乏氧细胞的杀灭作用而对有氧的正常组织一般损伤较小的一些化学物质。本文主要介绍了放射增敏剂的研究进展。从影响肿瘤放射敏感性因素入手,详细叙述了放射增敏剂的种类、主要作用机制和发展趋势。     

肿瘤放射增敏剂及增敏机制研究进展

放射增敏剂是指能增强射线对肿瘤内乏氧细胞的杀灭作用而对有氧的正常组织一般损伤较小的一些化学物质.本文主要介绍了放射增敏剂的研究进展.从影响肿瘤放射敏感性因素入手,详细叙述了放射增敏剂的种类、主要作用机制和发展趋势.     

拓扑替康对裸小鼠鼻咽癌放射增敏作用的分子水平探讨

目的:探讨拓扑替康(TPT)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放射增敏作用的基因水平机制。方法:应用实时荧光定量RT-PCR技术检测放射增敏实验各组(TPT RT组,TPT组,RT组,生理盐水对照组)肿瘤标本中拓扑异构酶I(拓扑异构酶-I)基因mRNA表达水平。结果:制作的定量标准曲线线性相关系数为-0.99。各组的结果为:RT TPT组45±2.128拷贝数/μl;TPT组2112±1.208拷贝数/μl;RT20Gy组1699±1.317拷贝数/μl;生理盐水对照组3559295±1.154拷贝数/μl。TPT RT组的拓扑异构酶-I基因mRNA表达水平最低,与TPT组,RT20Gy组比较差异有统计学意义(P<0.05);各组与生理盐水对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:拓扑替康和放疗同时使用影响鼻咽癌细胞拓扑异构酶-I基因活性水平,使其下降,可能是其增敏作用在分子水平的重要机制。     

多烯紫杉醇对人肝癌细胞的放射增敏作用

多烯紫杉醇是继紫杉醇后又一种新型抗微管药物 ,与紫杉醇相比多烯紫杉醇从细胞内外流较少且低剂量诱导细胞凋亡效应显著。许多体外和临床研究均证实多烯紫杉醇对多种肿瘤细胞有放射增敏作用且不加重正常组织的放射损伤 ,但多烯紫杉醇在肝癌放射增敏方面的研究尚未见报道。一、材料和方法1.药品和试剂 :多烯紫杉醇为法国罗纳普朗克乐安公司产品。2 .细胞培养 :人SMMC 772 1肝癌细胞由复旦大学肝癌研究所提供 ,培养于含 10 %新生牛血清 (杭州四季青生物工程公司 )RPMI16 4 0 (Gibco BRL)培养液中 ,另加 10 0U/ml青霉素 ,10 0 μg/ml链霉…     

紫杉醇联合放射线照射对鼻咽癌细胞的放射增敏效应

目的探讨化疗药紫杉醇(PTX)联合放射线照射对鼻咽癌细胞的放射增敏作用。方法取指数生长期的CNE-I细胞,采用克隆形成分析法检测PTX的单药毒性,确定IC10、IC50和IC90剂量作为实验的药物浓度。分析照射前后PTX IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h,照射剂量分别为0～10 Gy时对CNE-I细胞的放射增敏效应。采用流式细胞术分析不同浓度PTX作用0、2、6、12、18和24 h CNE-I细胞周期分布的变化。结果PTX对CNE-I细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0.05、1.0和2.5 nmol/L。当小剂量照射前后,分别用0.05和1.0 nmoL/L PTX作用24 h,具有一定放射增敏作用。PTX浓度为2.5和10.0 nmol/L时,CNE-I细胞出现明显的G2/M期阻滞,高峰出现在18 h。结论在适当的结合序贯的基础上,PTX联合放射线照射对CNE-I细胞具有放射增敏效应,其增敏作用可能与PTX导致的细胞G2/M期阻滞相关。     

紫杉醇和吉西他滨对鼻咽癌HNE_2细胞系协同放射增敏的作用

 目的观察紫杉醇、吉西他滨两药联合对鼻咽癌细胞系HNE2的放射增敏作用,并探讨其可能机制。方法将HNE2细胞分为单纯照射组、吉西他滨(GE)+照射组、紫杉醇(PA)+照射组及GE+PA+照射组,用克隆形成实验计算两药物单用及合用的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较各组的细胞凋亡率及细胞周期变化。Westernblot法测定各组细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果吉西他滨、紫杉醇及两药联合使用的放射增敏比分别为1.06、1.13和1.34。流式细胞仪检测显示吉西他滨联合射线主要诱导S期阻滞(96.03%),诱导凋亡率为31.62%;紫杉醇联合射线引起的阻滞以G2+M期为主(75.71%),诱导细胞凋亡率为44.56%;两药合用并联合照射后G2+M期比例(65.98%)有所下降,同时S期比例(33.33%)有所上升(与PA+放射组比较),细胞凋亡率达到73.28%。在四组中bcl-2的表达呈逐步下降趋势,而bax的表达则呈逐步上升趋势。结论吉西他滨、紫杉醇单用及两药联合对鼻咽癌细胞系HNE2均有放射增敏作用,且两者协同增敏作用显著高于单独增敏作用,显示了两药联合应用有助于提高鼻咽癌的放射敏感性。两...     

泰索帝放射增敏作用的动物实验研究

研究表明泰索帝以浓度依赖性的、可逆性的与细胞内微管上的β-亚基N端第31个氨基酸直接结合，从而将细胞周期阻断在G2＋M期，提示它可能具有潜在的放射增敏效应。为此，通过动物肿瘤模型来观察泰索帝对C57BIf6小鼠Lewis肺癌放射敏感性的影响。     

紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制

目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。     

2-Methoxyestradiol and paclitaxel have similar effects on the cell cycle and induction of apoptosis in prostate cancer cells

2-Methoxyestradiol (2-ME) is an endogenous metabolite of estradiol with promise for cancer chemotherapy, including advanced prostate cancer. We have focused on events related to cell cycle arrest (G1 and G2/M) and induction of apoptosis in human prostate cancer cells. Treatment with 2-ME increased cyclin B1 protein and its associated kinase activity followed by later inhibition of cyclin A-dependent kinase activity and induction of apoptosis. Similar results were obtained with paclitaxel (taxol), a clinically relevant agent used to treat advanced prostate cancer. Cyclin-dependent kinase inhibitors prevented 2-ME and paclitaxel-mediated increase in cyclin B1-dependent kinase activity and blocked induction of apoptosis. Reduction of X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) protein by 2-ME and paclitaxel correlated with increased apoptosis. Lower doses of 2-ME and paclitaxel resulted in G1 (but not G2/M) cell cycle arrest in the p53 wild type LNCaP cell line, but with minimal induction of apoptosis. We suggest that 2-ME and paclitaxel-mediated induction of apoptosis in prostate cancer cells requires activation of cyclin B1-dependent kinase that arrests cells in G2/M and subsequently leads to the induction of apoptotic cell death.     

Cell cycle effect of gemcitabine and its role in the radiosensitizing mechanism in vitro

PURPOSE: The mechanism of radiosensitization by gemcitabine is still unclear. It has been hypothesized that the accumulation of cells in early S phase may play a role in enhancing radiosensitivity. METHODS AND MATERIALS: The schedule dependency of the radiosensitizing effect was studied in ECV304, human bladder cancer cells, and H292, human lung cancer cells, by varying the incubation time and time interval between gemcitabine and radiation treatment. To determine the role of cell cycle perturbations in the radiosensitization, the influence of gemcitabine on the cell cycle at the moment of radiation was investigated by flow cytometry. RESULTS: The radiosensitizing effect increased with a longer incubation period: Dose enhancement factors varied from 1.30 to 2.82 in ECV304 and from 1.04 to 1.78 in H292 after treatment during 8-32 h, respectively. Radiosensitization decreased with an increasing interval: Dose enhancement factors varied from 2.26 to 1.49 in ECV304 and from 1.45 to 1.11 in H292 after an interval 0-24 h, respectively. Cells were blocked in the early S phase of the cell cycle by gemcitabine. The highest percentage S-phase cells was observed after treatment with the schedules that resulted in the highest radiosensitizing effect. CONCLUSIONS: We observed a clear schedule-dependent radiosensitization by gemcitabine. Our findings demonstrated a correlation between gemcitabine-induced early S-phase block and the radiosensitizing effect.     

Loss of Cyclin B1 followed by downregulation of Cyclin A/Cdk2, apoptosis and antiproliferation in Hela cell line

Recent studies have shown that Cyclin B1 is overexpressed in various tumor types but present at low levels in normal tissues. To explore the possibility of employing Cyclin B1 as an anticancer target, we knocked down Cyclin B1 in an HeLa cell line using RNA interference (RNAi). Subsequently, we monitored cell cycle-related molecules by Western blot together with immunofluorescence and determined cell cycle distribution by flow cytometry. XTT and soft agar colony growth experiments were performed to detect cell viability and proliferation. Furthermore, we analyzed cell apoptosis by measuring Bcl-2 and Bax protein level and DNA-ladder assay. After performing Cyclin B1 RNAi, Cyclin B1, Cyclin A and Cdk2 protein levels were found to be markedly downregulated, whereas Cdc2 was almost unaffected; S-phase fraction increased significantly; HeLa cell viability and cell colony forming ability were markedly diminished after the RNAi; Bcl-2 was noticeably attenuated but Bax was hardly changed; and HeLa cells displayed typical DNA ladder. The loss of Cyclin B1 resulted in the downregulation of Cyclin A and Cdk2, S-phase delay and eventually led to cell apoptosis and the decrease of cell viability and proliferation. Our studies suggest that Cyclin B1 may be a promising anticancer target.     

唑来膦酸与紫杉醇体外协同抗肺腺癌细胞增殖及诱导凋亡的分子机制研究

  目的   探讨唑来膦酸（zoledronic acid,ZOL）及联合紫杉醇（paclitaxel,PTX）体外对人肺腺癌A-549细胞增殖影响及潜在机制。   方法   实验组包括不同浓度ZOL组、2 nM PTX组与ZOL联合应用PTX加药顺序不同3个组。MTT方法观测不同浓度ZOL与联合PTX对A-549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;RT-PCR检测各组ERK和AKT mRNA的变化;Western blot检测各组ERK、AKT蛋白表达及磷酸化水平和Bcl-2的表达。   结果   :ZOL能抑制A-549细胞生长,该作用随ZOL浓度增加而增强;ZOL与PTX具有协同抗肿瘤作用,作用大小与两药加药顺序有关,产生最大抑制作用的顺序为先PTX后ZOL;RT-PCR结果显示不同组ERK和AKT mRNA表达水平分别为空白对照组最高,单药ZOL组次之,再次为PTX组,先PTX后ZOL组最低;Western blot结果显示各实验组中ERK、AKT蛋白表达水平无差异,但ERK和AKT磷酸化水平有差异,分别为空白对照组最高,单药ZOL组次之,再次为PTX组,先PTX后ZOL组最低,Bcl-2的表达水平亦是如此。   结论   ZOL联合PTX可能通过下调RAF/MEK/ ERK信号通路中ERK基因mRNA的表达,降低ERK磷酸化水平,抑制ERK激酶活性,进而抑制A-549细胞生长和增殖;同时可能通过下调PI3K/AKT信号通路中AKT基因mRNA的表达,降低AKT磷酸化水平,进而减弱AKT活性,进一步降低抗凋亡蛋白Bcl-2水平,从而起到促凋亡作用。      

苦参碱对大鼠原发性肝癌防治作用及其机制的研究

目的:研究苦参碱对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导的大鼠原发性肝癌的防治作用及其可能的机制。方法:SD大鼠46只,模型组:21只,DEN35mg/kg灌胃,2次/周,共16周;苦参碱组:15只,DEN灌胃的同时给予苦参碱3mg/(kg.d)灌胃,共20周;空白对照组:10只,每日等体积生理盐水灌胃。大鼠肝脏HE染色观察病理改变,免疫组化SP法观察凋亡抑制蛋白Survivin、细胞周期蛋白Cyclin B1在肝脏的表达。结果:苦参碱组较模型组死亡率降低(40.0%vs76.2%),P<0.05;病理检查示,苦参碱组较模型组成癌率低(53.3%vs90.5%),P<0.05;免疫组化检测示,Survivin和Cyclin B1两种蛋白在模型组表达多,空白组表达少,苦参碱组表达较空白组多而较模型组少,苦参碱组与模型组比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:苦参碱对DEN诱导大鼠原发性肝癌有防治作用,其机制可能与降低Survivin及Cyclin B1表达有关。     

黄酮类化合物预防放射性肺损伤的分子机制

 放射性肺损伤是胸部肿瘤放疗的常见并发症。动物实验和临床研究表明,电离辐射所致的肺组织损伤是一个由多种细胞因子调控的复杂过程。其中核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和激活蛋白-1通过调控多种炎性蛋白的合成,参与放射性肺损伤的炎症反应。而黄酮类化合物则能通过对NF-κB和激活蛋白-1的抑制作用发挥放射防护的作用。     

沉默PKM2对人肺腺癌细胞系及移植瘤的放射增敏研究

目的 研究沉默丙酮酸激酶M2型(PKM2)对人肺腺癌细胞系(A549细胞)的放射敏感性及移植瘤的放射协同作用,并探索相关机制。方法 将PKM2基因干扰质粒pshRNA-PKM2稳定转染至A549细胞,同时设立空载质粒转染组和未转染组。采用蛋白印迹法检测A549细胞pshRNA-PKM2的沉默效率及微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平,克隆形成实验、移植瘤生长延迟法检测沉默PKM2后对A549细胞、移植瘤放射增敏效应,透射电镜观察A549细胞及移植瘤自噬形成,免疫组化法检测移植瘤中PKM2的表达水平。行Student′s t检验组间差异,裸鼠体重及移植瘤体积采用连续变量的方差分析。结果 成功获得转染pshRNA-PKM2的A549稳定细胞株。pshRNA-PKM2组可显著下调细胞和移植瘤PKM2的蛋白表达水平(P=0.001、0.000),对A549细胞的SER为1.47,移植瘤的SER为2.00。干扰PKM2可增加放射所诱导的自噬形成并增加LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P=0.0001)。结论 沉默PKM2调节自噬可能提高A549细胞及移植瘤的放射敏感性,其有望成为NSCLC有效放射增敏靶点,但有待进一步研究确认。