肿瘤干细胞的生物学特性及临床意义的研究进展

研究表明肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSC）起源于正常干细胞（stem cells,SC）的基因突变,SC的DNA受到损伤或处于与肿瘤相关的微环境是其发生基因突变,进而转化为CSC的主要原因。CSC可与肿瘤细胞相互转化,且与肿瘤细胞相比,其增殖和转移的速度更快,恶性程度更高,对化疗和放疗的耐受性更强。不同肿瘤的CSC生物学标记并不完全相同,即使是同一类肿瘤,因细胞系不同,生物学标记也有差异。CSC的生物学标记物也可以用于CSC的诊断、肿瘤的预后判断和治疗。因此,探索CSC的生物学标记和调控因子,并将其作为肿瘤的治疗靶标,开发相关的药物,将是未来CSC和肿瘤研究的重点。本文主要对肿瘤干细胞的起源、生物学特性及其临床意义进行了综述。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...     

肿瘤干细胞的研究新进展

近年来随着肿瘤干细胞（Gamer stem cells，CSC；或Tumour stem cells，TSC）在肿瘤组织中分离成功，并提出了肿瘤于细胞学说，为肿瘤研究提供了新的思路。肿瘤干细胞是存在于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞性质的细胞群体，均具有自我更新能力和不定向分化潜能，并可导致肿瘤发生。现认为肿瘤干细胞是肿瘤形成及其不断生长的根源。     

舌鳞癌组织中肿瘤干细胞的分离培养及PIWIL4对其的影响

目的：从人舌鳞癌组织中分离培养肿瘤干细胞细胞（CSC）,鉴定其生物学特性,并研究PIWIL4在CSC中的表达和意义。方法收集9例不同临床分期舌鳞癌患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133＋CD44＋细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL4 mRNA在CSC中的表达;裸鼠皮下接种CSC,观察其成瘤能力。结果成功的从人舌鳞癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSC,CSC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×10^4、1×10^5个CSC均可全部成瘤,PIWIL4 mRNA在CSC的表达也显著高于正常舌组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人舌组织中分离获得CSC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL4,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。     

抗人TLR9抗体对CpG寡核苷酸介导的人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的：观察细胞膜上的TLR9在CpG寡核苷酸（ODN）激活的信号转导通路中的作用。方法：采用抗TLR9抗体阻断人外周血单个核细胞（hPBMCs）表面的TLR9，观察细胞膜表面的TLR9是否与CpG ODN的内化和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的释放直接相关。结果：虽然CpG ODN和GpC ODN都能被细胞吞噬，但只有CpG ODN能够引起TNF—α释放；氯喹作为内体成熟抑制剂，在抑制这两种寡核苷酸降解的过程中无显著性差别；当使用抗人TLR9抗体阻断细胞膜表面的TLR9，对CpG ODN的内化、CpG ODN诱导的TNF-α释放以及氯喹对CpG ODN诱导hPBMCs释放TNF-α的抑制作用均没有显著影响。结论：细胞膜上的TLR9对CpG ODN的内化和hPB—MCs释放TNF-α没有直接影响。     

酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性粒细胞白血病的研究进展

慢性粒细胞白血病（Chronic myelogenous leukemia，CML）是一种以粒系增生为主要表现的获得性造血干细胞恶性克隆性疾病。95％以上患者骨髓细胞中有特征性的Ph染色体，即t（9；22）（q34；q11）或Bcr／Abl融合基因，该融合基因是CML发病的主要原因。Bcr／Abl融合基因产物激活结构性酪氨酸激酶，该激酶激活细胞中多条信号传导途径（如Ras／MAPK、PI3K／Akt、JAK／STAT），导致细胞增殖加快，生长因子依赖性减低，凋亡细胞减少，细胞外基质与基质细胞的相互作用受到干扰，最终导致造血细胞转化为异常增生的白血病细胞。因此，Bcr／Abl酪氨酸激酶被认为是最理想的分子靶向治疗的目标。     

哮喘大鼠肺组织Toll样受体3和9的表达及布地奈德的影响

目的 观察哮喘大鼠肺组织中Toll样受体3（TLR3）和TLR9的表达及对布地奈德的影响,探讨TLRs在哮喘炎症机制中的作用。方法 建立大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组和布地奈德组,免疫组织化学法检测肺组织TLR3和TLR9的表达。结果 哮喘组（OD值：0.201±0.034）和布地奈德组（OD值：0.195±0.043）肺组织TLR3的光密度值显著高于对照组（OD值：0.144±0.039）（P〈0.05）,布地奈德组与哮喘组差异无统计学意义。哮喘组（OD值：0.236±0.022）和布地奈德组（OD值：0.231±0.023）肺组织TLR9的光密度值均显著低于对照组（OD值：0.271±0.025）（P〈0.05）;布地奈德组与哮喘组差异无统计学意义;肺组织TLR3和TLR9蛋白的表达水平无显著相关性（n=26,r=0.153）。结论 哮喘大鼠肺组织TLR3蛋白表达升高,TLR9蛋白的表达则反之,TLRs的表达过度或不足可能是哮喘气道炎症的重要原因之一。布地奈德的抗炎作用可能主要不是通过TLR3和TLR9的途径实现。     

Toll样受体在自身免疫性疾病中的作用机制研究现状

Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）是近年来发现的一类模式识别受体,通过识别病原相关分子模式（pathogen associated molecular pattem,PAMP）,激活天然免疫。TLR信号还通过上调抗原提呈细胞（antigen presenting cells,APC）表面共刺激分子及APC分泌的炎症细胞因子调节获得性免疫。本文就TLR通过调节T、B淋巴细胞及TLR,MyD88信号通路在介导自身免疫性疾病中的作用机制以及其在皮肤病如系统性红斑狼疮等发病中的作用做一综述。     

CSC诱导BEAS-2B细胞恶性转化中miRNA表达谱变化

目的通过烟草烟雾凝集物(cigarette smoke condensate, CSC)慢性染毒永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B体外构建恶性转化细胞模型,miRNA芯片技术筛选模型中差异表达的miRNAs,发现与恶性转化相关的miRNAs,为进一步研究CSC诱导恶性转化的作用机制提供实验基础。方法 CCK-8检测细胞存活率,确定CSC染毒终浓度。划痕实验、克隆形成实验、MTT实验及凋亡检测评估细胞恶性转化情况。MiRNAs芯片检测BEAS-2B和CSC30组细胞,明确差异表达谱。表达下调的hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521进行RT-PCR验证。结果 CSC诱导的恶性转化细胞迁移能力、克隆形成能力和增殖活力明显增强,凋亡率明显下降。相对于BEAS-2B组,CSC30组细胞中有78种miRANs差异表达,其中52种表达上调,26种表达下调。RT-PCR验证hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521表达下调与芯片结果一致。结论 CSC可诱导BEAS-2B细胞发生恶性转化,采用miRNA芯片技术筛选到miRNA差异表达谱,其可能与CSC诱导恶行转化的发生发展有关。     

桑黄多糖对人TLR4信号通路的激活作用研究

目的 观察桑黄多糖（polysaccharide from Phellinus igniarius,PPI）对人Toll-样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）通路的激活作用及作用特点。方法 采用转染了人TLR4基因、分泌型胚胎碱性磷酸酶报告基因的HEK-Blue^TM hTLR4细胞模型,快速评价PPI对TLR4通路的激活作用,并用PMA诱导的THP-1细胞模型观察药物对TLR4通路作用的特点;MTT法检测细胞活性;ELISA法检测细胞因子分泌量;Real time PCR检测细胞mRNA表达水平。结果 PPI作用24 h不影响细胞活性,但能剂量依赖性地增加HEK-Blue^TM hTLR4细胞分泌型胚胎碱性磷酸酶的表达,并使THP-1细胞TLR4通路相关细胞因子TNF-α,IP-10分泌量增加。TLR4受体阻断剂TAK-242能显著降低PPI诱导的细胞因子分泌量（P<0.01）。Real-time PCR结果显示PPI既可以增加MyD88通路TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β、COX-2等细胞因子的mRNA表达,又可以增加TRIF通路IP-10、IFN-β等细胞因子的mRNA表达。结论 PPI对人TLR4受体具有直接激活作用,能同时激活TLR4下游MyD88和TRIF 2条分支,对TLR4分支通路的激活没有选择性。     

厚朴及其有效成分防治阿尔茨海默病和帕金森病的药理作用及机制研究进展

动物实验证实厚朴及其有效成分（厚朴酚、和厚朴酚等）具有防治阿尔茨海默病和帕金森病的药理作用。它们最主要的作用机制是抗氧化和抗炎作用：通过直接清除自由基和提高机体的核因子红系2-相关因子-2（Nrf2）抗氧化信号通路和抗氧化酶活性间接清除自由基的方式抑制活性氧生成；通过激活去乙酰化酶（SIRT），阻滞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶-B（Akt），细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Toll样受体-2（TLR2）/MAPK/核因子-κB（NF-κB）信号通路和促进线粒体自噬，抑制炎性细胞因子表达，保护脑神经（包括海马、黑质和纹状体等），表现出防治阿尔茨海默病和帕金森病的作用。     

肿瘤干细胞来源的DC-CIK 对同源肿瘤细胞的杀伤作用

【摘要】目的 观察干细胞负载树突细胞诱导的杀伤细胞（CSC-DC-CIK）作为效应细胞对同源肿瘤细胞的杀伤作用,探讨CSC 抗原参与肿瘤杀伤作用的可行性。方法 培养肾癌细胞株A498 和肺癌细胞株A549,用流式分选术分离纯化CD133+细胞,分别作为肾癌干细胞（KSC）和肺癌干细胞（LSC）,冻融法制备抗原。提取健康产妇脐带血的单个核细胞,体外扩增诱导生成DC 和CIK 细胞。分别用上述CSC 抗原负载DC,与CIK 共培养（CSC-DC-CIK）,流式细胞术分析DC 和CIK 细胞免疫表型,ELISA 法检测细胞因子分泌水平,用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测CSCDC- CIK 对同源肿瘤细胞的杀伤效率。结果CSC-DC 的DC 免疫表型CD40+、CD80+、CD86+及HLA-DR+的表达均高于单纯DC 的相应免疫表型的表达（P < 0.01）;DC、CSC-DC 与CIK 共培养后的DC 免疫表型CD40+、CD80+、CD86+ 及HLA-DR+的表达均高于共培养前（P < 0.01）;CSC-DC 与CIK 共培养后的DC 免疫表型CD40+、CD80+、CD86+及 HLA-DR+的表达高于DC 与CIK 共培养后的相应免疫表型（P < 0.01）;DC、CSC-DC 与CIK 共培养后的CIK 免疫表型CD3+、CD8+、CD56+的表达高于共培养前（P < 0.01）;CSC-DC 与CIK 共培养后的CIK 免疫表型CD3+、CD8+、CD56+ 的表达高于DC 与CIK 共培养后的CIK 相应免疫表型（P < 0.01）;DC、CSC-DC 与CIK 共培养后的IFN-γ、TNF-α和 IL-2 分泌水平高于共培养前（P < 0.01）;CSC-DC 与CIK 共培养后的IFN-γ、TNF-α和IL-2 分泌水平高于DC 与CIK 共培养后的相应细胞因子表达（P < 0.01）;KSC-DC-CIK 组和LSC-DC-CIK 组对靶细胞的杀伤率为（50.21±4.24）% 和（49.32±3.89）%,明显高于DC-CIK 组的（30.25±3.11）%（F=89.157,P < 0.01）。结论 CSC 抗原负载DC 活化CIK （CSC-DC-CIK）对同源肿瘤细胞有更好的杀伤作用,对其作用机制和临床应用的可能性尚需深入研究。     

波生坦联合曲前列尼尔对持续肺动脉高压新生儿红细胞分布宽度及血清褪黑素的影响

目的：通过柯里拉京（Cor）干预单纯疱疹病毒性脑炎（HSE）小鼠模型,分析柯里拉京对Toll样受体3（TLR3）信号通路的调控机制。方法：通过颅内注射单纯疱疹病毒1型（HSV1）建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,每天定时灌胃1次等体积的柯里拉京或生理盐水,在第5天断头处死小鼠,取出右侧颞叶病变脑组织进行苏木精-伊红（HE）染色,在显微镜下观察小鼠脑组织病理改变,通过实时定量（Real-time）PCR检测TLR3及其下游信号分子TLR结构域的干扰素诱导链接蛋白（TRIF）mRNA的表达情况,Western blot检测TLR3、TRIF蛋白表达情况,ELISA检测炎性组织细胞内干扰素α（IFN-α）的分泌情况。结果：HSE小鼠模型中TLR3及其下游分子TRIF的mRNA、蛋白表达及IFN-α的分泌均高于正常对照组（P<0.01）;柯里拉京干预可有效缓解动物脑组织的病理变化,且TLR3及其下游分子TRIF的mRNA、蛋白表达及IFN-α的分泌均低于正常对照组（P<0.01）。结论：柯里拉京能明显抑制小鼠小胶质细胞内TLR3通路达到缓解单纯疱疹病毒1型引起的脑组织的损伤。     

红景天苷介导TLR4调控小胶质细胞激活对小鼠抑郁样行为的改善作用

目的 探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导炎症抑郁模型小鼠的作用及机制。方法 48只Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、盐酸氟西汀（阳性药,20 mg/kg）组、红景天苷（25 mg/kg）组,每组12只。各组连续ig给药14 d后,除对照组外,其余各组ip 1 mg/kg LPS连续7 d制备抑郁症模型。以糖水偏好实验、旷场实验、悬尾实验和强迫游泳实验检测小鼠抑郁样症状;结束后取脑组织与血液检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;Iba1免疫荧光染色检测脑组织小胶质细胞激活;Western blotting法检测脑组织TLR4信号通路蛋白TLR4、NLRP3、cleaved-Caspase-1/Caspase-1表达。结果 与模型组比较,红景天苷与盐酸氟西汀预防给药能够显著上调小鼠糖水摄取率（P<0.05）,增加小鼠穿格评分（P<0.05）,下调悬尾与强迫游泳不动时间（P<0.05）;显著逆转LPS造成的TNF-α、IL-1β水平上调（P<0.05）;明显抑制小胶质细胞激活,显著降低Iba1荧光强度（P<0.05）;显著降低脑组织中TLR4、NLRP3与cleaved-Caspase-1/Caspase-1蛋白表达（P<0.05）。结论 ip LPS成功构建了炎症诱导的抑郁模型,红景天苷通过TLR4信号通路调控小胶质细胞激活,从而改善小鼠抑郁样行为。     

Toll样受体4及肝细胞生长因子水平与急性肾损伤病变程度的关系

目的 观察血清及肾组织中Toll样受体4（TLR4）、肝细胞生长因子（HGF）水平与急性肾损伤病变程度的关系。方法 上海市松江区中心医院肾内科2015年5月至2017年5月收治的90例急性肾损伤患者根据疾病分期不同，分为A组33例（急性肾损伤Ⅰ期）、B组29例（急性肾损伤Ⅱ期）、C组28例（急性肾损伤Ⅲ期）。分别取患者静脉血及穿刺活检肾组织，检测血清及肾组织中TLR4、HGF的表达情况，并以急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅲ（APACHE Ⅲ）分析其与急性肾损伤病变程度的相关性。结果 C组血清TLR4、HGF水平高于B组、A组，B组TLR4、HGF水平高于A组，差异均有统计学意义（P<0.05）。3组肾组织中TLR4、HGF阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）；B组、C组TLR4、HGF阳性表达率高于A组，C组TLR4、HGF阳性表达率高于B组，差异均有统计学意义（P<0.017）。TLR4、HGF水平随肾损伤病变程度的加重而升高，TLR4与APACHE Ⅲ评分呈正相关（r=0.942，P<0.05），HGF与APACHE Ⅲ评分呈正相关（r=0.926，P<0.05）。结论 不同分期急性肾损伤患者血清及肾组织中TLR4、HGF水平存在差异。TLR4、HGF与急性肾损伤病变程度呈正相关。     

鼻咽癌肿瘤干细胞研究进展

鼻咽癌（nasopharyngealcarcinoma，NPC）是我国常见的恶性肿瘤，我国是世界上NPC发病率最高的国家之一，而华南地区尤其是广东、广西和香港等地是高发病区．发病率比其他国家地区高100倍以上。放射治疗是NPC首选治疗手段，疗效尚不能令人满意，5年存活率为50％左右。有一部分患者虽经积极正规的治疗，仍会出现局部复发，放疗后NPC局部复发是影响生存率的主要原因之一。新近提出的肿瘤干细胞（cancerstemcell．CSC）学说认为，肿瘤组织中存在极少量肿瘤细胞，     

肿瘤干细胞和低氧微环境与肿瘤转移的关系

恶性肿瘤迄今仍是一种难以根治的疾病.肿瘤干细胞(cancer stem cell, CSC)理论的提出为肿瘤的彻底治愈带来了希望,我们可以从CSC这一与正常干细胞同样具有自我更新功能的细胞群入手对肿瘤进行治疗.研究表明,CSC周围微环境在肿瘤形成、发展、侵袭、转移过程中有重要作用,尤其是低氧微环境与肿瘤转移密切相关[1].     

肿瘤干细胞和低氧微环境与肿瘤转移的关系

恶性肿瘤迄今仍是一种难以根治的疾病.肿瘤干细胞(cancer stem cell, CSC)理论的提出为肿瘤的彻底治愈带来了希望,我们可以从CSC这一与正常干细胞同样具有自我更新功能的细胞群入手对肿瘤进行治疗.研究表明,CSC周围微环境在肿瘤形成、发展、侵袭、转移过程中有重要作用,尤其是低氧微环境与肿瘤转移密切相关[1].     

Toll样受体4的研究及现状

Toll样受体4（Toll-like receptor4，TLR4）是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体，在天然免疫反应中具有重要的作用。TLR4细菌脂多糖（1ipopolysaeeharide，LPS）是介导信号跨膜转导的主要受体，对于革兰氏阴性菌的感染性炎症至关重要。近年来，有关TLR4介导的信号转导及其TLR4与疾病的关系受到人们的关注。本文就TLR4的信号转导、TLR4与LPS的关系进行了综述，并介绍了TLR4与相关疾病之间的关系，对TLR4的研究意义进行了肯定。     

1,25-二羟维生素D3对其诱导的树突状细胞上Toll样受体7表达的抑制作用

目的探讨Toll样受体7（TLR7）在1,25-二羟维生素D3（1,25-（OH）2D3）抑制树突状细胞（DC）成熟中可能的机制。方法体外扩增小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术和混合淋巴细胞反应检测1,25-（OH）₂D₃对DC表型和功能的影响;利用RT-PCR半定量方法测定1,25-（OH）₂D₃对DC的TLR7表达的影响。结果 1,25-（OH）₂D₃处理后,DC表达CD86和MHCⅡ的荧光强度均明显降低;对T细胞的刺激能力较对照组明显减弱,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,1,25-（OH）₂D₃可以明显下调TLR7的表达（P<0.05）。结论 1,25-（OH）₂D₃可能通过影响TLR7的表达来抑制DC细胞的成熟,从而使DC具有耐受性特征。