鞘氨醇激酶调节细胞凋亡的研究进展

鞘磷脂衍生物神经酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sp)及1-磷酸鞘氨醇(SIP)在调控细胞增殖、存活及凋亡中发挥着重要作用。鞘氨醇激酶(SPK1)是调控细胞内Cer、Sp、SIP代谢平衡的关键酶。SPK1磷酸化Sp生成SIP，SIP通过细胞内和细胞外作用机制调节细胞生长和凋亡。SPK1参与细胞因子的信号传递。高表达SPK1抑制半胱天冬酶的裂解并上调Bcl-2基因的表达。本文综述了SPK的结构、调控及对细胞凋亡的调节作用。     

鞘氨醇代谢物——肿瘤治疗的新靶点

神经鞘脂类是细胞膜的结构成分之一。其代谢产物如神经酰胺、鞘氨醇、1-磷酸鞘氨醇亦是具有生物活性的信号分子,可作为第一和（或）第二信使调控着细胞的生命活动,如细胞的增殖、存活、迁移、新生血管形成。鞘氨醇激酶1是调节神经酰胺、1-磷酸鞘氨醇平衡的限速酶。近年研究表明,神经酰胺、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇可调控肿瘤细胞代谢的多个环节,由此提示神经鞘脂类代谢产物可作为肿瘤治疗的新靶点。     

1-磷酸鞘氨醇对淋巴管内皮细胞生物学特性调节作用的研究

目的：研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）对淋巴管内皮细胞（HDLEC）的生物学特性的调节作用及其调节机制。方法：应用RT-PCR方法检测HDLEC是否表达SPK及S1P受体,应用MTT法、细胞扩散盒技术检测S1P对HDLEC增殖、迁移特性的影响,并用Western印迹方法检测S1P对HDLEC的MAPK信号通路的调节。结果：HDLEC表达SPK及S1P受体,包括S1P1,S1P2,S1P3和S1P4。外源性S1P对HDLEC没有促增殖作用,但可促进其迁移,并可通过S1P1和S1P2诱导MAPK快速磷酸化。结论：初步研究结果提示,S1P可以影响淋巴管内皮细胞的生物学特性,有可能成为调控淋巴管生成及其功能的新靶点。     

IL-6对人多发性骨髓瘤细胞鞘氨醇激酶的激活作用

目的：鞘氨醇激酶是细胞内合成磷酸鞘氨醇的激酶。该酶是细胞迁移、增殖及凋亡调节中发挥重要作用的信号分子。本研究拟确定鞘氨醇激酶在人多发性骨髓瘤细胞的表达及在IL-6信号途径中的作用。方法：采用RT-PCR方法鉴定了鞘氨醇激酶在骨髓瘤细胞的表达情况，通过鞘氨醇激酶活性测定确定IL-6对多发性骨髓瘤细胞鞘氨醇激酶的激活作用。结果：人多发性骨髓瘤细胞表达鞘氨醇激酶及S1P受体EDG1，3，5。IL-6通过PI-3K和MAPK激活鞘氨醇激酶。结论：在多发性骨髓瘤细胞中，鞘氨醇激酶参与IL-6的信号转导。鞘氨醇激酶有可能成为多发性骨髓瘤治疗的新靶点。     

鞘氨醇激酶1对氧自由基诱导心肌细胞损伤的保护作用研究

目的:研究鞘氨醇激酶1(SPK1)在氧自由基诱导心肌细胞损伤过程中的作用.方法:分离培养Wistar乳大鼠心肌细胞,用不同浓度过氧化氢(H2O2,0, 50, 100, 200, 400 μmol/L)处理细胞,检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放和细胞SPK1酶活性变化;Northern 印迹方法分析SPK1催化产物1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体的表达.用S1P预处理心肌细胞,然后加入100 μmol/L的H2O2继续作用48 h,检测细胞培养上清中LDH的活性;用携带人SPK1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad-SPK1)感染Wistar乳大鼠心肌细胞,然后加入100 μmol/L的H2O2继续作用48 h,检测细胞培养上清中LDH的活性.分析外源性S1P或SPK1高表达对H2O2诱导心肌细胞损伤的保护作用.结果:H2O2作用于心肌细胞后,导致LDH释放增多,SPK1酶活性抑制,其作用呈剂量依赖性;H2O2刺激使S1P受体Edg-1表达水平升高,Edg-3表达水平降低.外源性S1P预处理使H2O2诱导的LDH释放减少,其作用呈剂量依赖性.与对照组相比,Ad-SPK1感染使心肌细胞SPK1酶活性明显升高,细胞培养上清中S1P含量增多,并明显抑制H2O2诱导心肌细胞LDH的释放.结论:SPK1高表达能保护H2O2导致的心肌细胞死亡,这种保护作用主要通过S1P的释放来实现.Edg-1和Edg-3可能参与SPK1对心肌细胞的保护作用.     

鞘氨醇激酶——运动改善胰岛素抵抗的新靶点

随着生活水平的日益提高,肥胖、2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)等代谢性疾病发病率逐年上升,胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)是诸多代谢性疾病的共同病理生理基础。运动通过提高机体外周组织代谢水平而显著改善IR已被广泛应用于代谢性疾病的防治。近年来,鞘氨醇激酶(Sphingosine kinases,SK)作为机体脂代谢的重要调控蛋白受到了广泛关注,其催化鞘氨醇(Sphingosine)合成鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1-Phosphate,S1P),SK及其S1P在运动调控机体脂代谢从而改善IR的过程中发挥举足轻重的作用。本文对近年来有关SK及其催化产物S1P在运动改善机体IR过程中的作用研究加以综述,为揭示运动防治IR机制提供新的研究靶点。     

腺病毒介导的鞘氨醇激酶基因转染对心肌梗死后心衰的改善作用研究

目的 探索腺病毒介导的鞘氨醇激酶1(SPK1)基因局部表达对心肌梗死后心衰的治疗作用.方法 将20只Wistar大鼠(250～300g)随机分成3组:假手术组(6只)、Ad-GFP对照组(7只)和Ad-SPK1(7只)组.结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支,Ad-SPK1组在心脏梗死区及周围多位点注射携带人SPK1基因的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-SPK1),Ad-GFP对照组注射同体积的携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒(Ad-GFP),14d后进行血流动力学及组织形态学检查.结果 Ad-SPK1组左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、最大左心室收缩压上升/降低时间(±dP/dtmax)(分别为132.82±13.03mmHg、4.34±0.69mmHg、5095.20±384.79)与Ad-GFP组(分别为76.96±8.44mmHg、14.79±1.08mmHg、2954.12±195.05)比较明显改善(P<0.01),而与假手术组(分别为147.42±10.92mmHg、2.80±0.45mmHg、5865.19±484.36)比较则无明显差异.Ad-SPK1组梗死区面积(3.78%±0.96%)与Ad-GFP组(38.86%±5.68%)比较明显减小(P<0.01).Ad-SPK1组左心室直径、左心室壁厚度(分别为4.63±0.80mm、2.70±0.29mm)与Ad-GFP组(分别为7.30±1.03mm、1.34±0.36mm)比较,直径明显缩小,厚度变薄的程度减轻(P<0.01),而与假手术组(分别为4.50±0.36mm、2.80±0.34mm)比较则无明显差异.Ⅷ因子相关抗原免疫组化分析显示,SPK1基因转染能明显刺激梗死缺血区的血管生成;天狼星红染色结果表明,SPK1基因转染能显著降低胶原在梗死缺血区的沉积.结论 腺病毒介导的SPK1基因转染能够保护缺血导致的心功能损伤,局部Ad-SPK1注射可能是治疗缺血性心脏病的一条新途径.     

携带人鞘氨醇激酶及突变体基因重组腺病毒载体的制备及表达

目的制备携带人野生型鞘氨醇激酶基因(SPK^wt)及其突变体(SPK^DN)的腺病毒载体,为研究SPK的生物学功能提供高效基因转移载体。方法将野生型和突变体SPK基因亚克隆至穿梭载体pshuttle-cmv,重组的穿梭质粒经Pme线性化后,电转化E.coli BJ-AD-1感受态,获得带有目的基因的腺病毒重组子质粒;重组子经Pac I线性化后,以脂质体介导转染293包装细胞,获得重组腺病毒载体;分别行PCR鉴定重组腺病毒是否携带目的基因,Western blot鉴定目的基因是否表达,酶活性检测判断野生型基因和突变体基因表达活性。结果重组腺病毒带有目的基因,可以感染内皮细胞并正确表达,酶活性分析表明野生型SPK基因增强SPK活性,突变体SPK基因抑制SPK活性。结论成功构建了携带SPK野生型及其突受体的重组腺病毒,为研究SPK的功能提供了物质基础。     

高表达鞘氨醇激酶对胃癌细胞生物学特性的影响

目的研究高表达鞘氨醇激酶（SPK）对人胃癌细胞增殖、迁移和凋亡等细胞生物学行为的影响。方法以重组腺病毒为载体,将人野生型（rAd—SPK^WT）及突变体（rAd—SPK^DV）SPK基因导入人胃癌细胞BCC-823。以Western blot检测外源SPK基因的表达,以[γ^82P]ATP掺入法测定SPK酶活性,用迁移扩散盒技术测定细胞的迁移能力。结果重组腺病毒可有效介导SPK在人胃癌细胞BGC-823中的表达。酶活性分析表明野生型SPK基因可增强SPK活性,而突变体SPK基因抑制SPK活性;高表达野生型SPK可以促进胃癌细胞的迁移,抑制5-FU对胃癌细胞的细胞毒作用,而高表达突变体SPK可以抑制胃癌细胞的迁移,增强5FU对胃癌细胞的细胞毒作用。结论SPK可以抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞迁移,有可能成为胃癌新的治疗靶点。     

1-磷酸鞘氨醇促进大鼠血管平滑肌细胞迁移的实验研究

目的探讨1-磷酸鞘氨醇（sphingosine 1-phosphate,S1P）对大鼠血管平滑肌细胞（rat vascular smooth mus-cle cells,rVSMc）迁移的作用机制,为肿瘤血管新生和心血管疾病发生机制的研究提供新的思路。方法体外分离培养、鉴定rVSMc细胞,建立低氧培养箱和氯化钴诱导的细胞低氧模型,应用RT-PCR方法对rVSMc细胞的S1P受体表达水平进行检测,运用微孔隔离室穿越方法研究S1P对rVSMc细胞迁移的作用,并用S1P受体阻断剂加以证实。结果与结论rVSMc细胞表达SPK1和S1P受体rS1P1、rS1P2和rS1P3,低氧状态下rVSMc细胞SPK1的表达和活性均高于对照,S1P主要通过与rS1P2受体结合促进rVSMc细胞的迁移。     

鞘氨醇-1-磷酸受体-1促进肿瘤转移与放疗抵抗的研究进展

远处转移是癌症治疗的主要障碍之一。鞘氨醇-1-磷酸受体-1（sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1PR1）在恶性肿瘤中过度表达,通过激活下游信号通路增强细胞侵袭和迁移活性、调控上皮间质转化（EMT）以及诱导淋巴管与血管生成,最终导致肿瘤转移的发生。S1PR1与获得性放射抗性的产生也有密切关联。本文就S1PR1及其在肿瘤转移和放疗抵抗中的作用进行综述。     

鞘鞍醇激酶-2在转化生长因子-β1诱导心脏成纤维细胞增殖与活化过程中作用

目的探讨鞘鞍醇激酶-2(SPHK2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法分离乳鼠心脏成纤维细胞并体外培养。利用慢病毒分别将对照或SPHK2小分子干扰RNA(siRNA)转染心脏成纤维细胞。采用Western blot检测siRNA对SPHK2蛋白的干扰效率;采用酶联免疫吸附法检测心脏成纤维细胞1-磷酸鞘鞍醇(S1P)水平;采用TGF-β1处理诱导对照组和SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖与活化后,CCK8法检测心脏成纤维细胞增殖能力,Western blot检测心脏成纤维细胞活化的标记蛋白α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达,q-PCR检测心脏成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)的mRNA水平。结果慢病毒转染SPHK2 siRNA后,心脏成纤维细胞SPHK2蛋白表达水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞S1P水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。给予TGF-β1处理后,SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖能力、α-SMA蛋白和mRNA表达、ColⅠ和ColⅢ的mRNA表达显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调SPHK2表达可抑制TGF-β1诱导心脏成纤维细胞的增殖与活化。     

腺病毒介导的鞘氨醇激酶1高表达对心脏缺血再灌注损伤的保护作用观察

目的观察腺病毒介导的鞘氨醇激酶1(SPK1)高表达对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法Wistar大鼠心肌内注射携带人SPK1基因的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-SPK1),以5×109pfu/ml的病毒总量分4点注射,对照组心肌内注射同等量的携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP),3d后进行离体心脏缺血再灌注实验,测定左室舒张末压(LVEDP)、左室收缩压(LVSP),观察心律失常的发生情况,测定肌酸激酶(CK)的释放水平,用酶学方法检测SPK1的活性,用薄层层析法及Western blot方法检测外源和内源性SPK1在心肌组织的表达。结果心肌内注射Ad-SPK1的大鼠3d后心肌组织SPK1激酶活性明显升高,比对照组升高5倍左右;与对照组相比,注射Ad-SPK1的大鼠心脏对缺血再灌注损伤有明显的抵抗能力,表现在心脏的收缩和舒张功能在缺血和再灌注过程中没有受到明显损伤,心律失常的发生明显减少以及再灌注过程中CK释放明显减少。结论腺病毒介导的SPK1基因转染能预防缺血再灌注导致的心脏损伤。     

FTY720在多发性硬化治疗作用中的研究进展

多发性硬化（Muhipesclerosis，MS）是一种中枢神经系统自身免疫性疾病，激素等免疫抑制剂是其主要治疗方法。芬戈莫德（rrY720）是一种从冬虫夏草中分离出来的鞘氨醇1-磷酸盐受体抑制剂，具有促进淋巴细胞归巢、诱导淋巴细胞凋亡及免疫耐受、抑制T淋巴细胞活性等作用，而发性硬化（MS）是一种中枢神经系统免疫性疾病，FTY720作为一种新型的免疫抑制剂治疗复发-缓解型MS，在二期临床试验和三期临床试验中显示着安全有效。     

SphK1和CD68蛋白表达与结肠癌组织淋巴结转移关系分析

目的探讨Sph K1和CD68在结肠癌组织中的表达水平及与淋巴转移分期的关系。方法收集上海中医药大学附属普陀医院2014年手术切除88例结肠癌组织,采用免疫组化SABC法检测结肠癌组织中的Sph K1和CD68表达情况,分析Sph K1和CD68蛋白表达水平与淋巴转移的关系。结果结肠癌组织Sph K1蛋白在全部结肠癌组织表达;与无淋巴转移(N0)的结肠癌组织表达相比,N1期和N2期患者结肠癌组织中Sph K1表达显著上调(P<0.05);而CD68表达则与Sph K1表达刚好相反,CD68在N0期结肠癌组织表达较高,与无随着淋巴转移期相比,N1期和N2期CD68表达显著下降(P<0.05)。结论 Sph K1在结肠癌组织上皮细胞表达随着淋巴结转移显著升高;而CD68表达则与此相反。提示两者在结肠癌的进展中发挥重要作用,检测Sph K1和CD68表达可判断结肠癌淋巴转移分期。     

免疫细胞自噬在动脉粥样硬化中的作用研究进展

 心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)已成为世界范围内严重危害人类健康与生命的重大疾病,病死率居全球首位,因此防治CVD已成为全球公共卫生专家所关注的热点^[1]。动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种以脂质蓄积和炎性细胞浸润为主要特征的动脉血管壁慢性炎性反应,通常伴有大量免疫细胞参与,是众多CVD的病理基础^[2]。近期众多学者研究发现自噬(autophagy)与AS的形成、发生和发展密切相关^[3]。笔者就不同免疫细胞自噬对AS的影响进行综述,为下一步揭示AS的发生机制提供参考。     

卡前列素氨丁三醇在剖宫产同时剔除子宫肌瘤术中的应用

子宫肌瘤是女性生殖系统最常见的良性肿瘤,好发于育龄期妇女。妊娠合并子宫肌瘤已成为产科较常见的妊娠合并症,剖宫产术中是否剔除子宫肌瘤始终存在着争议。我院于2002—10至2009—12对合并子宫肌瘤的58例产妇在剖宫产术中同时行子宫肌瘤剔除术。笔者就卡前列素氨丁三醇（欣母沛,Hemabate）应用于剖宫产术中同时行子宫肌瘤剔除术的安全性及使用价值进行总结如下。     

磷霉素氨丁三醇散治疗难治性包皮龟头炎27例

目的 观察磷霉素氨丁三醇治疗难治性包皮龟头炎的效果.方法 难治性包皮龟头炎患者27例,其中包皮环切术后感染14例,生殖器疱疹合并溃疡性包皮龟头炎2例,尿道口慢性化脓性囊肿反复溃脓1例,慢性尿道炎伴包皮龟头炎、内板增厚、包皮口缩窄、皲裂8例,阴囊、阴茎湿疹伴感染2例.给予磷霉素氨丁三醇散（含磷霉素酸3.0 g）口服,空腹服用,1次/d,共3 d;然后根据情况延长用药时间.观察记录包皮龟头红肿、糜烂、渗液溢脓等症状停止产生、疼痛缓解、完全结痂、皮损消失时间,有无药物不良反应.结果 所有患者均取得痊愈疗效,最快者用药当天皮损开始消失,临床症状缓解,最慢者10 d左右皮损消失,症状好转,观察1个月无复发病例.结论 磷霉素氨丁三醇散治疗难治性包皮龟头炎安全有效,值得临床推广.     

鞘内注入氨甲环酸引起癫痫样抽搐1例

氨甲环酸为氨基酸赖氨酸的合成衍生物,是组织纤溶酶原激活剂的竞争性抑制剂,高剂量氨甲环酸可直接抑制纤溶酶的活性.近年来,氨甲环酸被广泛应用于外科手术来减少出血.该文报告鞘内注入氨甲环酸引起癫痫样抽搐1例.患者因腰椎间盘突出症伴神经根病入院,于全身麻醉下行经后路腰椎减压椎间盘切除植骨融合内固定术.手术进行顺利,缝皮结束后由...